Ukierunkowane dostarczanie siRNA do neuronów w celu wyciszenia białek prionowych za pomocą kompleksów liposomalnych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:57 min. • June 18th, 2025
Zacznij od małego interferującego RNA, który hamuje ekspresję białka prionowego, białka związanego z neurodegeneracyjnymi chorobami prionowymi.
Dodaj kationową zawiesinę liposomową.
Ujemnie naładowane siRNA wiąże się z dodatnio naładowaną powierzchnią liposomu.
Wprowadź peptyd RVG-9r, glikoproteinę wirusa wścieklizny przyłączoną do ogona poliargininy.
Reszty argininy ułatwiają wiązanie RVG-9r-siRNA.
Wstrzyknij kompleksy liposom-siRNA-peptyd do żyły ogonowej znieczulonej myszy.
LSPC krążą w krwiobiegu i docierają do mózgu.
Peptyd RVG-9r wiąże się z nikotynowymi receptorami acetylocholiny na komórkach śródbłonka, wywołując transcytozę za pośrednictwem receptora przez barierę krew-mózg.
Wewnątrz mózgu RVG-9r wiąże się z neuronalnymi receptorami acetylocholiny, ułatwiając endocytozę LSPC i uwalnianie siRNA.
Kompleks wyciszający indukowany przez RNA wiąże się z siRNA.
Nić pasażerska dysocjuje, podczas gdy nić prowadząca wiąże się i rozszczepia mRNA PrP, zapobiegając translacji i zmniejszając ekspresję PrP.
Dodaj 20 mikrolitrów zawiesiny liposomów 4 nanomoli do 200 mikrolitrów 20-mikromolowego roztworu siRNA i inkubuj przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Następnie dodaj 80 mikrolitrów 500-mikr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych