Przewody wysiewane komórkami Schwanna do regeneracji aksonów po urazie rdzenia kręgowego

Weźmy znieczulonego szczura z odsłoniętymi kręgami, z wyrostkami kolczystymi i blaszkami wyciętymi z poziomu klatki piersiowej T7 do T9.

Przetnij korzenie grzbietowe i brzuszne powyżej i poniżej T8.

Nałóż sól fizjologiczną, aby zatrzymać krwawienie i usuń płyn za pomocą gąbki.

Przeciąć rdzeń kręgowy między T8 i T9, aby przeciąć włókna nerwowe.

Umieść skompresowaną piankę w szczelinie i nałóż sól fizjologiczną.

Po ustaniu krwawienia usuń pianę i usuń pozostały płyn.

Nasuń wstępnie przygotowany piezoelektryczny przewód polimerowy, z otwartymi oknami, na kikut rostralnego rdzenia kręgowego.

Włóż kikut ogonowy do przeciwległego końca przewodu.

Wstrzyknąć komórki Schwanna, zawieszone w matrycy do wstrzykiwań, przez okna przewodów.

Dokładnie zamknij okna.

Komórki Schwanna zasiedlają przewód i wydzielają czynniki neurotroficzne, które wspierają wzrost aksonów.

Przewód zapewnia wskazówki strukturalne, a jego właściwości piezoelektryczne generują bioelektryczne wskazówki dotyczące wzrostu neurytów.

Stopniowo aksony regenerują się w poprzek mostu, przywracając ciągłość między pniakami.

Po usunięciu wszystkich blaszek upewnij się, że przerwy między wyrostkami poprzecznymi są widoczne, szczególnie w T8, i zbadaj kości po obu stronach między T7 i T9, aby upewnić się, że nie ma wystających na zewnątrz fragmentów kości, a korzenie grzbietowe powinny stać się widoczne. Za pomocą skośnych nożyczek sprężynowych odetnij korzenie grzbietowe i brzuszne powyżej i poniżej T8. I dodaj sól fizjologiczną do rdzenia kręgowego, aby zatrzymać krwawienie.

Następnie umieść kątowe nożyczki sprężynowe nad rdzeniem kręgowym w szczelinach między wyrostkami poprzecznymi w T8 i wykonaj jedno cięcie, aby całkowicie przeciąć tkankę nerwową. Umieść mały kawałek sprasowanej pianki w powstałej szczelinie od 2 do 2,5 milimetra i natychmiast dodaj sól fizjologiczną do tego obszaru.

Czekając, aż odcięte kikuty pępowiny osiągną hemostazę, pokrój trójkąty absorpcyjne na cienkie, długie kawałki i wyjmij przewód z pamięci PBS. Umieść kilka trójkątów w przewodzie, aby usunąć nadmiar PBS i upewnij się, że wstępnie wycięte okna są otwarte.

Następnie usuń pożywkę z granulki komórek Schwanna GFP i ponownie zawieś komórki Schwanna w 10 mikrolitrach zimnego DMEM / F-12. Dodać 10 mikrolitrów zimnego żelu do wstrzykiwań do zawiesiny komórek i dobrze wymieszać, powtarzając pipetowanie. Następnie umieść zawiesinę komórkową na lodzie. Gdy kikuty pępowiny są gotowe, usuń skompresowaną pianę, a następnie użyj długich kawałków trójkątów absorpcyjnych, aby usunąć sól fizjologiczną i krew z obszaru laminektomii.

Następnie za pomocą mikroszpatułki delikatnie podnieś kikut rostralny i nasuń przewód na pień oknami skierowanymi do góry. Uważaj, aby cały kikut został włożony i aby nie doszło do nadmiernego krwawienia do przewodu. Delikatnie podnieś kikut ogonowy i nasuń na niego drugi koniec przewodu. Uważaj, aby cały kikut był włożony i aby okna znajdowały się na powierzchni grzbietowej.

Następnie za pomocą mikropipety wyposażonej w końcówkę ładującą Western blot wstrzyknąć 20 mikrolitrów mieszaniny matrycowej GFP Schwann do wstrzykiwań komórek Schwanna do przewodu przez jedno z wstępnie wyciętych okienek. I zamknij okna.