Półautomatyczna analiza morfologii mięśni szkieletowych myszy i składu włókien

Ogólnym celem tego protokołu jest wykorzystanie najnowocześniejszej immunohistochemii do dokładnej i szybkiej identyfikacji typów włókien mięśni szkieletowych. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie biologii mięśni, takie jak to, czy zmiany rodzaju włókien są przyspieszane przez utratę funkcjonalnych białek. Chociaż metoda ta może zapewnić wgląd w wiele modeli chorób mięśni, może być również stosowana w systemach takich jak modele knock in i knock out, aby ujawnić większy wpływ pojedynczej cząsteczki na podstawowe funkcje mięśni.

Na początek wysusz zamrożone odcinki mięśni myszy na naładowanych szkiełkach przez około pół godziny. Po wyschnięciu narysuj obramowanie wokół sekcji na każdym szkiełku za pomocą hydrofobowego pisaka PAP z barierą. Następnie, aby zablokować niespecyficzne wiązanie przeciwciał, załaduj około 250 mikrolitrów 5% BSA do PBS w narysowanych granicach i inkubuj szkiełka w temperaturze pokojowej przez godzinę.