Name: Pomiary cystometryczne i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u obudzonych szczurów z wszczepionym cewnikiem i elektrodami umożliwiającymi wielokrotne pomiary (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-30T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Naucz się techniki wszczepiania cewnika do pęcherza i elektrod zwieracza cewki moczowej u szczurów. Ta metoda umożliwia wielokrotne pomiary cystometryczne u przebudzonych zwierząt w badaniach urologii funkcjonalnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie mają żadnych podziękowań.

Wszystkie opisane tutaj procedury zostały zatwierdzone przez Austriacką Rządową Komisję Etyki ds. Badań na Zwierzętach (Bundesministerium für Wissenschaft, Forschung und Wirtschaft, WF / V /3b) i były zgodne z wytycznymi Stowarzyszenia Oceny Opieki nad Zwierzętami Laboratoryjnymi dla zwierząt. Szczury użyte do tego podejścia były samicami, 12-tygodniowymi szczurami Lewisa. Używaj sterylnych narzędzi przez cały czas trwania protokołu.
1. Przygotowanie materiału
<ol>
	<li>Produkcja cewnika
	<ol>
		<li>Przyciąć cewnik (rurka polietylenowa PE-50) na odpowiednią długość (20 do 25 cm), aby dopasować go do wielkości zwierzęcia. 
		UWAGA: Zostaw trochę dodatkowej długości do tunelowania i łatwiejszej obsługi.</li>
		<li>Rozszerz jeden koniec zapalniczką, aby uzyskać zaokrągloną końcówkę. Sprawdź, czy cewnik jest ostatecznie prawidłowo otwarty i.</li>
		<li>Umieść silikonową rurkę o długości 2 mm nad cewnikiem, aż znajdzie się tuż pod rozszerzonym końcem.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Produkcja elektrod
	<ol>
		<li>Przygotuj drut stalowy pokryty politetrafluoroetylenem o długości 20-25 cm (odpowiednia długość w zależności od wielkości zwierzęcia).</li>
		<li>Przygotuj srebrny drut o długości 2 cm i przekręć końce, aż pozostanie mała pętla. Zdejmij 2 mm izolacji teflonowej na jednym końcu. skręcony srebrny drut zakończony do odizolowanego drutu stalowego.</li>
		<li>Nałóż konwencjonalny lakier do paznokci w strefie powlekania. Przygotuj rurkę polietylenową o długości 4 mm na powlekanym obszarze i uszczelnij koniec, przykładając ciepło do kleszczy uciskających.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Przygotowanie zwierząt
<ol>
	<li>znieczulenie
	<ol>
		<li>Użyj odpowiedniego koktajlu znieczulającego zatwierdzonego przez instytucję do znieczulenia ogólnego.</li>
		<li>Przygotuj koktajl znieczulający z medetomidyną (0,15 mg/kg), midazolamem (0,08 mg/kg) i fentanylem (0,01 mg/kg) i wstrzyknij domięśniowo za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml z igłą 27 G.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie chirurgiczne
	<ol>
		<li>Ogol brzuch elektryczną maszynką do golenia, w tym okolice narządów płciowych i plecy na poziomie łopatek.</li>
		<li>Najpierw zdezynfekuj okolice brzucha i szyi 70% etanolem, a następnie 3 naprzemiennie peelinguj roztworem powidonu i jodu.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Implantacja cewnika do pęcherza moczowego
<ol>
	<li>Wykonaj laparotomię w linii środkowej na poziomie trzeciego i czwartego strzyka (o długości około 2 do 2,5 cm) za pomocą skalpela do skóry i nożyczek chirurgicznych do mięśnia brzucha.</li>
	<li>Odsłoń pęcherz, prowadząc ścianę brzucha w kierunku czaszkowo-ogonowym i zamocuj go w tej pozycji, umieszczając tylną część kleszczy za pęcherzem, aby uniknąć zmiany pozycji.</li>
	<li>Umieść szew ze sznurka torebkowego wokół kopuły pęcherza moczowego za pomocą niewchłanialnego szwu monofilamentowego 6-0 z igłą ze stożkową końcówką.</li>
	<li>Naciąć kopułę pęcherza moczowego wewnątrz sznurka torebki, za pomocą końcówki skalpela lub igły 18G, aby wprowadzić cewnik do pęcherza moczowego (patrz krok 1 protokołu).</li>
	<li>Wprowadzić cewnik wstępnie napełniony sterylnym fizjologicznym roztworem 0,9% chlorku sodu i ostrożnie wycofać cewnik pęcherza moczowego, aż rozszerzony otwór cewnika znajdzie się tuż pod kopułą pęcherza.</li>
	<li>Zabezpiecz szew sznurkowy wokół cewnika i wykonaj szew zatrzymujący wokół korpusu cewnika w celu dalszego mocowania.</li>
	<li>Sprawdź, czy nie ma wycieku przez kopułę pęcherza, powoli napełniając pęcherz przez cewnik sterylnym fizjologicznym 0,9% roztworem chlorku sodu.</li>
</ol>
4. Implantacja elektrody zwieracza cewki moczowej
<ol>
	<li>Przygotuj trzy elektrody do implantacji (patrz krok 1 protokołu).</li>
	<li>Oznacz jedną elektrodę kolorowym trwałym pisakiem w celu dalszej identyfikacji przyszłej elektrody zerowej. Dezynfekuj elektrody 70% etanolem. 
	UWAGA: Cewniki nie nadają się do zabiegów sterylizacji termicznej i chemicznej. Zamiast tego sterylizuj elektrody na zimno przez 24 godziny.</li>
	<li>Przedłuż nacięcie brzucha nożyczkami chirurgicznymi aż do kości łonowej, ale nie przecinaj spojenia łonowego.</li>
	<li>Zidentyfikuj cewkę moczową i utwórz kieszonkę, używając cienkich kleszczy po obu stronach cewki moczowej, ale unikaj urazów naczyń krwionośnych lub nerwów.</li>
	<li>Zidentyfikuj odpowiednie woreczki tłuszczowe w pobliżu cewki moczowej w tym oknie.</li>
	<li>Przymocuj elektrody obustronnie do odpowiedniego woreczka tłuszczowego za pomocą niewchłanialnego szwu monofilamentowego 6-0. 
	UWAGA: Końcowa pozycja elektrod powinna być obustronna w środkowej części cewki moczowej.</li>
	<li>Zwiąż obie elektrody razem niewchłanialnym szwem monofilamentowym 6-0.</li>
	<li>Zszyj oznaczoną elektrodę zerową do mięśnia ściany brzucha w odległości od cewki moczowej. Zwiąż wszystkie trzy elektrody jednym szwem.</li>
</ol>
5. Drążenie tunelu
<ol>
	<li>Wykonaj małe nacięcie skóry między łopatkami w celu tunelowania.</li>
	<li>Przyłóż elektrody tunelowe do szyjki i wykonaj ostateczną kontrolę pod kątem prawidłowego umieszczenia oraz sprawdź położenie elektrod po tunelowaniu.</li>
	<li>Tunel cewnika pęcherza moczowego do poziomu łopatek - podczas tunelowania cewnika należy zwracać uwagę na pęcherz, aby uniknąć skręcenia pęcherza. W tym celu należy przytrzymać cewnik tuż przed wejściem do kopuły pęcherza, aby uniknąć skręcenia pęcherza.</li>
	<li>Zamknij mięśnie brzucha za pomocą ciągłych lub przerywanych szwów za pomocą wchłanialnego szwu z polifilamentu 4-0. Zamknij nacięcie skóry przerwanymi szwami materaca.</li>
	<li>Rozciągnij zwierzę na całą długość, aby uzyskać maksymalne rozciągnięcie drutów elektrod i cewnika.</li>
	<li>Zamocuj druty cewnika i elektrody za pomocą zatopionego szwu do mięśnia barkowego.</li>
	<li>Zamknij skórę pojedynczym szwem za pomocą szwu 4-0.</li>
</ol>
6. Dopasowanie uprzęży
<ol>
	<li>Dopasuj uprząż do zwierzęcia, naciągając uprząż na głowę zwierzęcia i pociągnij kończyny przednie do pozycji końcowej między dwoma silikonowymi paskami. Sprawdź rozmiar uprzęży w zależności od wagi zwierzęcia przed zabiegiem za pomocą dystrybutora.</li>
	<li>Przełóż cewnik pęcherza moczowego do centralnego otworu wiązki, a elektrody przez specjalnie wykonany otwór za pomocą wiertła dostosowanego do rozmiaru drutów elektrod.</li>
	<li>Wyreguluj uprząż, pociągając za silikonowe paski. Wyreguluj uprząż tak, aby nie była zbyt luźna, ale upewnij się, że pozostało trochę miejsca, aby utrzymać zdolność poruszania się szczura.</li>
	<li>Użyj opaski kablowej, aby przymocować paski silikonowe.</li>
	<li>Przytnij długość cewnika pęcherza moczowego do 3 cm nad uprzężą, podłącz do korka 23-G, a na koniec przymocuj go do uprzęży.</li>
</ol>
7. Produkcja łącznika elektrody
<ol>
	<li>Przygotuj trzy małe rurki termokurczliwe (inny kolor dla elektrody zerowej). Przygotuj dwie kolejne rurki termokurczliwe w odpowiednim większym rozmiarze.</li>
	<li>Skróć długość przewodów elektrod do optymalnej długości, aby można je było później podłączyć do wtyczki żeńskiej, nie będąc zbyt luźnymi lub zbyt krótkimi. Zdejmij izolację teflonową z trzech drutów (około 2 mm) i skręć stalowe druty w sznurek.</li>
	<li>Umieść duże rurki termokurczliwe na wszystkich przewodach, umieść małe rurki pojedynczo dla wszystkich trzech drutów i użyj kolorowej rurki jako elektrody zerowej.</li>
	<li>elektrody do męskiej wtyczki 3-połączeniowej. Umieść elektrodę zerową na środku i obkurcz trzy małe pojedyncze rurki nad lutowanym obszarem.</li>
	<li>Skurcz pierwszą z większych rurek na końcu poszczególnych końców rurek, a ostatnią dużą rurkę do męskiej krawędzi wtyczki.</li>
	<li>Podłącz wtyczkę męską do złącza żeńskiego przymocowanego do wiązki przewodów i przymocuj kawałkiem taśmy dla większego bezpieczeństwa.</li>
</ol>
8. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Oczyść obszary operacyjne i zdezynfekuj jodonem powidonu.</li>
	<li>Umieść zwierzę na poduszce grzewczej do momentu przebudzenia i podaj 0,9% roztwór chlorku sodu w celu zastąpienia wody, w oparciu o lokalne wytyczne dotyczące opieki nad zwierzętami podczas i po operacji.</li>
	<li>Leki przeciwbólowe (meloksykam 1 mg/kg) i antybiotyki (sulfadoxinum 200 mg, trimetoprimum 40 mg, 15 mg/kg) należy podawać podskórnie w postaci złożonego roztworu do wstrzykiwań. Dwa razy dziennie podawaj leki przeciwbólowe (rano i wieczorem), a raz dziennie podawaj antybiotyki przez pięć kolejnych dni.</li>
	<li>Kontynuuj stosowanie antybiotyków w tej samej dawce przez cały okres obserwacji w dwóch do trzech wstrzyknięciach tygodniowo.</li>
	<li>Codziennie sprawdzaj, czy uprząż jest prawidłowo dopasowana i przeprowadzaj inspekcję pola operacyjnego, zwłaszcza w okolicy szyi. Wyreguluj uprząż, jeśli stanie się zbyt ciasna, ostrożnie pociągając za silikonowe paski.</li>
	<li>Cewnik należy przepłukiwać regularnie raz w tygodniu, aby uniknąć blokady.</li>
</ol>
9. Przygotowanie do pomiaru cystometrycznego
<ol>
	<li>Pierwsze pomiary cystometryczne należy wykonać po sześciu dniach po operacji. 
	UWAGA: Na wcześniejsze pomiary mogą mieć wpływ leki przeciwbólowe i/lub podrażnienie urotelialne spowodowane implantacją cewnika.</li>
	<li>Włącz wyłącznik główny, komputer i wzmacniacz EMG.</li>
	<li>Napełnić pompę strzykawkową 0,9% chlorkiem sodu ogrzanym w temperaturze pokojowej. Otwórz złącza trójdrogowe jeden po drugim w sposób malejący, zaczynając od pompy, i przepłucz rurki. 
	UWAGA: Sprawdź dokładnie, czy nie ma pozostałych pęcherzyków powietrza, ponieważ pęcherzyki zmienią pomiary cystometryczne.</li>
</ol>
10. Kalibracja
<ol>
	<li>Uruchom program uroflowmeter software i przejdź do Kalibracja.</li>
	<li>Zamknij trójdrożne złącze do pompy i zwierzęcia.</li>
	<li>Otwórz zawór do podłączonego manometru i naciśnij zero w programie.</li>
	<li>Ustaw ciśnienie na manometrze na 100 mmHg i naciśnij przycisk 100 mmHg w programie. Naciśnij przycisk potwierdź, aby zapisać korektę kalibracji. Okno zamknie się automatycznie.</li>
	<li>Zamknij zawór manometru i otwórz trójdrożne złącza od pompy do zwierzęcia, aby być gotowym do pomiaru.</li>
</ol>
11. Baza danych zwierząt (Animal DB)
<ol>
	<li>Aby zarejestrować zwierzęta, nadaj im zwięzły identyfikator.</li>
	<li>Wprowadź dalsze dane, takie jak data SCI, początek leczenia, data implantacji cewnika, grupa doświadczalna i data urodzenia zwierzęcia.</li>
	<li>Aby w końcu zarejestrować dane, naciśnij "zapisz rekord" i zapisz do pliku.</li>
</ol>
12. Ustawienia pomiaru przed rejestracją
<ol>
	<li>Uruchom oprogramowanie, naciskając przycisk start.</li>
	<li>Wybierz zwierzę i naciśnij skalę tary i ciśnienie zerowe. 
	UWAGA: Podczas umieszczania zwierzęcia w uwięziku należy zachować ostrożność, aby żaden nie był zablokowany, ponieważ może to doprowadzić do usunięcia przewodu EMG.</li>
</ol>
13. Przygotowanie zwierząt
<ol>
	<li>Wyjmij zatyczkę cewnika i odłącz wtyczkę EMG od wiązki przewodów.</li>
	<li>Umieść szczura w uwięzi. Zamknij ogranicznik i zablokuj uprząż za pomocą zacisku.</li>
	<li>Wyjmij cewnik i wtyczkę EMG z ogranicznika.</li>
	<li>Umieść ogranicznik w jednostce catamount. Przełóż ogon przez rurkę i przymocuj rurkę taśmą, aby uniknąć ruchów.</li>
	<li>Podłącz męską wtyczkę EMG do żeńskiego złącza EMG nagrywającego.</li>
	<li>Ponownie naciśnij ciśnienie zerowe, a następnie podłącz cewnik do rurki napełniającej/nagrywającej. Sprawdź ciśnienie w oprogramowaniu. 
	UWAGA: Ciśnienie powinno być dodatnie, około 5-10 cm H2O na linii podstawowej. Jeśli ciśnienie jest ujemne, odłącz cewnik od kaniuli, naciśnij ciśnienie zerowe, a następnie ponownie podłącz cewnik.</li>
</ol>
14. Nagrywanie
<ol>
	<li>Jeśli cewnik i EMG są podłączone, naciśnij uruchom pompę i nagrywanie.</li>
	<li>Dostosuj prędkość napełniania do potrzeb doświadczalnych w μl/min.</li>
	<li>Zanotuj godzinę rozpoczęcia nagrywania i temperaturę w pomieszczeniu w dzienniku pokładowym.</li>
	<li>Aby zatrzymać zapis cystometryczny, zatrzymaj pompę, naciskając przycisk uruchom pompę i ponownie naciśnij przycisk nagrywania. 
	UWAGA: Pompa będzie wyłączona, a zielone światło na pompie jest wyłączone.</li>
	<li>Odłącz cewnik i użyj zatyczki 23G, aby zamknąć końcówkę cewnika. Odłącz EMG.</li>
	<li>Otwórz przód krępa i wyprowadź szczura z ogranicznika. 
	UWAGA: Ostrożnie obchodź się ze szczurem i monitoruj przewody, aby uniknąć zablokowania.</li>
	<li>Podłącz cewnik z powrotem do uprzęży. Ponownie podłącz wtyczkę EMG do wiązki przewodów i owiń wtyczkę taśmą. 
	UWAGA: Jeśli zwierzę ma patologiczny stan dolnych dróg moczowych, odciągnij pęcherz na końcu ręcznie, aby uniknąć nadmiernego rozdęcia pęcherza.</li>
	<li>Umieść zwierzę z powrotem w jego domowej klatce.</li>
	<li>Zamknij program, naciskając przycisk Escape.</li>
	<li>Wyczyść ogranicznik i zlewkę.</li>
	<li>Zamknij trójdrożne złącza do pompy i wylotu zwierzęcia.</li>
	<li>Wyłącz komputer, jednostkę EMG i system za pomocą wyłącznika głównego. 
	UWAGA: Dane są zapisywane w osobnym folderze "Zarejestrowane dane" z podfolderem pliku zmierzonego identyfikatora szczura. Pojedyncze nagrania są sortowane w folderach z pojedynczym identyfikatorem szczura według daty.</li>
</ol>

<ol><li>Andersson, K. E., Soler, R., Fullhase, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+urodynamic+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Rodent models for urodynamic investigation.</a> Neurourol Urodyn. 30, 636-646 (2011).</li>
<li>Schneider, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+urodynamic+model+for+lower+urinary+tract+assessment+in+awake+rats%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">A novel urodynamic model for lower urinary tract assessment in awake rats.</a> BJU Int. 115, Suppl 6. 8-15 (2015).</li>
<li>Cruz, C. D., Cruz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury+and+bladder+dysfunction%3A+new+ideas+about+an+old+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+World+Journal%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury and bladder dysfunction: new ideas about an old problem.</a> Scientific World Journal. 11, 214-234 (2011).</li>
<li>de Groat, W. C., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+in+reflex+pathways+to+the+lower+urinary+tract+following+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Plasticity in reflex pathways to the lower urinary tract following spinal cord injury.</a> Exp Neurol. 235, 123-132 (2012).</li>
<li>Matsuura, S., Downie, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+anesthetics+on+reflex+micturition+in+the+chronic+cannula-implanted+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Effect of anesthetics on reflex micturition in the chronic cannula-implanted rat.</a> Neurourol Urodyn. 19, 87-99 (2000).</li>
<li>Cannon, T. W., Damaser, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anesthesia+on+cystometry+and+leak+point+pressure+of+the+female+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of anesthesia on cystometry and leak point pressure of the female rat.</a> Life Sci. 69, 1193-1202 (2001).</li>
<li>Patra, P. B., Thorneloe, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+sensitivity+to+afferent+stimulation+and+impact+of+overactive+bladder+therapies+in+the+conscious%2C+spontaneously+hypertensive+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced sensitivity to afferent stimulation and impact of overactive bladder therapies in the conscious, spontaneously hypertensive rat.</a> J Pharmacol Exp Ther. 338, 392-399 (2011).</li>
<li>Herrera, G. M., Meredith, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+variation+in+urodynamics+of+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Diurnal variation in urodynamics of rat.</a> PloS One. 5, e12298(2010).</li>
<li>Chang, H. Y., Havton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+urethane+and+isoflurane+on+external+urethral+sphincter+electromyography+and+cystometry+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential effects of urethane and isoflurane on external urethral sphincter electromyography and cystometry in rats.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 295, F1248-F1253 (2008).</li>
<li>Yaksh, T. L., Durant, P. A., Brent, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micturition+in+rats%3A+a+chronic+model+for+study+of+bladder+function+and+effect+of+anesthetics%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Micturition in rats: a chronic model for study of bladder function and effect of anesthetics.</a> Am J Physiol. 251, R1177-R1185 (1986).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Protokół ten opisuje procedurę chirurgiczną implantacji elektrod cewnika stałego i zwieracza cewki moczowej oraz technikę zapisu cystometrycznego u przytomnych, lekko skrępowanych szczurów, obejmującą zarówno jednoczesną analizę pęcherza moczowego, jak i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej.
Krytycznymi krokami podczas operacji jest staranne wszczepienie cewnika do pęcherza moczowego, unikanie wycieku i rozległej manipulacji. Co więcej, precyzyjna implantacja elektrod obustronnych do zwieracz...

Aby przeanalizować funkcję i dysfunkcję magazynowania moczu oraz funkcji i dysfunkcji oddawania moczu, większość badań wykorzystywała modele gryzoni. Poprzez sekwencyjną aktywację odruchów wytwarzana jest mikcja. Koordynacja tych odruchów jest niezbędna do skutecznego oddawania moczu1. Techniki rejestracji cystometrycznej dostarczają cennych narzędzi do analizy funkcji pęcherza moczowego pod jego kontrolą neuronalną1.
Większość konwencjonalnych cystometrii u szczurów jest wykonywana jako pojedyncza, końcowa analiza w znieczuleniu, głównie uretanowa2, i skupia się wyłącznie na pęcherzu moczowym. Jednak w niektórych patologiach, takich jak neurogenna dysfunkcja dolnych dróg moczowych (NLUTD), nie tylko pęcherz moczowy, ale także ujście pęcherza, zewnętrzny zwieracz cewki moczowej, jest dysfunkcyjny3,4. To sprawia, że NLUTD jest trudny do obserwacji, jeśli tylko pęcherz moczowy jest badany w jednym pomiarze cystometrycznym. Aby uzyskać wiarygodne wyniki, które są porównywalne z ludzkimi, konieczne jest dokładne zmierzenie zarówno funkcji pęcherza moczowego, jak i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej oraz jego interakcji2. Ponadto bardzo ważne jest przeprowadzanie analiz funkcjonalnych u obudzonych szczurów, ponieważ znieczulenie z dużym prawdopodobieństwem zmieni funkcję pęcherza moczowego2,5,6. Dobry zapis cystometryczny u obudzonych zwierząt jest podstawą do identyfikacji funkcji pęcherza moczowego i jego nieprawidłowego działania7.
Używana stacja cystometryczna dla małych zwierząt (np. stacja cystometryczna Catamount (CCS)) to jednostka do wykonywania analiz cystometrycznych u małych zwierząt obudzonych8. Za pomocą stałego cewnika do pęcherza moczowego i wszczepionych elektrod zewnętrznego zwieracza cewki moczowej, powtarzalne pomiary mogą być wykonywane przez dłuższy czas2. W związku z tym CCS stanowi cenne narzędzie do oceny nieneurogennej i NLUTD w modelu gryzoni, w którym patomechanizmy mogą się zmieniać podczas krótko- lub średnioterminowej obserwacji. Dodatkowo metoda ta obejmuje analizę cystometryczną z redukcją artefaktów przy użyciu ogranicznika do przeprowadzania pomiarów pęcherza moczowego u obudzonych szczurów.
W tym artykule opisujemy chirurgiczne podejście do trwałego wszczepienia cewnika do pęcherza moczowego i zewnętrznych elektrod zwieracza cewki moczowej, wraz z pomiarami cystometrycznymi u obudzonych szczurów.

<table><tbody><tr><td>Rurka polietylenowa PE 50</td><td>Becton Dickinson</td><td>427411</td><td>Cewnik</td></tr><tr><td>Prolene 6-0 (BV-1, 9.3 mm, 3/8c)</td><td>Ethicon</td><td>EH7403H</td><td>Szew</td></tr><tr><td>Drut stalowy pokryty teflonem</td><td>Drut Cooner</td><td>AS631</td><td>Materiał elektrody</td></tr><tr><td>Drut srebrny 0,250 mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>AGW1030</td><td>Materiał elektrody</td></tr><tr><td>Rotilabo - rura PVC</td><td>Carl Roth</td><td>97241</td><td>Uprząż</td></tr><tr><td>Vicryl rapide 4-0 (P-3, 13 mm, 3/8c)</td><td>Ethicon</td><td>V4940H</td><td></td></tr><tr><td>Szew Quick Connect Pojedyncza uprząż</td><td>SAI Infusion Technologies</td><td>QCH-23CW</td><td>Uprząż</td></tr><tr><td>Rurki termokurczliwe</td><td>ChiliTec</td><td>17894</td><td>elektrod</td></tr><tr><td>Drut lutowniczy Pb60 Sn40</td><td>Stannol</td><td>LD0029</td><td>elektrod</td></tr><tr><td>Topnik agent 157</td><td>Castolin Eutectin</td><td>157 0150</td><td>elektrod</td></tr><tr><td>Conn Unshrouded Header HDR 3 POS, 2.54mm Lut ST Thru-Hole Box</td><td>Preci-dip</td><td>801-87-050-10-001101</td><td>elektrod</td></tr><tr><td>Listwa zasilająca Conn SKT 50 POS 2.54mm, Solder ST Thru-Hole Box</td><td>Preci-dip</td><td>890-18-003-10-001101</td><td></td></tr> <tr><td>elektrodPakiet cystometrii szczurów (zawiera pompę, skalę, przetwornik ciśnienia, sprzęt do analizy cystometrycznej)</td><td>Catamount Research and Development Inc.</td><td>CAT-CYT-R</td><td></td></tr><tr><td>Wzmacniacz różnicowy z aktywną sceną</td><td>czołową AD Wzmacniacz</td> AD <td>DP-311</td> Wzmacniacz <td>EMG</td></tr><tr><td>Powściągliwy Średni rozmiar dla szczurów 200-300 g</td><td>emka Technologies</td><td>HLD-RM</td><td></td></tr><tr><td>Uro Dyn Software</td><td>Z&uuml; bogaty w uniwersyteckie</td><td></td><td></td></tr><tr><td>samice szczurów oparte na MTA (szczep Lewis) w wieku 12 tygodni</td><td>Charles River, Sulzfeld, Niemcy</td><td></td><td>zwierzęta</td></tr></tbody></table>

pomiary cystometryczne i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u obudzonych szczurów z wszczepionym cewnikiem i elektrodami umożliwiającymi wielokrotne pomiary

Cystometric and External Urethral Sphincter Measurements in Awake Rats with Implanted Catheter and Electrodes Allowing for Repeated Measurements

Funkcja dolnych dróg moczowych jest głównie oceniana za pomocą cystometrycznej analizy funkcji pęcherza moczowego u gryzoni. Konwencjonalne cystometrie są zwykle wykonywane jako analiza końcowa w znieczuleniu uretanowym. Powszechnie wiadomo, że leki znieczulające mogą wpływać na czynność pęcherza. Dlatego celem tej techniki jest wykonanie pomiarów cystometrycznych pęcherza moczowego i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u lekko skrępowanych obudzonych szczurów. W tym celu do kopuły pęcherza moczowego wszczepia się cewnik do pęcherza moczowego. Następnie dwie elektrody są wszczepiane obustronnie do zewnętrznego zwieracza cewki moczowej, a elektroda uziemiająca jest zszywana do niereagującego mięśnia szkieletowego. Cewnik pęcherza moczowego i trzy elektrody są ostatecznie tunelizowane podskórnie w okolicy szyi i mocowane do uprzęży. Dzięki tej technice dolne drogi moczowe mogą być mierzone w wielu punktach czasowych u tego samego zwierzęcia w celu oceny funkcji dolnych dróg moczowych. Głównym zastosowaniem tej techniki jest monitorowanie jednoczesnej funkcji pęcherza moczowego i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u obudzonych zdrowych szczurów oraz po indukcji choroby lub urazu. Ponadto można przeprowadzić późniejsze monitorowanie dolnych dróg moczowych podczas oceny choroby/urazu oraz w celu monitorowania skuteczności leczenia.

Schemat przedstawiający przebieg pomiarów cystometrycznych u zwierząt w stanie czuwania zaprezentowano na Rysunku 1, a anatomię wewnętrzną w kontekście implantacji cewnika pęcherzowego pokazano na Rysunku 2. Operacja trwa około 2 h. Pooperacyjna analgezja i antybiotykoterapia, zgodnie z opisem w protokole, zapewniają uśmierzenie bólu i ochronę przed infekcjami przez pięć dni po zabiegu. Po tym czasie nie zauważono żadnych oznak b...

Ten protokół po pierwsze opisuje procedurę chirurgiczną polegającą na stałym wszczepieniu cewnika do pęcherza moczowego w połączeniu z zewnętrznymi elektrodami zwieracza cewki moczowej, a po drugie, pomiar funkcji pęcherza moczowego i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u wszczepionych obudzonych zwierząt.

Pomiary cystometryczne i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u obudzonych szczurów z wszczepionym cewnikiem i elektrodami umożliwiającymi wielokrotne pomiary

Lower urinary tract function is mainly assessed by means of cystometric bladder function analysis in rodents. Conventional cystometries are usually ...

Ogólnym celem tej interwencji chirurgicznej jest obserwacja funkcji pęcherza moczowego u przytomnych szczurów podczas pomiaru cystometrycznego. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie urologii funkcjonalnej, takie jak zmiany w funkcji pęcherza moczowego spowodowane postępującą chorobą lub urazem. Główną zaletą tej techniki jest to, że pozwala na powtarzalne zapisy cystometryczne u szczurów alarmowych.Po znieczuleniu zwierzęcia do zabiegu chirurgicznego należy ogolić jego brzuch, w tym okolicę narządów płciowych i okolicę pleców na poziomie łopatek. Następnie zdezynfekuj okolice brzucha i szyi oraz przednie i tylne łapy za pomocą 70% etanolu i roztworu jodowidonu. Rozpocznij operację od laparotomii w dolnej linii środkowej na poziomie trzeciego i czwartego strzyka za pomocą skalpela.Wykonaj nacięcie o długości od 2 do 2,5 centymetra, a następnie użyj nożyczek chirurgicznych, aby przeciąć mięśnie brzucha. Następnie odsłoń pęcherz, wykonując sekcję wzdłuż ściany brzucha w kierunku czaszkowo-ogonowym. Następnie zabezpiecz pęcherz za pomocą tylnej części kleszczy.Teraz umieść szew ze sznurka torebkowego wokół kopuły pęcherza moczowego za pomocą niewchłanialnego szwu monofilamentowego 6-0 z igłą ze stożkową końcówką. Po założeniu szwu należy wykonać otwór na cewnik w kopule pęcherza moczowego w sznurku torebki. Użyj skalpela lub igły o rozmiarze 18.Następnie włóż cewnik wstępnie załadowany sterylnym fizjologicznym roztworem chlorku sodu. Ostrożnie wycofaj cewnik pęcherza moczowego, aż jego rozszerzony otwór znajdzie się tuż pod kopułą pęcherza. Teraz zabezpiecz szew ze sznurka torebkowego wokół cewnika i wykonaj szew zatrzymujący wokół korpusu cewnika, aby jeszcze bardziej zabezpieczyć cewnik.Przed przystąpieniem do dalszych czynności sprawdź, czy wokół kopuły pęcherza moczowego nie ma przecieków, powoli napełniając pęcherz przez cewnik roztworem. Aby zatamować przecieki, dodaj kolejny szew zatrzymujący wokół cewnika. Najpierw przygotuj trzy elektrody do implantacji.Zaznacz jedną elektrodę trwałym tuszem, aby zidentyfikować ją jako elektrodę zerową. Następnie zdezynfekuj wszystkie trzy za pomocą 70% etanolu. Aby wszczepić elektrody, najpierw użyj nożyczek chirurgicznych, aby przedłużyć nacięcie brzucha aż do kości łonowej bez przecinania spojenia publicznego.Następnie zidentyfikuj cewkę moczową i utwórz kieszonki po obu stronach. Unikaj powodowania urazów naczyń krwionośnych lub nerwów podczas tworzenia kieszeni. Następnie zidentyfikuj odpowiednie woreczki tłuszczowe, aby zamknąć cewkę moczową.Teraz przymocuj dwie elektrody obustronnie do woreczków tłuszczowych za pomocą niewchłanialnych szwów monofilamentowych 6-0. Następnie zszyj dwie elektrody ze sobą. Elektrody powinny być obustronne w środkowej części cewki moczowej.Następnie zszyj oznaczoną elektrodę zerową do mięśnia ściany brzucha cewki moczowej. Następnie zabezpiecz wszystkie trzy elektrody razem jednym szwem. Aby rozpocząć procedurę tunelowania, wykonaj małe nacięcie skóry między łopatkami, a następnie tuneluj urządzenie od okolicy brzucha do szyi.Następnie przedrąż tunel drutów elektrod do szyi. Pamiętaj, aby sprawdzić ich położenie w stosunku do elektrod. Następnie tuneluj cewnik pęcherza moczowego do poziomu łopatek.Należy przy tym uważać, aby trzymać cewnik tuż przed wejściem do kopuły pęcherza, aby uniknąć skręcenia pęcherza. Następnie zamknij mięśnie brzucha za pomocą ciągłych lub przerywanych szwów z wchłanialnym szwem polifilamentowym 4-0. Następnie zamknij nacięcie skóry za pomocą przerwanych szwów materacowych.Teraz rozciągnij zwierzę na całą długość, aby dowiedzieć się, jak długie muszą być druty. Następnie przymocuj cewnik i druty elektrod za pomocą zatopionego szwu do mięśnia barkowego. Kontynuuj, używając pojedynczego szwu 4-0 szwu, aby zamknąć skórę.Następnie przeciągnij uprząż przez głowę szczura, a następnie całkowicie przeciągnij jego cztery kończyny między silikonowe paski. Teraz przełóż tunel cewnika pęcherza moczowego do centralnego kadłuba uprzęży. Następnie przeprowadź przewody przez wstępnie wywiercone, dostosowane do potrzeb klienta otwory w wiązce przewodów.Po umieszczeniu przewodów wyreguluj wiązkę, pociągając za silikonowe paski. Zaciśnij uprząż tak mocno, jak to możliwe, nie utrudniając ruchów szczura. Po wyregulowaniu zabezpiecz paski za pomocą opaski na.Teraz skróć długość cewnika pęcherza moczowego, aby wystawał trzy centymetry ponad uprząż. Następnie podłącz cewnik do korka o rozmiarze 23 i przymocuj go do uprzęży. Bezpieczne przymocowanie przewodów elektrod do wiązki ma kluczowe znaczenie.Najpierw wytnij trzy krótkie odcinki małych rurek termokurczliwych, z których jedna ma unikalny kolor. Następnie wykonaj dwie nieco większe rurki termokurczliwe, aby utrzymać wszystkie trzy druty. Teraz dostosuj długość przewodów elektrod, aby można je było podłączyć tak, aby nie były zbyt luźne ani zbyt krótkie.Następnie zdejmij dwa milimetry izolacji z każdego drutu i skręć odsłonięte gwinty. Następnie przeprowadź dwie większe rurki termokurczliwe przez wszystkie trzy druty, a następnie poprowadź jedną małą rurkę termokurczliwą przez każdy drut, używając unikalnego koloru, aby zidentyfikować elektrodę zerową. Teraz elektrody do męskiej wtyczki z trzema połączeniami.Umieść elektrodę zerową na środku i obkurcz trzy małe pojedyncze rurki nad punktami lutowniczymi. Złóż jedną z większych rurek na drugą koszulkę termokurczliwą i zawiń drugą na granicy z wtyczką męską. Następnie podłącz wtyczkę męską do wiązki przewodów i zabezpiecz połączenie taśmą hydrofobową.Wskaźnik powodzenia zabiegu chirurgicznego wynosił około 80%Nieudane zabiegi były spowodowane głównie odłączeniem drutów elektrod od wtyczki. Siedem dni po operacji szczury były zwykle gotowe do analizy. Zarejestrowane pomiary cystometryczne zwykle obejmowały trzy kolejne cykle mikcji na pomiar, które trwały od 20 do 40 minut, w zależności od stanu niepokoju i obchodzenia się ze szczurem.Następnie główne parametry odczytu obejmują odczyty wartości wyjściowej, progowej, średniej i maksymalnej ciśnienia wypieracza, objętość opróżnianej mikcji, przepływ i czas, podatność pęcherza moczowego oraz aktywność EMG zewnętrznego zwieracza cewki moczowej. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wszczepić stały cewnik do pęcherza moczowego i elektrody zewnętrznego zwieracza cewki moczowej w celu powtarzających się zapisów cystometrycznych po przebudzeniu. Po opanowaniu implantacji można zakończyć w ciągu 90 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo.Po jej opracowaniu, technika ta utorowała drogę naukowcom w dziedzinie urologii do zbadania aspektów urologii funkcjonalnej u szczurów alarmowych.

cystometric-external-urethral-sphincter-measurements-awake-rats-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Cystometria jest wydajną techniką pomiaru funkcji pęcherza moczowego u małych zwierząt in vivo. Do pęcherza prowadzona jest ciągła infuzja z szybkością kontrolowaną poprzez cewnik wewnątrz pęcherza, podczas gdy cewka moczowa pozostaje wolna, aby umożliwić mikcję. Pozwala to na wielokrotne napełnianie i opróżnianie pęcherza, przy jednoczesnym rejestrowaniu ciśnienia wewnątrz pęcherza oraz objętości wydalonego moczu.

Zastosowanie cystometrii u małych gryzoni: badanie chemosensytywności pęcherza moczowego

Etapy chirurgiczne powiększenia pęcherza moczowego opisano z wykorzystaniem rusztowań 3-D w modelach mysich i szczurzych. W celu przetestowania skuteczności konfiguracji biomateriałów do zastosowania w powiększeniu pęcherza przedstawiono techniki cystometrii przeprowadzanej zarówno u zwierząt w stanie czuwania, jak i znieczulonych.

Ocena biomateriałów do augmentacji pęcherza moczowego z wykorzystaniem analiz cystometrycznych w różnych modelach gryzoni

To badanie opisuje procedury chirurgiczne i techniki eksperymentalne do wykonywania cystometrii na jawie u swobodnie poruszającej się myszy. Ponadto dostarcza dowodów eksperymentalnych wspierających jego optymalizację i standaryzację.

Ocena procedury wykonywania cystometrii w stanie czuwania w modelu mysim

Rejestracja ciśnienia w jamistości (ICP) jest ważną metodą oceny funkcji erekcji zwierząt doświadczalnych. Tutaj pokazano szczegółowy protokół procedury rejestracji ICP poprzez cewnikowanie crura penisa, a następnie elektryczną stymulację nerwów jamistych u szczurów.

Rejestracja ciśnienia w jamistach w celu oceny funkcji erekcji u gryzoni

To badanie opisuje uproszczoną procedurę chirurgiczną i technikę wykonywania stymulacji nerwów jamistych z izolacją kompleksu nerwowo-elektrodowego za pomocą kleju silikonowego i pomiarem ciśnienia w jamie jamistym.

Stymulacja nerwów jamistych i rejestracja ciśnienia w ciałach jamistych u szczura

Ten protokół opisuje procedurę pomiaru stężenia ATP w świetle pęcherza moczowego u znieczulonego gryzonia.

In vivo (in vivo) Pomiar luminalny wywołanego rozdęciem urotelialnego uwalniania ATP u gryzoni

Ten protokół zawiera przewodnik do impregnacji skóry cyjanoakrylem, aby zapobiec wchłanianiu moczu przez sierść i skórę. Zawiera instrukcję nakładania kleju na skórę, wszczepiania cewnika do pęcherza moczowego oraz elektrody do cystometrii i zapisy elektromiografii zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u obudzonych myszy.

Optymalizacja technik urodynamicznych myszy w celu zwiększenia dokładności

Wielokrotne pomiary fizjologii układu oddechowego gryzoni oraz pobieranie próbek komórek zapalnych dróg oddechowych są pożądane, lecz zazwyczaj niewykonalne. W niniejszym materiale opisujemy powtarzalną metodę intubacji doustnej myszy, która umożliwia wielokrotne pomiary nadreaktywności dróg oddechowych oraz pobieranie próbek komórek zapalnych dróg oddechowych.

Odwracalna, nieinwazyjna metoda pomiaru oporu dróg oddechowych i pobierania płynu z płukania pęcherzykowo-oskrzelowego u myszy

Przedstawiamy metodę wykorzystującą spektrometrię mas MALDI oraz chemię redukcyjnego metylowania do ilościowego określania zmian w metylowaniu lizyny.

Zastosowanie metody MassSQUIRM do ilościowych pomiarów aktywności demetylazy lizyny

Opisujemy izolację ludzkich miocytów przedsionkowych, które mogą być używane do wewnątrzkomórkowych pomiarów Ca2+ w połączeniu z elektrofizjologicznymi badaniami patch-clamp.

Izolacja ludzkich miocytów przedsionkowych do jednoczesnych pomiarów stanów nieustalonych Ca2+ i prądów błonowych

Naucz się techniki wszczepiania cewnika do pęcherza i elektrod zwieracza cewki moczowej u szczurów. Ta metoda umożliwia wielokrotne pomiary cystometryczne u przebudzonych zwierząt w badaniach urologii funkcjonalnej.

Pomiary cystometryczne i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u obudzonych szczurów z wszczepionym cewnikiem i elektrodami umożliwiającymi wielokrotne pomiary (Wideo) | JoVE Journal

Pomiary cystometryczne i zewnętrznego zwieracza cewki moczowej u obudzonych szczurów z wszczepionym cewnikiem i elektrodami umożliwiającymi wielokrotne pomiary

Przeglądaj więcej filmów