Name: Ocena regeneracji naczyń w OUN za pomocą siatkówki myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-23T18:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Poznaj metodę oceny regeneracji naczyń w OUN w modelu retinopatii tlenowej u myszy. Technika obejmuje wstrzyknięcia doszklistkowe, angiografię fluoresceinową i analizę mikroskopową siatkówki.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

PS posiada Kanadyjską Katedrę Badań w Biologii Komórki Siatkówki oraz Nagrodę Nowego Badacza Instytutu Badawczego Alcon. Prace te były wspierane przez granty z Kanadyjskich Instytutów Badań nad Zdrowiem (221478), Kanadyjskiego Towarzystwa Diabetologicznego (OG-3-11-3329-PS), Kanadyjskiej Rady ds. Badań Nauk Przyrodniczych i Inżynierii (418637) oraz Fundacji Walki ze Ślepotą Kanady. Wsparcia udzieliła również organizacja Reseau de Recherche en Santé de la Vision du Québec.

Oświadczenie etyczne: Wszystkie eksperymenty na zwierzętach są zgodne z wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami ustalonymi przez Stowarzyszenie Badań nad Wzrokiem i Okulistyką (ARVO) Oświadczenie dotyczące wykorzystania zwierząt w badaniach okulistycznych i wzrokowych oraz Kanadyjską Radę Opieki nad Zwierzętami.
1. Retinopatia indukowana tlenem (OIR)
<ol>
	<li>Zapisz datę urodzenia szczeniąt myszy jako P0.</li>
	<li>Należy odnotować całą masę ciała zwierząt w momencie wprowadzenia do O2 w celu zapewnienia odpowiedniego zakresu wagowego. Uwaga: W przypadku myszy C57BL/6 na poziomie P17 masa ciała powinna wynosić od 5 do 7,5 g dla maksymalnego NV32. W celu utrzymania spójności środowiskowej zaleca się stosowanie rodzeństwa z miotu jako kontroli (dla myszy modyfikowanych genetycznie, a także myszy otrzymujących leczenie eksperymentalne). Oceniając działanie wektora wirusowego, należy wziąć pod uwagę tropizm wirusa i przeznaczyć wystarczająco dużo czasu na pełną ekspresję transgenów dostarczonych przez wirusa. Zaleca się szybką ekspresję wektorów wirusowych, takich jak lentiwirusy 3. generacji 24,25,33.</li>
	<li>Umieść młode myszy w P7 (C57BL / 6 lub pożądany szczep) i matkę zastępczą CD1 w komorze tlenowej ustawionej na 75%O2 na 5 dni27. Wilgotność i temperatura otoczenia utrzymywały się na stałym poziomie przez cały czas ekspozycji naO2. Uwaga: Urządzenia badawcze wyposażone w centralne źródłoO2 są idealne i ograniczają kłopotliwą wymianę pustych zbiornikówO2. W przypadku pracy z myszami transgenicznymi lub z nokautem ważne jest, aby upewnić się, że myszy kontrolne i eksperymentalne są pozyskiwane od tego samego dostawcy, aby ograniczyć dryfy genetyczne w obrębie tych samych szczepów30,29. </li>
	<li>W P12 wyjmij myszy z komory tlenowej i wróć do otoczeniaO2.</li>
</ol>
2. Iniekcja doszklistkowa w celu dostarczenia związków do wewnętrznej siatkówki (podczas oceny działania związku farmakologicznego lub białka rekombinowanego)
<ol>
	<li>W P14 znieczulij myszy 2% izofluranem w tlenie 2 l/min (lub wybranym środkiem znieczulającym zatwierdzonym przez komitet ochrony zwierząt). W celu sprawdzenia skuteczności znieczulenia należy kolejno uszczypnąć ogon, tylną stopę i ucho kleszczami.</li>
	<li>Połóż mysz na brzuchu.</li>
	<li>Za pomocą sterylnej strzykawki o pojemności 10 μl, wyposażonej w igłę ze ściętego szkła, należy wykonać wstrzyknięcie maksymalnej objętości 1 μl roztworu zawierającego badany związek lub nośnik (sól fizjologiczna) w tylną część rąbka oka, pod kątem 45° omijając soczewkę. Uwaga: Wyciągniętą szklaną igłę przymocowuje się do strzykawki za pomocą kropli żywicy epoksydowej.</li>
	<li>Nałóż kroplę lubrykantu maści okulistycznej (najlepiej z antybiotykiem) za pomocą wacika na oko myszy.</li>
	<li>Wróć mysz z powrotem do klatki z matką zastępczą. Myszy są następnie dokładnie monitorowane, dopóki nie wyzdrowieją i nie będą w pełni zdolne do chodzenia.</li>
</ol>
3. Ocena perfuzji naczyń i funkcji bariery (integralności) za pomocą angiografii fluoresceinowej
<ol>
	<li>Znieczulić myszy 2% izofluranem w tlenie 2 l/min (lub wybranym środkiem znieczulającym zatwierdzonym przez komitet ochrony zwierząt). W celu sprawdzenia skuteczności znieczulenia należy kolejno uszczypnąć ogon, tylną stopę i ucho kleszczami. Uwaga: Jest to zwykle wykonywane w P17, gdy oceniana jest regeneracja. Przeprowadź również analizę w P19 i P21, aby określić, czy integralność naczyń krwionośnych jest zachowana w czasie.</li>
	<li>Po znieczuleniu zważ mysz.</li>
	<li>Wykonaj nacięcie brzucha w linii środkowej nożyczkami preparacyjnymi. Uwaga: Narzędzia preparacyjne powinny być regularnie sprawdzane i ostrzone.</li>
	<li>Przetnij żebra na boki i podnieś klatkę piersiową za pomocą kleszczy. Uwaga: Konieczne jest cięcie tak boki, jak to możliwe, aby uniknąć uszkodzenia serca.</li>
	<li>Po usunięciu tkanki obwodowej z serca zaciśnij aortę zstępującą za pomocą kleszczy hemostatycznych.</li>
	<li>Powoli wstrzyknąć fluoresceinę-dekstran do lewej komory za pomocą igły 25 G. Uwaga: Jeśli badana jest funkcja bariery naczyniowej, stosuje się 70 kDa fluoresceiny-dekstranu, ponieważ wycieka ona z naczyń, gdy integralność naczynia jest naruszona. Jeśli badacz chce odlewać naczynia krwionośne, stosuje się 2 MDa fluoresceiny-dekstranu. Kroki krytyczne: 1) Aby zapewnić jednorodny podział, odwirować fluoresceinę-dekstran i wstrzyknąć supernatant, 2) Aby zapobiec zwężeniu naczynia, wstrzyknąć podgrzany roztwór fluoresceiny-dekstranu, 3) Jego czas krążenia nie powinien przekraczać 4 minut.</li>
	<li>Odetnij głowę myszy 2 minuty po wstrzyknięciu nożyczkami operacyjnymi.</li>
</ol>
4. Wyłuszczenie i fiksacja oka
Uwaga: Oceniając tempo regeneracji naczyń krwionośnych, najpierw zbierz siatkówki na P12 i dodatkowo na P14 i P17. Zwiększ liczbę punktów czasowych pobierania próbek, aby dokładniej określić tempo rewaskularyzacji24.
<ol>
	<li>Przechyl głowę myszy i połóż ją na boku.</li>
	<li>Usuń skórę i powieki zakrywające oko za pomocą nożyczek preparacyjnych.</li>
	<li>Umieść zakrzywione kleszcze pod okiem i delikatnie pociągnij je do góry, aż nerw wzrokowy zostanie przecięty.</li>
	<li>Obróć głowę myszy na drugą stronę i wykonaj te same czynności (kroki 4.2 i 4.3).</li>
	<li>Aby zapewnić lepszą penetrację utrwalacza, należy nakłuć otwór w przedniej komorze oka za pomocą igły 30 G.</li>
	<li>Przenieś oczy do probówki zawierającej 4% paraformaldehydu (PFA) i utrwal na 1 godzinę w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Usuń PFA i przemyj oczy 4 razy roztworem lodowatego PBS.</li>
</ol>
5. Rozwarstwienie siatkówki
<ol>
	<li>Umieść mysie oczy na szalce Petriego zawierającej zimny PBS i wykonaj sekcję siatkówki pod mikroskopem stereoskopowym.</li>
	<li>Usuń nadmiar tłuszczu/tkanki otaczającej oko za pomocą nożyczek do mikropreparacji.</li>
	<li>Odetnij rogówkę nożyczkami do mikropreparacji.</li>
	<li>Za pomocą dwóch par kleszczy delikatnie oderwij twardówkę od obwodu w kierunku nerwu wzrokowego i wyrzuć.</li>
	<li>Ściśnij soczewkę (białawą kulkę pod rogówką) kleszczami i wyjmij ją z muszli ocznej. Użyj jednej pary kleszczy jako podpory, a drugiej do chwycenia i ostrożnego podnoszenia i zdejmowania soczewki.</li>
	<li>Odłącz naczynia hialoidalne od wewnętrznej strony siatkówki za pomocą małych szczoteczek (rozmiar 0) i kleszczyków.</li>
	<li>Usuń wiązki naczyń hialoidalnych połączonych z tarczą nerwu wzrokowego za pomocą kleszczy.</li>
	<li>Wypreparowane siatkówki należy przenieść do probówek mikrowirówkowych o pojemności 2 ml zawierających PBS i umieścić na lodzie przed rozpoczęciem procedury barwienia.</li>
</ol>
6. Barwienie naczyń siatkówki
<ol>
	<li>Wypreparowane siatkówki inkubować przez noc, delikatnie wstrząsając w temperaturze 4 °C w roztworze fluorescencyjnie sprzężonej izolektyny B4 (rodamino-lektyny lub innej) w PBS zawierającym 1 mM CaCl2 (zaleca się rozcieńczenie 2 izolektyny B4 w stosunku 1:100). Podczas całej procedury barwienia przykryj probówki folią aluminiową lub nieprzezroczystą folią, aby chronić przed światłem.</li>
	<li>Następnego dnia usuń roztwór barwiący i przemyj siatkówki 3x w PBS przez 10 minut w temperaturze pokojowej.</li>
</ol>
7. Przygotowanie płaskich nasadek siatkówki
<ol>
	<li>Przenieś siatkówki, stroną fotoreceptorową do dołu, na szkiełko mikroskopowe i wykonaj cztery głębokie, równoodległe nacięcia promieniowe za pomocą skalpela chirurgicznego, aby podzielić siatkówkę na cztery równej wielkości ćwiartki. Podczas nacięć należy usztywnić siatkówkę szczoteczką, aby się nie poruszała.</li>
	<li>Używając dwóch szczotek nasączonych PBS, ostrożnie spłaszcz kwadranty fotoreceptora stroną do dołu i zanurz siatkówkę w podłożu montażowym, aby zapobiec fotowybielaniu. Następnie ostrożnie umieść szkiełko nakrywkowe na powierzchni zamontowanej siatkówki bez wywierania nacisku i upewniając się, że pęcherzyki powietrza nie gromadzą się pod szkiełkiem nakrywkowym.</li>
</ol>
8. Obrazowanie i kwantyfikacja wazoobliteracji (VO) i neowaskularyzacji (NV) zgodnie z wcześniejszym opisem31
<ol>
	<li>Rób zdjęcia całych siatkówk za pomocą mikroskopu epi-fluorescencyjnego przy powiększeniu 10X.</li>
	<li>Otwórz obraz siatkówki w oprogramowaniu do edycji zdjęć, zszyj i zmierz całkowitą powierzchnię siatkówki oraz obszar beznaczynki. Powierzchnia może być wyrażona w pikselach.</li>
	<li>Określ zasięg VO, dzieląc liczbę pikseli w obszarze beznaczyniowym przez liczbę pikseli w całkowitej powierzchni siatkówki.</li>
	<li>Określ zasięg NV, dzieląc liczbę pikseli NV przez liczbę pikseli w całkowitej powierzchni siatkówki, jak opisano31.</li>
</ol>

<ol><li>Carmeliet, P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+mechanisms+of+nerve+and+blood+vessel+wiring%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Common mechanisms of nerve and blood vessel wiring.</a> Nature. 436, 193-200 (2005).</li>
<li>Eichmann, A., Thomas, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Parallels+between+Neural+and+Vascular+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Molecular Parallels between Neural and Vascular Development.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 3, (2012).</li>
<li>Larrivee, B., Freitas, C., Suchting, S., Brunet, I., Eichmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+of+vascular+development%3A+lessons+from+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Guidance of vascular development: lessons from the nervous system.</a> Circ Res. 104, 428-441 (2009).</li>
<li>Stefater Iii, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+angiogenesis+by+a+non-canonical+Wnt-Flt1+pathway+in+myeloid+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Regulation of angiogenesis by a non-canonical Wnt-Flt1 pathway in myeloid cells.</a> Nature. 474, 511-515 (2011).</li>
<li>Checchin, D., Sennlaub, F., Levavasseur, E., Leduc, M., Chemtob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+role+of+microglia+in+retinal+blood+vessel+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Potential role of microglia in retinal blood vessel formation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 3595-3602 (2006).</li>
<li>Quaegebeur, A., Lange, C., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurovascular+link+in+health+and+disease%3A+molecular+mechanisms+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The neurovascular link in health and disease: molecular mechanisms and therapeutic implications.</a> Neuron. 71, 406-424 (2011).</li>
<li>Yamamoto, Y., Craggs, L., Baumann, M., Kalimo, H., Kalaria, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+molecular+genetics+and+pathology+of+hereditary+small+vessel+diseases+of+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathol+Appl+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Review: molecular genetics and pathology of hereditary small vessel diseases of the brain.</a> Neuropathol Appl Neurobiol. 37, 94-113 (2011).</li>
<li>Brun, A., Englund, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+white+matter+disorder+in+dementia+of+the+Alzheimer+type%3A+a+pathoanatomical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">A white matter disorder in dementia of the Alzheimer type: a pathoanatomical study.</a> Ann Neurol. 19, 253-262 (1986).</li>
<li>Prat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+of+multiple+sclerosis+lymphocytes+through+brain+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Migration of multiple sclerosis lymphocytes through brain endothelium.</a> Arch Neurol. 59, 391-397 (2002).</li>
<li>Rule, R. R., Schuff, N., Miller, R. G., Weiner, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gray+matter+perfusion+correlates+with+disease+severity+in+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Gray matter perfusion correlates with disease severity in ALS.</a> Neurology. 74, 821-827 (2010).</li>
<li>Antonetti, D. A., Klein, R., Gardner, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> N Engl J Med. 366, 1227-1239 (2012).</li>
<li>Hartnett, M. E., Penn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+management+of+retinopathy+of+prematurity%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and management of retinopathy of prematurity.</a> N Engl J Med. 367, 2515-2526 (2012).</li>
<li>Sapieha, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinopathy+of+prematurity%3A+understanding+ischemic+retinal+vasculopathies+at+an+extreme+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Retinopathy of prematurity: understanding ischemic retinal vasculopathies at an extreme of life.</a> J Clin Invest. 120, 3022-3032 (2010).</li>
<li>Chen, J., Smith, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinopathy+of+prematurity%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Retinopathy of prematurity.</a> Angiogenesis. 10, 133-140 (2007).</li>
<li>Cheung, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy+and+systemic+vascular+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy and systemic vascular complications.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27, 161-176 (2008).</li>
<li>Smith, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Through+the+eyes+of+a+child%3A+understanding+retinopathy+through+ROP+the+Friedenwald+lecture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Through the eyes of a child: understanding retinopathy through ROP the Friedenwald lecture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 5177-5182 (2008).</li>
<li>Caballero, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+vascular+damage+can+be+repaired+by+healthy%2C+but+not+diabetic%2C+endothelial+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Ischemic vascular damage can be repaired by healthy, but not diabetic, endothelial progenitor cells.</a> Diabetes. 56, 960-967 (2007).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-mediated+STAT3+activation+inhibits+retinal+vascularization+by+down-regulating+local+erythropoietin+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">VEGF-mediated STAT3 activation inhibits retinal vascularization by down-regulating local erythropoietin expression.</a> Am J Pathol. 180, 1243-1253 (2012).</li>
<li>Ritter, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+progenitors+differentiate+into+microglia+and+promote+vascular+repair+in+a+model+of+ischemic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Myeloid progenitors differentiate into microglia and promote vascular repair in a model of ischemic retinopathy.</a> J Clin Invest. 116, 3266-3276 (2006).</li>
<li>Saito, Y., Geisen, P., Uppal, A., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+NAD%28P%29H+oxidase+reduces+apoptosis+and+avascular+retina+in+an+animal+model+of+retinopathy+of+prematurity%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Inhibition of NAD(P)H oxidase reduces apoptosis and avascular retina in an animal model of retinopathy of prematurity.</a> Mol Vis. 13, 840-853 (2007).</li>
<li>Connor, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+dietary+intake+of+omega-3-polyunsaturated+fatty+acids+reduces+pathological+retinal+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Increased dietary intake of omega-3-polyunsaturated fatty acids reduces pathological retinal angiogenesis.</a> Nat Med. 13, 868-873 (2007).</li>
<li>Banin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T2-TrpRS+inhibits+preretinal+neovascularization+and+enhances+physiological+vascular+regrowth+in+OIR+as+assessed+by+a+new+method+of+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">T2-TrpRS inhibits preretinal neovascularization and enhances physiological vascular regrowth in OIR as assessed by a new method of quantification.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 2125-2134 (2006).</li>
<li>Dorrell, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+retinal+astrocytes+normalizes+revascularization+and+prevents+vascular+pathology+associated+with+oxygen-induced+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Maintaining retinal astrocytes normalizes revascularization and prevents vascular pathology associated with oxygen-induced retinopathy.</a> Glia. 58, 43-54 (2010).</li>
<li>Joyal, J. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+neurons+prevent+vascular+regeneration+of+neural+tissue+by+secreting+semaphorin+3A%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Ischemic neurons prevent vascular regeneration of neural tissue by secreting semaphorin 3A.</a> Blood. 117, 6024-6035 (2011).</li>
<li>Binet, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+ER+Stress+Impedes+Myeloid-Cell-Induced+Vascular+Regeneration+through+IRE1alpha+Degradation+of+Netrin-1%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Neuronal ER Stress Impedes Myeloid-Cell-Induced Vascular Regeneration through IRE1alpha Degradation of Netrin-1.</a> Cell Metab. 17, 353-371 (2013).</li>
<li>Fukushima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sema3E-PlexinD1+signaling+selectively+suppresses+disoriented+angiogenesis+in+ischemic+retinopathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Sema3E-PlexinD1 signaling selectively suppresses disoriented angiogenesis in ischemic retinopathy in mice.</a> J Clin Invest. 121, 1974-1985 (2011).</li>
<li>Smith, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Oxygen-induced retinopathy in the mouse.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 35, 101-111 (1994).</li>
<li>Lange, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+retinal+vaso-obliteration+and+neovascularisation+in+the+oxygen-induced+retinopathy+%28OIR%29+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Kinetics of retinal vaso-obliteration and neovascularisation in the oxygen-induced retinopathy (OIR) mouse model.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 247, 1205-1211 (2009).</li>
<li>Connor, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse%3A+a+model+of+vessel+loss%2C+vessel+regrowth+and+pathological+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological angiogenesis.</a> Nature Protocols. 4, 1565-1573 (2009).</li>
<li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 2813-2826 (2010).</li>
<li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer-aided+quantification+of+retinal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Computer-aided quantification of retinal neovascularization.</a> Angiogenesis. 12, 297-301 (2009).</li>
<li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+Weight+Gain+Modifies+Severity+and+Functional+Outcome+of+Oxygen-Induced+Proliferative+Retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Postnatal Weight Gain Modifies Severity and Functional Outcome of Oxygen-Induced Proliferative Retinopathy.</a> Am J Pathol. 177, 2715-2723 (2010).</li>
<li>Cerani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-Derived+Semaphorin+3A+is+an+Early+Inducer+of+Vascular+Permeability+in+Diabetic+Retinopathy+via+Neuropilin-1%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Neuron-Derived Semaphorin 3A is an Early Inducer of Vascular Permeability in Diabetic Retinopathy via Neuropilin-1.</a> Cell Metabolism. 18, 505-518 (2013).</li>
<li>Sapieha, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eyeing+central+neurons+in+vascular+growth+and+reparative+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Eyeing central neurons in vascular growth and reparative angiogenesis.</a> Blood. 120, 2182-2194 (2012).</li>
<li>Dorfman, A., Dembinska, O., Chemtob, S., Lachapelle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+manifestations+of+postnatal+hyperoxia+on+the+retinal+structure+and+function+of+the+neonatal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Early manifestations of postnatal hyperoxia on the retinal structure and function of the neonatal rat.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 458-466 (2008).</li>
<li>Dorfman, A. L., Joly, S., Hardy, P., Chemtob, S., Lachapelle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+oxygen+and+light+on+the+structure+and+function+of+the+neonatal+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The effect of oxygen and light on the structure and function of the neonatal rat retina.</a> Doc Ophthalmol. 118, 37-54 (2009).</li>
<li>Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis%2C+angiogenesis%2C+and+MRI+indices+of+functional+recovery+from+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis, angiogenesis, and MRI indices of functional recovery from stroke.</a> Stroke. 38, 827-831 (2007).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+improved+cerebral+blood+flow+in+the+ischemic+boundary+area+detected+by+MRI+after+administration+of+sildenafil+to+rats+with+embolic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and improved cerebral blood flow in the ischemic boundary area detected by MRI after administration of sildenafil to rats with embolic stroke.</a> Brain Res. 1132, 185-192 (2007).</li>
<li>Robinson, R., Barathi, V. A., Chaurasia, S. S., Wong, T. Y., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+animal+models+of+diabetic+retinopathy%3A+from+molecular+approaches+to+mice+and+higher+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Update on animal models of diabetic retinopathy: from molecular approaches to mice and higher mammals.</a> Dis Model Mech. 5, 444-456 (2012).</li>
<li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat Genet. 37, 1181-1186 (2005).</li>
<li>Jenuth, J. P., Peterson, A. C., Shoubridge, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+selection+for+different+mtDNA+genotypes+in+heteroplasmic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific selection for different mtDNA genotypes in heteroplasmic mice.</a> Nat Genet. 16, 93-95 (1997).</li>
<li>Mattapallil, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rd8+mutation+of+the+Crb1+gene+is+present+in+vendor+lines+of+C57BL%2F6N+mice+and+embryonic+stem+cells%2C+and+confounds+ocular+induced+mutant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmolog.%2C+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The Rd8 mutation of the Crb1 gene is present in vendor lines of C57BL/6N mice and embryonic stem cells, and confounds ocular induced mutant phenotypes.</a> Investigative ophthalmolog., & visual science. 53, 2921-2927 (2012).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Jaki jest najskuteczniejszy sposób stymulowania wzrostu nowych zdrowych naczyń w niedokrwiennej tkance nerwowej? Czy medycznie uzasadnione jest zakłócanie i przyspieszanie naturalnie występującego wzrostu naczyń krwionośnych? W patologiach neuroniedokrwiennych, takich jak retinopatie niedokrwienne lub udar mózgu, zwyrodnienie naczyń wiąże się ze zmniejszoną funkcją neuronów35-38. W związku z tym, aby przeciwdziałać wczesnym urazom, korzystne może okazać się przywrócenie regionalnego mikrokrążenia w bezpośredni...

Podczas rozwoju OUN, nerwy, komórki odpornościowe i naczynia krwionośne tworzą niezwykle sprzężone sieci, aby zapewnić odpowiednią perfuzję tkanek i umożliwić przekazywanie informacji sensorycznych1-5. Rozpad układów naczyniowych powoduje niedostateczne dotlenienie tkanek i upośledzone zaopatrzenie metaboliczne i jest coraz częściej uznawany za istotny czynnik przyczyniający się do patogenezy chorób neurodegeneracyjnych6. Na przykład zanik naczyń krwionośnych i pogorszenie jednostki nerwowo-naczyniowej w mózgu są związane z otępieniem naczyniowym, zmianami naczyniowymi istoty białej mózgu7, a choroba Alzheimera ze zwężeniem tętniczek i małych naczyń8. Ponadto uważa się, że upośledzona funkcja bariery naczyniowej przyczynia się do stwardnienia rozsianego9 i stwardnienia zanikowego bocznego10.
Bezpośrednie znaczenie dla modelu siatkówki opisanego w tym protokole, choroby powodujące ślepotę, takie jak retinopatia cukrzycowa11 i retinopatia wcześniaków 12,13 charakteryzują się fazą wczesnego zwyrodnienia naczyniowego. Wynikający z tego stres niedokrwienny siatkówki nerwowo-naczyniowej wyzwala drugą fazę nadmiernej i patologicznej neowaskularyzacji, która prawdopodobnie powstaje jako reakcja kompensacyjna na przywrócenie dopływu tlenu i energii14-16. Atrakcyjną strategią przezwyciężania stresu niedokrwiennego, który ma kluczowe znaczenie dla postępu choroby, jest przywrócenie funkcjonalnych sieci naczyniowych, szczególnie w strefach niedokrwiennych siatkówki nerwowej (ryc. 2 i 3). Wywołanie kontrolowanej odpowiedzi angiogennej może wydawać się sprzeczne z intuicją w przypadku stanu, w którym terapie antyangiogenne, takie jak anty-VEGF, są uważane za terapie dostosowane. Jednak dowodów na słuszność tego podejścia jest coraz więcej. Na przykład, zwiększenie "fizjologicznego" wzrostu naczyń krwionośnych w retinopatiach niedokrwiennych zostało elegancko zademonstrowane poprzez wprowadzenie śródbłonkowych komórek prekursorowych17, hamowanie indukowanej przez komórki Müllera regulacji w dół innych czynników angiogennych18, wstrzykiwanie komórek progenitorowych szpiku19, hamowanie apoptozy wywołanej oksydazą NADPH20, zwiększenie spożycia wielonienasyconych kwasów tłuszczowych ω-3 w diecie21, leczenie karboksylowo-końcowym fragmentem syntetazy tRNA tryptofanu22 i bezpośrednie podawanie VEGF lub FGF-2 w celu ochrony komórek glejowych23. Ponadto wykazaliśmy, że modulowanie klasycznych sygnałów przewodnictwa neuronalnego, takich jak semaforyny lub Netrins w retinopatiach niedokrwiennych, przyspiesza regenerację naczyń krwionośnych zdrowych naczyń w siatkówce, a w konsekwencji zmniejsza patologiczną angiogenezę24,25. Mając bezpośrednie znaczenie kliniczne, kilka z wyżej wymienionych badań na zwierzętach dostarcza dowodów na to, że promowanie regeneracji naczyń krwionośnych we wczesnej fazie niedokrwiennej retinopatii może znacznie zmniejszyć zagrażającą wzrokowi neowaskularyzację przedsiatkówkową 19,23,24,26, prawdopodobnie poprzez zmniejszenie obciążenia niedokrwiennego.
Opracowanie strategii terapeutycznych, które stymulują regenerację funkcjonalnych naczyń krwionośnych, pozostaje poważnym wyzwaniem dla biologów naczyniowych. Tutaj opisujemy system eksperymentalny, który wykorzystuje mysi model retinopatii indukowanej tlenem (OIR) do zbadania strategii modulowania odrostu naczyń w siatkówce. Model ten, opracowany przez Smitha i in. w 1994 roku27, służy jako wskaźnik zastępczy dla ludzkich retinopatii proliferacyjnych i polega na wystawieniu młodych myszy P7 na działanie 75% O2 aż do P12, a następnie ponownym wprowadzeniu szczeniąt do otoczenia w pomieszczeniu O2 (ryc. 1). Ten paradygmat luźno naśladuje scenariusz, w którym wcześniak jest wentylowany za pomocąO2. Narażenie młodych myszy na hiperoksję powoduje zwyrodnienie naczyń włosowatych siatkówki i mikrokrążenia oraz daje powtarzalny obszar zaniku naczyń krwionośnych (VO) zwykle oceniany po wyjściu z O2 w P12, chociaż maksymalny obszar VO osiąga się po 48 godzinach (P9) po ekspozycji na O2 28. U myszy jałowe strefy VO spontanicznie regenerują się w ciągu tygodnia po ponownym wprowadzeniu do powietrza w pomieszczeniu i ostatecznie strefy VO są całkowicie unaczynione (ryc. 2). Ponowne wprowadzenie do powietrza w pomieszczeniu myszy poddanych OIR wywołuje również neowaskularyzację przed siatkówką (NV) (maksymalną przy P17), która jest zwykle oceniana w celu określenia skuteczności paradygmatów leczenia antyangiogennego. W swojej najczystszej postaci model OIR zapewnia wysoce powtarzalne i wymierne narzędzie do oceny zwyrodnienia naczyń wywołanego tlenem i określenia zakresu destrukcyjnej neowaskularyzacji przedsiatkówkowej29-31.
Różne paradygmaty leczenia eksploracyjnego, które modulują regenerację naczyń OUN, mogą być badane za pomocą modelu OIR, w tym stosowanie związków farmakologicznych, terapii genowej, delecji genów i innych. Skłonność danego podejścia do wpływania na odrost naczyń ocenia się krok po kroku w oknie między P12 (maksymalne VO po wyjściu z hiperoksji) a P17 (maksymalne NV). Ocena wyników leczenia patologicznego NV może być szybko i łatwo określona równolegle i została dokładnie opisana przez Stahla i współpracowników30,31. Tutaj przedstawiamy prostą procedurę krok po kroku w celu zbadania modulacji fizjologicznej rewaskularyzacji w obrębie siatkówki nerwowej przez związki farmakologiczne, prospektywne terapie, wektory wirusowe lub w celu zbadania wpływu genów kandydujących na myszy transgeniczne lub nokautujące.

<table><tbody><tr><td>Myszy C57Bl/6 (można stosować inne szczepy; odpowiedź angiogenna różni się w zależności od szczepu)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>CD1 matki karmiące</td><td>Dostawca z wyboru</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki operacyjne proste</td><td>World Precision Instruments</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki preparacyjne proste</td><td>World Precision Instruments</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki do oczu Vannas</td><td>Aparat Harvarda</td><td>72-8483</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze do przysłony, zakrzywione, ząbkowane</td><td>World Precision Instruments</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>Szczotki 362R rozmiar 0</td><td>Kleszcze Dynasty</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3; proste</td><td>World Precision Instruments</td><td>500338</td><td></td></tr><tr><td>Ostrze chirurgiczne, rozmiar 10</td><td>Bard-Parker</td><td>371110</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamine Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I</td><td>Vector Laboratories, Inc</td><td>RL-1102</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka mikroskopowe</td><td>VWR</td><td>16004-368</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>Mikroskopia elektronowa Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Observer Z1 Mikroskop odwróconych faz i fluorescencji</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica MZ9.5 Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dekstran izoticyjanianu fluoresceiny, 70000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46945</td><td></td></tr></tbody></table>

ocena regeneracji naczyń w oun za pomocą siatkówki myszy

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Siatkówka gryzoni jest prawdopodobnie najbardziej dostępnym systemem ssaków, w którym można badać interakcje nerwowo-naczyniowe w obrębie ośrodkowego układu nerwowego (OUN). Coraz częściej uznaje się, że kilka chorób neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Alzheimera, stwardnienie rozsiane i stwardnienie zanikowe boczne, zawiera elementy upośledzenia naczyniowego. Ponadto najczęstsze przyczyny ślepoty w populacjach pediatrycznych i w wieku produkcyjnym (odpowiednio retinopatia wcześniaków i retinopatia cukrzycowa) charakteryzują się zwyrodnieniem naczyń krwionośnych i niepowodzeniem fizjologicznego odrastania naczyń. Celem niniejszej pracy technicznej jest przedstawienie szczegółowego protokołu badania regeneracji naczyń krwionośnych w sieci nerwowej siatkówki. Metoda ta może być stosowana do wyjaśnienia mechanizmów molekularnych, które prowadzą do zahamowania wzrostu naczyń krwionośnych po urazie niedokrwiennym. Ponadto można zbadać potencjalne metody terapeutyczne w celu przyspieszenia i przywrócenia zdrowych splotów naczyniowych. Wyniki uzyskane przy użyciu opisanego podejścia mogą zapewnić możliwości terapeutyczne w retinopatiach niedokrwiennych, takich jak cukrzyca lub wcześniactwo, a także być może przynieść korzyści innym zaburzeniom naczyniowym OUN.

Model OIR jest powszechnie wykorzystywany do badania indukowanej tlenem degeneracji naczyniowej oraz indukowanej niedokrwieniem patologicznej neowaskularyzacji siatkówki i odegrał kluczową rolę w opracowaniu obecnie stosowanych terapii antyangiogennych w chorobach oczu27,29,30. Wyniki uzyskane przy użyciu tego modelu mogą być w przybliżeniu ekstrapolowane na niedokrwienne retinopatie, takie jak proliferacyjna retinopatia cukrzycowa oraz retinopatia przedwczesności<su...

Siatkówka gryzonia od dawna jest uznawana za dostępne okno do mózgu. W tym artykule technicznym przedstawiamy protokół, który wykorzystuje mysi model retinopatii indukowanej tlenem do badania mechanizmów, które prowadzą do niepowodzenia regeneracji naczyń w ośrodkowym układzie nerwowym po urazie niedokrwiennym. Opisany system można również wykorzystać do zbadania strategii wspomagających odrastanie funkcjonalnych naczyń krwionośnych w obrębie siatkówki i ośrodkowego układu nerwowego.

Ocena regeneracji naczyń w OUN za pomocą siatkówki myszy

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest zbadanie strategii sprzyjających odrastaniu funkcjonalnych naczyń krwionośnych w siatkówce oraz w OUN po urazie niedokrwiennym. W tym celu w pierwszej kolejności wykorzystuje się mysi model retinopatii indukowanej tlenem. Następnie związki są dostarczane do oka poprzez zastrzyki wewnątrzgałkowe.Perfuzję naczyń oraz funkcję bariery weryfikuje się następnie za pomocą angiografii z fluoresceiną. Ostatnim krokiem jest wyjęcie gałki ocznej i wyizolowanie siatkówki. Następnie siatkówkę barwi się i montuje przed obrazowaniem.Ostatecznie mikroskopia immunofluorescencyjna jest wykorzystywana do oceny tempa regeneracji naczyniowej po zabiegach dokonanych drogą dostępu przezwitrylowego lub u myszy z modyfikacjami genetycznymi. Prezentowana przez nas technika zapewnia wysoce powtarzalny i prosty system oceny regeneracji naczyniowej w obrębie ośrodkowego układu nerwowego. Opiera się ona na modelu retinopatii indukowanej tlenem według Smitha i może być bardzo pomocna w projektowaniu strategii terapeutycznych mających na celu leczenie niedokrwienia w obrębie ośrodkowego układu nerwowego.Ta metoda może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania dotyczące mechani

assessment-of-vascular-regeneration-in-the-cns-using-the-mouse-retina

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Ocena regeneracji naczyń krwionośnych w OUN przy użyciu siatkówki myszy

Źródło: Portela-Lomba, M., et. al. Kokultura aksotomizowanych neuronów zwojowych siatkówki szczura z glejem osłonki węchowej, jako model in vitro regeneracji aksonów u dorosłych. J. Vis. Exp. (2020). Ten film przedstawia obrazowanie i kwantyfikację regeneracji aksonów w aksotomizowanych neuronach zwojowych siatkówki szczura (RGN) współhodowanych z unieśmiertelnionymi ludzkimi komórkami glejowymi otaczającymi węch. RGN są znakowane immunologicznie, z czerwonymi somi i zielonymi aksonami. Obrazy...

Obrazowanie i kwantyfikacja regeneracji aksonów w akskotomizowanych neuronach zwojowych siatkówki szczura

Mysia siatkówka noworodka dostarcza dobrze scharakteryzowanego fizjologicznego modelu angiogenezy, który pozwala na badanie ról różnych genów lub leków modulujących angiogenezę w kontekście in vivo. Barwienie immunofluorescencyjne w celu dokładnej wizualizacji splotu naczyniowego ma kluczowe znaczenie dla powodzenia tego typu badań.

Barwienie immunofluorescencyjne siatkówki noworodka myszy w celu zbadania angiogenezy in vivo

Ten film ilustruje metodę, przy użyciu klinicznego skanera 3 T, do obrazowania MR z kontrastem projekcji wzrokowej naiwnej myszy oraz do powtarzalnych i podłużnych badań in vivo zwyrodnienia nerwu wzrokowego związanego z ostrym uszkodzeniem nerwu wzrokowego i przewlekłym zwyrodnieniem nerwu wzrokowego u myszy z nokautem (p50KO).

In vivo (in vivo) Obrazowanie integralności włókien nerwu wzrokowego za pomocą rezonansu magnetycznego ze wzmocnieniem kontrastowym u myszy

Narzędzia używane do wizualizacji regeneracji naczyń krwionośnych wymagają metod kontrastowania drzew naczyniowych. Film ten zademonstrował delikatną technikę iniekcji zastosowaną w celu uzyskania optymalnego kontrastu drzew naczyniowych i zilustrował potencjalne korzyści wynikające ze szczegółowej analizy otrzymanej próbki za pomocą μCT i histologicznych odcinków seryjnych.

Wizualizacja regeneracji naczyń krwionośnych i miąższu po 70% częściowej hepatektomii u zdrowych myszy

Obrazowanie in vivo jest potężnym narzędziem do badania biologii w zdrowiu i chorobie. Protokół ten opisuje obrazowanie przezźrenicowe siatkówki myszy za pomocą standardowego mikroskopu dwufotonowego. Zademonstrowano również różne metody obrazowania in vivo, które umożliwiają fluorescencyjne znakowanie wielu kohort komórkowych siatkówki.

Przezźrenicowe dwufotonowe obrazowanie in vivo siatkówki myszy

Ten protokół opisuje szczegółową metodę przygotowania i immunofluorescencji barwienia płaskich mocowań siatkówki myszy oraz analizy. Szczegółowo opisano również zastosowanie angiografii dna oka fluoresceiny (FFA) u młodych myszy i przetwarzanie obrazu.

Monitorowanie dynamicznego wzrostu naczyń siatkówki w mysim modelu retinopatii indukowanej tlenem

Ten artykuł opisuje dobrze sprawdzony i powtarzalny test barwienia lektyny dla całego preparatu siatkówki Mount oraz protokoły wymagane do ilościowego pomiaru parametrów naczyniowych często zmienianych w retinopatiach proliferacyjnych i nieproliferacyjnych.

Kwantyfikacja parametrów naczyniowych w całych siatkówkach górskich myszy z retinopatiami nieproliferacyjnymi i proliferacyjnymi

Tutaj prezentujemy trzy protokoły analizy danych dla obrazów angiografii fluoresceinowej (FA) i optycznej koherentnej tomografii (OCT) w badaniu okluzji żył siatkówki (RVO).

In vivo (in vivo) Odczyty uszkodzeń naczyniowych w siatkówce myszy w celu zwiększenia odtwarzalności

Niniejszy protokół opisuje prostą i niedrogą metodę ilościowego określania aktywności elementów cis-regulatorowych (tj. enhancerów/promotorów) w żywych siatkówkach myszy za pomocą elektroporacji eksplantów. Opisano przygotowanie DNA, wycięcie siatkówki, elektroporację, hodowlę eksplantów siatkówki oraz analizę i kwantyfikację po utrwaleniu.

Ilościowe określenie aktywności elementów regulacyjnych cis w siatkówce myszy za pomocą elektroporacji eksplantatu

W tym artykule przedstawiamy szybką mikrojonoforezę neuroprzekaźników jako technikę badania integracji sygnałów postsynaptycznych z dużą precyzją przestrzenną i czasową.

Szybka mikrojonoforeza glutaminianu i GABA: przydatne narzędzie do badania integracji synaptycznej

Poznaj metodę oceny regeneracji naczyń w OUN w modelu retinopatii tlenowej u myszy. Technika obejmuje wstrzyknięcia doszklistkowe, angiografię fluoresceinową i analizę mikroskopową siatkówki.

Ocena regeneracji naczyń w OUN za pomocą siatkówki myszy

Przeglądaj więcej filmów