JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:59 min. • August 7th, 2025
Napełnij mikropipetę mieszaniną DNA zawierającą wektory plazmidowe przenoszące interesujący nas gen i barwnik śledzący. Zabezpiecz go w mikromanipulatorze.
Umieść blok agarozy pod mikroskopem i umieść na nim embrionalny wycinek mózgu myszy z agarozą z interneuronami korowymi.
Opuścić mikropipetę i wstrzyknąć mieszaninę DNA do obszaru progenitorowego interneuronu. Barwnik śledzący oznacza miejsce wstrzyknięcia.
Umieść kolejny blok agarozy na elektrodzie na szalce Petriego, a kolumnę agarozową na elektrodzie pokrywowej.
Przenieść plaster na blok i wyrównać elektrodę osłonową nad miejscem wstrzyknięcia.
Zastosuj krótkie impulsy elektryczne, aby tymczasowo przepuszczalnić błony komórkowe, umożliwiając plazmidom wejście do jądra.
Inkubuj plaster w pożywce, aby utrzymać żywotność komórek.
Wewnątrz jądra plazmid wyzwala ekspresję genów, wytwarza białko docelowe i moduluje funkcje progenitorowe interneuronów.
Do wstrzykiwania należy zmieszać DNA wektora ekspresyjnego i kontrolnego w stężeniu 1 mikrograma na mikrolitr dla każdego wektora i dodać szybki zielony roztwór podstawowy w rozcieńczeniu od 1 do 10. Napełnij wyciągniętą szklaną mikropipetę o średnicy wewnętrznej 0,5 milimetra i średnicy zew
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych