Name: Bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-01T10:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Poznaj bioluminescencyjne obrazowanie zapalenia nerwu wzrokowego i mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy. Ta metoda umożliwia wizualizację i ilościową ocenę postępu choroby oraz skuteczności terapii w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Te badania były wspierane przez Deutsche Forschungsgemeinschaft (CRC1039 A3) oraz program finansowania badań "Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz" (LOEWE) kraju związkowego Hesja, Centrum Badawcze Medycyny Translacyjnej i Farmakologii TMP oraz Fundację Else Kröner-Fresenius (EKFS), Research Training Group Translational Research Innovation - Pharma (TRIP).

1. Indukcja EAE u myszy SJL/J
<ol>
	<li>Myszy
	<ol>
		<li>Użyj 11-tygodniowych samic myszy SJL/J i pozwól im przyzwyczaić się do pomieszczenia eksperymentalnego przez około 7 dni. Użyj n = 10 myszy na grupę.</li>
		<li>W celu oceny działania leku, lek i placebo należy podawać grupie kontrolnej w sposób ciągły przez wodę do picia lub granulki żywności, począwszy od 3 lub 5 dni po szczepieniu (n = 10 na grupę). W szczytowym okresie choroby podawaj leki lub placebo z mlekiem lub płatkami kukurydzianymi nasączonymi 3% cukrem.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Materiał uodparniający
	<ol>
		<li>Użyć zestawu indukcyjnego EAE składającego się z antygenu (peptyd białka proteolipidowego, PLP139-151, emulsja 1 mg/ml) w emulsji z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA, zabijane termicznie Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) i 2 fiolkami (po 5 μg każda) liofilizowanej toksyny krztuśca (PTX).</li>
		<li>Rozpuścić PTX (2 μg/ml) w 1x soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS; tj. dodać 1,5 ml PBS do każdej probówki PTX, dobrze wymieszać, usunąć tą samą końcówką pipety i dodać do 1 ml PBS w probówce o pojemności 50 ml); Dobrze wymieszaj.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>immunizacja
	<ol>
		<li>Wstrzyknąć PLP/CFA podskórnie w 2 porcjach, każda po 100 μl, obie u podstawy ogona. Nie należy wstrzykiwać leku w tylną część szyi, ponieważ jakiekolwiek reakcje immunologiczne w skórze w górnej części pleców lub szyi mogą zakłócić obrazowanie głowy i rdzenia kręgowego.</li>
		<li>Wstrzyknąć 100 μl PTX dootrzewnowo (i.p.), dwa razy na mysz, pierwsze 1-2 godziny po szczepieniu, a drugie po 24 godzinach.</li>
		<li>W przypadku myszy kontrolnych wstrzyknąć CFA bez PLP (2 porcje po 100 μl) oraz PTX bez PLP.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Postępowanie z myszami po szczepieniu
	<ol>
		<li>Waż myszy co drugi dzień do 7 dnia, a następnie waż je codziennie. 
		UWAGA: Myszy tracą około 1 - 2 g masy ciała podczas EAE. Spadek ten oznacza początek EAE.</li>
		<li>Oceniaj objawy kliniczne codziennie od 7 dnia zgodnie ze standardowymi systemami punktacji (tj. Wynik 0: brak oczywistych zmian w funkcjach motorycznych; wynik 0,5: dystalny paraliż ogona; wynik 1: całkowity paraliż ogona; wynik 1,5: łagodny niedowład jednej lub obu tylnych nóg; wynik 2: ciężki niedowład tylnych nóg; wynik 2,5: całkowity paraliż jednej tylnej nogi; wynik 3: całkowity paraliż obu tylnych nóg; Wynik 3,5: całkowity paraliż tylnych nóg i niedowład jednej przedniej nogi. Eutanazja myszy z wynikiem 3,5 lub wyższym przez > 12 godzin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przebieg EAE i czas obrazowania
	<ol>
		<li>Pierwsze obrazowanie należy wykonać na początku choroby, gdy myszy osiągną wynik > 1, co nastąpi około 10 - 12 dnia po szczepieniu.</li>
		<li>Drugie obrazowanie należy wykonać w szczytowym momencie, który zostanie osiągnięty 1 lub 2 dni po wystąpieniu początkowych objawów i będzie utrzymywał się przez 1 - 3 dni. 
		UWAGA: Następnie myszy w pełni wyzdrowieją w ciągu 7 do 10 dni. Obrazowanie w odstępach czasu może nadal wykazywać przecieki naczyniowe, ale wskaźniki stanu zapalnego powinny być ujemne.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Bioluminescencyjne i w bliskiej podczerwieni obrazowanie zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu
<ol>
	<li>Konfiguracja systemu obrazowania
	<ol>
		<li>Wykonuj obrazowanie in vivo za pomocą dowolnego sprzętu, który pozwala na analizę sygnałów bioluminescencyjnych i bliskiej podczerwieni.</li>
		<li>Utrzymuj myszy poniżej 2 - 2,5% znieczulenia izofluranem podczas wszystkich procedur obrazowania.</li>
		<li>Umieść jedną lub dwie myszy obok siebie w aparacie, korzystając ze środkowego dopływu gazu. Ustaw górny kręgosłup pośrodku.</li>
		<li>Użyj dwóch myszy jednocześnie, po jednej na grupę, do oceny efektów leków w celu porównania par. Jest to ważne dla obrazowania bioluminescencyjnego.</li>
		<li>Osłoń miejsce szczepienia czarną szmatką i zrób zdjęcie oraz obraz bazowy, aby ocenić prawidłowe ułożenie myszy/myszy. W przypadku wszystkich zdjęć należy używać ostrości B z odległością 6.5 cm od aparatu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Iniekcja i obrazowanie bioluminescencyjnej sondy zapalnej
	<ol>
		<li>Użyj ustawień systemu obrazowania in vivo: Epi-BLI, filtr Em otwarty, blok filtra Ex, fstop 1, binning 8, ostrość B = 6,5 cm, ekspozycja ad 120 s; wykonaj zdjęcie bazowe.</li>
		<li>Wstrzyknąć 100 μl i.p. gotowego do użycia odczynnika chemiluminescencyjnego (40 mg/ml). Dobrze wymieszać przed napełnieniem strzykawki.</li>
		<li>Uchwyć obrazy bioluminescencji 5, 10 i 15 minut po wstrzyknięciu. Przebieg w czasie piku bioluminescencyjnego różni się u poszczególnych zwierząt. 
		UWAGA: Szczyt nastąpi 5 - 10 minut po wstrzyknięciu; Spadek po 15 minutach oznacza, że nie są wymagane żadne dalsze obrazy. Użyj par myszy w grupach kontrolnych i leczonych, aby wyeliminować drobne odchylenia wynikające z różnych przebiegów czasowych.</li>
		<li>Uzupełnij opisy związane z eksperymentem. Obserwuj, jak automatycznie pojawia się wyskakujące okno dialogowe; Zawiera informacje, takie jak szczep myszy, płeć, punkt czasowy, czas wstrzyknięcia sondy, grupa itp. Zapisz wszystkie pliki w jednym folderze; Będą one zawierały znaczniki czasu i wszystkie opisy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wstrzykiwanie i obrazowanie nanocząstek fluorescencyjnych w bliskiej podczerwieni w celu zapewnienia integralności BBB
	<ol>
		<li>Użyj obrazowania epifluorescencji w bliskiej podczerwieni w ognisku B (odległość: 6,5 cm). Maksima wzbudzenia/emisji pegylowanych nanocząstek fluorescencyjnych wynoszą 675/690 nm. Uchwyć dwa obrazy na różnych długościach fal, przy Ex640/Em700 i Ex675/Em720; Użyj ekspozycji 2-s, binningu 8 i fstop 2. Wykonaj obraz linii bazowej.</li>
		<li>Wstrzyknij 70 μl pegylowanych fluorescencyjnych nanocząstek podczerwieni dożylnie przez żyłę ogonową i wyobraź sobie myszy 3 godziny i 24 godziny po wstrzyknięciu, korzystając z powyższych ustawień. Dobrze wymieszać roztwór przed napełnieniem strzykawki.</li>
		<li>Wstrzyknij 0,9% chlorku sodu myszom kontrolnym, który będzie potrzebny do oceny swoistości sygnału.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wstrzykiwanie i obrazowanie sondy fluorescencyjnej w bliskiej podczerwieni pod kątem aktywności MMP
	<ol>
		<li>Ostrożnie ogol lub wypiluj okolicę głowy i górnego odcinka kręgosłupa na dzień przed wykonaniem zdjęcia podstawowego. Skóra nie może być uszkodzona.</li>
		<li>Użyj obrazowania epifluorescencji w bliskiej podczerwieni w ognisku B (odległość: 6,5 cm). Maksima wzbudzenia/emisji sondy aktywowanej MMP wynoszą 680/700 nm. Uchwyć dwa obrazy na różnych długościach fal, przy Ex640/Em700 i Ex675/Em720; Użyj ekspozycji 1-S, binningu 8 i fstop 2. Wykonaj obraz linii bazowej.</li>
		<li>Dodaj 200 μl 1x PBS do 1,5 ml probówki gotowego do użycia roztworu (20 nmol/1,5 ml w 1x PBS), tak aby wystarczyło dla 10 myszy; dobrze wymieszaj przed napełnieniem strzykawki. 
		UWAGA: Podana objętość nie uwzględnia faktu, że część objętości jest tracona podczas napełniania strzykawki i wstrzykiwania.</li>
		<li>Wstrzyknąć 150 μl sondy dożylnie przez żyłę ogonową 24 godziny przed obrazowaniem. PBS należy wstrzykiwać tylko zwierzętom kontrolnym w celu oceny swoistości sygnału.</li>
		<li>Po 24 godzinach od wstrzyknięcia wykonaj zdjęcia Epi-FL co najmniej na dwóch długościach fali, Ex640/Em700 i Ex 675/Em720, z ustawieniami opisanymi powyżej (ekspozycja 1 s, ostrość B, binning 8 i fstop 2). 
		UWAGA: Zastosowanie dwóch długości fal pozwala na rozmieszanie widma poprzez odjęcie sygnału niespecyficznego.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Analizy obrazów
<ol>
	<li>Analiza bioluminescencyjna (BLI)
	<ol>
		<li>Kliknij dwukrotnie oprogramowanie, aby je otworzyć.</li>
		<li>Na górnym pasku menu kliknij ikonę przeglądarki plików, przejdź do katalogu folderu eksperymentu i wybierz go; spowoduje to otwarcie wszystkich plików w folderze w tabeli.</li>
		<li>Skonfiguruj kolumny z opisami istotnymi dla eksperymentu.</li>
		<li>W celu kontroli jakości kliknij dwukrotnie plik myszy bez odpowiedzi bez objawów EAE i/lub myszy naiwnej, aby sprawdzić specyficzność sygnałów EAE. 
		UWAGA: U myszy nieleczonych wcześniej nie powinno być sygnału, a u myszy niereagujących na sygnał powinien być minimalny.
		<ol>
			<li>Sprawdź obraz linii bazowej przed wstrzyknięciem sondy dla każdej myszy jako dalszą kontrolę specyficzności sygnału; powinien być negatywny.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Aby wybrać obraz, kliknij dwukrotnie pierwszy plik pierwszej myszy EAE i sprawdź intensywność bioluminescencji (zakres pasków LUT) oraz lokalizację. Sprawdź wszystkie obrazy jeden po drugim. Zamknij plik z najniższą intensywnością dla każdej myszy (tj. zachowaj 2 z 3 obrazów dla każdej myszy).</li>
		<li>Regulacja i eksport obrazu
		<ol>
			<li>Kliknij dwukrotnie pierwszy plik, który ma zostać określony ilościowo. Obserwuj, jak pojawia się nowe wyskakujące okienko. W sekcji "opcje" (górne menu) dostosuj etykiety, które mają być wyświetlane na każdym obrazie.</li>
			<li>W prawej palecie narzędzi przejdź do "dopasowania obrazu". Domyślnie minimalne i maksymalne intensywności są ustawione na "auto" i wyświetlane w pseudokolorze tęczy. Wybierz "ręcznie", aby w razie potrzeby zmienić ustawienia. 
			UWAGA: Na przykład wszystkie eksportowane obrazy mogą mieć identyczne paski LUT (identyczne minima i maksima), aby można je było łatwo porównać. Korekta minimów i maksimów nie ma wpływu na wyniki ilościowe.</li>
			<li>Kliknij eksport obrazu, wybierz png, katalog i nazwę obrazu</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Kwantyfikacja regionów zainteresowania (ROI)
		<ol>
			<li>Przejdź do narzędzia "ROI" w palecie narzędzi. Wybierz metodę ROI (okrągła, prostokątna, automatyczna lub odręczna) oraz liczbę ROI. Obserwuj, jak w oknie obrazu pojawia się okno ROI.</li>
			<li>Za pomocą myszy dostosuj rozmiar i położenie. Użyj identycznych progów ROI dla wszystkich obrazów, jeśli używane jest narzędzie do automatycznego zwrotu z inwestycji. Użyj identycznych obszarów dla wszystkich obrazów, jeśli rozmiary i pozycje ROI są definiowane ręcznie (np. okrągłe ROI).</li>
			<li>Kliknij "zmierz RO.I. Obserwuj, jak pojawia się nowe okno. Dostosuj kolumny (np. nazwa pliku, liczba zwierząt, grupa, eksperyment, obszar, całkowita liczba, średnia liczba, liczba SD, minimalna i maksymalna liczba, obszar, punkt czasowy, czas wstrzyknięcia sondy itp.). Zapisz dostosowane ustawienia. Gdy wszystko będzie gotowe, zaznacz wszystko (Ctrl + A), a następnie skopiuj i wklej tabelę do arkusza kalkulacyjnego.</li>
			<li>Wyeksportuj obraz jako png z ustawionymi zwrotami akcji. Zapisz i zamknij plik obrazu.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Powtórz procedurę (kroki 3.1.6 - 3.1.7) dla wszystkich plików obrazów, które wymagają ilościowego określenia. Skopiuj wszystkie kwantyfikacje zwrotu z inwestycji do arkusza kalkulacyjnego. 
		UWAGA: Tutaj wyniki można sortować według grupy, punktu czasowego itp. i analizować statystycznie. Do analiz statystycznych należy wykorzystać łączną liczbę sygnałów bioluminescencyjnych w ROI.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza nanocząstek fluorescencyjnych w bliskiej podczerwieni (NIR)
	<ol>
		<li>Korzystając z elementów sterujących w oprogramowaniu, dostosuj próg obrazu. 
		UWAGA: Nie ma to wpływu na wynik ilościowy.</li>
		<li>Porównaj wizualnie obrazy zarejestrowane w Ex/Em 675/720 i Ex/Em 640/700, aby ocenić specyficzność sygnału.</li>
		<li>Do analizy ilościowej należy wykorzystać obrazy wykonane w Ex/Em 675/720 (maksimum wzbudzenia: 680 nm). Zdefiniuj ROI, dla których można użyć narzędzia do automatycznego zwrotu z inwestycji. Dostosuj próg automatycznego zwrotu z inwestycji i używaj go dla wszystkich obrazów. Określ ilościowo całkowitą wydajność promieniowania w ROI (patrz krok 3.1).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza w bliskiej podczerwieni (NIR) sondy czułej na proteazę
	<ol>
		<li>Korzystając z elementów sterujących oprogramowania, dostosuj próg obrazu. 
		UWAGA: Nie ma to wpływu na wynik ilościowy. Wykonaj demieszanie widmowe autofluorescencji. Narzędzie do rozłączania jest zaimplementowane w Living Image. Automatyczne rozmieszawanie wykorzystuje Ex/Em 640/700 jako obraz specyficzny i 675/720 jako obraz autofluorescencyjny.</li>
		<li>Wybierz niezmieszany obraz i zdefiniuj ROI, jak opisano powyżej. Wykorzystaj całkowitą wydajność promieniowania w ROI do analiz ilościowych i statystycznych.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Compston, A., Coles, A. <a target="_blank" href="http://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(08)61620-7/abstract">Multiple sclerosis.</a> Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).</li>
<li>Dunn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+mobility+impairment+on+the+burden+of+caregiving+in+individuals+with+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Pharmacoecon+Outcomes+Res%22%5BJournal%5D)">Impact of mobility impairment on the burden of caregiving in individuals with multiple sclerosis.</a> Expert Rev Pharmacoecon Outcomes Res. 10 (4), 433-440 (2010).</li>
<li>Dutta, R., Trapp, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+neuronal+dysfunction+and+degeneration+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of neuronal dysfunction and degeneration in multiple sclerosis.</a> Prog Neurobiol. 93 (1), 1-12 (2011).</li>
<li>Sawcer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+risk+and+a+primary+role+for+cell-mediated+immune+mechanisms+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genetic risk and a primary role for cell-mediated immune mechanisms in multiple sclerosis.</a> Nature. 476 (7359), 214-219 (2011).</li>
<li>Schmitz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((R-flurbiprofen+attenuates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">R-flurbiprofen attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis in mice.</a> EMBO Mol Med. 6 (11), 1398-1422 (2014).</li>
<li>Balls, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+and+early+days+of+the+Three+Rs+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Altern+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The origins and early days of the Three Rs concept.</a> Altern Lab Anim. 37 (3), 255-265 (2009).</li>
<li>Barthelmes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Experimental+Autoimmune+Encephalomyelitis+in+Mice+and+Evaluation+of+the+Disease-dependent+Distribution+of+Immune+Cells+in+Various+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues.</a> J Vis Exp. (111), (2016).</li>
<li>Leahy, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+trajectory+of+osteoarthritis+development+in+a+mouse+model+by+serial+near-infrared+fluorescence+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Analysis of the trajectory of osteoarthritis development in a mouse model by serial near-infrared fluorescence imaging of matrix metalloproteinase activities.</a> Arthritis Rheumatol. 67 (2), 442-453 (2015).</li>
<li>Scales, H. E., et al. Assessment of murine collagen-induced arthritis by longitudinal non-invasive duplexed molecular optical imaging. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aScales%2C+HE+%22Rheumatology+%28Oxford%29%22">Rheumatology (Oxford)</a>. 55 (3), 564-572 (2016).</li>
<li>Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+channel+optical+tomographic+imaging+of+leukocyte+recruitment+and+protease+activity+in+the+healing+myocardial+infarct%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Dual channel optical tomographic imaging of leukocyte recruitment and protease activity in the healing myocardial infarct.</a> Circ Res. 100 (8), 1218-1225 (2007).</li>
<li>Eaton, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+tomographic+imaging+of+near+infrared+imaging+agents+quantifies+disease+severity+and+immunomodulation+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Optical tomographic imaging of near infrared imaging agents quantifies disease severity and immunomodulation of experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo.</a> J Neuroinflammation. 10, (2013).</li>
<li>Kandagaddala, L. D., Kang, M. J., Chung, B. C., Patterson, T. A., Kwon, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+activation+of+matrix+metalloproteinase-9+and+NADPH+oxidase+in+tissues+and+plasma+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression and activation of matrix metalloproteinase-9 and NADPH oxidase in tissues and plasma of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice.</a> Exp Toxicol Pathol. 64 (1-2), 109-114 (2012).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+fluorescence+imaging+of+myelination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">In situ fluorescence imaging of myelination.</a> J Histochem Cytochem. 58 (7), 611-621 (2010).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.jneurosci.org/content/31/7/2382">Longitudinal near-infrared imaging of myelination.</a> J Neurosci. 31 (7), 2382-2390 (2011).</li>
<li>Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+involved+in+T+cell+migration+across+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms involved in T cell migration across the blood-brain barrier.</a> J Neural Transm. 113 (4), 477-485 (2006).</li>
<li>Badawi, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+EAE+and+prevention+of+blood-brain+barrier+breakdown+after+vaccination+with+novel+bifunctional+peptide+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Suppression of EAE and prevention of blood-brain barrier breakdown after vaccination with novel bifunctional peptide inhibitor.</a> Neuropharmacology. 62 (4), 1874-1881 (2012).</li>
<li>Simmons, S. B., Pierson, E. R., Lee, S. Y., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+heterogeneity+of+multiple+sclerosis+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Modeling the heterogeneity of multiple sclerosis in animals.</a> Trends in immunology. 34 (8), 410-422 (2013).</li>
<li>Lin, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+fMRI+detects+white-matter+dysfunction+in+mice+with+acute+optic+neuritis%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Diffusion fMRI detects white-matter dysfunction in mice with acute optic neuritis.</a> Neurobiol Dis. 67, 1-8 (2014).</li>
<li>Knier, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+IL-17+protects+the+optic+nerve+from+autoimmune+pathology+and+prevents+retinal+nerve+fiber+layer+atrophy+during+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Neutralizing IL-17 protects the optic nerve from autoimmune pathology and prevents retinal nerve fiber layer atrophy during experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Autoimmun. 56, 34-44 (2015).</li>
<li>Schellenberg, A. E., Buist, R., Yong, V. W., Del Bigio, M. R., Peeling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+blood-spinal+cord+barrier+disruption+in+mice+with+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Magn+Reson+Med%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of blood-spinal cord barrier disruption in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Magn Reson Med. 58 (2), 298-305 (2007).</li>
<li>Mori, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+pathological+alterations+of+lower+lumbar+cords+detected+by+ultrahigh-field+MRI+in+a+mouse+multiple+sclerosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunol%22%5BJournal%5D)">Early pathological alterations of lower lumbar cords detected by ultrahigh-field MRI in a mouse multiple sclerosis model.</a> Int Immunol. 26 (2), 93-101 (2014).</li>
<li>Bittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+TWIK-related+potassium+channel-1+%28TREK1%29+regulates+immune-cell+trafficking+into+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial TWIK-related potassium channel-1 (TREK1) regulates immune-cell trafficking into the CNS.</a> Nat Med. 19 (9), 1161-1165 (2013).</li>
<li>Theien, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+treatment+with+a+small-molecule+VLA-4+antagonist+before+and+after+onset+of+relapsing+EAE%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differential effects of treatment with a small-molecule VLA-4 antagonist before and after onset of relapsing EAE.</a> Blood. 102 (13), 4464-4471 (2003).</li>
<li>Hawkins, B. T., Davis, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%2Fneurovascular+unit+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disease.</a> Pharmacol Rev. 57 (2), 173-185 (2005).</li>
<li>Coisne, C., Mao, W., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+Natalizumab+blocks+adhesion+but+not+initial+contact+of+human+T+cells+to+the+blood-brain+barrier+in+vivo+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: Natalizumab blocks adhesion but not initial contact of human T cells to the blood-brain barrier in vivo in an animal model of multiple sclerosis.</a> J Immunol. 182 (10), 5909-5913 (2009).</li>
<li>Andresen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High-resolution intravital microscopy.</a> PLoS One. 7 (12), e50915(2012).</li>
<li>Bukilica, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+suppression+of+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stress-induced suppression of experimental allergic encephalomyelitis in the rat.</a> Int J Neurosci. 59 (1-3), 167-175 (1991).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Prezentowany film przedstawia techniki obrazowania bioluminescencji i fluorescencji w bliskiej podczerwieni in vivo EAE u myszy SJL/J. Pokazujemy, że obrazowanie bioluminescencyjne przy użyciu sondy wrażliwej na stan zapalny pokazuje głównie zapalenie nerwu wzrokowego, a kwantyfikacja zgadza się z kliniczną oceną ciężkości EAE i skutków leków. Jednak metoda obrazowania bioluminescencyjnego nie była w stanie wykryć stanu zapalnego lędźwiowego rdzenia kręgowego, który jest głównym miejscem manifestacji EAE<sup cla...

Stwardnienie rozsiane jest spowodowane przez autoimmunologiczny atak i zniszczenie osłonki mielinowej w mózgu i rdzeniu kręgowym1. Z ogólną częstością występowania około 3,6 przypadków na 100 000 osób rocznie u kobiet i około 2,0 u mężczyzn, stwardnienie rozsiane jest drugą najczęstszą przyczyną niepełnosprawności neurologicznej u młodych dorosłych, po urazach urazowych2,3. Do patologii choroby przyczyniają się czynniki genetyczne i środowiskowe4, ale nadal nie jest w pełni poznana. Autoreaktywne limfocyty T dostają się do ośrodkowego układu nerwowego i wywołują kaskadę zapalną, która powoduje ogniskowe nacieki w istocie białej mózgu, rdzenia kręgowego i nerwu wzrokowego. W większości przypadków nacieki te są początkowo odwracalne, ale trwałość wzrasta wraz z liczbą nawrotów. Opracowano szereg modeli gryzoni w celu zbadania patologii choroby. Najpopularniejszymi modelami są rzutowo-remisyjne EAE u myszy SJL / J i pierwotnie postępujące EAE u myszy C57BL6.
Kliniczne wyniki EAE, które opisują zakres deficytów funkcji motorycznych i masę ciała, są złotymi standardami do oceny ciężkości EAE. Te objawy kliniczne zgadzają się z zakresem infiltracji komórek odpornościowych i niszczenia mieliny w rdzeniu kręgowym i umiarkowanie przewidują skuteczność leczenia farmakologicznego u ludzi5. Jednak objawy te odzwierciedlają głównie zniszczenie brzusznych dróg włóknistych w rdzeniu kręgowym. Obecnie nie ma łatwej, nieinwazyjnej, niezawodnej i powtarzalnej metody oceny infiltracji mózgu in vivo i zapalenia nerwu wzrokowego u żywych myszy. 
Obrazowanie in vivo zgadza się z 3 zasadami "R" Russela i Burcha (1959), które twierdzą, że eksperymenty na zwierzętach mają miejsce R, edukację Ri udoskonalenieR6, ponieważ obrazowanie zwiększa odczyty jednego zwierzęcia w kilku punktach czasowych i pozwala na zmniejszenie ogólnej liczby. Obecnie stan zapalny lub stan mieliny jest głównie oceniany ex vivo za pomocą immunohistochemii, analizy FACS lub różnych metod biologii molekularnej7, z których wszystkie wymagają eutanazji myszy w określonych punktach czasowych. 
Opracowano wiele sond systemu obrazowania in vivo do oceny stanu zapalnego skóry, stawów i układu naczyniowego. Techniki te opierają się na aktywacji bioluminescencyjnych lub fluorescencyjnych substratów w bliskiej podczerwieni przez peroksydazy tkankowe, w tym mieloperoksydazę (MPO), metaloproteinazy macierzy (MMPs)8 i katepsyny9 lub cyklooksygenazę2. Sondy te zostały głównie zweryfikowane w modelach zapalenia stawów lub miażdżycy9,10. Czuła na katepsynę sonda została również wykorzystana do fluorescencyjnego obrazowania tomograficznego molekularnego EAE11. MMP, szczególnie MMP2 i MMP9, przyczyniają się do zaburzenia BBB za pośrednictwem proteazy w EAE i są regulowane w górę w miejscach infiltracji komórek odpornościowych12, co sugeruje, że te sondy mogą być przydatne do obrazowania EAE. To samo dotyczy sond opartych na peroksydazie lub katepsynach. Technicznie rzecz biorąc, obrazowanie stanu zapalnego w mózgu lub rdzeniu kręgowym jest znacznie trudniejsze, ponieważ czaszka lub kręgosłup pochłaniają sygnały bioluminescencyjne i bliskiej podczerwieni. 
Oprócz wskaźników stanu zapalnego, opisano fluorescencyjne substancje chemiczne, które specyficznie wiążą się z mieliną i mogą pozwolić na ilościowe określenie mielinizacji13. Stwierdzono, że sonda fluorescencyjna w bliskiej podczerwieni, jodek 3,3'-dietylotiotrikarbocyjaniny (DBT), specyficznie wiąże się z włóknami mielinowymi i została zwalidowana jako narzędzie ilościowe w mysich modelach pierwotnych defektów mielinizacji oraz w demielinizacji wywołanej miedziizonem14. W EAE sygnał DBT był raczej zwiększony, co odzwierciedlało stan zapalny włókien mielinowych5. 
Dodatkowym znakiem rozpoznawczym EAE i MS jest rozpad BBB, co skutkuje zwiększoną przepuszczalnością naczyń krwionośnych i wynaczynieniem komórek krwi, płynu pozakomórkowego i makrocząsteczek do miąższu OUN. Może to prowadzić do obrzęku, stanu zapalnego, uszkodzenia oligodendrocytów i ostatecznie demielinizacji15,16. W związku z tym wizualizacja przecieku BBB za pomocą sond fluorescencyjnych, takich jak albumina surowicy bydlęcej znakowana fluorochromem5, która normalnie rozprowadza się bardzo wolno z krwi do tkanki, może być przydatna do oceny EAE.
W obecnym badaniu oceniliśmy przydatność różnych sond w EAE i pokazaliśmy procedurę dla najbardziej niezawodnej i solidnej techniki bioluminescencyjnej. Ponadto omawiamy zalety i wady sond bliskiej podczerwieni pod kątem aktywności MMP i integralności BBB.

<table><tbody><tr><td>AngioSpark-680</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stany Zjednoczone</td><td>NEV10149</td><td>Sonda obrazująca, pegylowane nanocząstki, przydatne do obrazowania integralności bariery krew-mózg</td></tr><tr><td>MMP-sense 680</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stany Zjednoczone</td><td>NEV10126</td><td>Sonda do obrazowania, aktywowana przez metaloproteinazy macierzy, przydatna do obrazowania stanu zapalnego</td></tr><tr><td>Sonda zapalna XenoLight RediJect</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stany Zjednoczone</td><td>760535</td><td>Sonda obrazująca, aktywowana przez oksydazy, przydatna do obrazowania stanu zapalnego</td></tr><tr><td>Emulsja PLP139-151/CFA&nbsp;</td><td>Hooke Labs, St Lawrence, MA</td><td>EK-0123</td><td>Zestaw indukcyjny EAE</td></tr><tr><td>Toksyna krztuśca</td><td>Hooke Labs, St Lawrence, MA</td><td>EK-0123</td><td>Zestaw indukcyjny EAE</td></tr><tr><td>IVIS Lumina Spectrum</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA</td><td></td><td>System obrazowania bioluminescencji i podczerwieni</td></tr><tr><td>Oprogramowanie LivingImage 4.5&nbsp;</td><td>Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stany Zjednoczone</td><td>CLS136334</td><td>Oprogramowanie do analizy IVIS</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Labs, Illinois, USA</td><td>26675-46-7</td><td>Znieczulenie</td></tr></tbody></table>

bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu w modelu eae stwardnienia rozsianego u myszy

Bioluminescence and Near-infrared Imaging of Optic Neuritis and Brain Inflammation in the EAE Model of Multiple Sclerosis in Mice

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) u myszy SJL/J jest modelem rzutowo-remisyjnego stwardnienia rozsianego (RRMS). Kliniczne wyniki EAE opisujące deficyty funkcji motorycznych są podstawowymi odczytami zapalenia rdzenia kręgowego o podłożu immunologicznym. Jednak wyniki i masa ciała nie pozwalają na ocenę in vivo zapalenia mózgu i zapalenia nerwu wzrokowego. Ta ostatnia jest wczesną i częstą manifestacją u około 2/3 pacjentów ze stwardnieniem rozsianym. Tutaj pokazujemy metody bioluminescencji i obrazowania na żywo w bliskiej podczerwieni w celu oceny zapalenia nerwu wzrokowego wywołanego przez EAE, zapalenia mózgu i zakłócenia bariery krew-mózg (BBB) u żywych myszy za pomocą systemu obrazowania in vivo. Bioluminescencyjny substrat aktywowany przez oksydazy wykazywał przede wszystkim zapalenie nerwu wzrokowego. Sygnał był specyficzny i pozwalał na wizualizację efektów leków i przebiegów choroby w czasie, które pokrywały się z wynikami klinicznymi. Pegylowane nanocząstki fluorescencyjne, które pozostawały w układzie naczyniowym przez dłuższy czas, wykorzystano do oceny integralności bariery krew-mózg. Obrazowanie w bliskiej podczerwieni ujawniło wyciek z bariery krew-mózg w szczytowym momencie choroby. Sygnał był najsilniejszy w okolicach oczu. Do oceny stanu zapalnego wywołanego przez EAE wykorzystano substrat bliskiej podczerwieni dla metaloproteinaz macierzy. Autofluorescencja interferowała sygnał, wymagając rozmieszania widma w celu określenia ilościowego. Ogólnie rzecz biorąc, obrazowanie bioluminescencyjne było wiarygodną metodą oceny zapalenia nerwu wzrokowego związanego z EAE i efektów leków oraz przewyższało techniki bliskiej podczerwieni pod względem specyficzności sygnału, solidności, łatwości kwantyfikacji i kosztów.

Przebieg czasowy bioluminescencji w zapaleniu nerwu wzrokowego
Sygnał bioluminescencji sondy stanu zapalnego był najsilniejszy w okolicy oczu i występował wyłącznie u myszy z EAE z zapaleniem nerwu wzrokowego. Sygnał nie pojawił się ani u myszy bez EAE, ani u myszy, którym nie wstrzyknięto sondy stanu zapalnego. Sygnał znikał w miarę powrotu myszy do zdrowia. Zatem sygnał jest specyficzny dla zapalenia nerwu wzr...

Pokazujemy technikę obrazowania in vivo na żywo bioluminescencji i bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu w eksperymentalnym modelu autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE) dla stwardnienia rozsianego u myszy SJL/J.

Bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in SJL/J mice is a model for relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS). Clinical EAE scores describing ...

Ogólnym celem tej techniki obrazowania jest wizualizacja i ilościowe określenie zapalenia nerwu wzrokowego oraz stanu zapalnego mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u żywych myszy. Metoda ta może pomóc w udzieleniu odpowiedzi na kluczowe pytania z dziedziny neuroimmunologii, takie jak nowe mechanizmy wpływające na przebieg EAE i stwardnienia rozsianego. Główną zaletą tej techniki jest możliwość obserwacji i kwantyfikacji zapalenia nerwu wzrokowego oraz stanu zapalnego mózgu wywołanego przez EAE u żywych myszy w trakcie całego przebiegu choroby.Zastosowanie tej techniki ma znaczenie terapeutyczne, ponieważ pozwala na obserwację efektów działania leków, które nie są widoczne w wynikach punktowych EAE. W tej procedurze należy rozpuścić PTX w stężeniu 2 µg/mL w 1x PBS i dokładnie wymieszać. Następnie, podczas krótkiej anestezji izofluranem, wstrzyknąć myszom podskórnie 100 µL PLP/CFA dwukrotnie w nasadzie ogona.Nie wstrzykiwać w kark, ponieważ wszelkie reakcje immunologiczne w skórze górnej części pleców lub szyi będą zakłócać obrazowanie głowy i rdzenia kręgowego. Od jednej do dwóch godzin po immunizacji wstrzyknąć myszom 100 µL PTX drogą dosytroniczną. Następnie 24 godziny po i

bioluminescence-near-infrared-imaging-optic-neuritis-brain

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film demonstruje procedurę oceny przerwania bariery krew-mózg w mysim modelu EAE. Barwniki fluorescencyjne o różnych rozmiarach są wstrzykiwane po ortopie i krążą w naczyniach krwionośnych mózgu. Mniejszy barwnik przecieka przez szczeliny do tkanki mózgowej, podczas gdy większy barwnik dostaje się tylko wtedy, gdy zakłócenie jest poważne, co koreluje z zakresem uszkodzenia bariery.

Określanie przerwania bariery krew-mózg za pomocą barwników fluorescencyjnych w mysim modelu EAE

W tym filmie mysi model stwardnienia rozsianego jest tworzony za pomocą eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE). Myszowi wstrzykuje się emulsję zawierającą peptyd neuronalny i adiuwant, wywołując odpowiedź immunologiczną, która aktywuje autoreaktywne limfocyty T. Następnie podaje się wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (PTX) w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając autoreaktywnym limfocytom T infiltrację mózgu. Ten naciek inicjuje kaskadę...

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego w modelu mysim

Źródło: Breid, S.,  et. al. Obrazowanie bioluminescencyjne zapalenia układu nerwowego u myszy transgenicznych po obwodowej inokulacji włókienek alfa-synukleiny. J. Vis. Exp. (2017)Ten film demonstruje obrazowanie bioluminescencyjne zapalenia układu nerwowego u myszy transgenicznych, prezentując reakcje lucyferazy-lucyferyny w aktywowanych astrocytach. Protokół umożliwia nieinwazyjną kwantyfikację aktywacji astrocytarnej, wspomagając badania nad zapaleniem OUN i skutecznością terapeutyczną.

Obrazowanie bioluminescencyjne zapalenia nerwów u myszy transgenicznej

Źródło: Schmitz, K., et al., Bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy. J. Vis. Exp. (2017).Ten film pokazuje metodę wizualizacji i monitorowania eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego lub zapalenia nerwu wzrokowego wywołanego EAE za pomocą obrazowanie bioluminescencyjne. Obejmuje to pozycjonowanie myszy, wstrzykiwanie odczynnika i przechwytywanie sekwencyjnych...

Obrazowanie bioluminescencyjne w modelu myszy EAE

Opisujemy metodę wszczepiania i utrzymywania szklanych okien nad odsłoniętymi rdzeniami kręgowymi dorosłych myszy do badania eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia. Okna te zapewniają przewlekły dostęp optyczny do rdzenia kręgowego w celu monitorowania dynamiki komórek na poziomie subkomórkowym u żywych zwierząt za pomocą mikroskopii dwufotonowej.

Wszczepianie szklanych okien rdzenia kręgowego dorosłym myszom z eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego

Ten manuskrypt opisuje metody indukcji i oceny eksperymentalnego modelu autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego (EAE), wraz z oceną rozmieszczenia komórek odpornościowych i poziomów cytokin mRNA w węzłach chłonnych, śledzionie, krwi i rdzeniu kręgowym za pomocą cytometrii przepływowej i ilościowego PCR, odpowiednio, w różnych fazach choroby.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego u myszy i ocena zależnej od choroby dystrybucji komórek odpornościowych w różnych tkankach

Obwodowe wstrzyknięcie włókienek alfa-synukleiny do otrzewnej lub języka myszy Tg(M83+/-:Gfap-luc+/-), które wykazują ekspresję ludzkiej alfa-synukleiny z rodzinną mutacją A53T i lucyferazą świetlika, może wywołać neuropatologię, w tym zapalenie nerwów, w ich ośrodkowym układzie nerwowym.

Obrazowanie bioluminescencyjne zapalenia układu nerwowego u myszy transgenicznych po obwodowej inokulacji włókien alfa-synukleiny

Ten protokół opisuje, jak techniki obrazowania o wysokiej rozdzielczości, takie jak optyczna koherentna tomografia w domenie spektralnej i skaningowa oftalmoskopia laserowa, mogą być wykorzystane u małych gryzoni, przy użyciu systemu platformy obrazowania okulistycznego, aby uzyskać informacje odpowiednio o grubości siatkówki i rozmieszczeniu komórek mikrogleju.

In vivo (in vivo) Obrazowanie myszy reporterowych Cx3cr1gfp/gfp z optyczną koherentną tomografią w domenie spektralnej i skaningową oftalmoskopią laserową

Tutaj prezentujemy protokoły do badania upośledzenia jednostki nerwowo-naczyniowej podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia in vivo. W szczególności zajmujemy się tym, jak określić przepuszczalność bariery krew-mózg i aktywność żelatynazy zaangażowaną w migrację leukocytów przez limity gleju.

Wizualizacja upośledzenia barier śródbłonkowych i glejowych jednostki nerwowo-naczyniowej podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia mięśniowego in vivo

Niniejszy protokół opisuje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia w modelu mysim przy użyciu glikoproteiny oligodendrocytów mieliny i monitorowanie procesu chorobowego za pomocą systemu punktacji klinicznej. Eksperymentalne objawy związane z autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego są analizowane za pomocą analizy mikrotomografii komputerowej kości udowej myszy i testu terenowego w celu kompleksowej oceny procesu chorobowego.

Indukcja i zróżnicowane wskaźniki oceny eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) służy jako zwierzęcy model stwardnienia rozsianego. W tym artykule opisano podejście do oceny zapalenia rdzenia kręgowego, demielinizacji i uszkodzenia aksonów w EAE. Dodatkowo przedstawiono metodę ilościowego określania poziomu rozpuszczalnego światła neurofilamentów w surowicy myszy, ułatwiającą ocenę uszkodzenia aksonów u żywych myszy.

Ocena zapalenia ośrodkowego układu nerwowego, demielinizacji i uszkodzenia aksonów w eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia

Poznaj bioluminescencyjne obrazowanie zapalenia nerwu wzrokowego i mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy. Ta metoda umożliwia wizualizację i ilościową ocenę postępu choroby oraz skuteczności terapii w czasie rzeczywistym.

Bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy (Wideo) | JoVE Journal

Bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i zapalenia mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy

Przeglądaj więcej filmów