Terapia komórkowa niewydolności serca u szczurów: podwójna torakotomia w przypadku zawału mięśnia sercowego i implantacji nasierdzia komórek i biomatrycy

Celem tej procedury jest wykonanie podwójnej torakotomii u szczurów w celu wykonania podwiązania naczyń wieńcowych i aplikacji nasierdzia. Osiąga się to poprzez wykonanie najpierw torakotomii w czwartej przestrzeni międzyżebrowej. Następnie podwiązuje się lewą przednią zstępującą tętnicę wieńcową lub LAD.

Następnie dwa tygodnie później wykonuje się drugą torakotomię w piątej przestrzeni międzyżebrowej. Na koniec komórki i macierz są nakładane na powierzchnię bijącego serca z zawałem. Ostatecznie wykonuje się echokardiografię w celu oceny czynności serca, a histologię przeprowadza się za pomocą pomiarów wielkości zawału.

Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak sternotomia, jest to, że jest to podejście minimalnie inwazyjne, które pokazuje, że procedura będzie i Lopez wysłała współpracowników z naszego laboratorium. Wszystkie zwierzęta były leczone zgodnie z zaleceniami F-E-L-A-S-A i szwajcarską ustawą o ochronie zwierząt. Po wykrwawieniu szczura oraz wyizolowaniu i oczyszczeniu kości udowej zgodnie z protokołem tekstowym, użyj nożyczek, aby przeciąć oba końce kości.

Następnie, aby przepłukać szpik kostny, wstrzyknij sterylny PBS do rdzenia kości i zbierz szpik do 15-mililitrowej probówki. Odwirować pobrany szpik kostny przez siedem minut w temperaturze 300 razy G. Usunąć supinat za pomocą trzech mililitrów buforu do lizy czerwonych krwinek. Zawiesić osad, inkubować zawiesinę przez jedną minutę w temperaturze pokojowej, a następnie ponownie wirować przez siedem minut w temperaturze 300 razy G po resus.

Zawiesinie osadu w sterylnym podłożu hodowlanym. Dodać dodatkową pożywkę do hodowli komórkowych w kolbie hodowlanej o pojemności 150 mililitrów i wysiać komórki w drugim dniu inkubacji. Zmień pożywkę, aby usunąć komórki, które nie przylegają, i kontynuuj wymianę pożywki co drugi dzień przez dwa do trzech tygodni, aż do osiągnięcia pożądanej gęstości komórek.

Aby przeprowadzić pierwszą torakotomię T, zacznij od zważenia szczura i odpowiednio ustaw parametry respiratora. Wypływ wentylacji jest definiowany automatycznie. Następnie ogol lewą część klatki piersiowej, włącz poduszkę grzewczą i ustaw ją na 37 stopni Celsjusza.

Po znieczuleniu szczura zgodnie z protokołem tekstowym, przed umieszczeniem szczura na poduszce grzewczej w pozycji leżącej na plecach należy uszczypnąć go, zaintubować zwierzę, a następnie podłączyć cewnik intubacyjny do respiratora gryzoni. Zaprogramowany na 2,5 litra tlenu na minutę, 2,5% izofluoru, objętość oddechową dwa mililitry i częstotliwość oddychania 90 oddechów na minutę. Po przygotowaniu podskórnie strzykawki z buprenorfiną w ilości 0,1 miligrama na kilogram, wstrzyknąć jedną trzecią roztworu, a następnie użyć 1% roztworu betadyny do dezynfekcji obszaru.

Następnie naciąć skórę prostopadle do mostka czwartej przestrzeni międzyżebrowej i oddzielić trzy warstwy mięśnia piersiowego. Następnie otwórz czwartą przestrzeń międzyżebrową między żebrami czwartym a piątym. Użyj małego retraktora, aby rozłożyć żebra i odsłonić serce.

Następnie ostrożnie otwórz osierdzie i zlokalizuj lewą przednią zstępującą tętnicę wieńcową lub LAD i użyj szwu 7,0, aby podwiązać ją cztery milimetry poniżej przedsionka. Następnie kontroluj zmianę koloru obszaru niedokrwiennego za pomocą trzech szwów zerowych umieszczonych w przybliżeniu i dystalnie od mostka. Wykonaj dwa szwy, które zostaną użyte do zamknięcia przestrzeni międzyżebrowej.

Zaciśnij szew dystalny. Zacisnąć rurkę wydechową wentylatora na dwie sekundy, aby napompować klatkę piersiową i uniknąć odmy opłucnowej. Następnie zaciśnij drugi szew.

Ustaw warstwy mięśni z powrotem na miejscu. Następnie użyj pięciu szwów zerowych, aby zamknąć skórę 1% roztworem betadyny. Zdezynfekować szew i wstrzyknąć pozostały roztwór buprenorfiny.

Wyłącz system znieczulenia i wyjmij cewnik intubacyjny. Trzymaj szczura w klatce pod ciepłą lampą przez jedną do dwóch godzin przed powrotem do jednostki IVC. Dwa tygodnie po pierwszej torakotomii gojenie jest całkowite, a blizna jest ledwo widoczna.

Postępując zgodnie z procedurą opisaną wcześniej w tym filmie, aby przygotować szczura do operacji, naciąć skórę prostopadle do mostka w piątej przestrzeni międzyżebrowej. Oddziel trzy warstwy mięśni i otwórz piątą przestrzeń międzyżebrową między żebrami piątym a szóstym. Użyj małego retraktora, aby rozłożyć żebra i odsłonić serce.

Jeśli występuje pewne przyleganie, użyj cienkich kleszczy, aby ostrożnie je złagodzić. Następnie zlokalizuj obszar zawału, który pojawia się jako blady obszar poniżej ligatury. W razie potrzeby włóż 10-centymetrowy kawałek siedmioma szwów zerowych na wierzchołku i delikatnie pociągnij za niego, aby lepiej uwidocznić lewą komorę.

Następnie, aby nałożyć komórki i matrycę na powierzchnię niedokrwionego obszaru serca. Po granulowaniu, cztery razy od 10 do sześciu komórek, jak opisano w protokole tekstowym, umieść paletę na sercu przed użyciem fibrynowego uszczelniacza do jego przykrycia. Warstwa kleju mocuje komórki do powierzchni serca.

Po usunięciu kawałka szwu z pozycji wierzchołka, warstwy mięśniowe z powrotem na miejscu zszywają i dezynfekują zwierzę. Jak pokazano wcześniej w filmie, jak pokazano tutaj. Po interwencji chirurgicznej zwierzęta traciły na wadze i szybko wracały do zdrowia, zanim przybrały na wadze, niezależnie od zastosowanego leczenia Jak wykazano na tym wykresie Kaplana, wskaźnik przeżycia jest wysoki po pierwszej torakotomii T, zwierzęta leczone fibryną i/lub komórkami wykazywały niższe wskaźniki przeżycia niż inne grupy, jak widać na tym wykresie.

Niemniej jednak ogólne wskaźniki przeżycia pozostały wysokie po sekundzie. Torakotomię i leczenie czynności serca oceniano za pomocą echokardiografii. Te reprezentatywne obrazy trybu M dla zwierząt zdrowych i z zawałem ilustrują, że kurczliwość ścian LV została zniesiona dwa tygodnie po podwiązaniu LAD, frakcyjne skrócenie zarejestrowano dwa tygodnie po lacji LAD u łącznie 104 zwierząt.

Rozkład częstości pokazuje w miarę powtarzalne metody ze współczynnikiem zmienności 17%Ten rysunek przedstawia graficzne przedstawienie funkcji serca za pomocą zmierzonej frakcji wyrzutowej dwa i sześć tygodni po LAD lacji Czynność serca nadal spada w tym okresie. W tym okresie zachodzi również przebudowa serca, która jest reprezentowana przez wzrost objętości lewej komory odnotowywanej zarówno u sióstr, jak i u rozkurczu. Wreszcie, złote barwienie na wycinkach serca ujawniło, że tkanka zwłóknieniowa i ostatecznie blizna przezścienna rozwinęła się sześć tygodni po podwiązaniu LAD Po opanowaniu tej techniki można wykonać w ciągu 30 do 40 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać minimalnie inwazyjną podwójną torakotomię.