Ocena żywotności wstrzyknięcia ludzkiego tłuszczu nagim myszom za pomocą mikrotomografii komputerowej

Ogólnym celem tej procedury jest opisanie modelu mysiego, który wykorzystuje mikro CT do porównania zachowania objętości między technikami odraczania przygotowania i dostarczania przeszczepu tłuszczu. Osiąga się to poprzez pierwsze przetworzenie ludzkiego aspiratu lipo w celu uzyskania tłuszczu gotowego do szczepienia. Drugim krokiem jest umieszczenie przeszczepów tłuszczu w skórze głowy nagich myszy grasicy CD one.

Następnie przeżycie przeszczepu tłuszczu jest analizowane co tydzień przez myszy skanujące tomografię komputerową, rekonstrukcję obrazów i ilościowe określenie retencji objętości. Ostatnim krokiem jest wyjaśnienie przeszczepu tłuszczu pod koniec ośmiu tygodni i porównanie ich według wagi i histologii. Ostatecznie mikrotomografia komputerowa i histologia są wykorzystywane do wykazania różnic w jakości przeszczepu tłuszczu i przeżywalności.

Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak ważenie przeszczepów tłuszczu, jest to, że umożliwia wizualizację i obiektywne ilościowe określenie objętości przeszczepu tłuszczu w wielu punktach czasowych po początkowym przeszczepie bez konieczności poświęcania badanego zwierzęcia. Po raz pierwszy wpadliśmy na pomysł tej metody, gdy zaczęliśmy używać mikro CT do analizy wad calva. Implikacją tej techniki jest to, że oferuje ona model chirurgiczny dla wszystkich badań oceniających przeszczep, retencję i żywotność tłuszczu.

Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które dopiero zaczynają korzystać z tej metody, będą miały trudności, ponieważ utrzymanie przeszczepu tłuszczu we właściwej pozycji nad skórą głowy jest trudne. Wizualna demonstracja tej techniki ma kluczowe znaczenie, ponieważ etapy szczepienia i rekonstrukcji są trudne do nauczenia, ponieważ istnieje wiele etapów, na których niewielkie odchylenie w technice może zmienić wynik. Za pomocą procedury Colemana należy pozyskać ludzką tkankę tłuszczową z okolic brzucha, boku i ud zdrowych pacjentek poddawanych planowej liposukcji.

Aby przetworzyć aspirat lipo do szczepienia, zacznij od pozostawienia tłuszczu na 30 minut. Aspirat lipo zazwyczaj osadza się w trzech warstwach z olejem na górze, tłuszczem w środku i krwią na dole. Odessać i wyrzucić górną warstwę oleju, a następnie dolną warstwę krwi.

Aby dodatkowo usunąć pozostały płyn tumescencyjny lub resztki komórek, odwiruj tłuszcz przez pięć minut w temperaturze 350 g i czterech stopniach Celsjusza. Po odwirowaniu należy zassać dolną warstwę krwi i górną warstwę oleju. Aby obliczyć ilość tłuszczu potrzebną do przeszczepu, jak opisano w protokole tekstowym, aby wykonać przeszczep tłuszczu, należy uzyskać samicę homozygotycznego CD one nagich myszy.

Do badania eksperymentalnego wybierz myszy w wieku od ośmiu do 12 tygodni, aby wywołać znieczulenie. Umieść mysz w pudełku do knockdown box z 2.5% mieszaniną tlenu fluoru w ilości dwóch litrów na minutę przez około 10 minut, gdy tempo oddychania myszy zwolni. Potwierdź odpowiednią sedację za pomocą uszczypnięcia palca u nogi.

Nałóż weterynaryjną smarującą maść okulistyczną na oba oczy myszy i umieść nos myszy w stożku nosowym, dostarczając mieszaninę tlenu fluoru 2,5% ISO w tempie od jednego do dwóch litrów na minutę. Następnie ustaw sterylne pole pod myszką. Następnie wysterylizuj skórę głowy 2,5% jodowidonem, a następnie 70% roztworem etanolu.

Powtórz sterylizację jeszcze dwa razy. Załaduj z powrotem jednomililitrową strzykawkę z blokadą przynęty jednym mililitrem tłuszczu, który został zrównoważony do temperatury pokojowej. Podłącz kaniulę do przeszczepu tłuszczu o rozmiarze 14 i długości ośmiu centymetrów do końca strzykawki.

Zalać system, naciskając tłok strzykawki, aż w strzykawce pozostanie od 200 do 400 mikrolitrów tłuszczu. Wciskając tłok strzykawki, upewnij się, że kaniula jest całkowicie wypełniona tłuszczem, obserwując tłuszcz wychodzący z dystalnego otworu kaniuli za pomocą cienkich kleszczyków. Podnieś skórę grzbietową w linii środkowej nad najbardziej rozpieszczonym aspektem czaszki.

Wykonaj 1,5-milimetrowe nacięcie w skórze za pomocą cienkich nożyczek. Umieść nylonowy sześcian o grubości sześciu oh przez środek cięcia, który później zostanie użyty do zbliżenia krawędzi rany. Po wykonaniu przeszczepu nie należy wiązać szwu.

Następnie utwórz kieszeń podskórną nad czaszką, wprowadzając kaniulę przez nacięcie skóry i przesuwając kaniulę tam iz powrotem w kształcie wachlarza nad czaszką, aby uwolnić wszelkie przyczepy tkanki łącznej do leżącej nad nią skóry, gdy kieszeń zostanie utworzona, umieść kaniulę w linii środkowej myszy bezpośrednio nad czaszką, aż końcówka znajdzie się w części teramosowej kieszeni, który powinien znajdować się tuż za linią narysowaną między oczami. Powoli wstrzykuj tłuszcz w sposób wsteczny, przesuwając tłok, jednocześnie odciągając kaniulę do tyłu. Za pomocą kleszczy zbliż do siebie krawędzie rany i podnieś je, aby tłuszcz nie wyciekał z kieszeni.

Zawiąż szew, który został wcześniej założony, upewniając się, że pierwszy węzeł lekko przylega do skóry. Zawiąż trzy kolejne kwadratowe węzły i przetnij szew trzymilimetrowym ogonem. Wyjmij mysz ze znieczulenia i kontynuuj rekonwalescencję zgodnie z opisem w protokole tekstowym.

Przed wykonaniem pierwszego skanu należy skalibrować mikrotomografię komputerową za pomocą fantomu do obrazowania, który rozróżnia intensywność powietrza, wody i kości. Po kalibracji. Umieść cztery myszy w skanerze w pozycji brzusznej, z dwiema myszami na górze i dwiema na dole.

Umieść na stole skanującym. Wcześniej zbudowany z 60-mililitrowych strzykawek do trzymania ciała myszy i 10-mililitrowych strzykawek jako stożków na nos. Potwierdź za pomocą obrazu zwiadowczego, że cała czaszka myszy od nosa do pierwszego kręgu szyjnego i od czubka czaszki do podstawy czaszki zostanie zobrazowana.

Kontynuuj skanowanie zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Otwórz zrekonstruowane obrazy za pomocą oprogramowania do analizy obrazowania mikrotomografem komputerowym, które umożliwia tworzenie obszarów zainteresowania lub ROI poprzez wybór wokseli za pomocą progów intensywności pikseli. Zacznij od wczytania zrekonstruowanych obrazów TK w dwóch wymiarach: czołowym, osiowym i strzałkowym.

Używając wycinka osiowego jako przewodnika, przejdź do wycinka strzałkowego, który odpowiada skrajnemu lewemu aspektowi przeszczepu tłuszczu. Wybierz górny i dolny próg intensywności pikseli, który przechwytuje wszystkie woksele odpowiadające przeszczepowi tłuszczu, ale nie obejmuje otaczającej tkanki i kości. Zdefiniuj ROI w widoku strzałkowym, który odpowiada przeszczepowi tłuszczu.

Korzystając z wcześniej zdefiniowanych progów intensywności pikseli, powtarzaj tę procedurę co piąty plasterek strzałkowy, nawigując aż do osiągnięcia skrajnego prawego aspektu przeszczepu. Następnie interpoluj wybrane woksele ze wszystkich ROI 2D w jeden połączony ROI 3D, rejestruj objętość ROI obliczoną przez oprogramowanie. Renderuj izopowierzchnię 3D, aby zwizualizować końcową objętość przeszczepu tłuszczu.

W kolejnej analizie należy upewnić się, że maksymalne i minimalne wartości progowe intensywności pikseli są takie same, jak te używane do analizy bazowej po zeskanowaniu myszy w ósmym tygodniu. Poddaj myszy eutanazji zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Umieść mysz w polu operacyjnym za pomocą nożyczek do tenotomii, ostrożnie otwórz kieszeń i leżące nad nią przyczepy skóry i tkanki łącznej z przeszczepu tłuszczu.

W tym momencie pomocne może być wycięcie łaty leżącej nad nią skóry grzbietowej, aby ułatwić ekstrakcję przeszczepu. Podczas wycinania należy trzymać się jak najbliżej przeszczepu, aby zminimalizować tkankę łączną pobraną z przeszczepu po wycięciu przeszczepu. Zmierz masę na rozdartej skali z dokładnością co najmniej 0,01 grama.

Objętość przeszczepów tłuszczu stopniowo zmniejszała się w trakcie badania, co skutkowało średnim przeżyciem 62,2% do ósmego tygodnia. Po zakończeniu skanowania w ósmym tygodniu każdy przeszczep tłuszczu został pobrany w jednym kawałku. Test sumy rang Coxin WIL został wykorzystany do porównania różnicy między pomiarami objętości przeszczepu tłuszczu uzyskanymi za pomocą mikro CT lub obliczonymi na podstawie masy fizycznej.

Nie stwierdzono istotnej różnicy między tymi dwiema metodami. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w ciągu dwóch godzin na sesję, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Przystępując do tego zabiegu, należy pamiętać, aby za każdym razem wykonywać operacje i rekonstrukcje w ten sam sposób.

Inne metody, takie jak barwienie immunologiczne i Q-R-T-P-C-R, mogą być wykonane, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania, takie jak wpływ różnych metod szczepienia na unaczynienie i ekspresję genów. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak przetwarzać lipo aspirat do szczepienia seryjnie Tomografia komputerowa przeszczepów in vivo, ocena przeżycia przeszczepu i explan przeszczepów do histologii masy ciała oraz przyszła analiza Po jego opracowaniu. Technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się chirurgią plastyczną do zbadania przeszczepu tłuszczu w modelu lustrzanym.