Name: Przeszczep arkusza ADSC w celu zapobiegania zwężeniu po rozszerzonym endoskopowym rozwarstwieniu podśluzówkowym przełyku (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Poznaj technikę przeszczepu arkusza ADSC w zapobieganiu zwężeniu przełyku po endoskopowym rozwarstwieniu podśluzówkowym u świni. Ta metoda terapii komórkowej poprawia gojenie tkanek i redukuje zwłóknienie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie było wspierane i finansowane przez Fundację Avenir (Fondation de l'Avenir, 255 rue de Vaugirard, 75719 Paris cedex 15, Paryż, Francja). To badanie nigdy nie zostałoby przeprowadzone bez cennej pomocy zespołu weterynaryjnego z Laboratorium Badań Biochirurgicznych z Fundacji Alaina Carpentiera.

Wszystkie zwierzęta były leczone zgodnie z Komisją Etyki Badań na Zwierzętach (wytyczne francuskiego Ministerstwa Rolnictwa). Protokół uzyskał aprobatę lokalnej komisji etycznej upoważnionej do eksperymentów na zwierzętach na Uniwersytecie Kartezjusza w Paryżu (numer rejestracyjny MESR 2035.02; Wydział Lekarski Paryż Kartezjusz, Paryż, Francja).
1. Kultura i etykietowanie ADSC
<ol>
	<li>Uzyskaj potwierdzone ADSC z prywatnej instytucji. Hodowla allogenicznych ADSC w temperaturze 37 °C i 5% CO2 z minimalną pożywką niezbędną alfa, w tym 10% płodowej surowicy cielęcej i 1% antybiotyków (penicyliny i streptomycyny).</li>
	<li>Uzyskać około 24 x 106 ADSC na zwierzę przy użyciu standardowych procedur namnażania komórek (37 °C i 5% CO2 ). Zbierz ADSC za pomocą standardowego roztworu trypsyny (10 ml na szalkę T150). Wykonaj zliczanie komórek za pomocą hemocytometru.</li>
	<li>Znakowanie komórek należy wykonać dzień przed przeszczepem, stosując procedurę barwienia PKH67 opisaną poniżej. 
	UWAGA: Celem procedury barwienia jest umożliwienie śledzenia komórek po przeszczepie.
	<ol>
		<li>W celu oznaczenia 2 x 106 ADSC należy przygotować roztwór A (2 x 106 komórek ze 100 μl rozcieńczalnika C) i roztwór B (4 μl PKH67 z 1 ml rozcieńczalnika C).</li>
		<li>Inkubować roztwory A i B przez 2 minuty. Następnie dodaj 100 μl płodowej surowicy cielęcej przez 1 minutę.</li>
		<li>Przepłukać roztwór 300 μl cytrynianu RPMI (298,5 μl RPMI i 1,5 μl cytrynianu) i odwirować przy 1.500 x g przez 5 min. Powtórzyć tę czynność 2 razy. Utrzymuj oznakowane komórki i chroń je przed światłem aż do powstania arkusza.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Konstrukcja z podwójnym arkuszem ADSC
<ol>
	<li>Dzień przed przeszczepem należy przygotować 12-dołkowe naczynie do hodowli komórkowych reagujące na temperaturę z 4 ml na dołek pożywki do hodowli komórkowych, opisanej powyżej, przed znakowaniem PKH. Wysiać na szalce 1,5 x 106 komórek znakowanych PKH na studzienkę i inkubować przez 12 godzin (37 °C i 5% CO2 ).</li>
	<li>W dniu przeszczepu oderwij zlewający się arkusz komórek, inkubując naczynie w temperaturze pokojowej przez 30 minut.</li>
	<li>Delikatnie odessać jeden arkusz ADSC za pomocą pipety i ułożyć go na papierze hydrofobowym (średnica 1,5 cm). Użyj tego papieru jako membrany nośnej.</li>
	<li>Chwyć kolejny arkusz ADSC i delikatnie połóż go na drugim, aby uzyskać konstrukcję dwuwarstwową.</li>
	<li>Powtórz te procedury, aby uzyskać tyle konstruktów z arkusza ADSC, ile potrzeba (4 na zwierzę).</li>
</ol>
3. Endoskopowe rozwarstwienie podśluzówkowe przełyku (ESD)
<ol>
	<li>W dniu przeszczepienia należy poddać zwierzęta premedykacji 10 mg/kg ketaminy podawanej domięśniowo i indukować je dożylnym podaniem 8 mg/kg propofolu. Następnie należy wykonać intubację dotchawiczą i utrzymać znieczulenie izofluranem w 2,5% inhalacji.</li>
	<li>Gdy zwierzę jest w znieczuleniu ogólnym, wykonaj ESD za pomocą gastroskopu, wideoskopu i urządzenia do elektrochirurgii.
	<ol>
		<li>Za pomocą noża endoskopowego i miękkiej koagulacji uzyskać znamiona grzbietowe w obwodzie połowiczym w odległości od 40 cm do 45 cm od łuku zębowego.</li>
		<li>Wstrzyknąć roztwór glicerolu zawierający barwnik indygotyny do warstwy podśluzówkowej w celu oddzielenia warstwy błony śluzowej od warstwy mięśniowej.</li>
		<li>Użyj noża endoskopowego z trybem endocut I, aby uzyskać nacięcia obwodowe.</li>
		<li>Użyj noża endoskopowego z trybem wymuszonej koagulacji, aby wykonać rozwarstwienie podśluzówkowe, przesuwając się od nacięcia bliższego do nacięcia dystalnego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pod koniec procedury ESD obserwuj półobwodową bliznę przełyku o długości 5 cm, odsłaniającą warstwę mięśniową.</li>
</ol>
4. Przeszczep endoskopowy
<ol>
	<li>Bezpośrednio po ESD endoskopowo przeszczep zwierzęta za pomocą 4 podwójnych konstruktów arkuszowych ADSC.
	<ol>
		<li>Chwyć konstrukcję arkusza ADSC za pomocą endoskopowych kleszczy i chroń ją podczas transportu do miejsca rany za pomocą dużej, przezroczystej nasadki endoskopowej.</li>
		<li>Nałożyć całą powierzchnię konstrukcji arkusza ADSC na łożysko wrzodu.</li>
		<li>Delikatnie nakładaj konstrukt ADSC przez 10 minut, aby uzyskać pełne i stabilne wszczepienie. Do aplikacji należy użyć kleszczyków endoskopowych lub czepka endoskopowego i nałożyć całą powierzchnię konstruktu ADSC na warstwę podśluzówkową przełyku.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Powtórz tę procedurę cztery razy dla każdego zwierzęcia, aby uzyskać cztery przeszczepione i przylegające do siebie konstrukcje z podwójnych arkuszy komórkowych. 
	UWAGA: Celem jest pokrycie mniej więcej połowy obszaru rannych.</li>
</ol>
5. Ocena pooperacyjna i obserwacja
<ol>
	<li>Każdemu zwierzęciu należy zapewnić analgezję po ESD poprzez domięśniowe wstrzyknięcie 0,2 mg/kg morfiny trzy razy na dobę przez pierwszy dzień oraz 28-dniową kurację przeciwkwasową ezomeprazolem (40 mg/dobę). Profilaktykę antybiotykową należy stosować amoksycyliną (1 g/dobę) przez 7 dni. Zezwalaj na płyny w dniu 1, a ciała stałe w dniu następnym.</li>
	<li>Obserwacja ze zwierzętami przez 28 dni. Uzyskaj codzienne oceny kliniczne za pomocą wyników dysfagii Mellow Pinkas 16 i pomiarów zmienności wagi.</li>
	<li>Multimodalna ocena zwężenia: w znieczuleniu ogólnym, w zaplanowanych dniach 3, 14 i 28, wykonaj multimodalną ocenę występowania zwężenia.
	<ol>
		<li>Wykonaj ocenę endoskopową na podstawie opisu blizny, pomiaru zwężenia i wykrywania błony nośnej na papierze. Zmierz zwężenie za pomocą gastroskopu, aby przejść przez zwężenie (średnica gastroskopu wynosi 8 mm). Obserwuj bliznę, zwracając uwagę na aspekt zapalny (rumień błony śluzowej, obrzęk błony śluzowej i spontaniczne krwawienie z błony śluzowej) oraz brak lub obecność papierowej błony nośnej w bliźnie.</li>
		<li>Zastosować zieloną sondę pCLE przez kanał operatora gastroskopu bezpośrednio do łożyska blizny. Wyszukaj spontaniczny i zorganizowany zielony sygnał kompatybilny z wszczepieniem konstrukcji arkusza ADSC z oznaczeniem PKH67.</li>
		<li>Wykonaj 2 ortogonalne przypadki ezofagografii barytowej z obręczą radiologiczną (częstości przednie i lewostronne). Zachowaj najściślejszy kąt występowania dla oceny zwężenia (stopień zwężenia (%) = [1-(długość krótkiej osi pod zwężeniem/długość normalnej osi pod zwężeniem) x 100)])17,18.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Składanie ofiar ze zwierząt.
	<ol>
		<li>W 28 dniu, pod koniec okresu obserwacji, należy złożyć ofiarę ze zwierzęcia. Gdy zwierzę jest nadal w znieczuleniu ogólnym, wstrzyknąć 100 mg/kg dożylnie fenobarbitalu. Zapewnić śmierć zwierzęcia za pomocą badania klinicznego pod kątem braku bicia serca i ruchów oddechowych.</li>
		<li>Po sternotomii i ekspozycji narządu należy usunąć przełyk z każdego uśmierconego zwierzęcia (z 10% buforowanym utrwaleniem formaliny, zatopieniem parafiny i skrawkami o grubości 4 μm). Zabarwić szkiełka za pomocą Hematoxyliny i Szafranu15. Zdigitalizuj slajdy do analizy komputerowej i porównaj grupy zwierząt15.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Ono, S., Fujishiro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcomes+of+endoscopic+submucosal+dissection+for+superficial+esophageal+squamous+cell+neoplasms%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell neoplasms.</a> Gastrointestinal endoscopy. 70 (5), 860-866 (2009).</li>
<li>Pech, O., May, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+efficacy+and+safety+of+endoscopic+resection+for+patients+with+mucosal+adenocarcinoma+of+the+esophagus%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term efficacy and safety of endoscopic resection for patients with mucosal adenocarcinoma of the esophagus.</a> Gastroenterology. 146 (3), 652-660 (2014).</li>
<li>Yahagi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+esophageal+endoscopic+submucosal+dissection+an+extreme+treatment+modality%2C+or+can+it+be+a+standard+treatment+modality%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Is esophageal endoscopic submucosal dissection an extreme treatment modality, or can it be a standard treatment modality.</a> Gastrointestinal Endoscopy. 68 (6), 1073-1075 (2008).</li>
<li>Rösch, T., Sarbia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attempted+endoscopic+en+bloc+resection+of+mucosal+and+submucosal+tumors+using+insulated-tip+knives%3A+a+pilot+series%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Attempted endoscopic en bloc resection of mucosal and submucosal tumors using insulated-tip knives: a pilot series.</a> Endoscopy. 36 (9), 788-801 (2004).</li>
<li>Chennat, J., Ross, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+pathology+under+squamous+epithelium+on+initial+EMR+specimens+in+patients+with+Barrett%27s+esophagus+and+high-grade+dysplasia+or+intramucosal+carcinoma%3A+implications+for+surveillance+and+endotherapy+management%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Advanced pathology under squamous epithelium on initial EMR specimens in patients with Barrett's esophagus and high-grade dysplasia or intramucosal carcinoma: implications for surveillance and endotherapy management.</a> Gastrointestinal endoscopy. 70 (3), 417-421 (2009).</li>
<li>Oyama, T., Tomori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+submucosal+dissection+of+early+esophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+gastroenterology+and+hepatology%3A+the+official+clinical+practice+journal+of+the+American+Gastroenterological+Association%22%5BJournal%5D)">Endoscopic submucosal dissection of early esophageal cancer.</a> Clinical gastroenterology and hepatology: the official clinical practice journal of the American Gastroenterological Association. 3 (7), Suppl 1 67-70 (2005).</li>
<li>Werner, S., Krieg, T., Smola, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17435785">Keratinocyte-fibroblast interactions in wound healing.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 127 (5), 998-1008 (2007).</li>
<li>Yamaguchi, N., Isomoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+oral+prednisolone+on+esophageal+stricture+after+complete+circular+endoscopic+submucosal+dissection+for+superficial+esophageal+squamous+cell+carcinoma%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Digestion%22%5BJournal%5D)">Effect of oral prednisolone on esophageal stricture after complete circular endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell carcinoma: a case report.</a> Digestion. 83 (4), 291-295 (2011).</li>
<li>Hanaoka, N., Ishihara, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralesional+steroid+injection+to+prevent+stricture+after+endoscopic+submucosal+dissection+for+esophageal+cancer%3A+a+controlled+prospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Intralesional steroid injection to prevent stricture after endoscopic submucosal dissection for esophageal cancer: a controlled prospective study.</a> Endoscopy. 44 (11), 1007-1011 (2012).</li>
<li>Ohki, T., Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+oesophageal+ulcerations+using+endoscopic+transplantation+of+tissue-engineered+autologous+oral+mucosal+epithelial+cell+sheets+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Treatment of oesophageal ulcerations using endoscopic transplantation of tissue-engineered autologous oral mucosal epithelial cell sheets in a canine model.</a> Gut. 55 (12), 1704-1710 (2006).</li>
<li>Ohki, T., Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+esophageal+stricture+after+endoscopic+submucosal+dissection+using+tissue-engineered+cell+sheets%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Prevention of esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection using tissue-engineered cell sheets.</a> Gastroenterology. 143 (3), 582-588 (2012).</li>
<li>García-Gómez, I., Elvira, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+biological+properties+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+opinion+on+biological+therapy%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: biological properties and clinical applications.</a> Expert opinion on biological therapy. 10 (10), 1453-1468 (2010).</li>
<li>Jorgensen, C., Noël, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+osteoarticular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in osteoarticular diseases.</a> Regenerative Medicine. 6 (6), Suppl 44-51 (2011).</li>
<li>Antonic, A., Sena, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+transplantation+in+traumatic+spinal+cord+injury%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+biology%22%5BJournal%5D)">Stem cell transplantation in traumatic spinal cord injury: a systematic review and meta-analysis of animal studies.</a> PLoS biology. 11 (12), 1001738(2013).</li>
<li>Perrod, G., Rahmi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Sheet+Transplantation+for+Esophageal+Stricture+Prevention+after+Endoscopic+Submucosal+Dissection+in+a+Porcine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Cell Sheet Transplantation for Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection in a Porcine Model.</a> PLOS ONE. 11 (3), 0148249(2016).</li>
<li>Mellow, M. H., Pinkas, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+laser+therapy+for+malignancies+affecting+the+esophagus+and+gastroesophageal+junction.+Analysis+of+technical+and+functional+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endoscopic laser therapy for malignancies affecting the esophagus and gastroesophageal junction. Analysis of technical and functional efficacy.</a> Archives of Internal Medicine. 145 (8), 1443-1446 (1985).</li>
<li>N.A.S.C.E.T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effect+of+carotid+endarterectomy+in+symptomatic+patients+with+high-grade+carotid+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Beneficial effect of carotid endarterectomy in symptomatic patients with high-grade carotid stenosis.</a> The New England Journal of Medicine. 325 (7), 445-453 (1991).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomised+trial+of+endarterectomy+for+recently+symptomatic+carotid+stenosis%3A+final+results+of+the+MRC+European+Carotid+Surgery+Trial+%28ECST%29%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Randomised trial of endarterectomy for recently symptomatic carotid stenosis: final results of the MRC European Carotid Surgery Trial (ECST).</a> Lancet. 351 (9113), 1379-1387 (1998).</li>
<li>Kanai, N., Yamato, M., Ohki, T., Yamamoto, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricated+autologous+epidermal+cell+sheets+for+the+prevention+of+esophageal+stricture+after+circumferential+ESD+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Fabricated autologous epidermal cell sheets for the prevention of esophageal stricture after circumferential ESD in a porcine model.</a> Gastrointestinal Endoscopy. 76 (4), 873-881 (2012).</li>
<li>Aggarwal, S., Pittenger, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+modulate+allogeneic+immune+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses.</a> Blood. 105 (4), 1815-1822 (2005).</li>
<li>Maeda, M., Kanai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+cell+sheet+transplantation+device+developed+by+using+a+3-dimensional+printer+and+its+feasibility+evaluation+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Endoscopic cell sheet transplantation device developed by using a 3-dimensional printer and its feasibility evaluation in a porcine model.</a> Gastrointestinal Endoscopy. , (2015).</li>
<li>Haraguchi, Y., Shimizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+functional+three-dimensional+tissues+by+stacking+cell+sheets+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Fabrication of functional three-dimensional tissues by stacking cell sheets in vitro.</a> Nature Protocols. 7 (5), 850-858 (2012).</li>
<li>Nishida, K., Yamato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+reconstruction+with+tissue-engineered+cell+sheets+composed+of+autologous+oral+mucosal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Corneal reconstruction with tissue-engineered cell sheets composed of autologous oral mucosal epithelium.</a> The New England Journal of Medicine. 351 (12), 1187-1196 (2004).</li>
<li>Napoléon, B., Lemaistre, A. -I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+to+the+diagnosis+of+pancreatic+serous+cystadenoma%3A+needle-based+confocal+laser+endomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">A novel approach to the diagnosis of pancreatic serous cystadenoma: needle-based confocal laser endomicroscopy.</a> Endoscopy. 47 (1), 26-32 (2015).</li>
<li>Gabbani, T., Manetti, N., Bonanomi, A. G., Annese, A. L., Annese, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+endoscopic+imaging+techniques+in+surveillance+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">New endoscopic imaging techniques in surveillance of inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 7 (3), 230-236 (2015).</li>
<li>Nagyova, M., Slovinska, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+PKH67%2C+DiI%2C+and+BrdU+labeling+techniques+for+tracing+rat+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology.+Animal%22%5BJournal%5D)">A comparative study of PKH67, DiI, and BrdU labeling techniques for tracing rat mesenchymal stem cells.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. 50 (7), 656-663 (2014).</li>
<li>Jain, D., Singhal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Esophageal+Stricture+Prevention+after+Endoscopic+Submucosal+Dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection.</a> Clinical Endoscopy. 49 (3), 241-256 (2016).</li>
<li>Lua, G. W., Tang, J., Liu, F., Li, Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+Esophageal+Strictures+After+Endoscopic+Submucosal+Dissection%3A+A+Promising+Therapy+Using+Carboxymethyl+Cellulose+Sheets%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+Diseases+and+Sciences%22%5BJournal%5D)">Prevention of Esophageal Strictures After Endoscopic Submucosal Dissection: A Promising Therapy Using Carboxymethyl Cellulose Sheets.</a> Digestive Diseases and Sciences. 61 (6), 1763-1769 (2016).</li>
<li>Sakaguchi, Y., Tsuji, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triamcinolone+Injection+and+Shielding+with+Polyglycolic+Acid+Sheets+and+Fibrin+Glue+for+Postoperative+Stricture+Prevention+after+Esophageal+Endoscopic+Resection%3A+A+Pilot+Study%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Triamcinolone Injection and Shielding with Polyglycolic Acid Sheets and Fibrin Glue for Postoperative Stricture Prevention after Esophageal Endoscopic Resection: A Pilot Study.</a> The American Journal of Gastroenterology. 111 (4), 581-583 (2016).</li>
<li>Sakurai, T., Miyazaki, S., Miyata, G., Satomi, S., Hori, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+buccal+keratinocyte+implantation+for+the+prevention+of+stenosis+after+EMR+of+the+esophagus%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Autologous buccal keratinocyte implantation for the prevention of stenosis after EMR of the esophagus.</a> Gastrointestinal endoscopy. 66 (1), 167-173 (2007).</li>
<li>Nieponice, A., McGrath, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extracellular+matrix+scaffold+for+esophageal+stricture+prevention+after+circumferential+EMR%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">An extracellular matrix scaffold for esophageal stricture prevention after circumferential EMR.</a> Gastrointestinal Endoscopy. 69 (2), 289-296 (2009).</li>
<li>Honda, M., Hori, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+adipose+tissue-derived+stromal+cells+for+prevention+of+esophageal+stricture+after+circumferential+EMR+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointestinal+endoscopy%22%5BJournal%5D)">Use of adipose tissue-derived stromal cells for prevention of esophageal stricture after circumferential EMR in a canine model.</a> Gastrointestinal endoscopy. 73 (4), 777-784 (2011).</li>
<li>Barret, M., Pratico, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amniotic+membrane+grafts+for+the+prevention+of+esophageal+stricture+after+circumferential+endoscopic+submucosal+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Amniotic membrane grafts for the prevention of esophageal stricture after circumferential endoscopic submucosal dissection.</a> PloS One. 9 (7), 100236(2014).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W tym modelu świni przeszczepienie arkusza ADSC zakończyło się sukcesem technicznym, a ocena pCLE in vivo pozwoliła na monitorowanie wszczepienia komórek. Oceny kliniczne, endoskopowe, radiologiczne i histologiczne wykazały skuteczność endoskopowego arkusza ADSC w zapobieganiu zwężeniu przełyku po przedłużonym ESD.
Endoskopowe przeszczepienie roztworu glicerolu ADSC zawierającego arkusz barwnika indygotynowego jest innowacyjnym podejściem w medycynie regeneracyjnej. Ohki i wsp.</e...

Leczenie powierzchownych guzów przełyku zmieniło się wraz z rozwojem nowych technik endoskopowych. Obecnie resekcja endoskopowa jest leczeniem pierwszego rzutu. Rzeczywiście, wiąże się to z niższymi wskaźnikami zachorowalności i śmiertelności niż operacja o takich samych wynikach onkologicznych1,2,3. Endoskopowa resekcja błony śluzowej (EMR) i endoskopowa resekcja podśluzówkowa (ESD) są najczęściej stosowanymi technikami. W przypadku rozszerzonego guza powierzchownego preferowane jest ESD. W porównaniu do EMR, ESD umożliwia resekcję en bloc, niezależnie od wielkości i kształtu zmiany4,5,6. Głównym opóźnionym powikłaniem ESD jest tworzenie się zwężenia przełyku, które zwykle występuje między jednym a dwoma tygodniami po resekcji. Ostatnie opublikowane badania wykazały, że powstawanie zwężeń jest skorelowane z wielkością resekcji. Japońskie Towarzystwo Endoskopowe zaleca unikanie rozmiarów ESD większych niż 3/4 obwodu przełyku, ponieważ w ponad 90% przypadków wiążą się one z rozwojem zwężeń i są odpowiedzialne za poważne problemy z karmieniem i znaczne pogorszenie jakości życia.
Zapobieganie zwężeniu przełyku pozostaje wyzwaniem. Mechanizmy związane z powstawaniem zwężeń są znane tylko częściowo. Powstawanie zwężeń wydaje się wynikać z połączenia dwóch różnych mechanizmów: (1) prozapalnej rekrutacji komórkowej i (2) nadmiernego rozwoju zwłóknienia7. Zaproponowano kilka zabiegów profilaktycznych. Jednak wyniki były niezadowalające, z niewielkimi korzyściami i poważnymi skutkami ubocznymi8,9. Niedawno japoński zespół, Ohki i wsp., zaproponował przeszczepienie jednowarstwowego arkusza komórek autologicznych komórek błony śluzowej jamy ustnej do blizny przełyku. Transplantację przeprowadzono natychmiast po ESD10,11. Zademonstrowali skuteczność tego innowacyjnego podejścia, najpierw na modelu psów, a następnie na pacjentach.
Komórki zrębowe pochodzące z tkanki tłuszczowej (ADSC) są obiecujące w medycynie regeneracyjnej. Ich zastosowanie w kilku dziedzinach przyniosło interesujące wyniki, zwłaszcza w procesie gojenia się ran. Terapia ADSC ma kilka zalet, ponieważ komórki są łatwe do wyizolowania i są związane z właściwościami przeciwzapalnymi, miejscowym działaniem immunomodulującym, indukcją neowaskularyzacji i zdolnościami różnicowania do linii mezenchymalnych i niemezenchymalnych12,13,14.
W poprzednim badaniu, nasz zespół wykazał skuteczność podwójnego przeszczepu endoskopowego ADSC w zapobieganiu zwężeniom przełyku po przedłużonym ESD u świń model15. W artykule przedstawiono doniesienia dotyczące budowy arkusza ADSC i techniki przeszczepu endoskopowego.

<table><tbody><tr><td>Przezroczysta nasadka endoskopowa kompatybilna z Q180</td><td>Gastroskop Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GIF-Q180&nbsp;</td>System wideoskopowy <td>Exera firmy Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>. II&nbsp;</td><td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igła iniekcyjna 18 G</td><td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unit do elektrochirurgii ERBE ICC 350&nbsp;</td><td>Technologia</td><td></td><td></td>ERBE</tr><tr><td>Indigo carmin 1%</td><td>Life</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Endoskopowy nóż hybrydowy</td><td>Life</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Minisonde Z pCLE zielona sonda</td><td>Mauna Kea Technology</td><td></td><td>Musisz nauczyć się korzystać z sondy. Manipulacja może być trudna.</td></tr><tr><td>Surowica bydlęca</td><td>płodu Sigma Aldrich</td><td>12105C</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T146</td><td></td></tr><tr><td>Alfa minimum niezbędne podłoże</td><td>Thermo Fisher</td><td>22561-021</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanami</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw barwników PKH67</td><td>Sigma</td><td>Aldrich Mini67-KT</td><td></td></tr><tr><td>12-dołkowa komórka reagująca na temperaturę naczynie hodowlane</td><td>Upcell Thermo Scientific</td><td>174900</td><td>Poczuj weel z 4 ml standardowej pożywki 30 min przed wysiewem komórek</td></tr><tr><td>Esomeprazol 40 mg&nbsp;</td><td>Biogaran</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moprhine siarczan 50 mg/ml</td><td>Lavoisier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amoksycylina 1 g</td><td>Biogaran</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamina 250 mg/5 ml</td><td>Panpharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Propofol 10 mg/ml</td><td>Fresenius</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papier hydrofobowy</td><td>Carrefour</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

przeszczep arkusza adsc w celu zapobiegania zwężeniu po rozszerzonym endoskopowym rozwarstwieniu podśluzówkowym przełyku

ADSC-sheet Transplantation to Prevent Stricture after Extended Esophageal Endoscopic Submucosal Dissection

W ostatnich latach konstrukt z arkuszy komórkowych przyczynił się do szerokiego zainteresowania medycyną regeneracyjną, szczególnie w zakresie zabiegów chirurgii rekonstrukcyjnej. Rozwój zróżnicowanych technologii łączących komórki zrębu pochodzące z tkanki tłuszczowej (ADSC) z różnymi biomateriałami doprowadził do budowy wielu rodzajów substytutów inżynierii tkankowej, takich jak kości, chrząstki i tkanki tłuszczowe z ADSC gryzoni, świń lub ludzi. Rozszerzone endoskopowe rozwarstwienie podśluzówkowe przełyku (ESD) jest odpowiedzialne za powstawanie zwężenia przełyku. Zapobieganie zwężeniom pozostaje wyzwaniem, ponieważ nie są dostępne skuteczne metody leczenia. Wcześniejsze badania wykazały skuteczność przeszczepu komórek błony śluzowej w modelu psim i u ludzi. ADSC przypisuje się właściwości przeciwzapalne, miejscowe działanie modulujące układ odpornościowy, indukcję neowaskularyzacji i zdolności różnicowania w linie mezenchymalne i niemezenchymalne. To oryginalne badanie opisuje endoskopowy przeszczep konstruktu inżynierii tkankowej ADSC w celu zapobiegania zwężeniu przełyku w modelu świni. Konstrukcja ADSC składała się z dwóch allogenicznych arkuszy ADSC ułożonych jeden na drugim na papierowej membranie nośnej. ADSC zostały oznaczone fluoroforem PKH67, aby umożliwić monitorowanie konfokalnej endomikroskopii laserowej (pCLE) za pomocą sondy. W dniu przeszczepu wykonano 5-centymetrowe i półobwodowe ESD, o którym wiadomo, że wywołuje zwężenie przełyku. Zwierzętom natychmiast przeszczepiono endoskopowo 4 konstrukty ADSC. Pełną przyczepność konstruktów ADSC uzyskano po 10 minutach delikatnej aplikacji. Zwierzęta składano w ofierze w 28 dniu. Wszystkie zwierzęta zostały pomyślnie przeszczepione. Przeszczep został potwierdzony w 3 dobie z dodatnią oceną pCLE. W porównaniu ze zwierzętami przeszczepionymi, u zwierząt kontrolnych rozwinęły się poważne zwężenia, z dużym rozwojem tkanki zwłóknieniowej, częstszymi problemami żołądkowymi i zmniejszonym przyrostem masy ciała. W naszym modelu przeszczepienie allogenicznych ADSC, zorganizowanych w podwójne arkusze komórek, po przedłużonym ESD zakończyło się sukcesem i silnie wiązało się z niższym wskaźnikiem zwężenia przełyku.

Kultura ADSCs oraz procedura otrzymywania arkusza ADSC przedstawione są na Rysunku 1. Rysunek 2 przedstawia konstrukcję przeszczepu, składającego się z dwóch arkuszy ADSC ułożonych warstwowo na papierowej membranie wspierającej. ADSCs zostały wcześniej znakowane fluorophorem PKH67, aby umożliwić monitorowanie przeszczepu in vivo za pomocą pCLE. Rysunek 3 pokazuje poszczególne etapy rozszerzonej endoskopowej dyssekcji podśluzówkow...

To badanie opisuje udaną metodę endoskopowego przeszczepu komórek zrębu pochodzących z tkanki tłuszczowej (ADSC) w celu zapobiegania zwężeniu przełyku po rozszerzonej endoskopowej dyssekcji podśluzówkowej (ESD) w modelu trzody chlewnej.

Przeszczep arkusza ADSC w celu zapobiegania zwężeniu po rozszerzonym endoskopowym rozwarstwieniu podśluzówkowym przełyku

In past years, the cell-sheet construct has spurred wide interest in regenerative medicine, especially for reconstructive surgery procedures. The ...

W praktyce klinicznej występowanie zwężenia przełyku jest głównym ograniczeniem dla rozszerzonej endoskopowej resekcji powierzchownej neoplazji przełyku. Ten film przedstawia technikę przeszczepu arkusza ADSC, która zapobiega takim zwężeniom, umożliwiając rozszerzoną resekcję endoskopową w modelu świni. Metoda ta może postawić kluczowe pytanie w dziedzinie zapobiegania zwężeniom przełyku po endoskopowej rozszerzonej resekcji.Główną zaletą tej techniki jest to, że endoskopowy przeszczep arkusza ADSC jest znaczący, skuteczny i nie jest czasochłonny, aby zapobiec takiemu zwężeniu przełyku. Tę procedurę zademonstruje Gabriel Rahmi, lekarz z mojego laboratorium, i ja. Zbierz około 24 miliony ADSC na świnię przy użyciu standardowych procedur namnażania komórek i kolb hodowlanych T150.Zebrać ADSC przy użyciu 10 mililitrów standardowego roztworu trypsyny na kolbę. Następnie policz komórki za pomocą automatycznego cytometru. Załaduj 1,5 miliona komórek do każdej studzienki 12-dołkowej płytki do hodowli komórkowej reagującej na temperaturę.Teraz uzupełnij każdą studzienkę do czterech mililitrów pożywką hodowlaną. Następnie inkubuj płytki przez 12 godzin przez noc do przeszczepu następnego dnia. W dniu przeszczepu oderwij zlewające się arkusze komórek w dołkach płytkowych, inkubując je w temperaturze pokojowej przez 30 minut.Po pół godzinie delikatnie odpipetuj jeden arkusz ADSC i ułóż go na hydrofobowym papierze o średnicy 1,5 centymetra w plastikowym naczyniu. Użyj tego papieru jako membrany nośnej. Zachowaj cierpliwość i ostrożność podczas obchodzenia się z arkuszami ADSC.Są bardzo delikatne. Następnie chwyć arkusz ADSC i delikatnie ułóż go na innym, aby utworzyć konstrukcję dwuwarstwową. Wykonaj cztery dwuwarstwowe konstrukcje na zwierzę.W znieczuleniu ogólnym wykonaj ESD na świni. Korzystaj z wideogastroskopu i urządzenia do elektrochirurgii. Najpierw, za pomocą noża endoskopowego z miękką koagulacją, utwórz białe ślady na obwodzie połowia w odległości od 40 do 45 centymetrów grzbietu od łuku zębowego, aby stworzyć wirtualną zmianę.Następnie oddziel warstwę błony śluzowej od warstwy mięśniowej, wstrzykując roztwór glicerolu zawierający barwnik indygotyny do warstwy podśluzówkowej. Teraz wykonaj obwodowe nacięcie warstwy błony śluzowej wokół znaków grzbietowych, używając noża endoskopowego z trybem wymuszonej koagulacji. Następnie wykonaj rozwarstwienie podśluzówkowe od nacięcia bliższego do nacięcia dystalnego.Następnie zakończ resekcję za pomocą ESD, półobwodowej, pięciocentymetrowej blizny przełyku odsłaniającej warstwę mięśniową. Teraz endoskopowo przeszczep cztery podwójne konstrukty arkusza ADSC. Chwyć konstrukcję za pomocą kleszczy endoskopowych i przykryj ją dużą przezroczystą endoskopową nasadką, aby chronić ją podczas transportu do miejsca rany.Następnie rozprowadź całą powierzchnię konstrukcji arkusza ADSC na łożysku wrzodu. Utrzymuj przeszczep na miejscu przez 10 minut, aby zapewnić pełne i stabilne wszczepienie. Kontynuuj nakładanie arkuszy ADSC tak, aby cztery pokrywały około połowy zranionego obszaru.Transport może być trudny u zwierzęcia w znieczuleniu ogólnym, oddychającego i połykającego, dlatego należy zachować szczególną ostrożność, aby nie uszkodzić pościeli. Po wykonaniu opisanej procedury na kilku zwierzętach, trzy dni później przeprowadzono ocenę PCLE. Pozytywne wyniki potwierdziły powodzenie przeszczepów.Okres obserwacji pozwolił na przeprowadzenie analizy multimodalnej. W porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi, grupa przeszczepionych zwierząt wykazywała rzadsze problemy z układem pokarmowym i większy przyrost masy ciała w 28 dniu. Wyniki endoskopowe i radiologiczne pod koniec okresu obserwacji ujawniły jedno zwierzę z przeszczepionej grupy, u którego rozwinęło się poważne zwężenie przełyku.Analiza histologiczna wykazała, że w porównaniu ze zwierzętami przeszczepionymi, u zwierząt kontrolnych rozwinęła się znaczna tkanka zwłóknieniowa. Pokazujemy, że ESD, a następnie przeszczep arkusza ADSC można wykonać w ciągu około półtorej godziny. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać, że arkusze ADSC są delikatne i należy z nimi obchodzić się ostrożnie.Kluczem do sukcesu jest poświęcenie niezbędnego czasu na każdy etap procedury. Po wystawieniu technika ta toruje drogę do badań pokazujących dziedzinę terapii komórkowej w celu endoskopowego leczenia innych chorób układu pokarmowego.

adsc-sheet-transplantation-to-prevent-stricture-after-extended

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiono przygotowanie i przeszczep arkuszy komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej (ASC) na niedostatecznie zszyte zespolenia jelita grubego w modelu szczurzym. To nowatorskie zastosowanie pokazuje, że arkusze ASC mogą zmniejszyć nieszczelność zespolenia jelita grubego.

Przeszczep arkusza komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej w celu zmniejszenia przecieku po częściowej kolektomii w modelu szczurzym

Opisujemy nowatorską technikę zespolenia przełykowo-żołądkowego w obrębie klatki piersiowej, mającą na celu stworzenie zespolenia o dużej średnicy, przy jednoczesnym utrzymaniu dopływu krwi w przewodach, aby zminimalizować występowanie nieszczelności i zwężeń zespolenia. Opisano również budowę i ułożenie przewodu żołądkowego zaprojektowanego w celu optymalizacji funkcji górnego odcinka przewodu pokarmowego.

Wycięcie przełyku metodą Ivora Lewisa mające na celu zminimalizowanie powikłań zespolenia i optymalizację funkcji przewodów

Rekonstrukcja przełyku jest wymagającą procedurą, a opracowanie inżynierii tkankowej przełyku, która umożliwia regenerację błony śluzowej i mięśni przełyku i która może być wszczepiona jako sztuczny przeszczep, jest konieczna. Tutaj przedstawiamy nasz protokół generowania sztucznego przełyku, w tym produkcję rusztowań, hodowlę bioreaktorów i różne techniki chirurgiczne.

Przeszczep inżynierii tkankowej do obwodowej rekonstrukcji przełyku u szczurów

W niniejszej pracy przedstawiono protokół endoskopowej terapii próżniowej (EVT) w postępowaniu w przypadku nieszczelności zespolenia po całkowitej resekcji żołądka z przełykiem.

Endoskopowa terapia próżniowa w leczeniu nieszczelności zespolenia po całkowitej resekcji żołądka z ezofagojejunostomią

Protokół ten opisuje podłużne cięcie podśluzówkowe – technikę mającą ułatwić resekcję i zamknięcie ubytków zmian podnabłonkowych żołądka.

Ocena skuteczności nacięcia podłużnego dla endoskopowego wykopu podśluzkowego zmian podnabłonka żołądka

Niniejsze badanie opisuje ustandaryzowany protokół PCM-ESD do usuwania dużych LST odbytniczych, mający na celu zwiększenie szybkości sekcji i zapobieganie przezmuralnej perforacji poprzez tunelowanie podśluzówkowe.

Procedura tworzenia kieszonki endoskopowej podśluzkowej dla dużych guzów rozprzestrzeniających się bocznie odbytnictwa

Protokół ten opisuje samodzielnie wykonaną metodę wielopierścieniową nici, która zapewnia kontrolowaną wewnętrzną trakcję podczas gastroskopowej podśluzówki żołądka. Technika ta umożliwia skuteczną trakcję płatów śluzowych w pożądanych kierunkach i siłach, umożliwiając łatwą, bezpieczną i opłacalną sekcję.

Samodzielnie stworzona metoda trakcji wewnętrznej do endoskopowej podśluzowej sekcji wczesnego raka żołądka

U osób, które przeżyły zespół ostrej niewydolności oddechowej (ARDS) oraz stany krytyczne, często rozwija się długotrwała słabość mięśniowa. Manualne badanie siły mięśni (MMT) jest wystandaryzowanym badaniem klinicznym powszechnie stosowanym do pomiaru siły obwodowych grup mięśni szkieletowych. Niniejszy materiał wideo prezentuje procedurę MMT z wykorzystaniem 6-stopniowej skali Medical Research Council.

Manualne badanie siły mięśni: metoda pomiaru siły mięśni kończyn zastosowana u pacjentów w stanie krytycznym

W niniejszym przedstawiamy model przeszczepu nerki u szczura do nieinwazyjnej oceny ostrego odrzucenia allograftu przy użyciu pozytonowej tomografii emisyjnej z zastosowaniem 18F-fluorodeoksyglukozy.

Nieinwazyjne obrazowanie ostrego odrzucenia allograftu po przeszczepieniu nerki u szczura z wykorzystaniem 18F-FDG PET

Opisaliśmy protokół wykonywania częściowej hepatektomii (PHx) i przeszczepu komórek przez śledzionę w NOD. SCID (NOD. CB17-Prkdcscid/J) myszy. W tym protokole wykonuje się nacięcie w celu odsłonięcia i wycięcia lewego płata wątroby, a następnie kolejne nacięcie w celu dośledziony przeszczepu komórek.

Wewnątrzśledzionowe przeszczepienia hepatocytów po częściowej hepatektomii w NOD. Myszy SCID

Poznaj technikę przeszczepu arkusza ADSC w zapobieganiu zwężeniu przełyku po endoskopowym rozwarstwieniu podśluzówkowym u świni. Ta metoda terapii komórkowej poprawia gojenie tkanek i redukuje zwłóknienie.

Przeszczep arkusza ADSC w celu zapobiegania zwężeniu po rozszerzonym endoskopowym rozwarstwieniu podśluzówkowym przełyku

Przeglądaj więcej filmów