Name: Model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 17 s
Description: Poznaj technikę kaniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów do oceny transportu lipidów i leków przez układ limfatyczny jelit. Metoda umożliwia bezpośredni pomiar wchłaniania substancji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Finansowanie z Australijskiej Rady ds. Badań Naukowych (ARC) oraz Narodowej Rady Zdrowia i Badań Medycznych (NHMRC) jest wdzięczne.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Model kaniulacji limfy krezkowej szczura umożliwia bezpośrednie określenie ilościowe stężenia i szybkości transportu różnych komórek i cząsteczek (takich jak lipidy i leki) z jelita do limfy oraz zmian w nich, które zachodzą w odpowiedzi na prowokację różnymi substancjami (dietą, antygenem, lekami, preparatami itp.)10,27 i chorobami (rak, wirusy, zapalenie jelita grubego, insulinooporność itp.)5-7. Składniki zebrane w limfie mogą być również dalej wykorzystywane w dodatkowych eksp...

Limfa przepływa z jelita cienkiego w jednokierunkowym procesie, który zaczyna się od pojedynczych mleczanów, które znajdują się w każdym kosmku jelita cienkiego1. Mleczaki są stosunkowo przepuszczalne dla płynów, makrocząsteczek i komórek, a zatem tworzenie limfy rozpoczyna się wraz z wejściem tych czynników do mleczanu. Początkowa limfa w mlekach przepływa następnie z jelita przez sieć mikronaczyń limfatycznych, zbierając (aferentne) naczynia limfatyczne, szereg węzłów chłonnych krezkowych i ostatecznie naczynia limfatyczne zawęzłowe (odprowadzające). W obrębie węzłów limfa przechodzi przez szereg zatok szpikowych, w których zachodzi wymiana z komórkami odpornościowymi rezydującymi w węzłach, a także materiałem wchodzącym do węzła z krwi. Cała limfa wypływająca z jelita cienkiego ostatecznie zbiega się w odprowadzającym górnym przewodzie chłonnym krezkowym, a następnie w cisterna chyli. Cisterna chyli zbiera również limfę odprowadzającą tkanki obwodowe ogona, okolice jelitowe, wątrobowe i lędźwiowe oraz łączy się z przewodem limfatycznym klatki piersiowej wraz z limfą ze śródpiersia i czaszkowych części ciała. Przewód chłonny piersiowy opróżnia limfę bezpośrednio do układu żylnego na styku lewej żyły szyjnej wewnętrznej i podobojczykowej. Opisany tu protokół, który umożliwia pobieranie limfy bezpośrednio z górnego przewodu chłonnego krezkowego, ułatwia tym samym analizę różnych czynników przechodzących bezpośrednio z jelita do krążenia ogólnoustrojowego (ogólnego) poprzez jelitowy układ limfatyczny.
Główne funkcje fizjologiczne przypisane układowi limfatycznemu jelit to utrzymanie równowagi płynów, ułatwienie wchłaniania lipidów i cząsteczek lipofilowych oraz umożliwienie odpowiednich odpowiedzi immunologicznych1. Komórki nowotworowe i wirusy rozprzestrzeniają się również przez limfatyczne jelita2-4, a kluczowe zmiany zachodzą w obrębie układu limfatycznego w kilku patologiach zapalnych i metabolicznych5-7. Kaniulacja krezkowego przewodu chłonnego w celu zebrania limfy w obrębie krezki umożliwia analizę przepływu płynu luzem przez limfy jelitowe, a także ilościowe określenie stężenia i szybkości transportu różnych komórek i cząsteczek. Można również ocenić zmiany w stężeniu lub pasażu tych czynników w odpowiedzi na różne wyzwania (np. diety, antygeny, leki) oraz w modelach chorobowych (np. zapalenie jelita grubego, HIV, cukrzyca). Chociaż niemożliwe jest dokładne opisanie każdego składnika limfatycznego, który może być tutaj analizowany i porównywany, limfa krezkowa w uproszczeniu składa się z fazy wodnej, lipidowej i komórkowej. Składniki będące przedmiotem zainteresowania w fazie wodnej obejmują peptydy i białka, takie jak antygeny lub tolerogeny8, przekaźniki immunologiczne, takie jak cytokiny i mediatory komórek tucznych9 oraz mediatory metaboliczne, takie jak inkretyny10. Frakcja komórkowa limfy krezkowej zawęzłowej składa się prawie w całości (ponad 99%) z limfocytów11. Różne komórki odpornościowe (komórki dendrytyczne, komórki tuczne itp.) dostają się do węzłowej limfy krezkowej, ale pozostają w węźle12. Jeśli interesujące są komórki w limfie doprowadzającej, możliwe jest pobranie tych komórek poprzez usunięcie węzłów chłonnych krezki na kilka dni przed kaniulacją węzła chłonnego krezki12. W ten sposób doprowadzające i odprowadzające przewody limfatyczne są bezpośrednio połączone, a komórki limfatyczne w limfie doprowadzającej przechodzą bezpośrednio do krezkowego przewodu chłonnego. W ten sposób można zbadać tranzyt i fenotyp różnych komórek odpornościowych przechodzących przez limfatyczne jelita. Być może najczęstszym powodem pobierania limfy krezkowej do tej pory jest jednak badanie przetwarzania jelitowego, wchłaniania i transportu lipidów pokarmowych i cząsteczek lipofilowych10.
Po spożyciu, lipidy dietetyczne są trawione (na przykład z trójglicerydów do kwasów tłuszczowych i monoglicerydów, fosfolipidów do kwasów tłuszczowych i lizofosfolipidów, a ester cholesterolu do kwasów tłuszczowych i cholesterolu, itd.) i rozpraszane w świetle jelita do małych struktur miceli i pęcherzyków poprzez dodanie amfifilów z żółci (fosfolipidy, cholesterol i sole żółciowe) oraz działanie enzymów trzustkowych10,13. Stąd są wchłaniane do enterocytów. Część wchłoniętych składników jest ponownie estryfikowana do wytworzenia trójglicerydów, fosfolipidów i estrów cholesterolu w komórkach absorpcyjnych (enterocytach). Te ponownie estryfikowane lipidy są składane z kombinacji egzogennie spożytych składników lipidowych i endogennych składników lipidowych z wydzielanej żółci, puli lipidów błony śluzowej lub dopływu krwi jelitowej13. Stąd estryfikowane lipidy są albo przechowywane w enterocytach, albo łączone w lipoproteiny jelitowe (chylomikrony, lipoproteiny o bardzo niskiej gęstości (VLDL)) wraz z różnymi apoproteinami i innymi cząsteczkami lipofilowymi (np. witaminami)10,13. Po wyjściu z enterocytów lipoproteiny są specyficznie transportowane z jelita do krążenia ogólnoustrojowego przez krezkowy układ limfatyczny, ponieważ mleczan jelitowy jest bardziej przepuszczalny dla ich wejścia niż naczynia włosowate krwi jelitowej. Część wchłoniętych składników lipidowych jest również transportowana z jelita do krążenia ogólnoustrojowego przez naczynia włosowate krwi i żyłę wrotną w postaci pojedynczych, niezwiązanych z lipoproteinami cząsteczek14 . Ogólnie rzecz biorąc, droga transportu żyły wrotnej jest tylko znaczącym graczem w wchłanianiu lipidów o krótkiej i średniej długości łańcucha.
Gromadzenie limfy krezkowej umożliwia zatem ocenę transportu lipoprotein i związanych z nimi składników (lipidów, cząsteczek lipofilowych, białek apo) z jelita. Lipoproteiny można określić ilościowo i scharakteryzować z tą zaletą, że lipoproteiny limfatyczne krezki są na ogół w stanie początkowym, ponieważ nie zostały w znacznym stopniu zmodyfikowane przez enzymy ogólnoustrojowe, takie jak lipazalipoproteinowa 15. Podczas gdy model szczura kaniulowany limfą krezkową był być może historycznie najszerzej opisany do analizy transportu lipidów / lipoprotein z jelita, obszarem rosnącego zainteresowania jest rola limfów w transporcie leków lipofilowych, proleków i innych ksenobiotyków13,16, na czym skupia się opisywany tutaj model. Leki lipofilowe (zazwyczaj te z logarytmem P > 5 i rozpuszczalnością w długołańcuchowych trójglicerydach > 50 mg/g, chociaż wyjątki są oczywiste)17,18, proleki19 i inne ksenobiotyki13,16 mogą uzyskać dostęp do limfy jelitowej biernie lub aktywnie integrując się ze szlakami transportu lipoprotein jelitowych19.
Technika kaniulacji krezkowej limfy szczura ma więc wiele zastosowań. Bollman i wsp. Po raz pierwszy opisał technikę kaniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów w 1948roku. Od tego czasu opisano szereg wariacji na temat tego modelu. Na przykład pobranie może nastąpić, gdy szczur jest znieczulony różnymi środkami znieczulającymi21,22 lub w stanie przytomności, gdy jest skrępowany15 lub swobodnie się porusza23,24. Szczurom można podawać różne roztwory nawadniające i inne substancje, takie jak lipidy i preparaty leków, w różnym tempie do żołądka, jelita lub pozajelitowo (zwykle 0-5 ml/godz.)25. W niektórych badaniach kaniulowany jest klatka piersiowa, a nie krezkowy przewód chłonny, aby oszacować transport z jelita przez układ limfatyczny, chociaż może to zawyżać tranzyt z jelita cienkiego, w zależności od czynnika zainteresowania, ponieważ przewód limfatyczny klatki piersiowej otrzymuje również limfę z innych regionów22,26. Modele kaniulacji limfatycznej opisano również u kilku innych gatunków, w tym myszy15,27, świnek miniaturowych12, owiec28,29, świń30 i psów31. Jednak model szczura jest najczęściej i najczęściej cytowany. Szczegółowe protokoły kaniulacji krezkowego przewodu chłonnego, a następnie pobrania limfy u przytomnych25 lub znieczulonych22 szczurów i myszy15,27 zostały opublikowane wcześniej, a zainteresowany czytelnik jest kierowany do tych protokołów. Ten protokół jest pierwszym, który demonstruje tę technikę w formie wizualizacji.
Model szczura z kaniulacją limfatyczną ma przewagę nad większymi modelami zwierzęcymi pod względem kosztów, łatwości operacji i względów etycznych. W porównaniu z modelem mysim, operacja kaniulacji krezki limfatycznej jest również łatwiejsza u szczurów, chociaż model mysi umożliwia bardziej szczegółowe badania na zwierzętach transgenicznych27. Niemniej jednak istnieją pewne ograniczenia modelu szczurzego, szczególnie te związane z różnicami w fizjologii, które ograniczają ekstrapolację na inne sytuacje przedkliniczne i kliniczne. Na przykład u szczurów przepływ żółci jest stały i niezależny od przyjmowania pokarmu, podczas gdy u wyższych gatunków pokarm lub lipidy stymulują przepływ żółci32. Stwarza to wyzwania związane z uzyskaniem reprezentatywnych środowisk przed- i poposiłkowych u szczurów, które odzwierciedlają to, co obserwuje się u większych gatunków i ludzi. W przypadku badań nad dostarczaniem leków, większe gatunki mogą być również preferowane przy ocenie transportu limfatycznego po podaniu realistycznych postaci dawkowania u ludzi25. W niedawnym badaniu stwierdzono, że tempo transportu lipidów w limfie krezkowej jest porównywalne u różnych gatunków (mysz, szczur, pies) po podaniu równoważnej masy i rodzaju lipidu, co daje pewną pewność w ekstrapolacji danych dotyczących transportu lipidów między gatunkami27. Jednak transport modelowego leku lipofilowego, halofantryny, plasował się w kolejności wielkości zwierzęcia (tj. pies > szczur > mysz). W związku z tym może być wymagany czynnik skalujący w celu ekstrapolacji danych dotyczących transportu limfatycznego leków od szczurów do innych gatunków.
Ograniczeniem modeli kaniulacji limfy jest to, że pasywne pobieranie limfy bezpośrednio z przewodu limfatycznego może modyfikować przepływ i transport limfy, ponieważ naczynia limfatyczne działają przeciwko gradientowi ciśnienia, który zmienia się po kaniulacji naczynia33. Model kaniulacji limfatycznej może być również trudny do ustalenia w laboratoriach, które nie są zaznajomione z tą techniką. W ten sposób opisano alternatywne modele. Na przykład pośrednio badano transport czynników przez jelitowy układ limfatyczny, takich jak lipoproteiny i cząsteczki lipofilowe, poprzez pobieranie krwi. Jeden z takich modeli polega na porównaniu stężeń lipidów i/lub leków we krwi po podaniu doustnym w obecności i braku inhibitorów (np. kolchicyny, Pluronu L81, cykloheksymidu) produkcji lipoprotein jelitowych, które blokują transport limfatyczny34. Zaletą modeli, które określają ilościowo transport limfatyczny pośrednio poprzez pobieranie próbek krwi, jest to, że umożliwiają one pewną ocenę transportu limfatycznego u ludzi, ponieważ nie jest wymagana chirurgia inwazyjna35. Jednak inhibitory transportu limfatycznego nie są specyficzne, a czynniki transportowane przez limfy są rozcieńczane i modyfikowane w krążeniu ogólnoustrojowym, co komplikuje takie oceny. Opisano również alternatywy in vitro. Na przykład hodowle komórek caco-2 lub izolowanych enterocytów wykorzystano do bardziej szczegółowego zbadania wydzielania jelitowego cząsteczek, które dostają się do układu limfatycznego36-38. Niedawno opisano również zaawansowany model in vitro, który jest bardziej reprezentatywny dla mikrośrodowiska jelitowegoczłowieka39. W tym modelu warstwa komórek śródbłonka limfatycznego jest współhodowana z komórkami Caco-2, co umożliwia bardziej szczegółową analizę przenoszenia substancji z jelita do układu limfatycznego. Jednak w systemach komórkowych in vitro brakuje przepływu wymiany i transferu, tj. połączenia ze światłem jelita i leżącym pod nim zaopatrzeniem w krew i naczynia limfatyczne. W alternatywnym podejściu, Kassis i in. stworzyli dwukanałowy (szybkie wideo w jasnym polu i fluorescencja) system obrazowania in situ, który umożliwia ilościowe porównania między skurczem naczyń, przepływem limfy i fluorescencyjnymi stężeniami lipidów w krezkowych naczyniach limfatycznych33. Przewagą tego modelu nad wyżej wymienionymi systemami in vitro jest to, że umożliwia on dokładne śledzenie przejścia komórek odpornościowych przez układ limfatyczny. Bezwzględne pomiary masowego transportu lipidów (lub leków) nie są jednak jeszcze ustalone za pomocą metod obrazowania. Opublikowano również podejścia in vitro i in silico do specyficznego przewidywania zakresu lipofilowego transportu leków przez limfę jelitową40-42. Na przykład stwierdzono, że powinowactwo ex vivo kilku związków do chylomikronów osocza dość dobrze koreluje z ich transportem limfatycznym in vivo41. Następnie ta sama grupa stworzyła model in silico, aby przewidzieć powinowactwo leków do chylomikronów w oparciu o wiele właściwości fizykochemicznych40. Holm i wsp. ustanowili również stosunkowo złożony model in silico, aby bezpośrednio przewidzieć transport limfatyczny związków lipofilowych na podstawie deskryptorów molekularnych42. Modele te mogą stanowić użyteczne podejście do przewidywania zakresu transportu limfatycznego nieznanych leków. Walidacja modeli z szeroką gamą leków i w różnych laboratoriach będzie jednak wymagana w celu potwierdzenia ich dokładności i odtwarzalności.
Kaniulacja krezkowego przewodu chłonnego pozostaje zatem jedynym sposobem bezpośredniego badania zawartości limfy drenującej jelito cienkie i szybkości tranzytu złożonego zestawu czynników (komórek, białek, peptydów, lipidów, leków) w limfie w sytuacji in vivo. W niniejszym artykule opisano protokół kaniulacji krezkowego przewodu chłonnego i tętnicy szyjnej, który umożliwia pobranie limfy krezkowej i krwi ogólnoustrojowej od znieczulonych szczurów. Reprezentatywne dane pokazują, w jaki sposób model może być wykorzystany do badania transportu lipidów i leków z jelita przez krezkowy układ limfatyczny. Po tym następuje omówienie trudności, które można napotkać podczas ustanawiania modelu, oraz przewodnik rozwiązywania problemów. Po ustaleniu model staje się potężnym narzędziem do badania transportu limfatycznego w jelitach.

<table><tbody><tr><td>Sterylna sól fizjologiczna</td><td>Baxter healthcare</td><td>AHB 1307</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj worki z solą Baxter 100 ml, pudełko zawierające 50</td></tr><tr><td>70 % etanolu w wodzie</td><td>Dowolna</td><td></td><td>można użyć dowolnej marki</td></tr><tr><td>Roztwór glukonianu chlorheksydyny (Microshield 4)</td><td>Livingstone International</td><td>JJ60243L</td><td>Można użyć dowolnej marki. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L</td></tr><tr><td>Roztwór betadyny</td><td>Livingstone International</td><td>BU0510</td><td>Można użyć dowolnej marki. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =BU0510</td></tr><tr><td>Ilium Ketamil (Ketamina 100 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp;</td><td>KETA I 1</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr> <tr><td>Ilium Xylazil (Ksylazyna 100 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp;</td><td>TRO-3828</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr> <tr><td>ACP 10 Iniekcja (Acepromazyna 10 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp;</td><td>VTG-DACP010020</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr> <tr><td>Pentobarbiton sodu</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp;</td><td>24529</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj Lethabarb&reg; 325 mg/ml pentobarbiton sodu, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au</td></tr><tr><td>Heparyna (35000I.U. w 35 ml)</td><td>Sigma Pharmaceuticals</td><td>337220</td><td>http://sigmaco.com.au/</td></tr> <tr><td>Kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA) sól disodowa dwuwodna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj sól disodowa EDTA firmy Sigma.&nbsp;</td></tr><tr><td>Kaniula polietylenowa (PE) o średnicy zewnętrznej 0,96 mm x średnica wewnętrzna 0,58 mm</td><td>Przedłużki mikroprobówek</td><td>PE8050</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj rurka PE 0,96 x0,58 mm, 30 m</td></tr><tr><td>Kaniula z polietylenu (PE) ø zewnętrzna 0,8 mm x średnica wewnętrzna 0,5 mm</td><td>Przedłużki do mikroprobówek</td><td>PE9658</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj rurka PE 0,8 x0,5 mm, linijka 30 m</td></tr><tr><td></td><td>Dowolna</td><td></td><td>Można użyć dowolnej marki</td></tr><tr><td>Markery</td><td>Dowolna</td><td></td><td>można użyć</td></tr><tr><td>dowolnej marki Zapalniczka</td><td>Dowolna</td><td></td><td>Można użyć dowolnej marki</td></tr><tr><td>Klej weterynaryjny</td><td>Dowolna</td><td></td><td>Można użyć dowolnej marki</td></tr><tr><td>Igły o rozmiarze 23 Livingstone</td><td>International</td><td>DN23GX0.75LV</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj jednorazowa igła Livingstone, sterylna, 23GX0.75 cala, 100 / PUDEŁKO. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6& search=DN23GX0.75LV</td></tr><tr><td>25 gauge igły</td><td>Livingstone International</td><td>DN25GX1.0LV</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj jednorazowa igła Livingstone, sterylna, 25GX1.0 cala, 100 / PUDEŁKO. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV</td></tr><tr><td>1 ml strzykawka</td><td>Livingstone International</td><td>T3SS01TA</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj strzykawka Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA</td></tr><tr><td>Strzykawka 10 ml</td><td>Livingstone International</td><td>T3SS10SA</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj strzykawka Terumo 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA</td></tr><tr><td>Waciki z gazy</td><td>Livingstone International</td><td>GSC075</td><td>Można użyć dowolnej marki i przyciąć do wymaganego rozmiaru. Przykładem są tutaj waciki z gazy wypełnione bawełną 7,5x7,5 cm, 8 warstw. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075</td></tr><tr><td>Patyczki kosmetyczne</td><td>Livingstone International</td><td>CTAST075DP</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj plastikowy aplikator bawełniany Livingstone z podwójną końcówką. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP</td></tr><tr><td>Poduszka grzewcza</td><td>Ratek</td><td>WT1</td><td>Można użyć dowolnej marki, która utrzymuje temperaturę na poziomie 37C. Przykładem jest tutaj taca do podgrzewania Ratek.</td></tr><tr><td>Światło chirurgiczne</td><td>Aparat Harvard</td><td>72-0215 z 72-0267</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj aparat Harvard V-Lux 1000 Zimne źródło światła z bifurcated gooseneck Light Guide,, średnica włókna 4,7 mm (każde ramię). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ -1_HAI_ProductDetail i&nbsp; http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ -1_HAI_ProductDetail___</td></tr> <tr><td>Mikroskop chirurgiczny</td><td>Zeiss</td><td>495005-0014-000</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj mikroskop stereoskopowy Zeiss Stemi 2000-C z podwójnym punktem Stand S i diodą LED KL 300. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143</td></tr><tr><td>Jedwabny szew</td><td>Livingstone International</td><td>DTSK163019F4</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj &nbsp; 3/8 Okrągły jedwabny szew o odwrotnym szlifie 3/0 Nić 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4</td></tr><tr><td>Ostrza skalpela</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10020-00</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj ostrze skalpela FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191</td></tr><tr><td>Rękojeść skalpela</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10004-13</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj rękojeść skalpela FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51</td></tr><tr><td>1 x Małe nożyczki chirurgiczne</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>14060-09</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj cienkie nożyczki FST, 9 cm z krawędzią tnącą 21 mm, ostre, proste. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17</td></tr><tr><td>2 x kleszcze z ząbkowaną zakrzywioną końcówką</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11001-13</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj kleszczyki FST 13 cm o standardowym wzorze z zakrzywioną końcówką 2,8x1,4 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x nożyczki do irydektomii</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>15000-08</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj nożyczki sprężynowe FST Vannas - krawędź tnąca 2.5 mm, prosta. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16&nbsp;</td></tr><tr><td>1 x kleszcze z prostą ząbkowaną końcówką</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11650-10</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest FST Graefe 10 cm prosty z ząbkowaną końcówką 1 x 0,99 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x kleszcze z gładką, ostrą, prostą, cienką końcówką</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11251-10</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem są kleszcze FST Dumont #5 proste 11 cm z końcówką 0,08 x 0,04 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29</td></tr><tr><td>1 x kleszcze z gładkimi, drobno zakrzywionymi kleszczami</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11063-07</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj delikatne kleszcze FST 9 cm z gładką końcówką 0,4 x 0,3 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360</td></tr><tr><td>2 x Hemostats</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>13010-12</td><td>Można użyć dowolnej marki. Nie wszyscy operatorzy używają hemostatów. Przykładem jest FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats o długości 20 mm x szerokości 1,3 mm ząbkowana, prosta końcówka. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33</td></tr><tr><td>1 x uchwyt na igłę do szwów</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>12001-13</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj uchwyt na igłę FST 13 cm Hasley z końcówką o długości 16 mm i szerokości 1,9 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70</td></tr><tr><td>1 x zacisk tętniczy</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>18050-28</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest FST Bulldog Serrefines prosty, o długości 28 mm, wymiarach szczęk 9x1,6 mm ze średnią prasą zaciskową. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82</td></tr><tr><td>Kwas oleinowy</td><td>Sigma Aldrich</td><td>O1008</td><td>W razie potrzeby można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj 99% czysty kwas oleinowy. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>Kwas 14C-oleinowy</td><td>Perkin&nbsp;</td><td>NEC317050UC&nbsp;</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj kwas oleinowy, [1-14C]-, 50&mikro; Ci (1,85 MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC</td></tr><tr><td>Taurocholan sodu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4009</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj kwas taurocholowy sól sodowa hydrat &ge; 95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>Halofantrine</td><td>Glaxo Smith Kline</td><td></td><td>Halofantrine został uprzejmie dostarczony jako prezent od Glaxo Smith Kline</td></tr><tr><td>Fosforan sodu jednozasadowy</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71507</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest jednowodny monohydrat fosforanu sodu, BioXtra, dla biologii molekularnej, >99,5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>Fosforan sodu dwuzasadowy</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71643</td><td>Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest dwuwodny fosforan sodu dwuwodny, BioUltra, dla biologii molekularnej, >99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&region=AU</td></tr></tbody></table>

model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Układ limfatyczny jelit odgrywa kluczową rolę w transporcie płynów, wchłanianiu lipidów i funkcjonowaniu układu odpornościowego. Limfa przepływa bezpośrednio z jelita cienkiego przez szereg naczyń limfatycznych i węzłów, które zbiegają się w górnym przewodzie limfatycznym krezki. Kaniulacja krezkowego przewodu chłonnego umożliwia zatem pobieranie limfy krezkowej wypływającej z jelita. Limfa krezkowa składa się z frakcji komórkowej komórek odpornościowych (99% limfocytów), frakcji wodnej (płyn, peptydy i białka, takie jak cytokiny i hormony jelitowe) oraz frakcji lipoprotein (lipidy, cząsteczki lipofilowe i apo-proteiny). Model kaniulacji krezkowego przewodu chłonnego może być zatem wykorzystany do pomiaru stężenia i szybkości transportu szeregu czynników z jelita przez układ limfatyczny. Można również określić zmiany tych czynników w odpowiedzi na różne wyzwania (np. diety, antygeny, leki) i choroby (np. nieswoiste zapalenie jelit, HIV, cukrzyca). Obszarem rosnącego zainteresowania jest rola transportu limfatycznego w wchłanianiu podawanych doustnie leków lipofilowych i proleków, które wiążą się ze szlakami wchłaniania lipidów w jelitach. W tym miejscu szczegółowo opisujemy model szczura kaniulowany w kaniulowanym przewodzie limfatycznym krezki, który umożliwia ocenę szybkości i zakresu transportu lipidów i leków przez układ limfatyczny przez kilka godzin po porodzie jelitowym. Metodę można łatwo dostosować do pomiaru innych parametrów w limfie. Przedstawiamy szczegółowe opisy trudności, które można napotkać przy ustalaniu tej złożonej metody chirurgicznej, a także reprezentatywne dane z nieudanych i udanych eksperymentów, aby dostarczyć instrukcji, jak potwierdzić sukces eksperymentu i zinterpretować uzyskane dane.

Wyniki reprezentatywnego eksperymentu służącego do ilościowego oznaczenia skumulowanego zakresu i szybkości transportu lipidów oraz leku przez układ limfatyczny po podaniu dojelitnym z wykorzystaniem modelu kaniulacji naczyń chłonnych krezkowych przedstawiono na Rysunku 4 i Rysunku 5. W tym eksperymencie 200 µg halofantryny, będącej modelowym lekiem lipofilnym, podano do dwunastnicy szczurów w ciągu 2 hr w formulacji zawierającej 40 mg kwasu oleinowego (w tym 2 - 5 µCi 14C-kwa...

Tutaj opisujemy technikę kannuacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów, która umożliwia ilościowe określenie transportu lipidów i leków przez układ limfatyczny po porodzie jelitowym. Technika ta może być dostosowana do oceny stężenia limfy krezkowej i/lub transportu płynu, komórek odpornościowych, peptydów, białek i cząsteczek lipofilowych.

Model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest ocena szybkości i stopnia transportu lipidów oraz leków do limfatycznego układu jelitowego po podaniu dojelitowym. Jest to realizowane poprzez wstępną izolację i kaniulację przewodu limfatycznego krezki w celu poboru limfy. W drugim kroku kaniulowane jest dwunastnicze, aby umożliwić infuzję do jelita, a następnie kaniulowana jest tętnica szyjna w celu umożliwienia pobierania próbek krwi.W ostatnim kroku substancja badawcza jest podawana do dwunastnicy, a następnie pobierane są próbki limfy i krwi w celu ilościowego oznaczenia systemowego poziomu lipidów lub leku. Ostatecznie model ten może być wykorzystany do oceny całkowitego wchłaniania oraz jelitowego transportu limfatycznego lipidów i leków po podaniu do jelit. Główną zaletą tej techniki jest możliwość bezpośredniego kaniulowania przewodu limfatycznego krezkowego i pobierania limfy przez cały okres eksperymentu.Umożliwia to oszacowanie całkowitej masy materiału, który wpływa do chłonki krezkowej i przez nią przepływa. Model ten pozwala na ocenę in vivo transportu leków oraz lipidów. Może być on również wykorzystany do pomiaru transportu limfatycznego w jelitach dowolnego interesującego czynnika, a także do badania zmian w transporcie limfatycznym tych czynników w odpowiedzi na różne bodźce lub stany chorobowe.Wizualna demonstracja tej metody jest kluczowa, ponieważ kaniulacja przewodu chłonnego krezkowego jest skomplikowana i trudna ze względu na to, że przewód jest mały, kruchy i znajduje się u zwierząt na czczo. Procedurę zaprezentują moja koleżanka i członkini kadry naukowej Uniwersytetu Monash, dr Natalie Cus, oraz starszy postdoc w grupie, dr LJ Hugh. Dzień przed operacją przytnąć kaniule do odpowiedniej długości i za pomocą sterylnego skalpela wykonać skośne cięcie na końcówce każdego odcinka rurki. Następnie, aby przygotować kaniulę wewnątrzdwunastniczą, zagiąć kaniulę w pętlę, a następnie podgrzać rurkę, aby stworzyć punkt zakotwiczenia.W dniu zabiegu zgolić sierść z prawej strony brzucha i szyi oraz z lewego obszaru obojczyka u zanestetyzowanego dorosłego szczura, a następnie aseptycznie oczyścić obszary operacyjne, wykonując trzy kolejne przemycia roztworem powidonu jodowego i 70% ethanol, aby przeprowadzić kaniulację przewodu limfatycznego. Umieścić zwierzę prawym bokiem do góry i za pomocą sterylnego ostrza skalpela otworzyć górną warstwę ściany mięśniowej brzucha, wykonując proste czterocentymetrowe nacięcie od wyrostka miecza do prawej flanki, około dwóch centymetrów poniżej łuku żebrowego. Odsunąć jelito cienkie pod lewą ścianę brzucha i użyć dwóch do trzech kawałków sterylnej gazy nasyconej solą fizjologiczną, aby utrzymać je w tej pozycji.Następnie ustabilizuj szczura, opierając go na plastikowej strzykawce o pojemności 10 mililitrów, umieszczonej poziomo pod grzbietem zwierzęcia na wysokości prawej nerki. Aby ułatwić wizualizację przewodu chłonnego krezkowego, zlokalizuj górny przewód chłonny krezkowy, który ma średnicę około 0,5 do 1 milimetra, przebiega prostopadle do prawej nerki oraz znajduje się bezpośrednio rostralnie i równolegle do ciemnoczerwonej, pulsującej tętnicy krezkowej. Należy zauważyć, że u szczurów nienaćmiących, jak pokazano tutaj, górny przewód chłonny krezkowy jest biały, nieprzezroczysty i łatwiejszy do wizualizacji niż u szczurów zainfekowanych.Następnie należy przeprowadzić parę prostych pęset przez tkankę tłuszczową krocza przy dolnym brzegu prawej nerki, równolegle do górnego przewodu limfatycznego krezki, oraz przez warstwy tkanki łącznej bezpośrednio poniżej żyły głównej dolnej. Następnie, używając końcówki pęsety, należy przeciągnąć kaniulę limfatyczną przez tkankę tłuszczową krocza tak, aby jeden jej koniec znajdował się bezpośrednio obok przewodu limfatycznego krezki, a drugi był wyprowadzony na zewnątrz organizmu zwierzęcia na poziomie prawej nerki. Następnie, przy użyciu mikroskopu chirurgicznego i pęsety jubilerskiej, należy wyizolować przewód limfatyczny krezki z nakładających się warstw tkanki łącznej i tłuszczowej poprzez rozwarstwianie tępe, rozpoczynając od dolnego końca i dbając o to, aby nie uszkodzić przewodu limfatycznego po jego wyizolowaniu.Za pomocą końcówki pęsety precyzyjnej wykonaj niewielki otwór w przewodzie limfatycznym. Po upewnieniu się, że kaniula limfatyczna jest całkowicie wypełniona roztworem przeciwkrzepliwym i nie zawiera pęcherzyków powietrza, użyj małej pęsety, aby wprowadzić kaniulę limfatyczną przez miejsce nakłucia na głębokość około dwóch do czterech milimetrów do wnętrza przewodu limfatycznego krezki. Jeśli kaniulacja przebiegła pomyślnie, z wolnego końca zbierającego kaniuli będzie obserwowany stopniowy wypływ limfy jelitowej.W takim przypadku nanieś małą kroplę kleju cyjanoakrylanowego nad otworem wejściowym do przewodu chłonnego, aby zabezpieczyć kaniulę, uważając, by nie zatkać naczynia nadmiarem kleju. W celu kaniulacji dwunastnicy najpierw zlokalizuj tkankę, identyfikując ją jako intensywnie różowy odcinek jelita cienkiego, który po delikatnym pociągnięciu w dół odsłania żołądek. Następnie za pomocą sterylnej igły 23G wykonaj małą dziurkę w dwunastnicy w okolicy odźwiernika, około dwóch centymetrów poniżej połączenia żołądka z dwunastnicą.Następnie wprowadź zakrzywiony koniec kaniuli dwunastniczej przez miejsce nakłucia i unieruchom kaniulę za pomocą kropli kleju akrylowego Sano. Następnie za pomocą szwów zamknij nacięcie ściany mięśni brzucha. Kaniulację tętnicy szyjnej można przeprowadzić przed lub po kaniulacji przewodu limfatycznego krezkowego. Zazwyczaj preferujemy kaniulację tętnicy szyjnej przed kaniulacją przewodu limfatycznego, aby zmniejszyć ryzyko przemieszczenia kaniuli limfatycznej podczas przemieszczania zwierzęcia. Aby przeprowadzić kaniulację tętnicy szyjnej, najpierw zaznacz kaniulę tętnicy szyjnej 2,5 centymetrów od ściętego końca, aby zidentyfikować odcinek rurki, który należy wprowadzić do tętnicy.Następnie podłącz nieostry koniec kaniuli do igły o rozmiarze 25 G przymocowanej do strzykawki wypełnionej roztworem przeciwzakrzepowym i wypełnij kaniulę tym roztworem, upewniając się, że nie pozostały w niej pęcherzyki powietrza. Następnie wykonaj nacięcie podłużne o długości od 1 do 1,5 cm przez warstwę skóry nad lewą stroną tchawicy w płaszczyźnie strzałkowej, a następnie za pomocą pęsety tępej rozdziel tkankę łączną podskórną i odsłoń znajdujące się pod nią parzyste mięśnie szyi. Odsunąć mięśnie szyi, aby odsłonić pulsującą lewą tętnicę szyjną wspólną, znajdującą się około 1 cm poniżej powierzchni skóry.Następnie oczyść tętnicę z przylegającej tkanki łącznej za pomocą rozdzielania tępego i użyj tępych pęsety tkankowej, aby wyizolować odcinek tętnicy o długości około jednego centymetra. Następnie za pomocą pęsety z cienkimi końcówkami przełóż dwa szwy jedwabne pod tętnicą szyjną, umieszczając je na obu końcach wyizolowanego odcinka tętnicy. Następnie zawiąż szew znajdujący się najdalej od serca i obojczyka szczura, a pod tętnicą szyjną umieść parę prostych pęset z cienkimi końcówkami, aby zablokować przepływ krwi przez tętnicę.Teraz, używając precyzyjnych nożyczek tęczówkowych, wykonaj małe nacięcie na górnej powierzchni tętnicy, w odległości około jednej trzeciej od górnej krawędzi wyizolowanego obszaru. Wprowadź końcówkę kaniuli do tętnicy za pomocą pęsety zakrzywionej. Po wprowadzeniu usuń prostą pęsetę precyzyjną, aby zablokować przepływ krwi, a następnie przesuń kaniulę o 2.5 centymetrów do wnętrza tętnicy, używając dwóch par pęset.Jedna osoba przytrzymuje kaniulę wewnątrz tętnicy, aby zapobiec cofaniu się krwi, a druga wprowadza kaniulę. Następnie należy użyć małego zacisku tętniczego, aby utrzymać kaniulę wewnątrz tętnicy. Do kaniuli wstrzykuje się roztwór przeciwzakrzepowy, a następnie odsysa niewielką ilość krwi, aby potwierdzić drożność cewki.Następnie przepłucz kaniulę roztworem przeciwzakrzepowym i zapieczętuj jej koniec za pomocą płomienia zapalniczki. Na koniec użyj szwów, aby przymocować kaniulę na miejscu, i zdejmij zacisk tętniczy. Następnie załóż trzeci szew wokół tętnicy i kaniuli, skróć długość szwów wokół tętnicy i po okresie rekonwalescencji zamknij ranę szyi kolejnymi szwami, a następnie wprowadź interesującą formulację do organizmu zwierzęcia za pomocą kaniuli dwunastniczej.Jak pokazano na wykresie, po podaniu lipofilnego leku modelowego, halal fanene, średni przepływ limfy u szczurów, u których kaniulacja przebiegła pomyślnie, wynosił od 0,4 do 1,3 ml/h. U niektórych zwierząt szybkość przepływu limfy była nieco niższa w ciągu pierwszych jednej do trzech godzin po kaniulacji, a następnie wzrosła, co jest zjawiskiem często obserwowanym po udanej kaniulacji limfatycznej. Natomiast u szczurów, u których kaniulacja była nieudana, szybkość przepływu pozostawała znacznie niższa niż w udanych eksperymentach przez cały okres pobierania próbek.Podobnie, w tych reprezentatywnych eksperymentach skumulowany transport limfatyczny triglicerydów i halalan RIN był znacznie niższy u zwierząt, u których kaniulacja nie powiodła się. Natomiast w grupach z udaną kaniulacją średni skumulowany transport halalan wyniósł 15,1% dawki, a skumulowany transport triglicerydów wyniósł 61 milligrams w ciągu 10 hours. W tym reprezentatywnym eksperymencie transportu lipidów proporcja podanej znakowanej radioaktywnie egzogennej dawki lipidów przetransportowanej w limfie wyniosła 54% Wartości te nie różniły się znacząco od tych zaobserwowanych wcześniej.W przypadku podobnej formulacji szybkość transportu zarówno triglicerydów, jak i leków do limfy osiąga szczyt kilka godzin po podaniu lipidów i leku, a następnie powraca do poziomów bazowych. Jest to typowe dla eksperymentów dotyczących jelitowego transportu lipidów i leków do limfy. Szybkość transportu leku w limfie w każdym przedziale czasowym odzwierciedla sytuację w przypadku transportu triglicerydów, ponieważ lek jest transportowany do limfy.W związku z lipoproteinami bogatymi w trójglicerydy, po opanowaniu techniki, kanulacja może zostać przeprowadzona w ciągu 30 minut, jeśli nie wystąpią żadne trudności. Po wykonaniu tej procedury składniki zawarte w pobranej limfie mogą zostać wyizolowane i wykorzystane w dodatkowych eksperymentach, na przykład poprzez reinfuzję zwierzętom biorczym w celu bezpośredniej oceny ich funkcji, metabolizmu, klirensu lub wzorców dystrybucji. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać gruntowną wiedzę na temat technik izolacji i kanulacji przewodu chłonnego krezkowego, tętnicy szyjnej oraz dwunastnicy.Stosując te techniki, powinni Państwo być w stanie ocenić transport zarówno leków, lipidów, jak i innych czynników z jelita do i przez chłonkę krezkową w modelu Viva.

the-mesenteric-lymph-duct-cannulated-rat-model-application-to

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Model szczura z kanulowanym przewodem chłonnym trzustkowym: zastosowanie do oceny przewozu leków przez układ limfatyczny jelit

Ten film demonstruje technikę kanniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów. Metoda ta umożliwia bezpośredni dostęp do całej objętości składników obecnych w płynie limfatycznym.

Kaniulacja krezki limfatycznej w modelu szczura w celu pobrania płynu limfatycznego

Ten film pokazuje kaniulację śróddwunastnicy na modelu szczurzym. Po znieczuleniu szczura lokalizuje się dwunastnicę i tworzy się małe nakłucie. Kaniula w kształcie litery J ze ściętą końcówką jest ostrożnie wprowadzana i zabezpieczana, a nacięcie jest zamykane. Kaniulowany model szczura umożliwia infuzję dojelitową do badań immunopatologicznych.

Kaniulacja śróddwunastnicza w modelu szczurzym do badań immunopatologicznych

W tym filmie pokazujemy zabieg chirurgiczny kaniulacji lewej tętnicy szyjnej na modelu szczurzym.

Kaniulacja tętnicy szyjnej w modelu szczurzym

Przedstawiamy zabieg chirurgiczny polegający na cewnikowaniu jelitowego pnia limfatycznego u nowonarodzonych świń w celu pobrania dużych ilości składników metabolizmu lipidów z odprowadzającej limfy.

Długotrwałe cewnikowanie pnia limfatycznego jelit i pobieranie limfy u nowonarodzonych świń

Dostęp do długotrwałej infuzji w tętnicy krezkowej górnej (SMA) szczurów to zabieg chirurgiczny, który polega na kaniulacji bliższej gałęzi SMA. Kaniula wychodzi z rany brzusznej i jest tunelowana przez przestrzeń podskórną z powrotem do fałdu międzyłopatkowego.

Celowanie w jelito cienkie szczura: długotrwała infuzja do tętnicy krezkowej górnej

Tutaj opisujemy dokładną metodę pobierania limfocytów przewodu piersiowego i obserwacji migracji limfocytów tropikalnych jelitowych w plamach Peyera szczura przez 3 godziny za pomocą fotografii poklatkowej. Ta technika może wyjaśnić, w jaki sposób dynamika limfocytów wpływa na stan zapalny.

Obserwacja mikroskopowa dynamiki limfocytów w szczurzych łatach Peyera

Obecny protokół opisuje szczegółowy protokół chirurgiczny izolowania przepływającej limfy jelitowej w odpowiedzi na infuzje składników odżywczych dodwunastnicy u myszy. Pozwala to na fizjologiczne określenie całkowitego wchłaniania lipidów w jelitach oraz syntezy i wydzielania chylomikronu w odpowiedzi na różne eksperymentalne składniki odżywcze.

Izolacja przepływającej limfy krezkowej u myszy w celu ilościowego określenia in vivo kinetyki wchłaniania lipidów w diecie i wydzielania chylomikronu

Ten eksperymentalny protokół demonstruje głęboki model szczura z kaniulowaniem przewodów wędrowych szyjnych, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę drenażu limfatycznego z okolic głowy. Model umożliwia szczegółową analizę substancji rozpuszczonych pochodzących z ośrodkowego układu nerwowego (OUN), populacji komórek odpornościowych oraz dystrybucję i oczyszczanie terapii ukierunkowanych na OUN.

Model szczura z kanulacją przewodu limfatycznego szyjnego do oceny transportu limfatycznego z głowy i mózgu

Ten protokół eksperymentalny opisuje model szczura z kanalikiem limfatycznym wątroby, który umożliwia bezpośrednią i ilościową ocenę limfatycznego i naczyniowego drenażu wątroby. Model pozwala na jednoczesne pobieranie limfy wątrobowej i krwi ogólnoustrojowej w celu zbadania transportu, metabolizmu i sygnalizacji odpornościowej wątroby, wspierając badania farmakokinetyki leków i biologii specyficznej dla wątroby.

Kompleksowy model szczura do oceny dróg transportu wątrobowego poprzez jednoczesne pobieranie próbek limfatycznych i krwionośnych

Przedstawiono technikę wykonywania mikroskopii intravitalnej węzła chłonnego (LN) pachwinowego. Technika ta umożliwia badanie mikrokrążenia i struktury węzła chłonnego w czasie rzeczywistym, in vivo, zarówno w stanie homeostazy, jak i podczas infekcji. Metoda ta może zostać dostosowana do badań nad migracją komórek oraz do analizy innych lokalizacji węzłów chłonnych.

Mikroskopia wewnątrzżyciowa węzła chłonnego pachwinowego

Poznaj technikę kaniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów do oceny transportu lipidów i leków przez układ limfatyczny jelit. Metoda umożliwia bezpośredni pomiar wchłaniania substancji.

Model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach (Wideo) | JoVE Journal

Model szczura kaniulowanego kaniulowanego w krezkowym przewodzie chłonnym: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach

Przeglądaj więcej filmów