Name: Wlew z przewodu trzustkowego: skuteczna i selektywna metoda dostarczania leków i wirusów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Poznaj technikę wlewu z przewodu trzustkowego u myszy do śledzenia linii komórkowych i wprowadzania genów. Ta metoda umożliwia precyzyjne badanie trzustki oraz chorób takich jak cukrzyca i rak trzustki.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie mają żadnych podziękowań. Dofinansowanie uzyskano od Fundacji Zdrowia i Komisji Planowania Rodziny prowincji Zhejiang (Grant 20146242) oraz Fundacji Biura Nauki i Technologii Wenzhou (Grant Y20140248).

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Badań i Opieki nad Zwierzętami w Szpitalu Dziecięcym w Pittsburghu oraz Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu w Pittsburghu.
1. Przygotowanie przedoperacyjne
<ol>
	<li>Wziewny izofluran (1 - 3% w leczeniu podtrzymującym i do 5% w indukcji) należy podawać przez stożek nosowy do odpowiedniego poziomu znieczulenia. Monitoruj adekwatność znieczulenia przez uszczypnięcie palca u nogi kleszczami. Brak odpowiedzi jest uważany za wystarczający i należy pamiętać, aby nie przesadzać z lekami, ponieważ może wystąpić depresja oddechowa.</li>
	<li>Umieść zwierzę na plecach na stoliku mikroskopu preparacyjnego, z brzuchem wyśrodkowanym w kierunku obiektywu. Unieruchomić zwierzę taśmą chirurgiczną. Nałóż maść okulistyczną na oczy zwierzęcia, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia.</li>
	<li>Nałóż gładką, grubą warstwę kremu do depilacji i pozostaw go na miejscu na 3 minuty. Sprawdź mały obszar do depilacji. Delikatnie zetrzyj krem i włosy gazą nasączoną 70% etanolem.</li>
	<li>Oczyść i zdezynfekuj brzuch zwierzęcia, przecierając go gazą nasączoną 70% etanolem, a następnie gazą nasączoną betadyną. Utrzymuj sterylne warunki przez cały zabieg chirurgiczny.</li>
</ol>
2. Właściwa ekspozycja
<ol>
	<li>Wykonaj nacięcie w linii środkowej skóry od wyrostka ksyloidalnego do pępka za pomocą skalpela. Podnieś otrzewną za pomocą kleszczy Adson i zrób mały otwór w linii środkowej za pomocą nożyczek.</li>
	<li>Przedłuż nacięcie otrzewnej do długości nacięcia skóry, uważając, aby pozostać na linii środkowej (linea alba). 
	UWAGA: Spowoduje to laparotomię górnej linii środkowej jamy brzusznej.</li>
	<li>Podnieś wątrobę za pomocą retraktorów, aby odsłonić wspólny przewód żółciowy. Zacisnąć wspólny przewód żółciowy za pomocą zakrzywionego zacisku naczyniowego buldoga. 
	UWAGA: Ten manewr zapobiega niepożądanemu wlewowi do wątroby.</li>
</ol>
3. Identyfikacja brodawki trzustkowej i duodenotomii
<ol>
	<li>Zidentyfikuj dwunastnicę i za pomocą kleszczy Arruga cofnij ją doogonowo, aby wyświetlić brodawkę. 
	UWAGA: Brodawka to biała plamka na przedniej powierzchni drugiej części dwunastnicy.</li>
	<li>Cofnij dwunastnicę doogonowo, co pozwala na identyfikację przebiegu przewodu trzustkowego. Za pomocą igły o rozmiarze 301/2 nakłuć ścianę dwunastnicy stycznie, dokładnie naprzeciwko brodawki. 
	UWAGA: Igła powinna podążać pod tym samym kątem co przewód, gdy wchodzi do dwunastnicy.</li>
</ol>
4. Napar.
<ol>
	<li>Przeprowadź cewnik przez duodenotomię utworzoną w kroku 3.2, aż cewnik będzie widoczny w przewodzie. Wsuń cewnik do kanału nie więcej niż 1 cm, aby zapobiec ominięciu mniejszych dopływów przewodowych.</li>
	<li>Zacisnąć cewnik na miejscu za pomocą drugiego zakrzywionego zacisku naczyniowego buldoga. Włącz pompę i wlej wybraną objętość. Objętość podawanej infuzji może wynosić od 25 do 250 μl, przy idealnej objętości około 150 μl.</li>
	<li>Podaj dootrzewnowe wstrzyknięcie około 1,5 ml soli fizjologicznej, aby zrównoważyć straty. Przykryj odsłonięte jelito wilgotną gazą, aby zapobiec wysuszeniu.</li>
	<li>Po zakończeniu infuzji usuń zacisk buldoga, który utrzymywał cewnik na miejscu. Użyj zacisku buldoga, aby delikatnie usunąć cewnik z przewodu trzustkowego. Zwolnij zacisk ze wspólnego przewodu żółciowego.</li>
	<li>Zamknij otrzewną i skórę w jednej lub dwóch warstwach za pomocą szwu biegowego. 
	UWAGA: Nie ma potrzeby zamykania duodenotomii, ponieważ ona sama się zapieczętuje.</li>
	<li>W analgezji pooperacyjnej należy podać dawkę ketofenu w dawce 5 mg/kg mc. podczas zabiegu i jedną następnego dnia.</li>
	<li>Umieść mysz z powrotem w klatce pod lampą grzewczą, aż dojdzie do siebie. Zapewnij myszy jedzenie i wodę ad libitum.</li>
	<li>Nie pozostawiaj zwierzęcia bez opieki, dopóki nie odzyska wystarczającej przytomności, aby utrzymać pozycję leżącą w mostku. Nie należy zwracać zwierzęcia, które przeszło operację, do towarzystwa innych zwierząt, dopóki w pełni nie wyzdrowieje.</li>
</ol>
5. Przygotowanie próbki
<ol>
	<li>Umieść zwierzę w komorze na dwutlenek węgla lub wykonaj zwichnięcie szyjki macicy.</li>
	<li>Zbierz trzustkę, ze śledzioną, wątrobą i dwunastnicą jako kontrolą. Utrwalić tkanki w paraformaldehydzie przez noc w temperaturze 4 °C. Cryoprotect próbkę w 30% sacharozie przez noc, jak opisano wcześniej6.</li>
	<li>Próbki należy zamrozić na zatrzask. Przeciąć tkankę o grubości 6 μm za pomocą mikrotomu. Wykonaj obrazowanie pod mikroskopem z obrazowaniem fluorescencyjnym, jak opisano wcześniej7.</li>
</ol>

<ol><li>Gittes, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+biology+of+the+pancreas%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review.</a> Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).</li>
<li>Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+for+the+pancreatic+lineage%3A+NGN3%2B+cells+are+islet+progenitors+and+are+distinct+from+duct+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors.</a> Development. 129 (10), 2447-2457 (2002).</li>
<li>Weinberg, N., Ouziel-Yahalom, L., Knoller, S., Efrat, S., Dor, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+tracing+evidence+for+in+vitro+dedifferentiation+but+rare+proliferation+of+mouse+pancreatic+beta-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Lineage tracing evidence for in vitro dedifferentiation but rare proliferation of mouse pancreatic beta-cells.</a> Diabetes. 56 (5), 1299-1304 (2007).</li>
<li>Raper, S. E., DeMatteo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-mediated+in+vivo+gene+transfer+and+expression+in+normal+rat+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-mediated in vivo gene transfer and expression in normal rat pancreas.</a> Pancreas. 12 (4), 401-410 (1996).</li>
<li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cell+tracing%2C+lineage+tagging+and+targeted+genetic+manipulations+in+multiple+cell+types+using+pancreatic+ductal+infusion+of+adeno-associated+viral+vectors+and%2For+cell-tagging+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cell tracing, lineage tagging and targeted genetic manipulations in multiple cell types using pancreatic ductal infusion of adeno-associated viral vectors and/or cell-tagging dyes.</a> Nat Protoc. 9 (12), 2719-2724 (2014).</li>
<li>Song, Z., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27587395">EGFR signaling regulates beta cell proliferation in adult mice.</a> J Biol Chem. 291 (43), (2016).</li>
<li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M2+macrophages+promote+beta-cell+proliferation+by+up-regulation+of+SMAD7%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">M2 macrophages promote beta-cell proliferation by up-regulation of SMAD7.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (13), E1211-E1220 (2014).</li>
<li>Laukkarinen, J. M., Van Acker, G. J., Weiss, E. R., Steer, M. L., Perides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+pancreatic+duct+infusion+of+Na-taurocholate%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">A mouse model of acute biliary pancreatitis induced by retrograde pancreatic duct infusion of Na-taurocholate.</a> Gut. 56 (11), 1590-1598 (2007).</li>
<li>Lichtenstein, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10834702">Acute lung injury in two experimental models of acute pancreatitis: infusion of saline or sodium taurocholate into the pancreatic duct.</a> Crit Care Med. 28 (5), 1497-1502 (2000).</li>
<li>Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nat Protoc. 5 (2), 335-341 (2010).</li>
<li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+transduction+and+labeling+of+pancreatic+ducts+by+targeted+recombinant+viral+infusion+into+mouse+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Specific transduction and labeling of pancreatic ducts by targeted recombinant viral infusion into mouse pancreatic ducts.</a> Lab Invest. 93 (11), 1241-1253 (2013).</li>
<li>Xiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenin3+activation+is+not+sufficient+to+direct+duct-to-beta+cell+transdifferentiation+in+the+adult+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Neurogenin3 activation is not sufficient to direct duct-to-beta cell transdifferentiation in the adult pancreas.</a> J Biol Chem. 288 (35), 25297-25308 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Praca ta szczegółowo opisuje metodologię stojącą za infuzją przewodu trzustkowego, skutecznym mysim modelem dostarczania genów i innych cząsteczek specyficznie i skutecznie do trzustki. Niejasności w specyfice procedury między różnymi grupami uwypukliły potrzebę ustandaryzowanego protokołu 8,9,10.
Procedura składa się z kilku krytycznych etapów, począwszy od selekcji młodych, zdrowych myszy. Perforacj...

Trzustka jest dwufunkcyjnym organem, zawierającym zarówno składniki endokrynne, jak i zewnątrzwydzielnicze. Trzustkę może dotykać wiele patologii, w tym cukrzyca, zapalenie trzustki i rak trzustki1. Wszystkie te trzy choroby wyznaczają aktywne obszary badań, nie tylko w celu opracowania natychmiastowej terapii, ale także w celu lepszego zrozumienia ich patofizjologii.
Ukierunkowana metoda terapeutyczna byłaby korzystna. Opracowaliśmy technikę infuzji przewodu trzustkowego, która jest skuteczną i selektywną metodą dostarczania leków i wirusów do komórek trzustki. W tym modelu przewód trzustkowy jest selektywnie kaniulowany, a wspólny przewód żółciowy jest niedrożny, co pozwala na dostarczenie wyłącznie do trzustki.
Ta technika może pozwolić na śledzenie linii określonych typów komórek, aby dokładniej wyjaśnić szlaki rozwojowe ważne dla rozwoju i patologii trzustki2,3. Różne promotory w wektorach wirusowych pozwalają na specyficzne ukierunkowanie linii komórkowych i wprowadzenie genów do tych linii komórkowych4,5. Praca ta demonstruje ekspresję białka zielonej fluorescencji (GFP) w trzustce po infuzji przewodu trzustkowego wektora wirusowego wyrażającego GFP w porównaniu z pozorowaną operacją.

<table><tbody><tr><td>Myszy (25 - 30g, 8-12 tygodni)</td><td>Jackson Laboratory</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketofen</td><td>Henry Schein Inc.</td><td>5487</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (70%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34923</td><td></td></tr><tr><td>Sterylny roztwór soli</td><td>fizjologicznej Baxter Healthcare Corp.</td><td>2B-13-00</td><td></td></tr><tr><td>Sprzęt</td><td></td><td></td><td></td>ochronny</tr><tr><td>Produkt</td><td></td><td></td> do usuwania włosów <td>Nair lub trymer</td></tr><tr><td>Podkładki z gazy 2 cale x 2 cale</td><td>Fisher Healthcare</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Igły (30,5 G i 25 G)</td> <td>Becton Dicksinson and Co.</td><td>305106 i 305122</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka dla Ketofen i Saline</td><td>Becton Dicksinson and Co.</td><td></td><td></td>309657</tr><tr><td>Strzykawka do pompy</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>4010.200V0</td><td></td></tr><tr><td>Pompy infuzyjne</td><td>Pump Systems Inc.</td><td>NE-1000</td><td></td></tr><tr><td>Cewnik infuzyjny</td><td>World Precision Instruments</td><td>CMF31G</td><td></td></tr><tr><td>Zakrzywione zaciski Bulldog (2)</td><td>Roboz</td><td>RS-7439</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Arruga</td><td>Roboz</td><td>RS-5163</td><td></td></tr><tr><td>Adson Kleszcz</td><td>Roboz</td><td>RS-5234</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt igły</td><td>Roboz</td><td>RS-7882</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Roboz</td><td>RS-5982</td><td></td></tr><tr><td>Aplikatory z bawełnianą końcówką</td><td>Sprzedaż i usługi dla lekarzy</td><td>22-9988</td><td></td></tr> Mikroskop <tr><td>preparacyjny</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>szew</td><td>Owensa i drobnych</td><td>SXMD1B402</td><td></td></tr></tbody></table>

wlew z przewodu trzustkowego: skuteczna i selektywna metoda dostarczania leków i wirusów

Pancreatic Duct Infusion: An Effective and Selective Method of Drug and Viral Delivery

Trzustka jest dwufunkcyjnym organem zawierającym zarówno składniki endokrynne, jak i zewnątrzwydzielnicze. Trzustkę może dotykać wiele patologii, w tym cukrzyca, zapalenie trzustki i rak trzustki. Wszystkie te trzy choroby wyznaczają aktywne obszary badań, nie tylko w celu opracowania natychmiastowej terapii, ale także w celu lepszego zrozumienia ich patofizjologii. Istnieje niewiele narzędzi do rozwijania tych obszarów badań. Wlew do przewodu trzustkowego jest ważną techniką, która może pozwolić na śledzenie linii, wprowadzanie genów i celowanie specyficzne dla linii komórkowej. Technika ta wymaga skomplikowanego wypreparowania drugiej części dwunastnicy i bańki, a następnie niedrożności przewodu żółciowego i kaniulacji przewodu trzustkowego. Chociaż technika ta jest początkowo trudna technicznie, zastosowań jest niezliczona ilość. Niejasności w szczegółach procedury między grupami uwypukliły potrzebę wprowadzenia standardowego protokołu. W pracy opisano ekspresję białka zielonej fluorescencji (GFP) w trzustce po infuzji przewodu trzustkowego wektora wirusowego wyrażającego GFP w porównaniu z pozorowaną operacją. Napar, a tym samym ekspresja, jest specyficzna dla trzustki, bez ekspresji obecnej w żadnym innym typie tkanki.

Dzięki praktyce i starannej technice chirurgicznej przeżywalność tych myszy powinna wynosić ponad 95%. Po tygodniu od infuzji pożądany efekt powinien być widoczny w trzustce. Do infuzji do przewodu trzustkowego wykorzystano myszy w wieku od 10 do 12 tygodni. W tym przypadku zastosowano wirusa towarzyszącego adenowirusom serotypu 8 (AAV8) z promotorem CMV do ekspresji zielonego białka fluorescencyjnego (GFP), w porównaniu do operacji pozorowanej. Trzustki myszy pobrano 7 dni po infuzjach. ...

Infuzja przewodu trzustkowego jest ważną techniką, która pozwala na śledzenie linii, wprowadzanie genów i celowanie specyficzne dla linii komórkowych. Przedstawiono tutaj technikę infuzji przewodu trzustkowego do dostarczania leków i wirusów do komórek trzustki.

Wlew z przewodu trzustkowego: skuteczna i selektywna metoda dostarczania leków i wirusów

The pancreas is a bifunctional organ with both endocrine and exocrine components. A number of pathologies can afflict the pancreas, including diabetes, ...

Ogólnym celem procedury infuzji do przewodu trzustkowego jest umożliwienie śledzenia linii komórkowych, wprowadzenia genów oraz celowania w konkretne linie komórkowe w trzustce. Metoda ta może pomóc w znalezieniu odpowiedzi na kluczowe pytania dotyczące chorób dotykających trzustkę, w tym przewlekłego zapalenia trzustki, cukrzycy oraz raka trzustki. Na początku umieść znieczuloną mysz pod mikroskopem stereoskopowym w taki sposób, aby jej brzuch znajdował się w centrum pola widzenia.Unieruchom zwierzę za pomocą taśmy chirurgicznej, a następnie nałóż maść oftalmiczną do oczu, aby zapobiec ich wysychaniu. Następnie pokryj brzuch myszy grubą warstwą kremu do depilacji. Po około trzech minutach delikatnie zetrzyj krem gazą nasączoną 70% ethanol, aby usunąć wszystkie włosy.Na koniec przemyj skórę 70% etanolem, a następnie 10% roztworem powidonu jodowego, aby usunąć zanieczyszczenia i zdezynfekować skórę. Aby rozpocząć operację, wykonaj skalpelem nacięcie skóry w linii środkowej, rozciągając je od wyrostka mieczykowatego do pępka. Następnie za pomocą pęsety Adsona unieś otrzewną i wykonaj nożyczkami mały otwór w linii środkowej.Rozszerz nacięcie wzdłuż linii środkowej otrzewnej tak, aby jego długość była równa długości nacięcia skóry. Następnie, używając tępych retraktorów, unieś wątrobę, a po odsłonięciu wspólnego przewodu żółciowego, zacisnij go zakrzywionym naczyniowym kleszczykiem typu bulldog. Zidentyfikuj dwunastnicę i za pomocą kleszczyków Arruga odciągnij ją w kierunku ogonowym, aby odsłonić brodawkę widoczną jako biała plamka na przedniej ścianie drugiej części dwunastnicy.Aby zidentyfikować przewód trzustkowy, odsunąć dwunastnicę w kierunku ogonowym, następnie ustawić igłę o rozmiarze 30-1/5 gauge stycznie do dwunastnicy i wykonać nakłucie jej ściany w miejscu przeciwległym do brodawki. W celu wprowadzenia roztworu, wprowadzić cewnik podłączony do pompy infuzyjnej przez wykonaną duodenotomię i przesuwać go wzdłuż przewodu, aż stanie się widoczny w naczyniu, jednak nie dalej niż jeden centymetr, aby uniknąć pominięcia mniejszych dopływów przewodu. Unieruchomić cewnik, zaciskając go drugim zakrzywionym naczyniowym zaciskiem typu bulldog.Następnie włącz pompę, aby rozpocząć infuzję 150 µl roztworu do przewodu. Następnie wstrzyknij do otrzewnej myszy około 1,5 ml soli fizjologicznej, aby zapobiec utracie infuzowanego objętości, a następnie przykryj odsłonięte jelita zwilżoną gazą, aby zapobiec wysychaniu. Po zakończeniu infuzji zwolnij unieruchomiony cewnik i za pomocą klemy typu bulldog delikatnie usuń go z przewodu trzustkowego.Następnie zwolnij zacisk z przewodu żółciowego wspólnego. Zamknij otrzewną i skórę, stosując ciągły szew jednowarstwowy, i podaj pierwszą z dwóch dawek leku przeciwbólowego, z których druga zostanie podana następnego dnia. Następnie umieść mysz w klatce ustawionej pod lampą grzewczą i zapewnij zwierzęciu dostęp do pożywienia i wody ad libitum.Obserwuj mysz do czasu odzyskania przez nią wystarczającej świadomości, objawiającej się przyjęciem pozycji grzbietowej. Siedem dni po operacji pobierz od uśpionego zwierzęcia trzustkę oraz śledzionę, wątrobę i dwunastnicę służące jako kontrole. Zanurz wszystkie wyizolowane tkanki w 4% roztworze paraformaldehydu i utrwalaj je w temperaturze czterech stopni Celsius overnight.Po utrwaleniu tkanek należy poddać próbki krioprotekcji, mocząc je w 30% roztworze sacharozy w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez noc. Po nocnej krioprotekcji próbki należy gwałtownie zamrozić w ciekłym azocie, a następnie za pomocą mikrotomu wykonać przekroje tkanek o grubości sześciu mikrometrów. Na koniec należy wykonać obrazowanie przekrojów pod mikroskopem fluorescencyjnym.Przedstawiono tutaj obrazy mikroskopowe przekrojów trzustki wyciętych od myszy siedem dni po operacji pozorowanej oraz infuzji do przewodu trzustkowego AAV8 niosącego gen GFP. Wątroba, śledziona i dwunastnica wyizolowane z myszy, której podano AAV8, nie wykazały sygnału GFP, podczas gdy w trzustce stwierdzono wyraźną ekspresję GFP, co potwierdza swoiste dla trzustki dostarczenie wirusa po infuzji do przewodu trzustkowego. Po opanowaniu techniki, jej prawidłowe wykonanie zajmuje 10 minut.Podczas wykonywania tej procedury bardzo ważne jest przeprowadzenie starannej dyssekcji oraz wykonanie jak najmniejszej duodenotomii w celu wprowadzenia cewnika. Po opracowaniu, technika ta otworzyła drogę badaczom zajmującym się trzustką do analizy szeregu patologii dotykających tego organu, w tym przewlekłego zapalenia trzustki, cukrzycy oraz raka trzustki, zarówno w modelach gryzoni, jak i większych zwierząt. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać bardzo dobrą wiedzę na temat tego, jak skutecznie i selektywnie przeprowadzić infuzję do przewodu trzustkowego.

pancreatic-duct-infusion-an-effective-selective-method-drug-viral

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Kontrola i analiza obwodów neuronalnych in vivo zostałyby ułatwione dzięki technologii dostarczania wirusów i innych odczynników do wybranych trójwymiarowych zestawów obszarów mózgu. Prezentujemy wykonanie zindywidualizowanej macierzy wtryskiwaczy płynowych oraz dostarczanie kodowanych wirusowo sensybilizatorów optycznych, co umożliwia optyczną manipulację złożonymi obwodami mózgowymi.

Skalowalne macierze wtryskiwaczy płynowych do wirusowego targetowania nienaruszonych trójwymiarowych obwodów mózgowych

Ten film opisuje protokół dosercowego wstrzykiwania retrowirusów do transgenicznej myszy, aby zapewnić transfer genów do proliferujących zmian trzustkowych β przednowotworowych. Metoda ta może również pomóc w ocenie funkcji genów kandydujących w przerzutach nowotworowych.

Dosercowe dostarczanie wektorów wirusowych: technika wstrzykiwania wektorów wirusowych dosierdziowo w celu zbadania przerzutów do trzustki w modelu mysim

MikroRNA odgrywają kluczową rolę w mózgu i są potencjalnymi celami do modelowania neurodegeneracji. Jednak zaburzanie poziomów miRNA jest trudne ze względu na krótką długość miRNA i niedostępność tkanki mózgowej. Ten film przedstawia metodę projektowania antagomiru i dostarczania specyficznego dla mózgu przy użyciu neuropeptydu u myszy.

Prosta alternatywa dla wstrzyknięcia stereotaktycznego w celu specyficznego dla mózgu knockdownu miRNA

Wirusoterapie onkolityczne są w trakcie opracowywania jako nowe terapie w leczeniu raka wątrobowokomórkowego (HCC).  W tym artykule opisano metodę lokoregionalnej terapii HCC poprzez wątrobowe podawanie wirusa onkolitycznego do tętnic.

Przeztętnicze podawanie wirusów onkolitycznych w lokoregionalnej terapii ortotopowego HCC u szczurów

Po przebiciu aorty przez żyłę główną dolną (IVC) w celu wytworzenia przetoki aortalno-kasowej u myszy, roztwór zawierający lek jest wprowadzany do IVC za pomocą tej samej igły, a następnie następuje inkubacja. Ta metoda umożliwia skuteczniejsze dostarczanie leku do śródbłonka żylnego w porównaniu z drogą zewnętrzną.

Doświetlne podawanie leku do śródbłonka przetoki tętniczo-żylnej myszy

Unikalny model zacisku wnękowego wątroby szczura został opracowany do badania wpływu cząsteczek farmakologicznych na łagodzenie uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego. Model ten obejmuje bezpośrednią kaniulację dopływu wrotnego do niedokrwionego segmentu wątroby przez odgałęzienie żyły wrotnej, co pozwala na bezpośrednie dostarczenie wątrobowe.

Metoda bezpośredniego segmentalnego dostarczania dowątrobowego przy użyciu modelu klamry Hilar wątroby szczura

Przeszczep wysp trzustkowych jest sposobem na osiągnięcie normoglikemii w cukrzycy typu 1. Ten artykuł koncentruje się na technice przeszczepiania drogą wewnątrzwrotną w celu utrzymania prawidłowego poziomu glukozy u myszy z cukrzycą.

Wewnątrzportalowy przeszczep wysp trzustkowych w modelu mysim

Przedstawiono protokół tworzenia zmodyfikowanych genowo ludzkich pseudowysp trzustkowych z rozproszonych ludzkich komórek wysp trzustkowych, które są transdukowane przez lentiwirusa niosącego krótkie RNA spinki do włosów (shRNA). Protokół ten wykorzystuje łatwo dostępne naczynia enzymatyczne i hodowlane, może być łatwo wykonywany i wytwarza genetycznie zmodyfikowane ludzkie pseudowysepki odpowiednie do badań funkcjonalnych i morfologicznych.

Wyciszanie genów za pośrednictwem lentiwirusa w ludzkiej pseudowysepce przygotowanej na płytkach o niskim przyłączeniu

Obrazowanie in vivo trzustki w wysokiej rozdzielczości było ułatwione dzięki oknu obrazowania przyżyciowego trzustki.

Stabilizowana podłużna wizualizacja trzustki na poziomie komórkowym in vivo w modelu mysim z oknem obrazowania przyżyciowego trzustki

Badanie to opracowało uproszczoną metodę efektywnego wyodrębniania funkcjonalnych wysetek pierwotnych i komórek acynarnych z trzustki myszy, co stanowi cenne narzędzie do badania komunikacji międzykomórkowej w patogenezie ostrej cukrzycy indukowanej zapaleniem trzustki.

Prosta i szybka metoda jednoczesnej izolacji pierwotnych wysp i pierwotnych komórek acinowych trzustki od myszy

Poznaj technikę wlewu z przewodu trzustkowego u myszy do śledzenia linii komórkowych i wprowadzania genów. Ta metoda umożliwia precyzyjne badanie trzustki oraz chorób takich jak cukrzyca i rak trzustki.

Wlew z przewodu trzustkowego: skuteczna i selektywna metoda dostarczania leków i wirusów

Przeglądaj więcej filmów