JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:44 min • August 7th, 2025
Zacznij od powściągliwego rdzeniowego i opuszkowego zaniku mięśni lub myszy dotkniętej SBMA.
Oczyść jego ogon i ogrzej go, aby rozszerzyć żyłę.
SBMA jest wywoływane przez zmutowany receptor androgenowy lub gen AR, który wytwarza zmutowane mRNA AR.
To mRNA syntetyzuje toksyczne białka w neuronach ruchowych, które upośledzają przekazywanie sygnałów i powodują osłabienie mięśni.
Następnie należy pobrać strzykawkę zawierającą rekombinowany wirus związany z adenowirusem lub wektory AAV z plazmidem kodującym terapeutyczne mikroRNA.
Wprowadzić igłę do żyły ogonowej i wstrzyknąć roztwór.
Teraz zastosuj nacisk, aby zatrzymać krwawienie, a następnie przywróć mysz do klatki.
Po dostaniu się do krążenia wektor wirusowy dociera do neuronów ruchowych, które kontrolują funkcję mięśni.
Wirus dostaje się do komórki poprzez endocytozę, uwalniając plazmid.
Plazmid wytwarza dojrzałe mikroRNA z sekwencjami komplementarnymi do zmutowanego mRNA AR.
Te mikroRNA wiążą się z mRNA AR, wywołując ich degradację.
Hamuje to akumulację toksycznych białek i pomaga poprawić funkcje nerwowo-mięśniowe.
Podziel zapas plazmidu mikroRNA AAV na podwielokrotności od 100 do 200 mikrolitrów, zawierające miano wirusa od 10 do 100 bilionów genomów na mililitr. Następnie załadować jedną porcję do strzykawki i przymocować igłę o rozmiarze od 27 do 30.
Teraz, używając standardowego ogranicznika myszy, zabezpiecz mysz tak, aby jej ogon był odsłonięty. Następnie oczyść ogon 70% alkoholem i umieść ciepłą podkładkę pod ogonem na około 30 sekund, aby zwiększyć rozszerzenie naczyń krwionośnych. Teraz, w dystalnej części ogona, włóż igłę do żyły ogonowej skosem do góry i pod płytkim kątem, około 15 stopni.
Następnie wstrzyknij wirusa i odczekaj kilka sekund przed wyjęciem igły. Po wyjęciu igły należy zastosować umiarkowany ucisk dwoma palcami, aby zatamować krwawienie. Następnie zwróć zwierzę do jego domowej klatki.