Name: Metoda zadawania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową u Drosophila (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 22 s
Description: Poznaj metodę zadawania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową u Drosophila. Technika HIIT umożliwia badanie komórkowych i molekularnych mechanizmów TBI oraz przeprowadzanie behawioralnych i morfologicznych analiz.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez grant National Institutes of Health, R01 AG033620 (BG) oraz przez Robert Draper Technology Innovation Funding (DAW).

1. Budowa urządzenia HIT 
<ol>
	<li>Przymocuj sprężynę do deski za pomocą dwóch zacisków i czterech (Rysunek 1A). Wyśrodkuj zaciski względem szerokości deski i dociśnij je do siebie zewnętrznym zaciskiem równo z krawędzią deski. Przed założeniem zacisków zegnij je za pomocą szczypiec, aby ściśle przylegały do sprężyny. 
	UWAGA: Patrz Tabela 1 w celu zapoznania się z opisami materiałów wymaganych do budowy urządzenia HIT. Zaciśnięty koniec sprężyny powinien znajdować się 1/8 cala (3,2 mm) od krawędzi płytki, a wolny koniec powinien wystawać ponad płytę na 3/4 cala (19 mm). Wyreguluj sprężynę tak, aby leżała równolegle do długości deski.</li>
	<li>Owiń wolny koniec sprężyny raz dookoła paskiem samoprzylepnym pętli na rzepy. Zewnętrzna krawędź rzepu powinna być zlicowana z końcem sprężyny. Rzep jest ważny, ponieważ służy do mocowania fiolki do sprężyny poprzez stworzenie szczelnego złącza zaciskowego. Rzep umożliwia również łatwe podłączanie i wyjmowanie fiolek, co pozwala na przetworzenie wielu fiolek w krótkim czasie.</li>
	<li>Umieść pokrywę wiaderka na lód do góry nogami, wyśrodkowaną, mocno przylegającą do drewnianej deski. Ustaw podniesiony obszar pokrywy pojemnika na lód tak, aby długa krawędź była równoległa do szerokości deski. Zwróć uwagę, że podniesiony obszar wiaderka na lód jest o 1/2 cala (13 mm) wyższy niż drewniana deska, więc gdy fiolka jest przymocowana do sprężyny, sprężyna nie będzie leżeć płasko na desce.</li>
	<li>Dosuń całe urządzenie do stałego przedmiotu, takiego jak ściana, tak aby pokrywa pojemnika na lód była zaklinowana między deską a przedmiotem i nie przesuwała się.</li>
	<li>Przyklej kątomierz papieru do spodu tekturowej tacki na fiolki muchowe i ustaw go na krawędzi przy długości deski, tak aby znak 90° był wyrównany ze sprężyną, gdy zostanie pociągnięty z powrotem do idealnie pionowej pozycji.</li>
</ol>
2. Działanie urządzenia HIT
<ol>
	<li>Umieścić od 1 do 60 much znieczulonych CO2 w pustej fiolce i zakorkować fiolkę za pomocą ciasno przylegającego wacika.</li>
	<li>Ogranicz muchy do dna 1 cala (2.5 cm) fiolki, wciskając wacik do fiolki, aż znajdzie się 1 cal (2.5 cm) od dna. Pomocne jest narysowanie linii na fiolce w miejscu oznaczenia 1 cala (2,5 cm). Należy pamiętać, że ograniczanie much do większych lub mniejszych obszarów fiolki może wpływać na nasilenie fenotypów.</li>
	<li>Odczekaj 5 minut, aż muchy odzyskają mobilność z CO2 . Należy zauważyć, że nie wiadomo, czy 5 minut jest wystarczające do całkowitego usunięcia skutków CO2 .</li>
	<li>Włożyć koniec sprężyny do fiolki tak długo, aż wewnętrzna krawędź rzepu zrówna się z górną częścią fiolki (Rysunek 1B). Gdy sprężyna leży płasko, 1 cal (2.5 cm) fiolki powinien zachodzić na podniesiony obszar pokrywy pojemnika na lód. Fiolki mogą być wielokrotnie używane.</li>
	<li>Siedząc, trzymaj fiolkę w okolicy rzepów za pomocą kciuka i palca wskazującego lewej ręki. Przytrzymaj deskę mocno przy blacie prawej ręki. Alternatywnie użyj zacisków C, aby mocno przytrzymać deskę do blatu.</li>
	<li>Pociągnij sprężynę idealnie prosto z powrotem pod żądanym kątem. Zwolnij sprężynę. Pozwól, aby wiosna całkowicie się zatrzymała.</li>
	<li>Wyjąć fiolkę ze sprężyny i pozwolić muszkom zregenerować się przez ≥5 min. Poddać muchy kolejnemu uderzeniu lub przenieść muchy do fiolki z pokarmem dla much. 
	UWAGA: Do oceny fenotypowych efektów uderzeń z urządzenia HIT można zastosować różne testy. Na przykład wpływ na długowieczność można określić, analizując procent much, które przeżywają czasami po urazie, wpływ na morfologię mózgu można określić za pomocą analizy histologicznej głowy, a wpływ na ekspresję genów można określić za pomocą analizy ilościowej poziomów mRNA10.</li>
	<li>Określ efekty zabiegu, które nie są spowodowane braniami, identycznie traktując muchy kontrolne, które nie są poddawane ukłuciom. Nosić ochronniki słuchu, ponieważ uderzenie fiolki o pokrywę pojemnika na lód powoduje głośny dźwięk.</li>
</ol>

<ol><li>Harrison-Felix, C. L., Whiteneck, G. G., Jha, A., DeVivo, M. J., Hammond, F. M., Hart, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+over+four+decades+after+traumatic+brain+injury+rehabilitation%3A+A+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Phys+Med+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Mortality over four decades after traumatic brain injury rehabilitation: A retrospective cohort study.</a> Arch Phys Med Rehabil. 90, 1506-1513 (2009).</li>
<li>Coronado, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+for+traumatic+brain+injury-related+deaths+%E2%80%93+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Surveill+Summ%22%5BJournal%5D)">Surveillance for traumatic brain injury-related deaths – United States.</a> MMWR Surveill Summ. 60, 1-32 (1997).</li>
<li>Masel, B., DeWitt, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+A+disease+process%2C+not+an+event%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: A disease process, not an event.</a> J. Neurotrauma. 27, 1529-1540 (2010).</li>
<li>Blennow, K., Hardy, J., Zetterberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropathology+and+neurobiology+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The neuropathology and neurobiology of traumatic brain injury.</a> Neuron. 76, 886-899 (2012).</li>
<li>Prins, M., Greco, T., Alexander, D., Giza, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+traumatic+brain+injury+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+Mech%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of traumatic brain injury at a glance.</a> Disease Models Mech. 6, 1307-1315 (2013).</li>
<li>Menon, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+challenges+in+clinical+trails+in+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Unique challenges in clinical trails in traumatic brain injury.</a> Crit Care Med. 37, S129-S135 (2009).</li>
<li>Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Animal models of traumatic brain injury.</a> Nature Rev Neurosci. 14, 128-142 (2013).</li>
<li>Balsiger, Z., Leudkte, J., Mawer, S., Willey, M. HIT device high speed analysis. , Available from:
	
 <a target="_blank" href="https://www.youtube.com/watch?v=hkmCXwPacBQ">https://www.youtube.com/watch?v=hkmCXwPacBQ</a> (2014).</li>
<li>Davceva, N., Janevska, V., Illevski, B., Petrushevska, G., Popeska, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+occurrence+of+acute+subdural+haematoma+and+diffuse+axonal+injury+as+two+typical+acceleration+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Forensic+Leg+Med%22%5BJournal%5D)">The occurrence of acute subdural haematoma and diffuse axonal injury as two typical acceleration injuries.</a> J Forensic Leg Med. 19, 480-484 (2012).</li>
<li>Katzenberger, R. J., Loewen, C. A., Wassarman, D. R., Petersen, A. J., Ganetzky, B., Wassarman , D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila.+model+of+closed+head+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A Drosophila. model of closed head traumatic brain injury.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 110, E4152-E4159 (2013).</li>
<li>Fang, Y., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axon+degeneration+and+regeneration%3A+insights+from+Drosophila+.models+of+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Axon degeneration and regeneration: insights from Drosophila .models of nerve injury.</a> Annu Rev Cell Biol. 28, 575-597 (2012).</li>
<li>Babcock, D. T., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+accurate+and+rapid+measurement+of+flight+performance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An improved method for accurate and rapid measurement of flight performance in Drosophila.</a> J Vis Exp. (84), e51223(2014).</li>
<li>Tully, T., Preat, T., Boynton, S. C., Vecchio, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+consolidated+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of consolidated memory in Drosophila.</a> Cell. 79, 35-47 (1994).</li>
<li>Andretic, R., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essentials+of+sleep+recordings+in+Drosophila.%3A+moving+beyond+sleep+time%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Essentials of sleep recordings in Drosophila.: moving beyond sleep time.</a> Methods Enzymol. 393, 759-772 (2005).</li>
</ol>

Nie mamy żadnych konfliktów interesów, które moglibyśmy ujawnić.

Metoda urządzenia HIT różni się od innych metod zadawania urazów u much tym, że powoduje ona zamknięcie głowy, a nie penetrację TBI11. Co więcej, metoda urządzenia HIT wymaga mniej czasu, wysiłku i umiejętności, aby wywołać TBI u wielu much, więc metoda ta jest bardziej podatna niż inne metody na badania genetyczne na dużą skalę. Wreszcie fakt, że pierwotne urazy zadane przez urządzenie HIT nie ograniczają się do mózgu, jest zarówno ograniczeniem, jak i zaletą. Jest to ograniczenie, ponieważ wymagane są dodatk...

An author's name was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52905">A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila</a>. The second to last author's was spelled incorrectly. It has been updated from:
Barry Ganetky
to:
Barry Ganetzky

An author's name was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52905">A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila</a>.

Erratum: A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

Urazowe uszkodzenie mózgu (TBI) definiuje się jako uszkodzenie mózgu spowodowane zewnętrzną siłą mechaniczną. Najczęściej TBI wynika z zamkniętych sił głowy, takich jak siły oraz bezwładnościowe siły przyspieszania i zwalniania, które powodują, że mózg uderza w wnętrze czaszki. Szacuje się, że w Stanach Zjednoczonych 50 000 osób umiera każdego roku z powodu TBI, a 2,5-6,5 miliona osób żyje z konsekwencjami TBI, w tym wyniszczającymiproblemami fizycznymi, poznawczymi i behawioralnymi. Konsekwencje TBI wynikają nie tylko z pierwotnych mechanicznych urazów mózgu, ale także z wtórnych urazów komórkowych i molekularnych mózgu, a także innych tkanek, które pojawiają się z czasem3-5. Opracowanie metod diagnozowania i leczenia TBI okazało się trudne, ponieważ TBI jest złożonym procesem chorobowym. Zmienny charakter urazów pierwotnych, fizjologia człowieka i czynniki środowiskowe skutkują niejednorodnymi wtórnymi urazami i patologiami. Podstawowe czynniki zmienne obejmują ciężkość urazu pierwotnego, czas między powtarzającymi się urazami pierwotnymi oraz wiek i genotyp osoby. Zrozumienie, w jaki sposób każdy zmienny czynnik przyczynia się do konsekwencji TBI, może pomóc w opracowaniu podejść do diagnozowania i leczenia TBI6,7.
Tutaj opisujemy metodę wywoływania TBI z zamkniętą głową u muszek owocowych Drosophila melanogaster, która może być wykorzystana do określenia udziału zmiennych czynników w konsekwencjach TBI. Metoda opiera się na wstępnej obserwacji, że intensywne uderzanie w bok fiolki z kulturą much o dłoń powodowało tymczasowe obezwładnienie much dzikich typów, co jest prawdopodobną konsekwencją TBI. W związku z tym skonstruowaliśmy urządzenie High-Impact Trauma (HIT), aby podsumować siły przyspieszania i zwalniania wynikające z uderzenia ręką. Szybki film pokazuje, że pojedyncze uderzenie urządzeniem HIT powoduje, że muchy kilkakrotnie stykają się ze ścianką fiolki głową i ciałem8. Do pewnego stopnia wszystkie kontakty mogą spowodować, że mózg muchy odbije się rykoszetem i odkształci się na torebce głowy, podobnie jak dzieje się to z ludźmi podczasupadków i wypadków samochodowych. W związku z tym muchy leczone urządzeniem HIT wykazują fenotypy zgodne z uszkodzeniem mózgu, w tym tymczasowe ubezwłasnowolnienie, po którym następuje ataksja, stopniowe odzyskiwanie mobilności, zmiany ekspresji genów w głowie i postępująca neurodegeneracjaw mózgu. W ten sposób urządzenie HIT umożliwia badanie TBI przy użyciu ogromnego arsenału narzędzi i technik eksperymentalnych opracowanych dla much.

<table><tbody><tr><td>Ocynkowana sprężyna naciskowa</td><td>The Hillman&nbsp; Grupa</td><td>540189</td><td>9 7/8 cala (długość, 2,2 cm), 15/16 cala (średnica zewnętrzna, 2,4 cm), 0,12 cala (rozmiar drutu, 0,3 cm)</td></tr><tr><td>Drewniana deska</td><td></td><td></td><td>9 cali (długość, 22,9 cm), 6,5 cala (szerokość, 16,5 cm), 0,75 cala (wysokość, 1,9 cm)</td></tr><tr><td>Zaciski</td><td>Sigma Electrical Manufacturing Corporation</td><td>49822</td><td>3,10 cala (długość, 7,9 cm), 0,68 cala (szerokość, 1,7 cm), 1,11 cala (wysokość, 2,8 cm), paski z dwoma otworami EMT, kliknij typ dla 1 cala (2,5 cm) stalowego przewodu EMT</td></tr><tr><td>Pętla połowa samoprzylepnego rzepu</td><td></td><td></td><td>3 cale (długość, 7,6 cm), (3/4 cala szerokość, 1,9 cm)</td></tr><tr><td>Poliuretanowa osłona wiadra na lód</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-591-45</td><td>9 1/8 cala (długość, 23,2 cm), 9 1/8 cala (szerokość, 23,2 cm), 1 1/4 cala (wysokość, 3,2 cm)</td></tr><tr><td>Plastikowe fiolki na muchy</td><td>Applied Scientific</td><td>AS-510</td><td>3 11/16 cala (wysokość, 9,4 cm), 1 1/16 cala (średnica wewnętrzna, 2,7 cm), 1 1/8 cala (średnica zewnętrzna, 2,9 cm)</td></tr><tr><td>Duże waciki</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-456-883</td><td></td></tr><tr><td>Kątomierz</td><td></td><td></td> papierowy <td>10 cali (średnica, 25,4 cm)</td></tr></tbody></table>

metoda zadawania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową u drosophila

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

Urazowe uszkodzenie mózgu (TBI) dotyka miliony ludzi każdego roku, powodując upośledzenie funkcji fizycznych, poznawczych i behawioralnych oraz śmierć. Badania z wykorzystaniem Drosophila przyczyniły się do ważnych przełomów w zrozumieniu procesów neurologicznych. W związku z tym, mając na celu zrozumienie komórkowych i molekularnych podstaw patologii TBI u ludzi, opracowaliśmy urządzenie High Impact Trauma (HIT) do wywoływania TBI z zamkniętą głową u muszek. Muchy poddane działaniu urządzenia HIT wykazują fenotypy zgodne z ludzkim TBI, takie jak tymczasowe ubezwłasnowolnienie i postępująca neurodegeneracja. Urządzenie HIT wykorzystuje mechanizm sprężynowy do popychania much na ściankę fiolki, powodując mechaniczne uszkodzenie mózgu muchy. Urządzenie jest niedrogie i łatwe w budowie, jego obsługa jest prosta i szybka, a do tego daje powtarzalne wyniki. W związku z tym urządzenie HIT można połączyć z istniejącymi narzędziami i technikami eksperymentalnymi dla much, aby odpowiedzieć na fundamentalne pytania dotyczące TBI, które mogą doprowadzić do opracowania diagnostyki i leczenia TBI. W szczególności urządzenie HIT może być wykorzystywane do wykonywania badań genetycznych na dużą skalę w celu zrozumienia genetycznych podstaw patologii TBI.

Dążymy do zrozumienia, dlaczego muchy giną w krótkim czasie po pierwotnym urazie. Aby ilościowo określić śmiertelność, wyznaczyliśmy wskaźnik śmiertelności po 24 h (MI24), który stanowi procent much, które padły w ciągu 24 h od pierwotnego urazu. Muchy poddane uderzeniom za pomocą urządzenia HIT inkubowano w temperaturze 25 °C w probówce z pożywką dla much, a liczbę martwych osobników policzono po 24 h. Zastosowaliśmy to podejście, aby zidentyfikować czynniki wpływające na MI24, i stwierdziliśmy, że...

Tutaj opisujemy metodę zadawania zamkniętego urazowego uszkodzenia mózgu (TBI) u Drosophila. Metoda ta stanowi bramę do badania mechanizmów komórkowych i molekularnych, które leżą u podstaw patologii TBI, przy użyciu szerokiej gamy narzędzi i technik eksperymentalnych dostępnych dla much.

Metoda zadawania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową u Drosophila

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

Ogólnym celem tej procedury jest wywołanie zamkniętego urazu czaszkowo-mózgowego u much. Osiąga się to poprzez umieszczenie much w fiolce w odległości jednej cala od dna.Drugim krokiem jest przymocowanie fiolki do urządzenia HIIT. Następnie sprężyna zostaje odgięta pod określonym kątem, po czym fiolka zostaje zwolniona i pozostawiona do całkowitego zatrzymania. Ostatecznie można zastosować szereg testów behawioralnych, morfologicznych i molekularnych w celu scharakteryzowania skutków powstałego urazowego uszkodzenia mózgu.Główną zaletą tej metody w porównaniu do istniejących metod, takich jak metoda upadku ciężaru u gryzoni, jest możliwość zbadania wielu zwierząt w krótkim odstępie czasu. Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania z zakresu urazów czaszkowo-mózgowych, na przykład dlaczego skutki urazu czaszkowo-mózgowego różnią się u różnych osobników. Na początek należy przygotować materiały wymienione w tabeli 1 towarzyszącego protokołu tekstowego.Zegnij zaciski za pomocą szczypiec tak, aby ściśle przylegały do sprężyny. Następnie wycentruj zaciski względem szerokości płytki i dosuń je do siebie tak, aby zewnętrzny zacisk licował się z krawędzią płytki. Ustaw sprężynę

a-method-to-inflict-closed-head-traumatic-brain-injury-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Ten film demonstruje procedurę zadawania obrażeń urazu głowy u znieczulonych muchówek Drosophila za pomocą urządzenia uderzeniowego z impaktorem napędzanym gazem. Uraz wpływa na funkcje neuronów i upośledza zdolność chodzenia.

Technika zadawania urazowego uszkodzenia mózgu u muchówek Drosophila

Ten film demonstruje metodę wywoływania ukierunkowanego uszkodzenia neuronów u larw Drosophila za pomocą lasera o dużej mocy. Po umieszczeniu larwy pod mikroskopem, laser o małej mocy skanuje w poszukiwaniu neuronów fluorescencyjnych, a następnie zwiększa moc lasera w celu wywołania miejscowego uszkodzenia. Uraz potwierdza zwiększona fluorescencja i krater w miejscu urazu.

Wywoływanie ukierunkowanego uszkodzenia neuronów za pomocą lasera o dużej mocy u larwy Drosophila

Film demonstruje użycie urządzenia High-Impact Trauma (HIT) do wywołania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową (TBI) u Drosophila. TBI powoduje mechaniczny uraz mózgu wpływający na funkcje neuronów, co z czasem prowadzi do neurodegeneracji i śmiertelności.

Ten film pokazuje indukcję penetrującego urazowego uszkodzenia mózgu w mózgu drosophila. Nowo wylęgłe muchy są selekcjonowane, znieczulane i umieszczane pod mikroskopem stereoskopowym wyposażonym we fluorescencję. Identyfikowany jest korpus grzyba wykazujący ekspresję GFP i wkładana jest szpilka Minutien w celu spowodowania obrażeń. Muchom pozwala się wyzdrowieć w celu dalszych badań.

Wywoływanie penetrującego urazowego uszkodzenia mózgu u dorosłych much Drosophila

Źródło: Logsdon, A. F.,  i wsp. Model fali uderzeniowej o niskiej intensywności do przedklinicznej oceny łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu u gryzoni. (2020)Ten film pokazuje indukcję łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową w modelu mysim przy użyciu rurki do wstrząsu gazowego pod ciśnieniem. Wytworzona fala ciśnienia rozrywa membranę poliestrową, dostarczając falę uderzeniową do głowy myszy, która powoduje szybki ruch mózgu w czaszce, powodując łagodne urazowe uszkodzenie...

Generowanie łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową w modelu mysim

Tutaj opisujemy nowe podejście do zadawania urazów mózgu u Drosophila melanogaster. Nasza metoda ma tę zaletę, że bezpośrednio dostarcza powtarzalne uderzenia z regulowaną siłą do samej głowy. Dalsze badania układu bezkręgowców pomogą rzucić światło na patogenezę przewlekłej encefalopatii pourazowej.

Nowa metoda modelowania przewlekłej encefalopatii pourazowej u Drosophila

Tutaj prezentujemy protokół wykorzystujący model uszkodzenia neuronów neuronu czuciowego Drosophila - dendrytycznej arboryzacji (da), który łączy obrazowanie na żywo in vivo, dwufotonową laserową aksotomię/dendriotomię oraz potężny zestaw narzędzi genetycznych much, jako platformę do badań przesiewowych potencjalnych promotorów i inhibitorów neuroregeneracji.

Model uszkodzeń Drosophila in vivo do badania neuroregeneracji w obwodowym i ośrodkowym układzie nerwowym

Tutaj udostępniamy protokoły do przeprowadzenia trzech prostych testów degeneracji aksonów (śmierci aksonów) wywołanych urazem u Drosophila melanogaster, aby ocenić morfologiczne i funkcjonalne zachowanie odciętych aksonów i ich synaps.

Ocena morfologiczna i funkcjonalna aksonów i ich synaps podczas śmierci aksonów u Drosophila melanogaster

Ten artykuł zawiera szczegółowe protokoły zadawania penetrującego urazowego uszkodzenia mózgu (PTBI) dorosłym Drosophila i badania wynikającej z tego neurogenezy.

Stymulowanie i analiza neurogenezy dorosłych w centralnym mózgu Drosophila

Ten protokół przedstawia zmodyfikowany mysi model powtarzalnego łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu (rmTBI) wywołanego metodą zamkniętego urazu głowy (CHI). Podejście to obejmuje cieńsze okienko czaszki i płynną stymulację w celu zmniejszenia stanu zapalnego często spowodowanego ekspozycją opon mózgowych, a także lepszą odtwarzalność i dokładność w modelowaniu rmTBI u gryzoni.

Zmodyfikowany mysi model powtarzającego się łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu z przerzedzonym okienkiem czaszki i płynną stymulacją

To badanie przedstawia uproszczony protokół przetwarzania tkanek obejmujący dekapitację, fiksację, kriosekcję, barwienie fluorescencyjne, barwienie immunologiczne i obrazowanie, który może być rozszerzony na obrazowanie konfokalne i wielofotonowe. Metoda zachowuje skuteczność porównywalną ze skomplikowanymi sekcjami, omijając potrzebę zaawansowanych umiejętności motorycznych. Ilościowa analiza obrazu daje szeroki potencjał badawczy.

Bezpośrednia kriosekcja głów Drosophila w celu wzmocnienia barwienia fluorescencyjnego mózgu i barwienia immunologicznego

Poznaj metodę zadawania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową u Drosophila. Technika HIIT umożliwia badanie komórkowych i molekularnych mechanizmów TBI oraz przeprowadzanie behawioralnych i morfologicznych analiz.

Metoda zadawania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową u Drosophila

Przeglądaj więcej filmów