JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:07 min. • June 17th, 2025
Zacznij od chemicznie utrwalonych i przepuszczalnych mysich włókien mięśniowych umieszczonych w dołkach płytki wielodołkowej.
Inkubować w roztworze blokującym, aby zminimalizować niespecyficzne wiązanie przeciwciał.
Dodaj pierwszorzędowe przeciwciała skierowane przeciwko białku presynaptycznemu ulegającemu ekspresji w złączu nerwowo-mięśniowym lub NMJ.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem skierowanymi przeciwko przeciwciałom pierwszorzędowym i neurotoksyną sprzężoną z fluoroforem, która wiąże się z postsynaptycznymi receptorami acetylocholiny.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych odczynników.
Umieść włókna na szkiełku z nośnikiem montażowym, umieść szkiełko nakrywkowe i zabezpiecz magnesami cylindrycznymi, aby spłaszczyć włókna.
Rozpocznij obrazowanie za pomocą mikroskopu konfokalnego STED.
Po naświetleniu laserowym znakowane białka fluoryzują.
Mikroskopia konfokalna nie jest w stanie wyraźnie rozpoznać drobniejszych struktur NMJ ze względu na ograniczoną rozdzielczość i rozprzestrzenianie się fluorescencji.
W przeciwieństwie do tego, mikroskopia STED wykorzystuje laser zubożający do tłumieni
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych