Name: Indukowany model tocznia rumieniowatego układowego (SLE) bm12 u myszy C57BL/6 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Poznaj metodę indukowanego modelu tocznia rumieniowatego układowego bm12 u myszy C57BL/6. Charakteryzuj komórki Tfh, komórki B centrum rozrodczego i komórki plazmatyczne za pomocą cytometrii przepływowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była częściowo wspierana przez Lupus Research Institute, CA138617 grantów NCI, DK090978 grantów NIDDK, Charlotte Schmidlapp Award (dla E.M.J.) i Albert J. Ryan Fellowship (dla J.K.). Jesteśmy wdzięczni za wsparcie i oprzyrządowanie zapewnione przez rdzeń cytometrii przepływowej w Oddziale Reumatologii w Centrum Medycznym Szpitala Dziecięcego w Cincinnati, wspierane częściowo przez NIH AR-47363, NIH DK78392 i NIH DK90971.

<ol><li>Helmick, C. G., Felson, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Part+I.+Arthritis+Rheum%5BTitle%5D)+AND+%22Estimates+of+the+prevalence+of+arthritis+and+other+rheumatic+conditions+in+the+United+States%22%5BJournal%5D)">Part I. Arthritis Rheum.</a> Estimates of the prevalence of arthritis and other rheumatic conditions in the United States. 58, 15-25 (2008).</li>
<li>Lupus Foundation of America Web Site. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus">http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus</a> (2015).</li>
<li>Somers, E. C., Marder, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-based+incidence+and+prevalence+of+systemic+lupus+erythematosus%3A+The+Michigan+lupus+epidemiology+and+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Population-based incidence and prevalence of systemic lupus erythematosus: The Michigan lupus epidemiology and surveillance program.</a> Arthritis and Rheumatol. 66, 369-378 (2014).</li>
<li>Perry, D., Sang, A., Yin, Y., Zheng, Y. -Y., Morel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Murine models of systemic lupus erythematosus.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 271694(2011).</li>
<li>Lindholm, L., Rydberg, L., Strannegård, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+host+plasma+cells+during+graft-versus-host+reactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of host plasma cells during graft-versus-host reactions in mice.</a> Eur J Immunol. 3 (8), 511-515 (1973).</li>
<li>Fialkow, P. J., Gilchrist, C., Allison, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmunity+in+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Autoimmunity in chronic graft-versus-host disease.</a> Clin Exp Immunol. 13, 479-486 (1973).</li>
<li>Streilein, J. W., Stone, M. J., Duncan, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+Specificity+of+Autoantibodies+Produced+in+Systemic+Graft-vs-Host+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Studies on the Specificity of Autoantibodies Produced in Systemic Graft-vs-Host Disease.</a> J Immunol. 114 (1), 255-260 (1975).</li>
<li>Gleichmann, E., Gleichmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+caused+by+reactions+of+T+lymphocytes+to+in+compatible+structures+of+the+major+histocompatibility+complex.+I.+Autoimmune+hemolytic+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Diseases caused by reactions of T lymphocytes to in compatible structures of the major histocompatibility complex. I. Autoimmune hemolytic anemia.</a> Eur J Immunol. 6 (12), 899(1976).</li>
<li>Morris, S., Cohen, P. L., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+induction+of+systemic+lupus+erythematosus+by+recognition+of+foreign+Ia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Experimental induction of systemic lupus erythematosus by recognition of foreign Ia.</a> Clin Immunol Immunopathol. 57 (2), 263-273 (1990).</li>
<li>Chen, F., Maldonado, M., Madaio, M., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Host+%28Endogenous%29+T+Cells+in+Chronic+Graft-Versus-Host+Autoimmune+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Role of Host (Endogenous) T Cells in Chronic Graft-Versus-Host Autoimmune Disease.</a> J Immunol. 161 (11), 5880-5885 (1998).</li>
<li>Klarquist, J., Hennies, C. M., Lehn, M. A., Reboulet, R. A., Feau, S., Janssen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STING-Mediated+DNA+Sensing+Promotes+Antitumor+and+Autoimmune+Responses+to+Dying+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">STING-Mediated DNA Sensing Promotes Antitumor and Autoimmune Responses to Dying Cells.</a> J Immunol. 193, 6124-6134 (2014).</li>
<li>Petri, M., Orbai, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+validation+of+systemic+lupus+international+collaborating+clinics+classification+criteria+for+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Derivation and validation of systemic lupus international collaborating clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 64 (8), 2677-2686 (2012).</li>
<li>Zangala, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+genomic+DNA+from+mouse+tails%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of genomic DNA from mouse tails.</a> J Vis Exp. (6), e246(2007).</li>
<li>Lorenz, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerase+Chain+Reaction%3A+Basic+Protocol+Plus+Troubleshooting+and+Optimization+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies.</a> J Vis Exp. (63), e3998(2012).</li>
<li>Product information: Thermo Scientific FastDigest PsuI. , Thermo Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf">https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf</a> (2012).</li>
<li>Matheu, M. P., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+2-photon+imaging+of+peripheral+lymph+nodes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection and 2-photon imaging of peripheral lymph nodes in mice.</a> J Vis Exp. (7), e265(2007).</li>
<li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+mapping+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li>
<li>Covelli, V. Chapter 3, Internal examination. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCovelli%2C+V+%22Guide+to+the+necroscopy+of+the+mouse%22">Guide to the necroscopy of the mouse</a>. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html">http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html</a> (2009).</li>
<li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+%28CFSE%29+to+monitor+lymphocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. (44), e2259(2010).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CD4%2B+T+cells+from+mouse+lymph+nodes+using+Miltenyi+MACS+purification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CD4+ T cells from mouse lymph nodes using Miltenyi MACS purification.</a> J Vis Exp. (9), e53319(2007).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), e2771(2012).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+Blood+Collection+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>Cohen, M., Varki, N. M., Jankowski, M. D., Gagneux, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Unfixed%2C+Frozen+Tissues+to+Study+Natural+Mucin+Distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution.</a> J Vis Exp. (67), e3928(2012).</li>
<li>Cohen, P. L., Maldonado, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+SLE%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol.%22%5BJournal%5D)">Animal models for SLE.</a> Curr Protoc Immunol.. Chapter 15, Unit 15.20(2003).</li>
<li>Seavey, M. M., Lu, L. D., Stump, K. L. Animal models of systemic lupus erythematosus (SLE) and ex vivo assay design for drug discovery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeavey%2C+MM+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 5, Unit 5(2011).</li>
<li>McKenna, K. C., Vicetti Miguel, R. D., Beatty, K. M., Bilonick, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+caveat+for+T+cell+transfer+studies%3A+generation+of+cytotoxic+anti-Thy1.2+antibodies+in+Thy1.1+congenic+mice+given+Thy1.2%2B+tumors+or+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">A caveat for T cell transfer studies: generation of cytotoxic anti-Thy1.2 antibodies in Thy1.1 congenic mice given Thy1.2+ tumors or T cells.</a> J Leukoc Biol. 89 (2), 291-300 (2011).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mouse+male-specific+transplantation+antigen+H-Y.%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of a mouse male-specific transplantation antigen H-Y.</a> Nature. 376, 695-698 (1995).</li>
<li>Joly, E., Hudrisier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+trogocytosis+and+what+is+its+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">What is trogocytosis and what is its purpose.</a> Nat Immunol. 4 (9), 815(2003).</li>
<li>Brown, D. R., Calpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+an+NK+cell-independent+role+for+Slamf4+in+controlling+humoral+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: an NK cell-independent role for Slamf4 in controlling humoral autoimmunity.</a> J Immunol. 187 (1), 21-25 (2011).</li>
<li>Morris, S. C., Cheek, R. L., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allotype-specific+immunoregulation+of+autoantibody+production+by+host+B+cells+in+chronic+graft-versus+host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allotype-specific immunoregulation of autoantibody production by host B cells in chronic graft-versus host disease.</a> J Immunol. 144 (3), 916-922 (1990).</li>
<li>Choudhury, A., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+require+%E2%80%9Cnurturing%E2%80%9D+by+CD4+T+cells+during+development+in+order+to+respond+in+chronic+graft-versus-host+model+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells require “nurturing” by CD4 T cells during development in order to respond in chronic graft-versus-host model of systemic lupus erythematosus.</a> Clin Immunol. 136 (1), 105-115 (2010).</li>
<li>Slifka, M. K., Antia, R., Whitmire, J. K., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immunity+due+to+long-lived+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Humoral immunity due to long-lived plasma cells.</a> Immunity. 8 (3), 363-372 (1998).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Indukowalny model bm12 jest stosunkowo łatwym i wydajnym sposobem badania procesów komórkowych i molekularnych towarzyszących SLE. Przewlekła aktywacja adoptywnie przeniesionych limfocytów T CD4 skierowanych przeciwko autoantygenom prowadzi do akumulacji komórek Tfh, limfocytów B w centrach rozmnażania (GC B cells) oraz komórek plazmatycznych, co można zmierzyć za pomocą cytometrii przepływowej, zgodnie z opisem w niniejszej pracy. Przyszłe badania z wykorzystaniem tego modelu pozwolą na szybką i łatwą analizę roli genów...

Toczeń rumieniowaty układowy (SLE) jest złożoną chorobą autoimmunologiczną charakteryzującą się prototypowo produkcją przeciwciał przeciwjądrowych (ANA) i kłębuszkowym zapaleniem nerek. Wiele innych następstw, w tym zmiany skórne, krążeniowo-oddechowe i wątrobowe, są związane z chorobą u niektórych osób. Szacunki dotyczące rozpowszechnienia w USA różnią się znacznie, od 150 000 do 1 500 0001,2, przy czym szczególnie wysoka częstość występowania występuje u kobiet i mniejszości3. Chociaż etiologia TRU jest trudna do określenia, uważa się, że wynika ona z wzajemnego oddziaływania różnych czynników genetycznych i środowiskowych, które prowadzą do autoimmunizacji układowej.
Liczne modele zwierzęce zostały wykorzystane do badania czynników prowadzących do wystąpienia i postępu choroby. Klasyczne mysie modele SLE obejmują genetycznie predysponowane szczepy myszy, w tym model NZB x NZW F1 i jego pochodne NZM, szczep MLR/lpr i szczep BXSB/Yaa, a także systemy indukowalne, takie jak modele pristanu i przewlekłej choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (cGVHD)4. Wczesne doniesienia o produkcji autoprzeciwciał w modelach GVHD wykorzystywały różne szczepy myszy lub szczepy chomików do transferów rodzicielskichdo F1 5-8; bardziej powszechne metody stosowane do badania choroby podobnej do tocznia obejmują obecnie DBA/2 parent→(C57BL/6 x DBA/2) F1 oraz model transferu BM12 opisany tutaj. Każdy model ma swoje własne zastrzeżenia, ale generalnie mają one wspólny zestaw cech, które korelują z klinicznymi cechami choroby ludzkiej. Najczęściej zgłaszane parametry w modelach mysich obejmują powiększenie śledziony, powiększenie węzłów chłonnych, zapalenie nerek, produkcję ANA, a na poziomie komórkowym ekspansję komórek pomocniczych pęcherzyków T (Tfh), komórek B centrum rozrodczego (GC) i komórek plazmatycznych.
Indukowalny model bm12 jest osiągany przez adoptywny transfer limfocytów od myszy I-Abm12B6(C)-H2-Ab1 bm12/KhEgJ (bm12), szczepu identycznego z C57BL/6, z wyjątkiem 3 podstawień aminokwasów na MHC klasy II, do myszy I-Ab C57BL/6 (B6). Alloaktywacja limfocytów T CD4 dawcy przez APC biorcy prowadzi do cGVHD z objawami bardzo podobnymi do TRU. W szczególności obejmują one ekspansję Tfh pochodzącego od dawcy, ekspansję komórek GC B i komórek plazmatycznych pochodzących od biorcy oraz wytwarzanie ANA, w tym przeciwciał anty-dsDNA, anty-ssDNA, antychromatyny i przeciwciał anty-RBC9. Z biegiem czasu u myszy biorców rozwija się kłębuszkowe zapalenie nerek związane ze złogami IgG w kłębuszkowych, śródmiąższowych i naczyniowych obszarach nerek10. Wykazaliśmy niedawno, że podobnie jak w przypadku chorób u ludzi, w tym modelu11 również kluczową rolę odgrywa IFN typu I. Warto zauważyć, że kryteria definiujące TRU u ludzi obejmują rozwój zapalenia nerek zgodnego z TRU w obecności przeciwciał anty-dsDNA12, które są istotnymi cechami tego modelu mysiego.
Istnieje kilka zalet modelu bm12 w porównaniu z modelami spontanicznymi. Klasyczne modele, u których rozwijają się objawy podobne do SLE, spontanicznie opierają się na hybrydowych szczepach myszy, wsobnych szczepach myszy nie na tle B6 lub dużych loci genetycznych na tle B6, co sprawia, że krzyżowanie z myszami z nokautem lub w inny sposób zmodyfikowanymi genetycznie jest trudne i czasochłonne. Dzięki modelowi indukowalnemu bm12 genetycznie zmodyfikowane myszy mogą służyć zarówno jako dawca, jak i biorca, umożliwiając szybszą identyfikację przedziału komórkowego, w którym poszczególne geny mogą być ważne dla choroby. Co więcej, rozwój choroby w modelu bm12 jest znacznie szybszy i wymaga tylko 2 tygodni do pojawienia się ANA, w porównaniu do kilku miesięcy w przypadku większości modeli spontanicznych. Co więcej, w przeciwieństwie do modeli spontanicznych, które rozwijają chorobę w różnych punktach czasowych, początek i postęp choroby w modelu bm12→B6 jest wysoce zsynchronizowany. Pozwala to na generowanie kohort o odpowiedniej wielkości, które można wykorzystać do strategii interwencyjnych lub terapeutycznych na każdym etapie rozwoju choroby.
Poniżej znajduje się szczegółowy protokół inicjowania autoimmunizacji podobnej do SLE poprzez adoptywny transfer limfocytów bm12 do myszy C57BL/6 lub wariantów genetycznych na tle B6. Dodatkowo opisujemy protokół barwienia cytometrycznego przepływowego do zliczania komórek Tfh, GC B i komórek plazmatycznych - typów komórek związanych z chorobami ludzkimi. Co ważne, protokoły te mogą być również wykorzystywane do charakteryzowania choroby w większości mysich modeli TRU oraz identyfikacji komórek Tfh, GC B i komórek plazmatycznych w innych modelach choroby.

<table><tbody><tr><td>Klasa B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>CD45.1+ Szczep myszy BoyJ B6</td></tr><tr><td>(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>Szczep myszy Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>Bm12</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>Enzym trawienny restrykcyjny do genotypowania</td></tr><tr><td>1X bufor do lizy RBC</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>Probówka do separacji osocza (PST)</td><td>BD</td><td>365974</td><td>Probówka do pobierania krwi z</td></tr><tr><td>probówką do separacji surowicy Dipotassium EDTA (SST)</td><td>BD</td><td>365967</td><td>Probówka do pobierania krwi z aktywatorem skrzepu / SST Gel</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&nbsp;</td><td>Rozwiązanie do separacji komórek o dużej gęstości</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>Roztwór do separacji komórek o wysokiej gęstości</td></tr><tr><td>GL-7-biotyna</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Streptawidyna-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td></td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>Fixable Viability Dye ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>1,2 ml wkładki do probówek FACS, stojak</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&handel; Rury okrągłodenne</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

indukowany model tocznia rumieniowatego układowego (sle) bm12 u myszy c57bl/6

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Toczeń rumieniowaty układowy (SLE) jest chorobą autoimmunologiczną o zróżnicowanych objawach klinicznych i immunologicznych. Kilka spontanicznych i indukowalnych modeli zwierzęcych odzwierciedla wspólne składniki chorób u ludzi, w tym model transferu bm12. Po przeniesieniu splenocytów bm12 lub oczyszczonych limfocytów T CD4, myszy C57BL / 6 szybko rozwijają duże częstotliwości komórek pomocniczych pęcherzyków T (Tfh), komórek B centrum rozrodczego (GC) i komórek plazmatycznych, po których następuje wysoki poziom krążących przeciwciał przeciwjądrowych. Ponieważ model ten wykorzystuje myszy na czystym tle C57BL/6, naukowcy mogą szybko i łatwo badać postęp choroby w transgenicznych lub nokautujących szczepach myszy w stosunkowo krótkim czasie. Tutaj opisujemy protokoły indukcji modelu i oceny ilościowej Tfh, komórek GC B i komórek plazmatycznych za pomocą wielokolorowej cytometrii przepływowej. Co ważne, protokoły te mogą być również wykorzystane do scharakteryzowania choroby w większości mysich modeli TRU oraz identyfikacji komórek Tfh, GC B i komórek plazmatycznych w innych modelach choroby.

U chorych myszy w ciągu zaledwie 14 dni rozwija się splenomegalia, objawiająca się śledzionami o masie i liczbie komórek 2-3 razy większych niż u zdrowych myszy (Rysunek 2).
Splenocyty są sekwencyjnie bramkowane na podstawie rozproszenia światła (FSC-A względem SSC-A), eliminacji dubletów (FSC-W lub -H względem FSC-A), żywotności komórek (niskie barwienie barwnikiem żywotności) oraz populacji CD4+TCRβ+ (Rysunek 3A). Komórki dawcy są odróż...

Transfer limfocytów bm12 do biorcy C57BL/6 jest ustalonym modelem tocznia rumieniowatego układowego. Tutaj opisujemy, jak zainicjować chorobę za pomocą tego modelu i jak scharakteryzować komórki pomocnicze pęcherzyków T, komórki B centrum rozrodczego i komórki plazmatyczne za pomocą cytometrii przepływowej.

Indukowany model tocznia rumieniowatego układowego (SLE) bm12 u myszy C57BL/6

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Ogólnym celem tej procedury jest charakterystyka ekspansji limfocytów T pomocniczych pęcherzykowych, ośrodków rozmnażania, limfocytów B i komórek plazmatycznych za pomocą cytometrii przepływowej w modelu BM 12 tocznia rumieniowatego układowego (SLE). Ta metoda może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie badań nad toczniem, takie jak to, czy celowanie w określone szlaki molekularne za pomocą środków terapeutycznych może zatrzymać lub spowolnić progresję choroby. Główną zaletą tego modelu SLE jest wykorzystanie myszy na czystym tle genetycznym CPD C57BL/6, dzięki czemu badacze mogą szybko i łatwo badać progresję choroby u transgenicznych lub nokautowych szczepów myszy w stosunkowo krótkim czasie.Po wyizolowaniu i wstrzyknięciu komórek dawcy BM 12 myszom, określeniu wydajności przeszczepu oraz uśpieniu myszy zgodnie z protokołem tekstowym, należy lekko spryskać brzuch myszy 70% ethanol, aby go zwilżyć, a następnie użyć nożyczek chirurgicznych. Wykonaj małe, powierzchowne nacięcie około jednego centymetra powyżej narządów płciowych i odsuń skórę brzucha w kierunku mostka, zachowując nienaruszoną powięź otrzewnej. Przygotuj strzykawkę o pojemności pięciu mililitrów z igłą o

the-bm12-inducible-model-systemic-lupus-erythematosus-sle-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

W niniejszym filmie przedstawiono sposób indukowania autoimmunologicznego zapalenia przysadki u myszy szczepu SJL oraz metodę oceny stopnia jego nasilenia za pomocą badania histopatologicznego.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia przysadki u myszy szczepu SJL

Film demonstruje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u myszy poprzez wstrzyknięcie kombinacji glikoprotein oligodendrocytów mielinowych i inaktywowanych Mycobacterium tuberculosis. Model umożliwia naukowcom badanie mechanizmów chorobowych i testowanie interwencji terapeutycznych.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego w modelu mysim

W tym filmie mysi model stwardnienia rozsianego jest tworzony za pomocą eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE). Myszowi wstrzykuje się emulsję zawierającą peptyd neuronalny i adiuwant, wywołując odpowiedź immunologiczną, która aktywuje autoreaktywne limfocyty T. Następnie podaje się wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (PTX) w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając autoreaktywnym limfocytom T infiltrację mózgu. Ten naciek inicjuje kaskadę...

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) jest uznanym zwierzęcym modelem stwardnienia rozsianego. Myszy C57BL/6 są immunizowane peptydem 35-55 (MOG) glikoproteiny oligodendrocytów mieliny (MOG) (MOG35-55), co powoduje narastający porażenie wiotkie spowodowane przez autoreaktywne komórki odpornościowe w ośrodkowym układzie nerwowym. Omówione zostaną protokoły indukcji i monitorowania choroby.

Glikoproteina oligodendrocytów mielinowych (MOG35-55) indukowana eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego (EAE) u myszy C57BL / 6

Ten manuskrypt opisuje metody indukcji i oceny eksperymentalnego modelu autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego (EAE), wraz z oceną rozmieszczenia komórek odpornościowych i poziomów cytokin mRNA w węzłach chłonnych, śledzionie, krwi i rdzeniu kręgowym za pomocą cytometrii przepływowej i ilościowego PCR, odpowiednio, w różnych fazach choroby.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego u myszy i ocena zależnej od choroby dystrybucji komórek odpornościowych w różnych tkankach

Ten protokół opisuje, jak określić, czy farmakologiczne leczenie eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia wykazuje ochronę OUN w wyniku tłumienia infiltracji komórek odpornościowych, czy też są neuroprotekcyjne podczas ataku infiltracji komórek odpornościowych.

Określanie supresji układu odpornościowego w porównaniu z ochroną OUN dla interwencji farmakologicznych w demielinizacji autoimmunologicznej

Tutaj prezentujemy skuteczną metodę badania aktywności przeciwzwłóknieniowej ludzkich mezenchymalnych komórek zrębu podawanych dożylnie, uzyskanych z całej pępowiny po indukcji uszkodzenia płuc przez wstrzyknięcie dotchawicze bleomycyny u myszy C57BL/6. Protokół ten można łatwo rozszerzyć na badania przedkliniczne innych środków terapeutycznych.

Indukcja uszkodzenia płuc myszy przez wstrzyknięcie dotchwiaczą bleomycyny

Obecny protokół opisuje metodę śledzenia postępu tocznia u myszy. Przedstawiono dwie dodatkowe procedury w celu scharakteryzowania toczniowego zapalenia nerek w oparciu o naciek komórek i odkładanie się białek w nerkach.

Analizy białkomoczu, naciekania leukocytów przez nerki i odkładania się białek przez nerki u myszy MRL/lpr podatnych na toczeń

Niniejszy protokół opisuje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia w modelu mysim przy użyciu glikoproteiny oligodendrocytów mieliny i monitorowanie procesu chorobowego za pomocą systemu punktacji klinicznej. Eksperymentalne objawy związane z autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego są analizowane za pomocą analizy mikrotomografii komputerowej kości udowej myszy i testu terenowego w celu kompleksowej oceny procesu chorobowego.

Indukcja i zróżnicowane wskaźniki oceny eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia jest jednym z najczęściej stosowanych mysich modeli stwardnienia rozsianego. W obecnym protokole myszy C57BL/6J obu płci są immunizowane peptydem glikoproteinowym oligodendrocytów mielinowych, co skutkuje głównie wznoszącym się niedowładem ogona i kończyn. W tym miejscu omówiono protokół indukcji i oceny EAE.

Modelowanie stwardnienia rozsianego u obu płci: eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia wywołane MOG35-55

Tutaj przedstawiamy protokół ustanawiający mysi model reumatoidalnego zapalenia stawów (RA) poprzez adoptywny transfer limfocytów T CD4+ od myszy SKG, dostarczając szybkiego i niezawodnego narzędzia eksperymentalnego do badania mechanizmów immunologicznych, patologicznego postępu i rozwoju nowych metod leczenia RZS.

Adoptywny model transferowy reumatoidalnego zapalenia stawów u myszy

Poznaj metodę indukowanego modelu tocznia rumieniowatego układowego bm12 u myszy C57BL/6. Charakteryzuj komórki Tfh, komórki B centrum rozrodczego i komórki plazmatyczne za pomocą cytometrii przepływowej.

Indukowany model tocznia rumieniowatego układowego (SLE) bm12 u myszy C57BL/6

Przeglądaj więcej filmów