Obrazowanie in vivo transportu płynu mózgowo-rdzeniowego w mózgu myszy za pomocą makroskopii fluorescencyjnej

Zacznij od znieczulonej myszy z chirurgicznie odsłoniętą czaszką umieszczoną pod makroskopem fluorescencyjnym.

Głowa jest stabilizowana za pomocą płytki głowy nad czaszką, tworząc okno czaszki.

Kaniula zawierająca znacznik fluorescencyjny jest wprowadzana do cisterna magna lub CM mózgu.

CM służy jako rezerwuar płynu mózgowo-rdzeniowego lub płynu mózgowo-rdzeniowego, który krąży w przestrzeni podpajęczynówkowej otaczającej mózg.

Używając światła widzialnego, skup się na czaszce.

Wstrzyknij znacznik fluorescencyjny do CM, a następnie przełącz się na obrazowanie fluorescencyjne.

Oświetl światłem o określonej długości fali, aby wzbudzić smugę.

Znacznik pochłania to światło i emituje sygnały fluorescencyjne.

Znaczniki fluorescencyjne przemieszczają się wraz z płynem mózgowo-rdzeniowym, umożliwiając wizualizację jego przepływu przez przestrzeń podpajęczynówkową do przestrzeni okołonaczyniowych otaczających tętnice mózgowe i tętniczki penetrujące

, wchodząc do tkanki mózgowej.

Uchwyć sygnał fluorescencyjny w czasie, aby zobrazować przepływ płynu mózgowo-rdzeniowego.

Ostrożnie umieść mysz i pompę infuzyjną przymocowaną do kaniuli na wózku w celu transportu do makroskopu, a uchwyt głowy umieść na stoliku makroskopu. Upewnij się, że przewód od pompy strzykawkowej do kaniuli Cisterna Magna nie jest napięty i nie ma załamań. Obserwuj częstość oddechów i różowe zabarwienie błon śluzowych, aby potwierdzić dobre natlenienie.

Włącz kamerę mikroskopu i diodę elektroluminescencyjną i uruchom tryb na żywo. Dostosuj powiększenie pola obrazowania tak, aby szew nosowo-czołowy na górze pola i szew lambdooidalny na dole były wyraźnie widoczne. Po umieszczeniu na miejscu przyklej uchwyt głowy do stolika makroskopowego i skoncentruj makroskop na odsłoniętej czaszce, aż płaszczyzna ogniskowa znajdzie się po bocznych stronach kości ciemieniowych, za szwami koronalnymi.

W przypadku infuzji znacznika płynu mózgowo-rdzeniowego należy ustawić pompę infuzyjną na odpowiednią szybkość i objętość, a także ustawić odpowiednią długość fali wzbudzenia i czas ekspozycji dla znacznika dla każdego kanału. Następnie należy sprawdzić, czy funkcja wyzwalania w makroskopie jest prawidłowa przed jednoczesnym rozpoczęciem infuzji znacznika i obrazowania.