JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:47 min. • August 7th, 2025
Umieść znieczuloną mysz z ogoloną tylną nogą pod mikroskopem chirurgicznym.
Naciąć skórę na ogolonej nodze, a następnie przeciąć warstwy tkanki łącznej, aby odsłonić leżące pod nią mięśnie.
Za pomocą retraktorów oddziel mięśnie, aby odsłonić wspólny nerw strzałkowy.
Nerw zawiera neurony ruchowe, których zakończenia aksonów łączą się z włóknami mięśniowymi, tworząc połączenia nerwowo-mięśniowe lub NMJ.
Zlokalizuj skrzyżowanie nerwu ze ścięgnem mięśnia brzuchatego łydki w kolanie.
Przytrzymaj nerw kleszczami i wywieraj nacisk, aby wywołać uraz.
Półprzezroczyste miejsce urazu wskazuje na uszkodzenie aksonów, co prowadzi do upośledzenia NMJ.
Upewnij się, że zewnętrzna warstwa epineurium nerwu jest nienaruszona, aby kierować regeneracją aksonów.
Zdejmij zwijacze i wyrównaj mięśnie. Zszyj miejsce nacięcia i pozwól myszy dojść do siebie.
Sygnały z uszkodzonych aksonów rekrutują makrofagi do usuwania resztek aksonalnych, co wspomaga regenerację aksonów i ponowne ustanowienie NMJ.
Umieść mysz na tablicy chirurgicznej i potwierdź brak reakcji na uszczypnięcie palca. Ustawić kończyny w obrębie pasów, tak aby docelowa kończyna tylna znajdowała się w anatomicznie naturalnej pozycji, a staw kolanowy był lekko wyprostowany, bez rotacji wewnętrznej lub zewnętrznej.
Następnie przenieś zwierzę pod mikroskop chirurgiczny. I wyreguluj deskę, aż kostny staw kolanowy i grzbiet między piszczelą przednią a mięśniami brzuchatymi łydki będą widoczne przez obiektyw. Za pomocą skalpela i kleszczy wykonaj około trzycentymetrowe nacięcie przez skórę prostopadłe do leżącego poniżej przebiegu wspólnego nerwu strzałkowego. Kontynuuj nacięcie przez powięź powierzchowną, odsłaniając mięsień dwugłowy uda i mięśnie obszerne boczne, a następnie nacięcie o długości od 1 do 2 centymetrów przez łączącą powięź głęboką w celu oddzielenia mięśni.
Następnie użyj mechanicznych zwijaczy, aby doogonowo cofnąć mięsień dwugłowy uda, aby odsłonić wspólny nerw strzałkowy. Śledź nerw proksymalnie, aż zostanie znalezione jego przecięcie ze ścięgnem bocznej głowy mięśnia brzuchatego łydki. Następnie użyj cienkich kleszczy, aby chwycić nerw, wyrównując końcówki równolegle do bocznej granicy ścięgna brzuchatego łydki. I stosuj stały, skoncentrowany nacisk przez 5 sekund, aby zmiażdżyć wspólny nerw strzałkowy.
Trzymając kleszcze prostopadle do włókna, chwyć tkankę obszarem tuż za końcówką kleszczy. I zastosuj mocny, ale delikatny nacisk, aby uzyskać czyste, liniowe zmiażdżenie nerwu wzdłuż granicy ścięgna.
Sprawdź wzrokowo nerw za pomocą mikroskopu chirurgicznego, aby potwierdzić całkowite zmiażdżenie tkanki. Nerw będzie wyglądał na półprzezroczysty w miejscu urazu. Jeśli nerw został wystarczająco uszkodzony, usuń zwijacze. I wyrównaj mięśnie w ich anatomicznych pozycjach. Następnie użyj jedwabnych szwów 6-0, aby zamknąć miejsce nacięcia jednym lub trzema prostymi, przerywanymi szwami i umieść mysz na poduszce grzewczej w czystej klatce z monitorowaniem, aż do całkowitego wyzdrowienia.