Obrazowanie lokalnych sygnałów Ca2+ w hodowanych komórkach ssaków

Ogólnym celem tej procedury jest zademonstrowanie pozyskiwania, wykrywania i analizy lokalnych sygnałów wapniowych za pośrednictwem IP three w nienaruszonych komórkach ssaków przy użyciu obrazowania opartego na kamerach. Osiąga się to poprzez najpierw wyhodowanie komórek na szklanych naczyniach z dnem pokrywy i nałożenie na nie przepuszczalnych dla błony komórkowej form fluorescencyjnego wskaźnika wapnia. Licencja CAL pięć 20 i klatka IP trzy.

Drugim krokiem jest umieszczenie szkła nakrywkowego na stoliku mikroskopu odwróconego i oświetlenie próbki światłem o długości 488 nanometrów w celu wzbudzenia wrażliwego na wapń barwnika fluorescencyjnego Cal 5 20. Następnie lokalne sygnały wapniowe są indukowane przez wystawienie komórek na działanie krótkiego impulsu światła UV. To zdjęcie uwalnia IP three z prekursora w klatce, dzięki czemu może on teraz wiązać się z receptorem trifosforanu acetolu i pośredniczyć w uwalnianiu wapnia z retikulum endoplazmatycznego.