JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:26 min. • August 7th, 2025
Zabezpiecz znieczulone, genetycznie zmodyfikowane szczenię myszy w stereotaktycznej ramce za pomocą pasków nausznych w przeciwnym kierunku, aby zapobiec obrażeniom.
Hipokamp szczeniaka ma zmniejszone interneurony hamujące, co prowadzi do nadmiernego pobudzenia neuronów pobudzających.
Utrzymuj płaską pozycję głowy i przykryj szczeniaka lodem, aby przedłużyć znieczulenie.
Zdezynfekuj czaszkę i zidentyfikuj szew lambda jako punkt odniesienia.
Ustawić igłę do wstrzykiwań w docelowych współrzędnych hipokampa.
Za pomocą wygiętej igły stwórz otwór mikrowejściowy, jednocześnie minimalizując uszkodzenia czaszki.
Obniż igłę do docelowej głębokości i wstrzyknij komórki prekursorowe interneuronów pochodzenia ludzkiego w kontrolowanym tempie, minimalizując uszkodzenie tkanek.
Powoli chować igłę, aby zapobiec refluksowi komórek.
Wyjmij szczeniaka z ramy, ogrzej go, aż ruch zostanie wznowiony, a następnie włóż go z powrotem do ściółki w klatce.
Wstrzyknięte komórki prekursorowe rozpraszają się w hipokampie, dojrzewają i integrują się z siecią neuronalną. Z biegiem czasu nasilają przekaźnictwo hamujące, co przywraca równowagę pobudzająco-hamującą.
Ustaw szczeniaka, umieszczając go na ramie stereotaktycznej i używając nauszników w przeciwnym kierunku. Następnie oczyść powierzchnię skóry za pomocą miękkiej chusteczki nasączonej etanolem. Zidentyfikuj lambdę i ustaw współrzędne na 0 na cyfrowej konsoli wyświetlacza instrumentu stereotaktycznego.
Po przemieszczeniu strzykawki Hamiltona do pożądanych współrzędnych, użyj igły insuliny zgiętej pod kątem 90 stopni, aby przebić czaszkę, tworząc mały otwór. Następnie przyłóż strzykawkę Hamiltona w dół, aż igła przetnie czaszkę, a 0 współrzędna grzbietowo-brzuszna.
Opuść igłę, aż do uzyskania pożądanych współrzędnych grzbietowo-brzusznych. Po wstrzyknięciu komórek macierzystych należy powoli wycofać igłę. Zakończ procedurę, rozgrzewając szczenię rękami, aż zacznie się poruszać, zanim oddasz je matce.