Name: Wykonywanie iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni w celu dostarczenia komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w zawiesinie (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Poznaj metodę iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni do dostarczania komórek nabłonka barwnikowego siatkówki z minimalnym urazem. Technika umożliwia skuteczną terapię zwyrodnień siatkówki.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Pragniemy podziękować Alison Dorsey za pomoc w rozwoju techniki iniekcji podsiatkówkowych. Dziękujemy również National Eye Institute (NEI granty EY11254 i EY021416), Kalifornijskiemu Instytutowi Medycyny Regeneracyjnej (grant CIRM TR1-01219) oraz Lowy Medical Research Institute (LMRI) za bardzo hojne finansowanie tego projektu.

UWAGA: Wszystkie zwierzęta były traktowane zgodnie z wytycznymi etycznymi ustalonymi przez Instytut Badawczy Scripps.
1. Przygotowanie materiałów do iniekcji (~20 min)
<ol style="margines po lewej: 40px;">
	<li>Wstępnie podgrzany roztwór do dysocjacji komórek (najlepiej taki, który jest inaktywowany przez rozcieńczenie, a nie surowicą), sterylny PBS i pożywki hodowlane (Tabela 1).</li>
	<li>Wysterylizuj strzykawkę igłą, rozkładając ją i gotując części w wodzie przez 15 minut.</li>
</ol>
2. Przygotowanie komórek RPE do iniekcji (~30 min do 1 godz.)
<ol style="margines po lewej: 40px;">
	<li>Odłączyć komórki RPE za pomocą wstępnie podgrzanego roztworu dysocjacyjnego komórek przez 5-8 minut w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Delikatnie zeskrob komórki, aby uwolnić te, które są nadal przyczepione.</li>
	<li>Rozcieńczyć komórki dużą objętością pożywki hodowlanej (napełnić probówkę o pojemności 15 ml) w celu dezaktywacji roztworu dysocjacyjnego i policzenia ich.</li>
	<li>Wirować przy 800 x g przez 5 minut, aby granulować komórki.</li>
	<li>Ponownie zawiesić komórki w ilości 200 000 komórek/μl (aby dostarczyć 100 000 komórek w objętości 0,5 μl) w sterylnym, wstępnie podgrzanym PBS i przenieść je do probówki mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml.</li>
	<li>Opcjonalnie dodać marker fluorescencyjny żywej komórki przejściowej i inkubować w temperaturze 37 °C przez 30-45 minut.</li>
	<li>Naładować strzykawkę igłą z 0,5 μl komórek. Wstrzyknąć komórki tak szybko, jak to możliwe.</li>
</ol>
3. Wstrzyknięcie podsiatkówkowe (~5 min na wstrzyknięcie)
UWAGA: Jeśli to możliwe, naucz się techniki z dorosłymi szczurami albinosami, ponieważ naczynia limbus są znacznie łatwiejsze do wizualizacji. Wstrzyknij roztwór Fast Green podczas nauki (przed próbą wstrzyknięcia komórek), aby ułatwić wizualizację miejsca wstrzyknięcia.
<ol style="margines po lewej: 40px;">
	<li>Znieczulić gryzonia. Należy stosować wstrzyknięcia dootrzewnowe 100 mg/ml ketaminy i 10 mg/ml ksylazyny (20 μl/10 g masy ciała) zamiast inhalacji izofluoranu, ponieważ trudno jest manewrować gryzoniem i wstrzykiwać do oka pyskiem w inhalatorze.
	<ol>
		<li>Upewnij się, że zwierzę jest głęboko znieczulone, szczypiąc jedną z jego łap. Jeśli się wzdrygnie, odczekaj jeszcze kilka minut i spróbuj ponownie przed rozpoczęciem wstrzyknięcia podsiatkówkowego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ustaw gryzonia na boku, tak aby oko, które ma zostać wstrzyknięte, było skierowane w stronę sufitu.</li>
	<li>Pod mikroskopem preparacyjnym delikatnie rozciągnij skórę tak, aby oko lekko wyskoczyło z oczodołu (tymczasowa wytrzeszcz) i stało się bardziej dostępne, trzymając głowę dwoma palcami tuż nad uchem i za szczękę, a następnie delikatnie rozciągnij skórę równolegle do powiek, tak aby oko lekko wysunęło się z oczodołu (patrz ryc. 1C). Nie chwytaj gryzonia zbyt blisko gardła.</li>
	<li>Za pomocą jednorazowej, wstępnie wysterylizowanej igły o wadze 30 g wykonaj otwór bezpośrednio pod rąbkiem (jeśli naczynia zostaną uderzone, krwawienie będzie znaczne i trudno będzie później znaleźć otwór) i pod kątem, aby uniknąć dotykania soczewki igłą (ryc. 1D). Unikaj dotykania soczewki ostrą (lub) igłą, w przeciwnym razie nastąpi natychmiastowe powstanie zaćmy. 
	UWAGA: Zastrzyki działają lepiej w przypadku dwóch osób. W ten sposób jedna osoba może podać strzykawkę z igłą osobie wykonującej wstrzyknięcie po utworzeniu pierwszego otworu za pomocą ostrej jednorazowej igły, aby utrzymać ostrość na miejscu, w którym znajduje się otwór.</li>
	<li>Wycofaj jednorazową ostrą igłę z oka, utrzymując uchwyt na głowie. Pamiętaj dokładnie, gdzie jest.</li>
	<li>Po zamontowaniu wstępnie załadowanej strzykawki z igłą na mikromanipulatorze lub trzymaniu jej w ręku, włóż końcówkę strzykawki z igłą przez otwór, ponownie uważając, aby nie dotknąć soczewki i delikatnie wepchnij ją przez oko bardzo delikatnie, aż poczujesz opór (Rysunek 1D).</li>
	<li>Ograniczając wszystkie ruchy do minimum, ostrożnie wstrzyknij komórki RPE powoli do przestrzeni podsiatkówkowej. 
	UWAGA: Zostanie wywołane odwarstwienie RPE/siatkówki; Jest to nieuniknione. Jednak czystszy wtrysk minimalizuje odklejanie i znacznie zwiększa szanse na ponowne przymocowanie (ryc. 1E). Wszelkie przesadne ruchy mogą przesunąć igłę z powrotem do siatkówki, a ruchy boczne mogą uszkodzić siatkówkę. Zastosowanie pompy wtryskowej jest opcjonalne, ale pozwala na bardzo precyzyjne podawanie.</li>
	<li>Powoli wycofać strzykawkę. Stosuj krople nawilżające do oczu, aby utrzymać nawilżenie oka.</li>
	<li>Kontynuuj monitorowanie zwierzęcia, aż odzyska pozycję leżącą mostka. Nie pozostawiaj zwierzęcia bez opieki ani nie wracaj do klatki z innymi czujnymi zwierzętami, dopóki nie odzyska pozycji mostka.</li>
</ol>

<ol><li>Bird, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+targets+in+age-related+macular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Therapeutic targets in age-related macular disease.</a> The Journal of Clinical Investigation. 120 (9), 3033-3041 (2010).</li>
<li>Jong, P. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJong%2C+PT+%22Age-related+macular+degeneration%22">Age-related macular degeneration</a>. Med, N. . E. ngl. J. . 355 (14), 1474-1485 (2006).</li>
<li>Abe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auto+iris+pigment+epithelial+cell+transplantation+in+patients+with+age-related+macular+degeneration%3A+short-term+results%5BTitle%5D)+AND+%22The+Tohoku+Journal+Of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Auto iris pigment epithelial cell transplantation in patients with age-related macular degeneration: short-term results.</a> The Tohoku Journal Of Experimental Medicine. 191 (1), 7-20 (2000).</li>
<li>Algvere, P. V., Berglin, L., Gouras, P., Sheng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+fetal+retinal+pigment+epithelium+in+age-related+macular+degeneration+with+subfoveal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Transplantation of fetal retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration with subfoveal neovascularization.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 232, 707-716 (1994).</li>
<li>Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+transplantation+of+autologous+retinal+pigment+epithelium+in+age-related+macular+degeneration%3A+a+prospective+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Outcome of transplantation of autologous retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration: a prospective trial.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45 (11), 4151-4160 (2004).</li>
<li>Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+autologous+retinal+pigment+epithelium+in+eyes+with+foveal+neovascularization+resulting+from+age-related+macular+degeneration%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Transplantation of autologous retinal pigment epithelium in eyes with foveal neovascularization resulting from age-related macular degeneration: a pilot study.</a> Am. J. Ophthalmol. 133 (2), 215-225 (2002).</li>
<li>Juan, E., Loewenstein, A., Bressler, N. M., Alexander, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translocation+of+the+retina+for+management+of+subfoveal+choroidal+neovascularization+II%3A+a+preliminary+report+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Translocation of the retina for management of subfoveal choroidal neovascularization II: a preliminary report in humans.</a> Am. J. Ophthalmol. 125 (5), 635-646 (1998).</li>
<li>Falkner-Radler, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+retinal+pigment+epithelium+%28RPE%29+transplantation%3A+outcome+after+autologous+RPE-choroid+sheet+and+RPE+cell-suspension+in+a+randomised+clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Human retinal pigment epithelium (RPE) transplantation: outcome after autologous RPE-choroid sheet and RPE cell-suspension in a randomised clinical study.</a> British Journal of Ophthalmology. 95 (3), 370-375 (2011).</li>
<li>Joussen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+complete+is+successful+%27Autologous+retinal+pigment+epithelium+and+choriod+translocation+in+patients+with+exsudative+age-related+macular+degeneration%3A+a+short-term+follow-up%27+by+Jan+van+Meurs+and+P.R.+van+Biesen%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes.+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">How complete is successful 'Autologous retinal pigment epithelium and choriod translocation in patients with exsudative age-related macular degeneration: a short-term follow-up' by Jan van Meurs and P.R. van Biesen.</a> Graefes. Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 241 (12), 966-967 (2003).</li>
<li>Lai, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+outcomes+following+macular+translocation+with+360-degree+peripheral+retinectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Visual outcomes following macular translocation with 360-degree peripheral retinectomy.</a> Arch. Ophthalmol. 120 (10), 1317-1324 (2002).</li>
<li>Machemer, R., Steinhorst, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+separation%2C+retinotomy%2C+and+macular+relocation%3A+II.+A+surgical+approach+for+age-related+macular+degeneration%3F+Graefes%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Retinal separation, retinotomy, and macular relocation: II. A surgical approach for age-related macular degeneration? Graefes.</a> Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 231 (11), 635-641 (1993).</li>
<li>MacLaren, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+transplantation+of+the+retinal+pigment+epithelium+and+choroid+in+the+treatment+of+neovascular+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Autologous transplantation of the retinal pigment epithelium and choroid in the treatment of neovascular age-related macular degeneration.</a> Ophthalmology. 114 (3), 561-570 (2007).</li>
<li>Peyman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+retinal+pigment+epithelium+transplantation+for+age-related+macular+degeneration+secondary+to+extensive+subfoveal+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for retinal pigment epithelium transplantation for age-related macular degeneration secondary to extensive subfoveal scarring.</a> Ophthalmic Surgery. 22 (2), 102-108 (1991).</li>
<li>Buchholz, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+functional+retinal+pigmented+epithelium+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Derivation of functional retinal pigmented epithelium from induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells. 27 (10), 2427-2434 (2009).</li>
<li>Carr, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+and+functional+analysis+of+phagocytosis+by+human+embryonic+stem+cell-derived+RPE+cells+using+a+novel+human+retinal+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization and functional analysis of phagocytosis by human embryonic stem cell-derived RPE cells using a novel human retinal assay.</a> Mol. Vis. 15 (4), 283-295 (2009).</li>
<li>Carr, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+human+iPS-derived+retinal+pigment+epithelium+cell+transplantation+in+the+retinal+dystrophic+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective effects of human iPS-derived retinal pigment epithelium cell transplantation in the retinal dystrophic rat.</a> PLoS One. 4 (12), e8152(2009).</li>
<li>Hirami, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+retinal+cells+from+mouse+and+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Generation of retinal cells from mouse and human induced pluripotent stem cells.</a> Neurosci Lett. 458 (3), 126-131 (2009).</li>
<li>Idelson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+functional+retinal+pigment+epithelium+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into functional retinal pigment epithelium cells.</a> Cell Stem Cell. 5 (4), 396-408 (2009).</li>
<li>Klimanskaya, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+comparative+assessment+of+retinal+pigment+epithelium+from+human+embryonic+stem+cells+using+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Derivation and comparative assessment of retinal pigment epithelium from human embryonic stem cells using transcriptomics.</a> Cloning Stem Cells. 6 (3), 217-245 (2004).</li>
<li>Kokkinaki, M., Sahibzada, N., Golestaneh, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Induced+Pluripotent+Stem-Derived+Retinal+Pigment+Epithelium+%28RPE%29+Cells+Exhibit+Ion+Transport%2C+Membrane+Potential%2C+Polarized+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Secretion%2C+and+Gene+Expression+Pattern+Similar+to+Native+RPE%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human Induced Pluripotent Stem-Derived Retinal Pigment Epithelium (RPE) Cells Exhibit Ion Transport, Membrane Potential, Polarized Vascular Endothelial Growth Factor Secretion, and Gene Expression Pattern Similar to Native RPE.</a> Stem Cells. 29 (5), 825-835 (2011).</li>
<li>Krohne, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+retinal+pigment+epithelial+cells+from+small+molecules+and+OCT4-reprogrammed+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Generation of retinal pigment epithelial cells from small molecules and OCT4-reprogrammed human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 1 (2), 96-109 (2012).</li>
<li>Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+cells+rescue+visual+function+in+dystrophic+RCS+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived cells rescue visual function in dystrophic RCS rats.</a> Cloning Stem Cells. 8 (3), 189-199 (2006).</li>
<li>Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+early+retinal+development+with+human+embryonic+and+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (39), 16698-16703 (2009).</li>
<li>Osakada, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+differentiation+of+retinal+cells+from+human+pluripotent+stem+cells+by+small-molecule+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">In vitro differentiation of retinal cells from human pluripotent stem cells by small-molecule induction.</a> J. Cell Sci. 122 (17), 3169-3179 (2009).</li>
<li>Vugler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidating+the+phenomenon+of+HESC-derived+RPE%3A+anatomy+of+cell+genesis%2C+expansion+and+retinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Elucidating the phenomenon of HESC-derived RPE: anatomy of cell genesis, expansion and retinal transplantation.</a> Exp. Neurol. 214 (2), 347-361 (2008).</li>
<li>Westenskow, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+flow+cytometry+to+compare+the+dynamics+of+photoreceptor+outer+segment+phagocytosis+in+iPS-derived+RPE+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Using flow cytometry to compare the dynamics of photoreceptor outer segment phagocytosis in iPS-derived RPE cells.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53 (10), 6282-6290 (2012).</li>
<li>Zarbin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+concepts+in+the+pathogenesis+of+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Current concepts in the pathogenesis of age-related macular degeneration.</a> Arch. Ophthalmol. 122 (10), 598-614 (2004).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+safety+and+efficacy+of+human-induced+pluripotent+stem+cell+%28iPS%29+grafts+in+a+preclinical+model+of+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Long-term safety and efficacy of human-induced pluripotent stem cell (iPS) grafts in a preclinical model of retinitis pigmentosa.</a> Molecular Medicine. 18, 1312-1319 (2012).</li>
<li>Wang, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+reprogrammed+embryonic+stem+cells+improves+visual+function+in+a+mouse+model+for+retinitis+pigmentosa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa).</a> Transplantation. 89 (8), 911-919 (2010).</li>
<li>Ramsden, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+retinal+regeneration%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Stem cells in retinal regeneration: past, present and future.</a> Development. 140 (12), 2576-2585 (2013).</li>
<li>Schwartz, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+trials+for+macular+degeneration%3A+a+preliminary+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.</a> The Lancet. 379 (9817), 713-720 (2012).</li>
<li>Carr, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+human+embryonic+stem+cell+therapies+for+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Development of human embryonic stem cell therapies for age-related macular degeneration.</a> Trends in Neurosciences. 36 (7), 385-395 (2013).</li>
<li>Westenskow, P., Friedlander, M. Ch. 111. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWestenskow%2C+P+%22The+New+Visual+Neurosciences%22">The New Visual Neurosciences</a>. Werne, J. S., Chalupa, L. M. , The MIT Press. Cambridge, MA. 1611-1626 (2013).</li>
<li>Westenskow, P., Sedillo, Z., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Derivation+of+Retinal+Pigment+Epithelium+Cells+from+iPS%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from iPS.</a> J. Vis. Exp. , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Furhmann, S., Levine, E. M., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraocular+mesenchyme+patterns+the+optic+vesicle+during+early+eye+development+in+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extraocular mesenchyme patterns the optic vesicle during early eye development in the embryonic chick.</a> Development. 127 (21), 4599-4609 (2000).</li>
<li>Lu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Term+Safety+and+Function+of+RPE+from+Human+Embryonic+Stem+Cells+in+Preclinical+Models+of+Macular+Degeneration%29%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Long-Term Safety and Function of RPE from Human Embryonic Stem Cells in Preclinical Models of Macular Degeneration).</a> Stem Cells. 27 (9), 2126-2135 (2009).</li>
<li>Zhao, T., Zhang, Z. -N., Rong, Z., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 474 (7350), 212-215 (2011).</li>
<li>Eberle, D., Santos-Ferreira, T., Grahl, S., Ader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+transplantation+of+MACS+purified+photoreceptor+precursor+cells+into+the+adult+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Subretinal transplantation of MACS purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina.</a> Journal Of Visualized Experiments. , e50932(2014).</li>
<li>Huber, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+mouse+models+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Spectral domain optical coherence tomography in mouse models of retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 5888-5895 (2009).</li>
<li>Kim, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+mouse+retinal+degeneration+with+high-resolution+spectral-domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vision%22%5BJournal%5D)">Monitoring mouse retinal degeneration with high-resolution spectral-domain optical coherence tomography.</a> Journal of Vision. 53 (8), 4644-4656 (2008).</li>
<li>Pennesi, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+characterization+of+retinal+degeneration+in+rd1+and+rd10+mice+using+spectral+domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-term characterization of retinal degeneration in rd1 and rd10 mice using spectral domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 4644-4656 (2012).</li>
<li>Fisher, S. K., Lewis, G. P., Linberg, K. A., Verardo, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+remodeling+in+mammalian+retina%3A+results+from+studies+of+experimental+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+And+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular remodeling in mammalian retina: results from studies of experimental retinal detachment.</a> Progress in Retinal And Eye Research. 24 (3), 395-431 (2005).</li>
<li>Hu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+for+subretinal+implantation+of+ultrathin+substrates+containing+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelium+monolayer%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">A novel approach for subretinal implantation of ultrathin substrates containing stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer.</a> Ophthalmic Research. 48 (4), 186-191 (2012).</li>
<li>Diniz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+implantation+of+retinal+pigment+epithelial+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells%3A+improved+survival+when+implanted+as+a+monolayer%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Subretinal implantation of retinal pigment epithelial cells derived from human embryonic stem cells: improved survival when implanted as a monolayer.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (7), 5087-5096 (2013).</li>
</ol>

Żaden z autorów nie ma żadnych ujawnień komercyjnych do zadeklarowania.

W tym artykule opisujemy stosunkowo prostą metodę wykonywania podsiatkówkowych iniekcji komórek RPE w zawiesinie u szczurów i myszy. Protokół jest łatwy do nauczenia, a większe doświadczenie w tej technice przełoży się na mniejszą liczbę urazów (ryc. 3; jest to jedno z lepszych wstrzyknięć), zwłaszcza jeśli stosuje się mikromanipulator (ryc. 1A). Każdy uraz może być monitorowany in vivo za pomocą systemu cSLO i OCT (ryc. 2), jeśli jest dostępny. Jeśli pożądane s...

Siatkówka czuciowa jest zorganizowana w funkcjonalne poziomy neuronów, komórek glejowych i śródbłonka. Fotoreceptory w tylnej części siatkówki są aktywowane przez światło; Poprzez fototransdukcję przekształcają fotony w sygnały elektryczne, które są oczyszczane przez interneurony i przekazywane do kory wzrokowej w mózgu. Fototransdukcja nie może zajść bez skoordynowanych wysiłków komórek glejowych Muellera i komórek nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE). RPE są zorganizowane w monowarstwę bezpośrednio za fotoreceptorami i pełnią wiele różnorodnych funkcji integralnych z funkcją fotoreceptorów i homeostazą. W rzeczywistości RPE i fotoreceptory są tak współzależne, że uważa się je za jedną jednostkę funkcjonalną. Śmierć lub dysfunkcja RPE powoduje niszczący wtórny wpływ na fotoreceptory i jest związana ze zwyrodnieniem plamki żółtej związanym z wiekiem (AMD), główną przyczyną ślepoty u osób starszych1,2.
Chociaż nie znaleziono lekarstwa na AMD, kilka badań klinicznych wykazało, że wymiana komórek RPE może być obiecującą opcją terapeutyczną3-13. Wraz z pojawieniem się technologii komórek macierzystych, możliwe jest obecnie generowanie dużej liczby komórek RPE in vitro z embrionalnych i indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (hES i hiPS), które bardzo przypominają swoje somatyczne odpowiedniki pod względem funkcjonalnym i anatomicznym14-26. Wykazano również, że RPE pochodzące z komórek macierzystych działa in vivo przez wiele niezależnych grup, w tym naszą, w celu znacznego spowolnienia zwyrodnienia siatkówki w liniach szczurów i myszy ze spontanicznym zwyrodnieniem siatkówki16,18,21,22,25,28,29. To połączenie klinicznych i przedklinicznych dowodów potwierdzających jest tak przekonujące, że obecnie prowadzonych jest kilka badań klinicznych mających na celu zapobieganie zwyrodnieniu siatkówki przy użyciu komórek macierzystych RPE pochodzących z komórek macierzystych30,31. 
RPE można łatwo uzyskać z hES i/lub hiPS i wszczepić w przestrzeń podsiatkówkową gryzoni przy użyciu różnych technik derywacji i iniekcji32,33. (Patrz Westenskow et al., aby zapoznać się z artykułem metodycznym w formacie multimedialnym demonstrującym stosowany przez nas protokół ukierunkowanego różnicowania)34. Pozostają krytyczne pytania dotyczące bezpieczeństwa, przeżycia i zdolności funkcjonalnej egzogennie dostarczanych komórek RPE po implantacji, dlatego zdolność do wykonywania iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni jest umiejętnością krytyczną16,18,21,29,36,37. Podanie RPE nie jest trywialne, a pole jest podzielone co do najskuteczniejszej techniki iniekcji. Opisany tutaj protokół jest prostym i skutecznym sposobem dostarczania bolusa komórek RPE podsiatkówkowo i został wykorzystany w pierwszym badaniu klinicznym dotyczącym przeszczepu RPE pochodzącego z komórek macierzystych31. (Czytelnik może również zapoznać się z innym artykułem JoVE autorstwa Eberle et al., aby uzyskać alternatywny obraz zastrzyków podsiatkówkowych u gryzoni. 38) 
Technika opisana w tym manuskrypcie nie może być zobrazowana, a trauma jest nieunikniona (jak w przypadku każdej techniki iniekcji podsiatkówkowej). Wykonuje się go poprzez wykonanie otworu tuż pod naczyniami rąbka i wprowadzenie igły wzdłuż drogi przeztwardówkowej w celu wstrzyknięcia bolusa komórek pod diametralnie przeciwstawną siatkówkę. Osoba wykonująca wstrzyknięcie będzie odczuwać opór, gdy igła dotknie siatkówki. Komórki można jednak bezpośrednio uwidocznić po wstrzyknięciu, a stopień indukowanego odwarstwienia siatkówki można określić, znakując komórki RPE przejściowym markerem fluorescencyjnym i wykrywając je za pomocą konfokalnego skaningowego oftalmoskopu (cSLO). System optycznej koherentnej tomografii (OCT) może być również używany do monitorowania urazu i łatwej identyfikacji miejsca wstrzyknięcia.

<table><tbody><tr><td>2-merkaptoetanol (55 mM)</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>21985-023</td><td>50 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Cell Scapers</td><td>VWR</td><td>89260-222</td><td>Case x 1</td></tr><tr><td>Sondy molekularne</td><td>CellTracker Green CMFDA</td><td>C34552</td><td>50 &micro; g x 20</td></tr><tr><td>DPBS, bez wapnia, bez magnezu</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>500 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7258</td><td>25 g x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Genteal Geldrops Umiarkowane do silnych lubrykantów Krople do oczu&nbsp;</td><td>Walmart</td><td>4060941</td><td>25 ml x 1</td></tr><tr><td>Hamilton Model 62 RN SYR</td><td>Hamilton</td><td>87942</td><td>Strzykawka x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Igła Hamilton 33 G, 0,5", punkt 3 (stal nierdzewna 304)</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td>Igły x 6</td></tr><tr><td>Knockout DMEM</td><td>Gibco</td><td>10829-018</td><td>500 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>KnockOut Serum Zamiennik</td><td>Gibco</td><td>10828-028</td><td>500 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>L-Glutamina 200 mM</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>Podstawka magnetyczna</td><td>Stojak do 39430216 Leica Biosystems</td><td></td><td>x 1</td></tr><tr><td>Roztwór aminokwasów endogennych MEM 100X&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>Mikromanipulator</td><td>Leica Biosystems</td><td>3943001</td><td>Manipulator x 1</td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna (10 000 U/ml)</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>Strzykawka z końcówką ślizgową bez igieł BD&nbsp; (3 ml)&nbsp; &nbsp;</td><td>VWR</td><td></td><td>BD309656 Pack x 1</td></tr><tr><td>Igły do zastosowań specjalistycznych BD&nbsp; (30 g, 1")</td><td>VWR</td><td>BD305128</td><td>Box x 1</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme (1X), bez czerwieni fenolowej</td><td>Gibco</td><td>12604013</td><td>100 ml x 1</td></tr></tbody></table>

wykonywanie iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni w celu dostarczenia komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w zawiesinie

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Zamiana światła na impulsy elektryczne zachodzi w zewnętrznej siatkówce i jest realizowana głównie przez fotoreceptory pręcików i czopków oraz komórki nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE). RPE stanowią krytyczne wsparcie dla fotoreceptorów, a śmierć lub dysfunkcja komórek RPE jest charakterystyczna dla zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem (AMD), głównej przyczyny trwałej utraty wzroku u osób w wieku 55 lat i starszych. Chociaż nie znaleziono lekarstwa na AMD, wszczepienie zdrowego RPE w chore oczy może okazać się skutecznym leczeniem, a duża liczba komórek RPE może być łatwo wygenerowana z pluripotencjalnych komórek macierzystych. Kilka interesujących kwestii dotyczących bezpieczeństwa i skuteczności dostarczania komórek RPE można nadal badać w modelach zwierzęcych i opracowano dobrze akceptowane protokoły stosowane do wstrzykiwania RPE. Opisana tutaj technika była stosowana przez wiele grup w różnych badaniach i polega najpierw na stworzeniu w oku za pomocą ostrej igły. Następnie przez otwór wprowadza się strzykawkę z igłą załadowaną komórkami i przechodzi przez ciało szkliste, aż delikatnie dotknie RPE. Stosując tę metodę iniekcji, która jest stosunkowo prosta i wymaga minimalnego sprzętu, osiągamy spójną i wydajną integrację komórek RPE pochodzących z komórek macierzystych między RPE gospodarza, co zapobiega znacznej ilości zwyrodnień fotoreceptorów w modelach zwierzęcych. Chociaż nie jest to część rzeczywistego protokołu, opisujemy również, jak określić zakres urazu wywołanego przez wstrzyknięcie i jak sprawdzić, czy komórki zostały wstrzyknięte do przestrzeni podsiatkówkowej za pomocą metod obrazowania in vivo. Wreszcie, zastosowanie tego protokołu nie ogranicza się do ogniw RPE; Może być stosowany do wstrzykiwania dowolnego związku lub komórki do przestrzeni podsiatkówkowej.

Szybko i spójnie możemy wprowadzić zawiesinę komórek RPE do przestrzeni podsiatkowej gryzoni, stosując technikę opisaną w niniejszej pracy. Choć nie jest to wymagane, urazy można znacznie zminimalizować, korzystając z zestawu z mikromanipulatorem przedstawionego na Rysunku 1A&amp;B. Aby uzyskać tymczasowe wypadnięcie gałki ocznej (proptosję), należy trzymać gryzonia w sposób pokazany na Rysunku 1C. Kroki postępowania są takie same, niezależnie od tego, czy są wykonywane za pomocą mikroma...

Tutaj prezentujemy akceptowany przez społeczność protokół w formacie multimedialnym do podsiatkówkowego wstrzykiwania bolusa komórek RPE szczurom i myszom. Podejście to można wykorzystać do określenia potencjałów ratunkowych, profili bezpieczeństwa i zdolności przeżycia przeszczepionych komórek RPE po implantacji w zwierzęcych modelach zwyrodnienia siatkówki.

Wykonywanie iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni w celu dostarczenia komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w zawiesinie

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Ogólnym celem tej procedury jest wstrzyknięcie pigmentu siatkówki, nabłonka lub komórek RPE do przestrzeni podsiatkówkowej gryzoni przy jednoczesnej minimalizacji urazu. Osiąga się to, najpierw używając ostrej igły, aby zrobić dziurę w oku statecznego zwierzęcia. Następnie komórki są wstrzykiwane do przestrzeni podsiatkówkowej za pomocą igły.W ostatnim kroku oko jest pokryte kremem nawilżającym, aby utrzymać je nawilżone. Ostatecznie histologia i metody obrazowania in vivo mogą być wykorzystane do monitorowania skuteczności wstrzyknięcia. Podczas gdy metoda, którą pokazaliśmy dzisiaj, została specjalnie dostosowana do dostarczania komórek RPE do przestrzeni podsiatkówkowej, sama technika ma szerokie zastosowanie do dostarczania wielu innych typów komórek i substancji chemicznych do przestrzeni podsiatkówkowej, które mają być stosowane w różnych badaniach przedklinicznych.Ogólnie rzecz biorąc, osoby, które są nowe w tej metodzie, będą walczyć, ponieważ trudno jest zobaczyć, jak dobrze wykonano wstrzyknięcie. Wizualne demonstracje tej metody mają kluczowe znaczenie, ponieważ etapy wstrzykiwania są trudne do nauczenia się bez zobaczenia ich wykonywania. Osobiście.Na około godzinę prze

performing-subretinal-injections-rodents-to-deliver-retinal-pigment

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Wykonywanie iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni w celu dostarczenia komórek epitelium barwnikowego siatkówki w zawiesinie

Niniejsza technika chirurgiczna przedstawia wstrzykiwanie wektorów terapii genowej oraz komórek macierzystych do przestrzeni podsiatkówkowej oka myszy.

Podsiatkówkowe wstrzykiwanie wektorów terapii genowej i komórek macierzystych do oka myszy w okresie okołodniowym

Źródło: Park, S. W., et al. Podejście rąbkowe - podsiatkówkowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych do terapii genowej u myszy nabłonek barwnikowy siatkówki. J. Vis. Exp. (2015)Film opisuje metodę podsiatkówkowego wstrzykiwania wektorów wirusowych do nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) w modelu mysim. Szczegółowo opisano w nim procedurę, od znieczulenia i przygotowania oka po precyzyjne dostarczenie wektora lentiwirusowego, zapewniając integrację i ekspresję genów w RPE.

Podsiatkówkowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych do nabłonka barwnikowego siatkówki w modelu mysim

Wstrzyknięcie podsiatkówkowe to technika chirurgiczna służąca skutecznemu dostarczaniu genów do nabłonka barwnikowego siatkówki w oku myszy.  Tutaj opisujemy łatwą i powtarzalną metodę subretinalnego wstrzykiwania wektorów wirusowych do nabłonka barwnikowego siatkówki u myszy eksperymentalnych.

Podejście rąbkowe - podsiatkówkowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych do terapii genowej u myszy Nabłonek barwnikowy siatkówki

Zastrzyki podsiatkówkowe są najczęstszą techniką dostarczania dużych środków terapeutycznych, takich jak białka i wektory wirusowe, do fotoreceptorów i nabłonka barwnikowego siatkówki. Alternatywna metoda u myszy, która z powodzeniem celuje w przestrzeń podsiatkówkową z minimalnymi uszkodzeniami ubocznymi i krótkim czasem rekonwalescencji, jest opisana tutaj.

Alternatywna i zwalidowana metoda iniekcji umożliwiająca dostęp do przestrzeni podsiatkówkowej przez przeztwardówkowy dostęp tylny

Wstrzyknięcie podsiatkówkowe jest szeroko stosowane w badaniach przedklinicznych terapii zastępczej komórkami macierzystymi w przypadku zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem. W tym zwizualizowanym artykule opisujemy mniej ryzykowną, powtarzalną i precyzyjnie zmodyfikowaną technikę wstrzykiwania podsiatkówkowego za pomocą podejścia przeztwardówkowego w celu dostarczenia komórek do oczu szczura.

Opracowanie udoskonalonego protokołu przeztwardówkowego przeszczepu podsiatkówkowego ludzkich komórek nabłonka barwnikowego siatkówki do oczu szczurów

Komórki nabłonka barwnikowego siatkówki mogłyby służyć jako terapia zastępcza dla zaawansowanej formy suchego, związanego z wiekiem zwyrodnienia plamki żółtej. Protokół ten opisuje generowanie wielkookiego modelu atrofii geograficznej i podsiatkówkowy przeszczep ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego siatkówki pochodzących z embrionalnych komórek macierzystych do tego modelu choroby.

Przeszczep podsiatkówkowy ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego pochodzących z komórek macierzystych siatkówki do wielkookiego modelu atrofii geograficznej

Implantacja podsiatkówkowa pigmentowego nabłonka siatkówki (RPE) jest jednym z najbardziej obiecujących podejść do leczenia chorób zwyrodnieniowych siatkówki. Jednak wyniki badań przedklinicznych na modelach zwierzęcych z dużymi oczami pozostają wyzwaniem. W niniejszym raporcie przedstawiono wytyczne dotyczące podsiatkówkowego przeszczepiania RPE na nośniku komórkowym do świnek miniaturowych.

Podsiatkówkowa implantacja RPE na nośniku u świnek miniaturowych: wytyczne dotyczące przygotowań przedoperacyjnych, technik chirurgicznych i opieki pooperacyjnej

Ten protokół przedstawia przezźrenicowe, sterowane widzeniem podejście przeztwardówkowe do bezpiecznego i precyzyjnego dostarczania przeszczepów komórkowych podsiatkówkowych, z niskim wskaźnikiem powikłań chirurgicznych, u myszy, biorców ze zwyrodnieniem siatkówki lub bez.

Przezźrenicowe przeszczepienie przeztwardówkowe przeszczepów podsiatkówkowych w mysim modelu zwyrodnienia siatkówki

Opisujemy szczegółowy protokół przygotowania komórek progenitorowych fotoreceptorów pochodzących z kriokonserwacji hESC oraz dostarczania tych komórek do tkanki podsiatkówkowej u myszy rd10.

Podsiatkówkowe dostarczanie progenitorów fotoreceptorów pochodzących z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych u myszy rd10

Ten artykuł opisuje metody iniekcji podsiatkówkowej u szczurów, wykorzystując śródoperacyjną wizualizację do kontrolowania zarówno miejsca wstrzyknięcia, jak i obszaru odwarstwienia siatkówki.

Śródoperacyjna wizualizacja wstrzyknięcia podsiatkówkowego i odwarstwienia siatkówki u szczurów

Iniekcje podsiatkówkowe są nieodzowną techniką w przedklinicznym rozwoju terapii chorób fotoreceptorowych i RPE. Opisujemy zoptymalizowaną technikę przeztwardówkowego wstrzykiwania podsiatkówkowego u myszy, która poprawia wskaźniki powodzenia śródoperacyjnego i minimalizuje uszkodzenie siatkówki.

Zoptymalizowana minimalnie inwazyjna technika przeztwardówkowego wstrzykiwania podsiatkówkowego u myszy

Poznaj metodę iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni do dostarczania komórek nabłonka barwnikowego siatkówki z minimalnym urazem. Technika umożliwia skuteczną terapię zwyrodnień siatkówki.

Wykonywanie iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni w celu dostarczenia komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w zawiesinie

Przeglądaj więcej filmów