Ocena neuroprotekcyjnego działania badanego związku w mysim modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Zacznij od znieczulonych myszy ze szwami na tętnicy szyjnej zewnętrznej lub ECA i tętnicy szyjnej wewnętrznej lub ICA oraz cienkim włóknem zamykającym tętnicę środkową mózgową lub MCA.

Ustaw laserową sondę dopplerowską, aby zmierzyć względny przepływ krwi w mózgu w MCA. Zmniejszenie przepływu krwi potwierdza okluzję MCA.

Zabezpiecz żarnik w ICA, aby utrzymać okluzję MCA.

Ta okluzja ogranicza dopływ natlenionej krwi do mózgu, prowadząc do śmierci neuronów i powstania martwej tkanki lub zawału.

Po okresie okluzji wycofaj włókno, aby przywrócić przepływ krwi.

Zszyj nacięcie i pozwól myszom dojść do siebie.

Podziel myszy na dwie grupy i podaj badany związek przez zgłębnik doustny do grupy leczonej, podczas gdy grupa kontrolna pozostaje nieleczona.

Związek dostaje się do krążenia, dociera do mózgu, ogranicza apoptozę neuronów i hamuje dalszą śmierć neuronów w porównaniu z nieleczoną grupą kontrolną.

Mniejszy zawał w grupie leczonej w porównaniu z grupą kontrolną potwierdza działanie neuroprotekcyjne związku.

Aby skonfigurować mysi model niedrożności tętnicy środkowej mózgu lub MCAO, potwierdź brak reakcji na bodziec opowieści u znieczulonej sześciotygodniowej, 22-25-gramowej myszy męskiej C57 black 6. I umieść mysz na kocu do utrzymywania temperatury ciała o temperaturze ciała 36.5 stopnia Celsjusza podłączonym do termometru.

Po usunięciu wszystkich włosów z klatki piersiowej i szyi myszy za pomocą kremu do golenia i depilacji, umieść mysz pod mikroskopem stereoskopowym i wykonaj dwucentymetrowe nacięcie skóry na środku szyi. Ostrożnie odizoluj lewą tętnicę szyjną wspólną, tętnicę szyjną zewnętrzną i odgałęzienie tętnicy szyjnej wewnętrznej od otaczających tkanek łącznych. I użyj jedwabnego szwu 4-0, aby podwiązać tętnicę szyjną zewnętrzną i tętnicę szyjną wspólną, z węzłem półzaczepowym, aby tymczasowo zablokować przepływ krwi do tętnicy szyjnej wewnętrznej.

Włóż papier o grubości od 0,1 do 0,12 milimetra, długości 11 milimetrów, pokryty silikonem, 8-0 monofilamentowy, 4-0 zerowy szew jedwabny przez tętnicę szyjną wewnętrzną do początku lewej tętnicy środkowej mózgu. I użyj laserowego przepływomierza dopplerowskiego, aby zmierzyć spadek względnego przepływu krwi w tętnicy. Przymocuj włożony filament do naczynia krwionośnego na dwie godziny, podczas gdy tętnica mózgowa jest niedrożna.

Pod koniec okresu okluzji ostrożnie wycofaj włókno, aby przywrócić przepływ krwi na 22 godziny reperfuzji. I użyj jedwabnych szwów 3-0, aby zszyć skórę w pięciu miejscach za pomocą dwóch węzłów półzaczepowych. Następnie umieść mysz z powrotem w klatce w celu odzyskania znieczulenia. Godzinę po zakończeniu reperfuzji należy podać zwierzętom doświadczalnym 300 miligramów na kilogram masy ciała wyłącznie przez zgłębnik doustny.