Name: Wzmocnienie indukcji apoptozy i autofagii przez nowy syntetyczny analog C-1 7-deoksypankratistatyny w ludzkich komórkach gruczolakoraka piersi i nerwiaka zarodkowego za pomocą tamoksyfenu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 44 s
Description: Poznaj mechanizm wzmocnionej apoptozy i autofagii przez analog JCTH-4 z tamoksyfenem w komórkach raka piersi i nerwiaka zarodkowego. Metoda pozwala badać selektywną toksyczność wobec komórek nowotworowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca ta została wsparta przez Knights of Columbus Chapter 9671 (Windsor, Ontario) oraz stypendium kanadyjskie CIHR Frederick Banting and Charles Best Canada Graduate Scholarship przyznanym Dennisowi Ma. Dziękujemy Robertowi Hodge'owi i Elizabeth Fidalgo da Silva za pomoc przy mikroskopii poklatkowej. Dziękujemy Katie Facecchia za montaż filmów z mikroskopii poklatkowej. Chcielibyśmy również podziękować Sudipie June Chatterjee i Phillipowi Tremblayowi za krytyczny przegląd niniejszego manuskryptu. Praca ta jest dedykowana pamięci Kevina Couvillona, który w 2010 roku przegrał walkę z rakiem.

<ol><li>Earnshaw, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis.+A+cellular+poison+cupboard%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Apoptosis. A cellular poison cupboard.</a> Nature. 397, 387-389 (1999).</li>
<li>Kroemer, G., Mariño, G., Levine, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+the+integrated+stress+response%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Autophagy and the integrated stress response.</a> Mol. Cell. 40, 280-293 (2010).</li>
<li>Dalby, K. N., Tekedereli, I., Lopez-Berestein, G., Ozpolat, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+prodeath+and+prosurvival+functions+of+autophagy+as+novel+therapeutic+strategies+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Targeting the prodeath and prosurvival functions of autophagy as novel therapeutic strategies in cancer.</a> Autophagy. 6, 322-329 (2010).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Fearon, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Cancer+Syndromes%3A+Clues+to+the+Origin+and+Nature+of+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Human Cancer Syndromes: Clues to the Origin and Nature of Cancer.</a> Science. 278, 1043-1050 (1997).</li>
<li>Tsokos, M., Scarpa, S., Ross, R. A., Triche, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+neuroblastoma+recapitulates+neural+crest+development.+Study+of+morphology%2C+neurotransmitter+enzymes%2C+and+extracellular+matrix+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human neuroblastoma recapitulates neural crest development. Study of morphology, neurotransmitter enzymes, and extracellular matrix proteins.</a> The American Journal of Pathology. 128, 484-496 (1987).</li>
<li>Schwab, M., Westermann, F., Hero, B., Berthold, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma%3A+biology+and+molecular+and+chromosomal+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncol%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma: biology and molecular and chromosomal pathology.</a> Lancet Oncol. 4, 472-480 (2003).</li>
<li>Jemal, A., Siegel, R., Ward, E., Hao, Y., Xu, J., Thun, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2009%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2009.</a> CA Cancer J. Clin. 59, 225-249 (2009).</li>
<li>Howell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocrine+prevention+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract.+Res.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">The endocrine prevention of breast cancer.</a> Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab. 22, 615-623 (2008).</li>
<li>Moreira, P., Custodio, J., Morena, A., Oliveira, C., Santos, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tamoxifen+and+estradiol+interact+with+the+flavin+mononucleotide+site+of+complex+I+leading+to+mitochondrial+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Tamoxifen and estradiol interact with the flavin mononucleotide site of complex I leading to mitochondrial failure.</a> J. Biol. Chem. 281, 10143-10152 (2006).</li>
<li>Kekre, N., Griffin, C., McNulty, J., Pandey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancratistatin+causes+early+activation+of+caspase-3+and+the+flipping+of+phosphatidyl+serine+followed+by+rapid+apoptosis+specifically+in+human+lymphoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemother.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pancratistatin causes early activation of caspase-3 and the flipping of phosphatidyl serine followed by rapid apoptosis specifically in human lymphoma cells.</a> Cancer Chemother. Pharmacol. 56, 29-38 (2005).</li>
<li>McLachlan, A., Kekre, N., McNulty, J., Pandey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancratistatin%3A+a+natural+anti-cancer+compound+that+targets+mitochondria+specifically+in+cancer+cells+to+induce+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Pancratistatin: a natural anti-cancer compound that targets mitochondria specifically in cancer cells to induce apoptosis.</a> Apoptosis. 10, 619-630 (2005).</li>
<li>Griffin, C., Hamm, C., McNulty, J., Pandey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancratistatin+induces+apoptosis+in+clinical+leukemia+samples+with+minimal+effect+on+noncancerous+peripheral+blood+mononuclear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Pancratistatin induces apoptosis in clinical leukemia samples with minimal effect on noncancerous peripheral blood mononuclear cells.</a> Cancer Cell Int. 10, 6(2010).</li>
<li>Griffin, C., Karnik, A., McNulty, J., Pandey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancratistatin+selectively+targets+cancer+cell+mitochondria+and+reduces+growth+of+human+colon+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Pancratistatin selectively targets cancer cell mitochondria and reduces growth of human colon tumor xenografts.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 10, 57-68 (2011).</li>
<li>Griffin, C., McNulty, J., Pandey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancratistatin+induces+apoptosis+and+autophagy+in+metastatic+prostate+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Pancratistatin induces apoptosis and autophagy in metastatic prostate cancer cells.</a> Int. J. Oncol. 38, 1549-1556 (2011).</li>
<li>Collins, J., Rinner, U., Moser, M., Hudlicky, T., Ghiviriga, I., Romero, A. E., Kornienko, A., Ma, D., Griffin, C., Pandey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemoenzymatic+synthesis+of+Amaryllidaceae+constituents+and+biological+evaluation+of+their+C-1+analogues.+The+next+generation+synthesis+of+7-deoxypancratistatin+and+trans-dihydrolycoricidine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chemoenzymatic synthesis of Amaryllidaceae constituents and biological evaluation of their C-1 analogues. The next generation synthesis of 7-deoxypancratistatin and trans-dihydrolycoricidine.</a> J. Org. Chem. 75, 3069-3084 (2010).</li>
<li>Zhang, G., Gurtu, V., Kain, S. R., Yan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+apoptosis+using+a+fluorescent+conjugate+of+annexin+V%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Early detection of apoptosis using a fluorescent conjugate of annexin V.</a> Biotechniques. 23, 525-531 (1997).</li>
<li>Madesh, M., Hajnóczky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VDAC-dependent+permeabilization+of+the+outer+mitochondrial+membrane+by+superoxide+induces+rapid+and+massive+cytochrome+c+release%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">VDAC-dependent permeabilization of the outer mitochondrial membrane by superoxide induces rapid and massive cytochrome c release.</a> J. Cell Biol. 155, 1003-1015 (2001).</li>
<li>Simon, H. U., Haj-Yehia, A., Levi-Schaffer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+reactive+oxygen+species+%28ROS%29+in+apoptosis+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Role of reactive oxygen species (ROS) in apoptosis induction.</a> Apoptosis. 5, 415-418 (2000).</li>
<li>Batandier, C., Leverve, X., Fontaine, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opening+of+the+mitochondrial+permeability+transition+pore+induces+reactive+oxygen+species+production+at+the+level+of+the+respiratory+chain+complex+I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Opening of the mitochondrial permeability transition pore induces reactive oxygen species production at the level of the respiratory chain complex I.</a> J Biol Chem. 279, 17197-17204 (2004).</li>
<li>Lefranc, F., Sauvage, S., Goietsenoven, G. V. an, Mégalizzi, V., Lamoral-Theys, D., Debeir, O., Spiegl-Kreinecker, S., Berger, W., Mathieu, V., Decaestecker, C., Kiss, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Narciclasine%2C+a+plant+growth+modulator%2C+activates+Rho+and+stress+fibers+in+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">Narciclasine, a plant growth modulator, activates Rho and stress fibers in glioblastoma cells.</a> Mol. Cancer Ther. 8, 1739-1750 (2009).</li>
<li>Warburg, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">On the origin of cancer cells.</a> Science. 123, 309-314 (1956).</li>
<li>Heerdt, B. G., Houston, M. A., Augenlicht, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+properties+of+colonic+tumor+cells+are+a+function+of+the+intrinsic+mitochondrial+membrane+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Growth properties of colonic tumor cells are a function of the intrinsic mitochondrial membrane potential.</a> Cancer Res. 66, 1591-1596 (2006).</li>
<li>Green, D. R., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+mitochondrial+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of mitochondrial cell death.</a> Science. 305, 626-629 (2004).</li>
<li>Casellas, P., Galiegue, S., Basile, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+benzodiazepine+receptors+and+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem.+Int%22%5BJournal%5D)">Peripheral benzodiazepine receptors and mitochondrial function.</a> Neurochem. Int. 40, 475-486 (2002).</li>
<li>Mathupala, S. P., Rempel, A., Pedersen, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+glycolytic+metabolism+of+cancer+cells%3A+a+remarkable+coordination+of+genetic%2C+transcriptional%2C+post-translational%2C+and+mutational+events+that+lead+to+a+critical+role+for+type+II+hexokinase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bioenerg.+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Aberrant glycolytic metabolism of cancer cells: a remarkable coordination of genetic, transcriptional, post-translational, and mutational events that lead to a critical role for type II hexokinase.</a> J. Bioenerg. Biomembr. 29, 339-343 (1997).</li>
</ol>

Nie zgłoszono konfliktów interesów.

Wykazano, że PST i podobne związki wykazują właściwości przeciwnowotworowe11-15,21. Wcześniej zgłaszaliśmy, że naturalny PST selektywnie destabilizuje mitochondria w komórkach nowotworowych, co indukuje apoptozę poprzez uwalnianie czynników apoptogennych12,14. Najbardziej prawdopodobne jest, że JCTH-4 działa poprzez ten sam mechanizm; JCTH-4 spowodował spadek MMP w komórkach MCF7, co wykazano w barwieniu TMRM (Ryc. 5a), oraz zwiększył generowanie ROS w izolowanych mitochondriach z k...

<table><tbody><tr><td>linia komórkowa SH-SY5Y</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;modyfikowana pożywka Eaglesa F-12 HAM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>51448C</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca </td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>linia komórkowa MCF7</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td></td></tr><tr><td>pożywka RPMI-1640</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R 0883</td><td></td></tr><tr><td>Linia komórkowa pozornych normalnych fibroblastów płodu ludzkiego (NFF)</td><td>Coriell Institute for Medical Research</td><td>AG04431B</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;zmodyfikowane pożywka Eagle'a&amp;rsquo;poziom medium, pożywka z wysoką zawartością glukozy</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>SH30022.01</td><td></td></tr><tr><td>Cytrynian tamoksyfenu </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9262</td><td></td></tr><tr><td>szalki hodowlane z przeszklonym dnem o średnicy 35 mm </td><td>MatTek Corp.</td><td>P35G-014-C</td><td></td></tr><tr><td>odwrócony mikroskop Leica DMI6000 B</td><td>Leica Microsystems</td><td>N/D</td><td></td></tr><tr><td>H&amp;#8211;barwnik chst 33342</td><td>Sondy molekularne, Life Technologies</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>odwrócony mikroskop fluorescencyjny Leica DM IRB </td><td>Leica Microsystems</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Aneksyna V AlexaFluor-488</td><td>Invitrogen</td><td>A13201</td><td></td></tr><tr><td>roztwór błękitu trypanowego</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td></td></tr><tr><td>Komora licznikowa (hemocytometr)</td><td>Fisher Scientific</td><td>267110</td><td></td></tr><tr><td>odczynnik WST-1</td><td>Grupa Roche</td><td>11644807001</td><td></td></tr><tr><td>Wallac Victor&lt;sup&gt;3&lt;/sup&gt; Licznik wieloetykietowy 1420</td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>1420-011</td><td></td></tr><tr><td>Metyloester tetrametylorodaminy (TMRM) </td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>T-668</td><td></td></tr><tr><td>Szklany homogenizator do tkanek</td><td>Fisher Scientific</td><td>K8885300-0002</td><td></td></tr><tr><td>Analiza białek BioRad</td><td>Bio-Rad</td><td>500-0001Dół formularza</td><td></td></tr><tr><td>Amplex Red</td><td>Invitrogen</td><td>A12222</td><td></td></tr><tr><td>peroksydaza chrzanowa (HRP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8125</td><td></td></tr><tr><td>SpectraMax Gemini XPS</td><td>Molecular Devices</td><td>3126666</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało przeciwko LC3 wytworzone u królika</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB100-2220</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwmysi przeciwciało wtórne sprzężone z HRP</td><td>Abcam</td><td>ab6728</td><td></td></tr><tr><td>przeciwkrólicze przeciwciało wtórne sprzężone z HRP</td><td>Abcam</td><td>ab6802</td><td></td></tr><tr><td>Substrat peroksydazy do chemiluminescencji</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CPS160</td><td></td></tr><tr><td>Monodansylowana kadaweryna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30432</td><td></td></tr></tbody></table>

wzmocnienie indukcji apoptozy i autofagii przez nowy syntetyczny analog c-1 7-deoksypancratystatyny w ludzkich komórkach gruczolakoraka piersi i neuroblastoma w połączeniu z tamoksyfenem

Enhancement of Apoptotic and Autophagic Induction by a Novel Synthetic C-1 Analogue of 7-deoxypancratistatin in Human Breast Adenocarcinoma and Neuroblastoma Cells with Tamoxifen

Rak piersi jest jednym z najczęstszych nowotworów u kobiet w Ameryce Północnej. Wiele obecnych metod leczenia przeciwnowotworowego, w tym promieniowanie jonizujące, indukuje apoptozę poprzez uszkodzenie DNA. Niestety, takie terapie nie są selektywne względem komórek nowotworowych i wywołują podobną toksyczność w komórkach prawidłowych. Donieśliśmy o selektywnej indukcji apoptozy w komórkach nowotworowych za pomocą naturalnego związku, pankratystatyny (PST). Niedawno, w drodze syntezy de novo, otrzymano nowy analog PST, pochodną C-1 acetoksymetylową 7-deoksypankratystatyny (JCTH-4), która wykazuje porównywalną selektywną aktywność indukowania apoptozy w kilku liniach komórek nowotworowych. Ostatnio autofagia została powiązana ze złośliwościami nowotworowymi jako mechanizm zarówno pro-przeżyciowy, jak i pro-śmierciowy w odpowiedzi na chemioterapię. Tamoksyfen (TAM) niezmiennie wykazywał indukcję pro-przeżyciowej autofagii w wielu nowotworach. W niniejszym badaniu oceniono skuteczność samego JCTH-4 oraz JCTH-4 w połączeniu z TAM w indukowaniu śmierci komórek raka piersi człowieka (MCF7) i neuroblastoma (SH-SY5Y). Sam TAM indukował autofagię, ale nie wywołał istotnej śmierci komórek, podczas gdy sam JCTH-4 spowodował znaczną indukcję apoptozy wraz z pewną indukcją autofagii. Co ciekawe, leczenie skojarzone doprowadziło do drastycznego wzrostu indukcji apoptozy i autofagii. Przy użyciu mikroskopii time-lapse monitorowaliśmy zależne od czasu zmiany morfologiczne w komórkach MCF7 poddawanych autofagii indukowanej przez TAM, apoptozie i autofagii indukowanej przez JCTH-4 oraz przyspieszonej śmierci komórek w wyniku leczenia skojarzonego. Wykazaliśmy, że związki te indukują apoptozę/autofagię poprzez celowanie w mitochondria w tych komórkach nowotworowych. Co istotne, terapie te nie wpłynęły na przeżywalność nienowotworowych fibroblastów ludzkich. Zatem wyniki te wskazują, że JCTH-4 w połączeniu z TAM mógłby być stosowany jako bezpieczna i bardzo skuteczna terapia przeciwnowotworowa przeciwko komórkom raka piersi i neuroblastoma.

Zsyntetyzowaliśmy nowy analog pancratystatyny o przeciwnowotworowej aktywności porównywalnej z natywną pancratystatyną; co interesujące, leczenie skojarzone z tamoksyfenem doprowadziło do drastycznego nasilenia indukcji apoptozy i autofagii poprzez celowanie w mitochondria, przy minimalnym wpływie na nienowotworowe fibroblasty. W związku z tym JCTH-4 w połączeniu z tamoksyfenem może stanowić bezpieczną terapię przeciwnowotworową.

Wzmocnienie indukcji apoptozy i autofagii przez nowy syntetyczny analog C-1 7-deoksypancratystatyny w ludzkich komórkach gruczolakoraka piersi i neuroblastoma w połączeniu z tamoksyfenem

Rak piersi jest jednym z najczęstszych nowotworów występujących u kobiet w Ameryce Północnej. Wiele obecnie stosowanych metod leczenia przeciwnowotworowego, w tym promieniowanie jonizujące, indukuje...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest ocena selektywnej toksyczności oraz mechanizmu śmierci komórkowej indukowanej przez J CTH four, syntetyczny analog naturalnego związku pancreastatyny, podanego samodzielnie oraz w połączeniu z tamoksyfenem w komórkach raka piersi i neuroblastoma człowieka. Cel ten zostanie osiągnięty poprzez wcześniejszą hodowlę komórek raka piersi MC7, komórek neuroblastoma SHSY5Y oraz normalnych zarodkowych fibroblastów (NFF). Drugim krokiem jest ocena cytotoksyczności J CTH four i tamoksyfenu stosowanych osobno lub w połączeniu.Poprzez traktowanie komórek tymi lekami i monitorowanie zależnych od czasu zmian morfologicznych charakterystycznych dla apoptozy i autofagii. Następnie badany jest mechanizm indukcji apoptozy i autofagii poprzez monitorowanie potencjału błony mitochondrialnej oraz produkcji reaktywnych form tlenu w izolowanych mitochondriach z tych komórek nowotworowych. Ostatecznie wykorzystuje się fotografię poklatkową oraz różnorodne testy biochemiczne, aby wykazać, że JCT four indukuje apoptozę i autofagię w ludzkich komórkach raka piersi oraz neuroblastoma, a efekty te są znacznie nasilone po dodaniu tamoksyfenu.Co istotne, zabiegi te nie wpły

enhancement-apoptotic-autophagic-induction-novel-synthetic-c-1

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Wzmocnienie indukcji apoptozy i autofagii przez nowy syntetyczny analog C-1 7-deoksypankracistatyny w ludzkich komórkach gruczolakoraków piersi i neuroblastoma przy zastosowaniu tamoksyfenu

Opracowano system inżynieryjnych nanonośników na bazie żelatyny typu B (GENS) do systemowego dostarczania genów i transfekcji w leczeniu raka trzustki. Dzięki modyfikacji powierzchni nanocząstek specyficznym peptydem do receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR), nanonośniki te mogą celować w receptor EGFR i uwalniać plazmid w środowisku redukującym, takim jak wysokie wewnątrzkomórkowe stężenia glutationu.

Terapeutyczna dostawa genów i transfekcja w ludzkich komórkach raka trzustki z wykorzystaniem nanocząstek żelatynowych celowanych w receptor epidermalnego czynnika wzrostu

Autofagia to wszechobecny proces, który umożliwia komórkom degradację i recykling białek i organelli. Stosujemy zaawansowaną mikroskopię fluorescencyjną do wizualizacji i ilościowego określenia niewielkich, ale istotnych zmian fizycznych związanych z indukcją autofagii, w tym powstawania i dystrybucji autofagosomów i lizosomów oraz ich fuzji w autolizosomy.

Ilościowa analiza autofagii przy użyciu zaawansowanej mikroskopii fluorescencyjnej 3D

Cytotoksyczna aktywność fenantrydyny PJ-34 w komórkach nowotworowych przechodzących mitozę została udokumentowana w czasie rzeczywistym za pomocą obrazowania konfokalnego na żywo. PJ-34 zlikwidował ludzkiego raka piersi Komórki MDA-MB-231 zawierające extracentrosomy w mitozie. W przeciwieństwie do normalnej dwuogniskowej mitozy, pozacentrosomy nie były skupione w dwóch biegunach wrzeciona w obecności PJ-34.

Śmierć komórki związana z nieprawidłową mitozą obserwowana przez obrazowanie konfokalne w żywych komórkach rakowych

Trójwymiarowa hodowla komórek nabłonka sutka na odtworzonej błonie podstawnej jest użyteczną metodą do podsumowania in vivo architektury łagodnej piersi i odróżnienia złośliwego fenotypu od łagodnego fenotypu piersi. Co ważne, system ten może być stosowany do badania raków inwazyjnych w innych tkankach.

Hodowle trójwymiarowe: narzędzie do badania normalnej architektury zrazikowej a złośliwej transformacji komórek piersi

Opisany jest wykonalny moduł laboratoryjny dla studentów biologii, który bada zaawansowane koncepcje komórkowe i molekularne przy użyciu hodowli komórek zwierzęcych. Studenci hodują, charakteryzują i manipulują modelem komórkowym raka piersi poprzez ekspozycję na środki chemioterapeutyczne. Żywotność komórek jest oznaczana poprzez zliczanie komórek przy użyciu zarówno metody standardowej, jak i nowatorskiej.

Wykorzystanie komórek nowotworowych sutka myszy do nauczania podstawowych pojęć biologicznych: prosty moduł laboratoryjny

Tutaj opisujemy metodę długoterminowej mikroskopii poklatkowej do długotrwałego śledzenia pojedynczych komórek w odpowiedzi na terapie przeciwnowotworowe.

Po drugiej stronie lustra: mikroskopia poklatkowa i podłużne śledzenie pojedynczych komórek w celu zbadania terapii przeciwnowotworowych

Ta procedura pokaże, jak zsyntetyzowaliśmy i scharakteryzowaliśmy aktywność anty-NFκB i przeciwnowotworowych komórek macierzystych proleku aspiryny-fumaranu.

Synteza i charakterystyka proleku fumaranu aspiryny, który hamuje aktywność NFκB i komórki macierzyste raka piersi

Tutaj prezentujemy protokół izolacji komórek apoptotycznego raka piersi poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją i dalsze wykrywanie przejścia komórek raka piersi niebędących komórkami macierzystymi do komórek podobnych do komórek macierzystych raka piersi po odwróceniu apoptozy za pomocą cytometrii przepływowej.

Wykrywanie cytometryczne przepływowe nowo powstałych komórek przypominających komórki macierzyste raka piersi po odwróceniu apoptozy

Celem tego protokołu jest określenie poziomów autofagicznych w raku trzustki i komórkach groniastych trzustki poprzez immunofluorescencję LC3 i kwantyfikację kropek LC3.

Ocena poziomów autofagii w dwóch różnych modelach komórek trzustki przy użyciu immunofluorescencji LC3

Obecny protokół opisuje kompleksową strategię oceny działania farmakologicznego i mechanizmu salidrozydu w hamowaniu proliferacji i migracji komórek MCF-7.

Badanie działania farmakologicznego i mechanizmu molekularnego salidrozydu w hamowaniu proliferacji i migracji komórek MCF-7

Poznaj mechanizm wzmocnionej apoptozy i autofagii przez analog JCTH-4 z tamoksyfenem w komórkach raka piersi i nerwiaka zarodkowego. Metoda pozwala badać selektywną toksyczność wobec komórek nowotworowych.

Wzmocnienie indukcji apoptozy i autofagii przez nowy syntetyczny analog C-1 7-deoksypankratistatyny w ludzkich komórkach gruczolakoraka piersi i nerwiaka zarodkowego za pomocą tamoksyfenu (Wideo) | JoVE Journal

Wzmocnienie indukcji apoptozy i autofagii przez nowy syntetyczny analog C-1 7-deoksypancratystatyny w ludzkich komórkach gruczolakoraka piersi i neuroblastoma w połączeniu z tamoksyfenem

Przeglądaj więcej filmów