Name: Skuteczna metoda uzyskiwania odróżnicowanych komórek tłuszczowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: Poznaj efektywną metodę uzyskiwania odróżnicowanych komórek tłuszczowych (DFAT) w celach regeneracyjnych. Ulepszony podłoże wzrostowe znacząco poprawia jakość komórek i wspiera badania w inżynierii tkankowej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było częściowo wspierane przez Program Tworzenia Start-upów z Zaawansowanych Badań i Technologii (Program START) z Japońskiego Towarzystwa Promocji Nauki (ST261006IP, TM) oraz przez Program dla Fundacji Badań Strategicznych na Prywatnych Uniwersytetach (2014-2019) (S1411018, TM) z Ministerstwa Edukacji, Sportu, Nauki i Technologii.

Próbki ludzkiego tłuszczu podskórnego uzyskano od pacjentów poddawanych zabiegom chirurgicznym na Wydziale Chirurgii Plastycznej, Urologii, Chirurgii Dziecięcej i Chirurgii Ortopedycznej Szpitala Uniwersyteckiego Itabashi Nihon (Tokio, Japonia). Pacjenci wyrazili pisemną świadomą zgodę, a Komisja Etyki Szkoły Medycznej Uniwersytetu Nihon zatwierdziła badanie.
1. Przygotowanie tkanek
<ol>
	<li>Przynieś próbkę tkanki z sali operacyjnej do laboratorium.</li>
	<li>Przemyć 1-2 g tkanki tłuszczowej 5 ml PBS(-) w temperaturze pokojowej (RT) jeden raz w probówce o pojemności 50 ml, a następnie umieścić próbkę w plastikowym naczyniu o średnicy 10 cm.</li>
</ol>
2. Trawienie kolagenazy
<ol>
	<li>Usunąć próbkę z PBS(-), a następnie dodać 10 ml sterylnego 0,1% (m/v) roztworu kolagenazy (kolagenazy typu II) do naczynia zawierającego próbkę tkanki.</li>
	<li>Tkankę mielić nożyczkami chirurgicznymi przez około 15 minut, aż osiągnie zmiksowaną konsystencję.</li>
	<li>Następnie trawić zmieloną tkankę w 0,1% (m/v) roztworze kolagenazy w temperaturze 37 °C przez 30 minut (60 obr./min) w probówce o pojemności 50 ml, delikatnie mieszając na shakerze.</li>
	<li>Przefiltrować strawioną próbkę przez filtr 100 μm do probówki o pojemności 50 ml. Następnie przepuścić przez filtr 10 ml DCM (patrz Tabela Materiałów) uzupełnionego o 2% FBS.</li>
</ol>
3. Izolacja komórek
<ol>
	<li>Odwirować przefiltrowane komórki przy 100 x g przez 1 minutę w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>W tym momencie należy przygotować 5 ml DCM uzupełnionego o 2% FBS w probówce o pojemności 50 ml.</li>
	<li>Następnie narysuj pływające komórki tłuszczowe za pomocą pipety o pojemności 1 000 μl i dodaj komórki do probówki o pojemności 50 ml zawierającej pożywkę.</li>
	<li>Następnie delikatnie wstrząsnąć probówką o pojemności 50 ml, aby wymieszać pożywkę DCM z komórkami.</li>
	<li>Następnie odwirować probówkę o sile 100 x g przez 1 minutę w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Odrzucić pożywkę znajdującą się na dnie probówki za pomocą igły 18 G i strzykawki o pojemności 20 ml.</li>
	<li>Następnie do pobranych komórek dodać 10 ml DCM uzupełnionego o 2% FBS.</li>
	<li>Wymieszać DCM z komórkami, delikatnie potrząsając probówką o pojemności 50 ml.</li>
	<li>Odwirować probówkę o sile 100 x g przez 1 minutę w temperaturze pokojowej.</li>
</ol>
4. Komórki poszycia
<ol>
	<li>Dodać 41 ml DCM lub DMEM uzupełnionego 20% FBS do kolby o średnicy 12,5 cm.</li>
	<li>Następnie za pomocą pipety o pojemności 200 μl dodaj 40 μl komórek tłuszczowych do kolby.</li>
	<li>Następnie napełnij kolbę DCM lub DMEM uzupełnionym 20% FBS. KROK KRYTYCZNY: W tym momencie upewnij się, że komórki są rozrzucone po całym podłożu. Sprawdzić wzrokowo oderwane komórki, a następnie trzymać kolbę na pokrywie okrągłej szalki Petriego, aby była płaska.</li>
	<li>Na koniec umieścić kolbę w inkubatorze i pozostawić ją w spokoju w inkubatorze o stężeniu 5% CO2 w temperaturze 37 °C na 7 dni.</li>
	<li>Po tygodniu inkubacji odwrócić kolbę i sprawdzić, czy nie ma komórek DFAT. Następnie oceń biegłość w generowaniu komórek DFAT zgodnie z opisem10, ponieważ w tym momencie komórki podobne do fibroblastów (komórki DFAT) znajdują się w regionach innych niż komórki tłuszczowe.</li>
	<li>Dodać 5 ml DCM lub DMEM uzupełnionego 20% FBS do kolby po usunięciu poprzedniej pożywki do hodowli komórkowych. Pozwól komórkom DFAT rosnąć przez kolejny tydzień po zmianie podłoża.</li>
	<li>Korzystając z licznika komórek, policz liczbę komórek DFAT wygenerowanych w różnych warunkach hodowli komórkowej (DCM vs. DMEM).</li>
</ol>

<ol><li>Lanzoni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+clinical+programs+of+stem+cell+therapies+for+liver+and+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: clinical programs of stem cell therapies for liver and pancreas.</a> Stem Cells. 31 (10), 2047-2060 (2013).</li>
<li>de Girolamo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%3A+a+new+%22cells+as+drugs%22+paradigm.+Efficacy+and+critical+aspects+in+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Des%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem/stromal cells: a new "cells as drugs" paradigm. Efficacy and critical aspects in cell therapy.</a> Curr. Pharm. Des. 19 (13), 2459-2473 (2013).</li>
<li>Lindroos, B., Suuronen, R., Miettinen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+adipose+stem+cells+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">The potential of adipose stem cells in regenerative medicine.</a> Stem Cell. Rev. 7 (2), 269-291 (2011).</li>
<li>Yan, J., Tie, G., Xu, T. Y., Cecchini, K., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+as+a+treatment+for+peripheral+arterial+disease%3A+current+status+and+potential+impact+of+type+II+diabetes+on+their+therapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells as a treatment for peripheral arterial disease: current status and potential impact of type II diabetes on their therapeutic efficacy.</a> Stem Cell. Rev. 9 (3), 360-372 (2013).</li>
<li>Ringden, O., Keating, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+as+treatment+for+chronic+GVHD%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells as treatment for chronic GVHD.</a> Bone Marrow Transplant. 46 (2), 163-164 (2011).</li>
<li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+adipocyte-derived+dedifferentiated+fat+cells+exhibit+multilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mature adipocyte-derived dedifferentiated fat cells exhibit multilineage potential.</a> J. Cell. Physiol. 215 (1), 210-222 (2008).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+adipose+stem+cells+through+dedifferentiation+of+mature+adipocytes+in+ceiling+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of human adipose stem cells through dedifferentiation of mature adipocytes in ceiling cultures.</a> J. Vis. Exp. (97), (2015).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+dedifferentiating+human+mature+adipocytes+from+the+visceral+and+subcutaneous+fat+compartments%3A+fibroblast-activation+protein+alpha+and+dipeptidyl+peptidase+4+as+major+components+of+matrix+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of dedifferentiating human mature adipocytes from the visceral and subcutaneous fat compartments: fibroblast-activation protein alpha and dipeptidyl peptidase 4 as major components of matrix remodeling.</a> PLoS One. 10 (3), 0122065(2015).</li>
<li>Peng, X., et al. Phenotypic and Functional Properties of Porcine Dedifferentiated Fat Cells during the Long-Term Culture In Vitro. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPeng%2C+X+%22Biomed.+Res.+Int%22">Biomed. Res. Int</a>. 2015, 673651(2015).</li>
<li>Kono, S., Kazama, T., Kano, K., Harada, K., Uechi, M., Matsumoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+properties+of+feline+dedifferentiated+fat+cells+and+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional properties of feline dedifferentiated fat cells and adipose-derived stem cells.</a> Vet. J. 199 (1), 88-96 (2014).</li>
<li>Bellin, M., Marchetto, M. C., Gage, F. H., Mummery, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+the+new+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: the new patient.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (11), 713-726 (2012).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Dojrzałe adipocyty, które przechodzą dedyferencjację in vitro , proces znany jako hodowla sufitowa, mogą powrócić do bardziej prymitywnego fenotypu i uzyskać zdolności proliferacyjne. Komórki te są określane jako odróżnicowane komórki tłuszczowe (DFAT). Oceniono potencjał różnicowania wieloliniowego komórek DFAT. Analiza cytometrii przepływowej i analiza ekspresji genów wykazały, że komórki DFAT były wysoce jednorodne w porównaniu zASCs 6. W rzeczywistości profil antygenu powierzchniowego komórek DFAT...

Terapia komórkowa i inżynieria tkankowa to gorące tematy w dziedzinie medycyny regeneracyjnej1-5. Chociaż te metody terapeutyczne są bardzo obiecujące, kilka problemów technicznych utrudnia obecnie ich kliniczne zastosowanie. W związku z tym, podobnie jak w przypadku wytwarzania komórek iPS, wszystkie terapie inżynierii tkankowej muszą wytwarzać komórki wolne od zewnętrznych transdukcji genów, aby zapewnić bezpieczeństwo pacjenta. W związku z tym byliśmy pierwszą grupą, której udało się wyprodukować ludzkie komórki DFAT6. Od tego czasu kilka innych grup badawczych przyjęło naszą metodę generowania komórek DFAT pochodzenia ssaków7-9, co jeszcze bardziej podkreśla przydatność naszego modelu.
W trakcie kilku badań stwierdziliśmy, że jakość środowiska hodowli komórkowej może być modyfikowana poprzez dostosowanie zawartości pożywki komórkowej. Odkrycie to doprowadziło do zwiększenia wskaźnika sukcesu produkcji komórek DFAT i poprawy jakości komórek; oba te czynniki mają kluczowe znaczenie dla wydajnego generowania komórek do przyszłych badań klinicznych. W związku z tym opracowano ulepszoną pożywkę hodowlaną DFAT (DCM, pożywka podobna do pożywki z mezenchymalnych komórek macierzystych, która zawiera rekombinowaną insulinę ludzką, albuminę surowicy, kwas L-glutaminowy, kilka kwasów tłuszczowych i cholesterol) oraz metodę generowania i proliferacji komórek DFAT (więcej informacji na temat zawartości DCM można uzyskać na żądanie). Za pomocą tej metody uzyskano wysokiej jakości komórki DFAT ze zdolnością różnicowania się w kilka typów komórek, w tym komórki adipogenne, osteogenne i chondrogenne. Ogólnie rzecz biorąc, ten zwalidowany protokół hodowli komórkowej poprawia jakość komórek DFAT i może być bardzo przydatny do ulepszania klinicznych zastosowań terapii komórkowej i inżynierii tkankowej.

<table><tbody><tr><td>CSTI303-MSC średnie&nbsp;</td><td>CSTI</td><td>87-671</td><td>To podłoże jest zdefiniowane jako DCM w tekście</td></tr><tr><td>PBS(-)</td><td>Wako</td><td>166-23555</td><td>Nie zawiera Mg2+ i Ca2+</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>Nożyczki</td> do płodu bydlęcego Sigma 172012 <td></td></tr><tr><td>Kolagenaza typu II</td><td>Sigma</td><td>C-6885</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Takasago Medical Industry Co., Ltd</td><td>TKZ-F2194-1</td><td></td></tr><tr><td>Wytrząsarka</td><td>TAITEC</td><td>Bioshaker V.BR-36</td><td></td></tr><tr><td>Filtr siatkowy Falcon Cell 100 &mu; m Żółty</td><td>CORNING LIFE SCIENCES&nbsp;</td><td>DL 352360</td><td></td></tr><tr><td>Sokół 12,5 cm&sup2; Prostokątna kolba do hodowli komórkowych z przechyloną szyjką i niebieską wentylowaną zakrętką</td><td>CORNING LIFE SCIENCES&nbsp;</td><td></td><td></td>353107</tr><tr><td>Igła 18 G</td><td>NIPRO</td><td>02-002</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka 20 ml&nbsp;</td><td>NIPRO</td><td>08-753</td><td></td></tr><tr><td>Licznik redlic serii Z</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>383550</td><td></td></tr></tbody></table>

skuteczna metoda uzyskiwania odróżnicowanych komórek tłuszczowych

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

Inżynieria tkankowa i terapia komórkowa są bardzo obiecujące klinicznie. W związku z tym komórki multipotencjalne, takie jak mezenchymalne komórki macierzyste (MSC), mogą być w niedalekiej przyszłości wykorzystywane terapeutycznie do przywracania funkcji uszkodzonych narządów. Niemniej jednak kilka problemów technicznych, w tym wysoce inwazyjna procedura izolacji MSC i nieskuteczność związana z ich amplifikacją, utrudnia obecnie potencjalne zastosowanie kliniczne tych metod terapeutycznych. W niniejszym artykule przedstawiamy wysoce wydajną metodę generowania odróżnicowanych komórek tłuszczowych (DFAT), komórek podobnych do MSC. Co ciekawe, komórki DFAT można różnicować w kilka typów komórek, w tym komórki adipogenne, osteogenne i chondrogenne. Chociaż inne grupy już wcześniej prezentowały różne metody generowania komórek DFAT z dojrzałej tkanki tłuszczowej, nasza metoda pozwala nam produkować komórki DFAT bardziej efektywnie. W związku z tym wykazujemy, że pożywka hodowlana DFAT (DCM), uzupełniona 20% FBS, jest bardziej efektywna w generowaniu komórek DFAT niż DMEM, uzupełniona 20% FBS. Dodatkowo, komórki DFAT wytworzone naszą metodą hodowli komórkowej mogą być ponownie różnicowane w kilka typów tkanek. W związku z tym przedstawiono bardzo interesujący i użyteczny model do badania dedyferencjacji tkanek.

W niniejszym badaniu ulepszono metodę i zestaw narzędzi do generowania komórek DFAT (Rycina 1). Nasza metoda pozwala na generowanie komórek DFAT z wykorzystaniem zarówno pożywki DCM, jak i DMEM zawierającej 20% FBS (Rycina 2A). W związku z tym porównano efektywność DCM i DMEM w generowaniu komórek DFAT. W tym zakresie DCM trzykrotnie zwiększył proliferację komórek DFAT w porównaniu z DMEM, niezależnie od liczby adipocytów (Rycina 2A i<str...

Zmodyfikowaliśmy warunki generowania komórek DFAT i podajemy tutaj informacje dotyczące użycia ulepszonej pożywki do produkcji tych komórek.

Skuteczna metoda uzyskiwania odróżnicowanych komórek tłuszczowych

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

Ogólnym celem tej nowatorskiej metody hodowli komórkowej jest generowanie dediferencjowanych komórek tłuszczowych z większą wydajnością. Nasza metoda może pomóc badaczom pracującym w dziedzinie medycyny regeneracyjnej w uzyskaniu odpowiedzi na kluczowe pytania dotyczące wielu procesów zaangażowanych w wytwarzanie komórek adipogennych, osteogennych i chondrogennych. Ponieważ główną zaletą naszego protokołu hodowli komórkowej jest poprawa jakości komórek DEFAT, może on zostać zastosowany w najbliższej przyszłości w celu usprawnienia obecnych zastosowań w terapii komórkowej i inżynierii tkankowej.Po dostarczeniu do laboratorium próbki tkanki podskórnej pacjenta z sali operacyjnej, zważ tkankę i umieść próbkę tkanki tłuszczowej o masie od jednego do dwóch gramów w probówce o pojemności 15 ml. Następnie przemyj próbkę pięcioma ml PBS, a potem przenieś ją do plastikowej szalki o średnicy 10 cm. Usuń PBS.Następnie do naczynia z próbką należy dodać 10 mililitrów sterylnej kolagenazy w stężeniu 0,1% m/v. Następnie za pomocą nożyczek chirurgicznych należy rozdrobić tkankę, aż uzyska ona konsystencję papki. Rozdrobnioną tkankę wraz z roztworem kolagenazy należy przenieść do probówki do wirowania o pojemności 15 mililitrów i inkubować w temperaturze 37 °C przez 30 minut przy wstrząsaniu z prędkością 60 RPM.Po trawieniu przefiltruj trawioną próbkę przez filtr o rozmiarze oczek 100 micron przez nową probówkę o pojemności 15 milliliter. Następnie przepuść przez filtr 10 milliliters pożywki DEFAT uzupełnionej o 2%FBS. Aby wyizolować komórki tłuszczowe z zawiesiny komórkowej, najpierw odwiruj przefiltrowane komórki przy 100 times g przez jedną minutę w temperaturze pokojowej.Podczas wirowania przygotuj pięć mililitrów DCM uzupełnionego o 2% FBS w probówce o pojemności 15 mililitrów. Następnie za pomocą pipety 1000 µL pobierz unoszące się komórki tłuszczowe z wirowanej probówki i przenieś je do probówki o pojemności 15 mililitrów zawierającej podłoże. Delikatnie potrząśnij probówką, aby wymieszać podłoże DCM z komórkami.Następnie odwiruj probówkę z prędkością 100 ×g przez jedną minutę w temperaturze pokojowej. Po wirowaniu użyj igły o rozmiarze 18 G i strzykawki o pojemności 20 ml, aby usunąć medium z dna probówki. Następnie dodaj do komórek 10 ml DCM uzupełnionego o 2% FBS i wymieszaj, delikatnie wstrząsając probówką.Ponownie odwiruj komórki przy 100 ×g przez jedną minutę w temperaturze pokojowej. Aby rozpocząć wysiew, dodaj 41 mL DCM lub DMEM uzupełnionego o 20% FBS do kolby o pojemności 12,5 cm. Następnie za pomocą pipety 200 µL pobierz 40 µL komórek tłuszczowych i przenieś je do kolby.Następnie napełnij kolbę DCM lub DMEM uzupełnionym o 20% FBS. Kluczowe jest, aby komórki były równomiernie rozproszone w medium. Połóż kolbę na pokrywce okrągłej szalki Petriego, aby utrzymać ją w pozycji poziomej.Na koniec umieść kolbę w inkubatorze ustawionym na 5% carbon dioxide i 37 °C i pozostaw ją w spokoju na siedem dni. Po tygodniu inkubacji odwróć kolbę i sprawdź, czy pojawiły się dediferencjowane komórki tłuszczowe. Następnie odessij pożywkę i dodaj do kolby 5 mL DCM lub DMEM uzupełnionego o 20% FBS.Pozostaw komórki DEFAT do wzrostu przez kolejny tydzień po wymianie medium. Po tygodniu użyj licznika komórek, aby określić liczbę wygenerowanych komórek DEFAT w różnych warunkach hodowli komórkowej. Ten obraz przedstawia kolonie komórek DEFAT po 14 dniach hodowli w DMEM.Tutaj przedstawiono komórki DEFAT po 14 dniach hodowli w DCM. W każdym przypadku pasek skali odpowiada 200 mikronom. Proliferację komórek DEFAT ilościowo określono za pomocą licznika komórek, a następnie porównano efektywność DCM i DMEM w generowaniu komórek DEFAT.Jak widać tutaj, po zastosowaniu DCM obserwuje się zwiększoną proliferację komórek. Ludzkie komórki DEFAT, wytworzone przy użyciu DCM, hodowano przez trzy tygodnie w odpowiednich mediach indukcyjnych, aby ocenić zdolność komórek DEFAT do redyferencjacji i dyferencjacji. Komórki wykazały potencjał osteogenny w badaniu barwienia fosfatazą alkaliczną oraz barwieniu Alizarin Red S. Na koniec, potencjał adipogenny wykazano za pomocą barwienia Oil Red O.Niezwykle ważne jest, aby trawienie kolagenazą oraz izolacja komórek tłuszczowych były przeprowadzane z najwyższą starannością, aby z sukcesem uzyskać wysokiej jakości komórki DEFAT. Dzięki tym staraniom nasza zwalidowana metoda hodowli komórkowej ma na celu ułatwienie obecnych i przyszłych badań w dziedzinie biologii rozwoju oraz medycyny regeneracyjnej.

an-efficient-method-to-obtain-dedifferentiated-fat-cells

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Dojrzałe adipocyty mogą stanowić obfite źródło komórek macierzystych poprzez dedyferencjację, co prowadzi do jednorodnej populacji komórek podobnych do fibroblastów. Trawienie kolagenazą służy do izolowania dojrzałych adipocytów z ludzkiego tłuszczu. Celem naszego protokołu jest uzyskanie multipotencjalnych, odróżnicowanych komórek tłuszczowych z ludzkich dojrzałych adipocytów.

Wytwarzanie ludzkich komórek macierzystych tkanki tłuszczowej poprzez dedyferencjację dojrzałych adipocytów w hodowlach sufitowych

Odróżnienie białych i beżowych adipocytów od komórek progenitorowych naczyń tkanki tłuszczowej niesie ze sobą potencjał do metabolicznej poprawy otyłości. Opisujemy protokoły izolacji komórek śródbłonka CD34 + CD31 + z ludzkiego tłuszczu oraz późniejszej ekspansji i różnicowania in vitro do białych i beżowych adipocytów. Omówiono kilka dalszych zastosowań.

Izolacja, ekspansja i indukcja adipogenna komórek śródbłonka CD34+CD31+ z ludzkiej tkanki tłuszczowej i podskórnej

Biała tkanka tłuszczowa (WAT) ma krytyczne braki w swoich obecnych pierwotnych modelach hodowli, co utrudnia rozwój farmakologiczny i badania metaboliczne. W tym miejscu przedstawiamy protokół wytwarzania układu mikrofizjologicznego tkanki tłuszczowej poprzez umieszczanie WAT między arkuszami komórek zrębu. Ta konstrukcja zapewnia stabilną i adaptowalną platformę dla podstawowej kultury WAT.

Platforma mikrofizjologiczna dla ludzkiego tłuszczu: warstwowa biała tkanka tłuszczowa

Ten protokół opisuje techniczne podejście do izolowania subpopulacji komórek zrębu adipogennych i włóknisto-zapalnych z mysich magazynów białej tkanki tłuszczowej (WAT) w jamie brzusznej poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją lub separację kulek immunomagnetycznych.

Izolacja adipogennych i włóknisto-zapalnych subpopulacji komórek zrębu z mysich wewnątrzbrzusznych magazynów tłuszczu

Prezentujemy prostą metodę izolowania wysoce żywotnych komórek progenitorowych tkanki tłuszczowej z najądrzy myszy za pomocą sortowania komórek aktywowanego fluorescencją.

Preparat komórek progenitorowych tkanki tłuszczowej tkanki tłuszczowej najądrza myszy

Protokół pozwala na generowanie czystej populacji adipocytów z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC). Kwas retinowy służy do różnicowania iPSC w mezenchymalne komórki macierzyste (MSC), które są wykorzystywane do produkcji adipocytów. Następnie stosuje się podejście sortowania oparte na barwieniu czerwienią nilową w celu uzyskania czystych adipocytów.

Solidne różnicowanie ludzkich iPSC w czystą populację adipocytów w celu zbadania zaburzeń związanych z adipocytami

Ten protokół opisuje półautomatyczną izolację frakcji zrębu naczyniowego (SVF) z mysiej tkanki tłuszczowej w celu uzyskania preadipocytów i osiągnięcia różnicowania adipocytów in vitro. Użycie dysocjatora tkankowego do trawienia kolagenazy zmniejsza zmienność eksperymentalną i zwiększa odtwarzalność.

Półautomatyczna izolacja zrębu frakcji naczyniowej z mysiej białej tkanki tłuszczowej za pomocą dysocjatora tkankowego

Ten protokół opisuje izolację mięśni szkieletowych i mięśni sercowych włóknisto-adipogennych (FAP) od myszy kolczastej (Acomys) poprzez dysocjację enzymatyczną i sortowanie komórek aktywowane fluorescencją. FAP uzyskane z tego protokołu mogą być skutecznie rozszerzane i różnicowane do miofibroblastów i adipocytów.

Izolacja, ekspansja i różnicowanie fibro-adipogennych progenitorów od modelu myszy kolczastej

Tutaj prezentujemy protokół, który może przekształcić autologiczną tkankę tłuszczową w różne substancje składowe tkanki tłuszczowej o różnych właściwościach i funkcjach fizykochemicznych.

Innowacyjne frakcjonowanie tkanki tłuszczowej do przekształcania tłuszczu w specjalistyczne składniki

Przedstawiamy tutaj standardową metodę efektywnej izolacji komórek macierzystych pochodzących z tłuszczu i adipocytów, charakteryzującą się skróceniem czasu przetwarzania o &gt;90%, wysoką żywotnością komórek oraz szeroką kompatybilnością.

Efektywna izolacja komórek macierzystych i adipocytów pochodzących z tłuszczu z tkanki tłuszczowej wieprzi

Poznaj efektywną metodę uzyskiwania odróżnicowanych komórek tłuszczowych (DFAT) w celach regeneracyjnych. Ulepszony podłoże wzrostowe znacząco poprawia jakość komórek i wspiera badania w inżynierii tkankowej.

Skuteczna metoda uzyskiwania odróżnicowanych komórek tłuszczowych

Przeglądaj więcej filmów