JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:11 min • August 7th, 2025
Zacznij od probówki zawierającej zawiesinę egzosomów, które są zewnątrzkomórkowymi nanopęcherzykami na bazie lipidów.
Dodaj do probówki sól fizjologiczną buforowaną fosforanami lub PBS, aby uzyskać jednolitą dyspersję egzosomów.
Odessać roztwór egzosomu i przefiltrować go za pomocą filtra membranowego w celu usunięcia pozostałości zanieczyszczeń.
Przenieś tę przefiltrowaną zawiesinę egzosomu do świeżej probówki.
Dodaj roztwór zawierający dopaminę, środek neuroterapeutyczny, a następnie saponinę, środek powierzchniowo czynny, do zawiesiny egzosomu.
Inkubować mieszaninę w temperaturze fizjologicznej, aby zwiększyć przepuszczalność błony egzosomalnej.
Saponina selektywnie usuwa cholesterole związane z błoną z błony egzosomu, tworząc pory w egzosomalnych dwuwarstwach lipidowych.
Dopamina dyfunduje przez te pory do egzosomów.
Z biegiem czasu lipidy w błonie egzosomalnej redystrybuują się, a pory zamykają się, zamykając dopaminę w egzosomach.
Następnie ultraodwiruj roztwór mieszaniny, aby osadzać egzosomy obciążone dopaminą.
Usunąć supernatant zawierający wolną dopaminę i saponinę.
Osad zawierający egzosomy naładowane dopaminą jest gotowy do dalszych badań.
Dodaj 3 mililitry PBS do zawiesiny egzosomu zebranej wcześniej przez ultrawirowanie i wysterylizuj rozcieńczoną zawiesinę przez filtrację za pomocą filtra 0,22 mikrona.
Następnie przenieś 500 mikrolitrów wysterylizowanej zawiesiny egzosomu do innej probówki.
Następnie kolejno dodaj 500 mikrolitrów 0,5 miligrama na mililitr roztworu dopaminy i saponiny do wysterylizowanej zawiesiny. Po inkubacji ultraodwirować zawiesinę.