Wykorzystanie okna czaszkowego do wizualizacji tętnicy środkowej mózgu podczas niedrożności tętnicy środkowej mózgu wywołanej endoteliną-1

W tym protokole wideo zamierzamy zademonstrować wykorzystanie okna czaszkowego do wizualizacji środkowej tętnicy mózgowej podczas niedrożności tętnicy środkowej mózgu wywołanej endoteliną. W celu przygotowania okna czaszkowego wykonuje się kraniektomię skroniową w celu obejrzenia proksymalnych części środkowej tętnicy mózgowej. Stworzenie okna czaszkowego Jest to metoda, która umożliwia bezpośrednią wizualizację struktur na powierzchni kory mózgowej.

Technika ta może być wykonywana w wielu miejscach pokrywających mózg szczura, ale najłatwiej jest ją przeprowadzić, tworząc kraniektomię C na łatwo dostępnych kościach czołowych lub ciemieniowych. Najczęściej stosowaliśmy tę technikę w połączeniu z niedrożnością tętnicy środkowej mózgu wywołaną śródbłonkiem lub modelem udaru niedokrwiennego MCAO indukowanym przez ET. Zabieg okna czaszkowego wykonuje się w celu ilościowego określenia zmian średnicy naczynia, które zachodzą po wstrzyknięciu ET one do miąższu mózgu sąsiadującego z bliższą tętnicą środkową mózgu lub MCA.

W szczególności używamy techniki tworzenia okna czaszki przez kość skroniową po bocznej stronie czaszki szczura. Tętnice mózgowe można następnie uwidocznić albo z nienaruszoną oponą twardą, albo z oponą twardą zniesioną i cofniętą. Najczęściej podczas wizualizacji pozostawiamy oponę twardą nienaruszoną.

Ponieważ MCAO indukowany przez ET one polega na dostarczeniu peptydu zwężającego naczynia krwionośne do miąższu mózgu, omija to potrzebę nacinania opony twardej bezpośrednio nad uwidocznionymi naczyniami w celu dostarczenia leku. W tym filmie pokażemy, jak stworzyć okno czaszkowe, aby krok po kroku wizualizować tętnice mózgowe, a także jak uniknąć wielu typowych potencjalnych pułapek związanych z tą metodą. Po umieszczeniu kaniuli prowadzącej, jak wspomniano, można utworzyć okno czaszki, aby bezpośrednio uwidocznić proksymalne części środkowej tętnicy mózgowej podczas zabiegu udaru, najpierw wykonaj nacięcie w skórze głowy, jak pokazano, za pomocą nożyczek i cofnij skórę, aby odsłonić mięsień skroniowy.

Przetnij mięsień skroniowy za pomocą elektrokoagulacji, a następnie wycofaj się, aby uwidocznić płaskonabłonkową część kości skroniowej. Uzyskanie odpowiedniej ekspozycji kości skroniowej ma kluczowe znaczenie dla tej procedury. Uważaj, aby unikać orbity podczas kauteryzacji.

Aby poprawić wizualizację, użyj szwu, aby cofnąć przecięty na pół mięsień skroniowy. Narysuj kwadrat o długości od trzech do czterech milimetrów na płaskonabłonkowej części kości skroniowej do oczodołu i powyżej podstawy wyrostka jarzmowego, ponieważ odbija się od kości skroniowej. Użyj wiertła, aby wyciąć tę część kości.

Uważaj, aby nie wywierać zbyt dużego nacisku, ponieważ możliwe jest wwiercenie się w mózg. Pamiętaj, aby wykonywać częste płukanie sterylnym roztworem soli fizjologicznej, aby poprawić wizualizację pola operacyjnego i zapobiec przegrzaniu czaszki. Zaczynając od luźnego rogu, ostrożnie usuń kawałek kości skroniowej za pomocą cienkich kleszczyków do zębów szczura, uważając, aby nie rozerwać żadnych naczyń związanych z oponą twardą.

Tutaj możesz uwidocznić gałąź środkowej tętnicy mózgowej na początku przed wstrzyknięciem śródbłonka. Jeden. W ciągu kilku minut od jednego wstrzyknięcia śródbłonka środkowa tętnica mózgowa zacznie się zwężać. W końcu gałęzie stają się trudne do wizualizacji, a tkanka mózgowa staje się blada.

Po około 20 minutach działanie śródbłonka zmniejszy się, a naczynia zaczną się stopniowo rozszerzać. Powrót do średnicy wyjściowej po około 45 minutach Aby zmierzyć średnicę naczynia W różnych punktach czasowych przed i po jednym wstrzyknięciu śródbłonka, nieruchome klatki z filmu są rejestrowane w odstępach jednominutowych. Korzystanie z odtwarzacza multimedialnego VLC za pomocą VLC Media Player przejdź do narzędzi, preferencji, a następnie zmień ustawienie na wszystkie w obszarze pokaż ustawienia.

Rozwiń menu wideo na lewym pasku bocznym i rozwiń moduły wyjściowe. Wybierz typ filtru sceny scene dla prefiksu nazwy pliku. Następnie dodaj ścieżkę katalogu.

Następnie ustaw współczynnik nagrywania dla przechwytywania klatek w oparciu o liczbę klatek na sekundę filmu, jak wyjaśniono w pisemnym protokole. Na koniec kliknij zapisz otwarty. Żądany odtwarzacz wideo i VLC będzie automatycznie zapisywał nieruchome klatki raz na minutę, aby zmierzyć średnicę naczynia.

Korzystając z tych obrazów, najpierw otwórz oprogramowanie Image J, a następnie otwórz nieruchome klatki, które będziesz mierzyć. Przejdź do sekcji Analiza, ustaw pomiary i odznacz wszystkie pola. Wybierz narzędzie linii prostej, powiększ zgodnie z wymaganiami.

Umieść linię prostopadłą do ścieżki naczynia Aby zmierzyć średnicę naczynia. Przejdź do analizy, a następnie kliknij zmierz, aby uzyskać średnicę naczynia. Powtórz to dla wszystkich żądanych obrazów.

Średnica naczynia w każdym punkcie czasowym powinna być znormalizowana do podstawowej średnicy naczynia, aby można było dokonać porównań przy użyciu wielu szczurów. Aby to zrobić, użyj wzoru pokazanego tutaj. Podsumowując, ta technika przygotowania okna czaszkowego jest bardzo wszechstronna, ponieważ można ją zmienić, aby sprostać potrzebom wielu eksperymentów z niewielkimi modyfikacjami.

Na przykład udało nam się monitorować przepływ krwi w mózgu w określonych gałęziach MCA za pomocą laserowych obrazów przepływu dopplerowskiego, aby skupić się bezpośrednio na tętnicy mózgowej wizualizowanej przez okno czaszki. Ponadto podobny preparat o rozmiarach opony twardej może być stosowany przy miejscowym podawaniu związków wazoaktywnych w celu stworzenia kąpieli reaktywnej in vivo. Podczas przygotowywania okna czaszkowego należy wziąć pod uwagę kilka czynników, aby zmniejszyć awaryjność tej techniki.

Wiele z tych czynników jest związanych z uzyskaniem dobrej wizualizacji tętnic mózgowych. Na przykład podczas tworzenia kraniektomii C należy zachować ostrożność, aby opona twarda lub naczynia krwionośne nad nią nie zostały naruszone przez łoże wiertnicze. Najlepiej osiągnąć to poprzez częste mycie sterylną solą fizjologiczną, aby usunąć zanieczyszczenia i schłodzić czaszkę.

Mamy nadzieję, że ten film pomoże Ci w projektowaniu eksperymentów wykorzystujących okno czaszkowe i pomoże uniknąć typowych pułapek, które mogą wystąpić podczas tej procedury.