Name: Częściowe podwiązanie dróg żółciowych u myszy: kontrolowany model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: Poznaj technikę częściowego podwiązania dróg żółciowych u myszy jako model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej. Ta metoda pozwala badać mechanizmy regeneracji wątroby i porównywać płaty w tym samym zwierzęciu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr Khan dziękuje za wsparcie grantowe od NIH/NICHD K12HD052892, Fundacji Alpha-1, Fundacji Hillmana oraz Centrum Badań nad Wątrobą w Pittsburghu. Dr Michalopoulos dziękuje za wsparcie ze strony NIH/NIDDK P01DK096990. Doceniamy doskonałą i hojną pomoc techniczną Anne Orr. Jesteśmy również wdzięczni dr Davidowi A. Gellerowi za zapewnienie dostępu do laboratorium mikrochirurgii transplantacji i gryzoni.

Wszystkie procedury zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi etycznymi Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki nad Zwierzętami i Ich Użytkowania Uniwersytetu w Pittsburghu.
1. Podstawowe techniki i typowe procedury
<ol>
	<li>Przed użyciem należy sterylizować w autoklawie cały sprzęt mikrochirurgiczny.</li>
	<li>Aby uniknąć zabicia myszy przez znieczulenie, dokładnie sprawdź jej wzorzec oddychania.</li>
	<li>Dotykaj narządów i jelit tak rzadko, jak to możliwe, aby uniknąć uszkodzenia narządów i spowodowania krwawienia. Dociśnij miejsca krwawienia wilgotnymi wacikami lub gąbkami z gazy.</li>
	<li>Używaj mokrych bawełnianych wacików do delikatnej manipulacji narządami. Mokre, włókninowe gąbki z gazy są używane w dwóch rozmiarach, 3,5 × 3,5 cm oraz 6,0 × 6,0 cm. Użyj mniejszej, aby cofnąć całą wątrobę. Użyj większego, aby owinąć jelito cienkie i grube.</li>
</ol>
2. Przygotowanie przedoperacyjne
<ol>
	<li>Użyj samców myszy c57 / b6 w wieku 8-12 tygodni (gdy masa ciała wynosi około 20-35 g) do częściowego podwiązania dróg żółciowych.</li>
	<li>Pozwól myszom na swobodny dostęp do wody i pożywienia do czasu indukcji znieczulenia.</li>
</ol>
3. Operacja częściowego podwiązania przewodu żółciowego
<ol>
	<li>Znieczulij mysz, umieszczając zwierzę w komorze indukcyjnej z mieszanką 1,5-2,0% izofluranu i 1 l/min tlenu. Uważnie monitoruj zwierzę, obserwując częstość oddechów. Gdy częstość oddechów zwierzęcia wynosi jeden oddech na sekundę, mysz jest dobrze znieczulona. Ponieważ odruch wycofania kończyn przednich zanika szybciej, uszczypnij również stopę kończyny tylnej, aby potwierdzić całkowity brak odruchu wycofania. Oczy należy smarować okulistycznym środkiem smarującym, aby zapobiec owrzodzeniom rogówki. Należy pamiętać, że pierwszą dawkę leku przeciwbólowego można podać przed operacją, aby zapobiec stymulacji receptorów bólu.</li>
	<li>Ogol ścianę brzucha maszynką do strzyżenia włosów i umieść mysz na stole operacyjnym pod mikroskopem operacyjnym. Przymocuj wszystkie kończyny do stołu za pomocą taśmy. Stosować inhalację izofluranu, aby utrzymać mysz w znieczuleniu ogólnym.
	<ol>
		<li>Wyreguluj parownik izofluranu i użyj 2,0-3,0% izofluranu do indukcji.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Za pomocą sterylnych wacików należy najpierw zdezynfekować ścianę brzucha 0,3-0,5 ml jodu powidonu stosowanego miejscowo, a następnie 70% etanolu. Zwierzę należy przykryć sterylnym serwetem.</li>
	<li>Wykonaj długie nacięcie brzucha w linii środkowej od mieczyka mieczykowatego do łonowego za pomocą nożyczek i kleszczy Adson. Po wykonaniu nacięcia brzusznego zmniejsz izofluran do 0,8-1,0% w celu podtrzymania.</li>
	<li>Odsłoń jamę brzuszną za pomocą mikroretraktora. Przytrzymaj mieczykowatą zębiad kleszczami komarów i cofnij się w kierunku głowy myszy. Zamocuj kleszczyki do komarów za pomocą miękkiej gliny.</li>
	<li>Wkraplać 1-2 ml podgrzanego (37 °C) wysterylizowanego roztworu soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) do jamy brzusznej, aby uniknąć uszkodzenia narządów jamy brzusznej. Przytrzymaj jelito cienkie mokrymi wacikami i delikatnie cofnij je w kierunku głowy myszy. Przetnij więzadła między jelitem cienkim a zaotrzewną, aby uniknąć uszkodzenia jelita cienkiego (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A).</li>
	<li>Owiń jelito cienkie i grube mokrą, włókninową gąbką z gazy. Umieść je po ogonowej stronie jamy brzusznej. Jelita owinięte sterylną gazą można umieścić na sterylnie udrapowanym polu, aby uniknąć zanieczyszczenia.</li>
	<li>Delikatnie cofnij całą wątrobę w kierunku mieczykowatej kości za pomocą małej mokrej gąbki z włókniny, aby odsłonić wnękę wątroby i więzadło wątrobowo-dwunastnicze (<silna klasa = "xfig">Ryc. 1B).</li>
	<li>Sprawdź, aby potwierdzić anatomię wnęki wątroby. Wspólny przewód żółciowy znajduje się po brzusznej stronie żyły wrotnej. Potwierdź lokalizacje prawego i lewego wątrobowego przewodu żółciowego, które spływają do głównego zbiegu dróg żółciowych we wnęce wątroby.</li>
	<li>Zidentyfikuj lewy przewód żółciowy wątroby, który odprowadza lewy płat, i otocz go nylonowym szwem 10-0 za pomocą strony igły do szycia (<silna klasa = "xfig">Rysunek 2A). Unikaj uszkodzenia żyły wrotnej, tętnicy wątrobowej i powierzchni wątroby.</li>
	<li>Podwiązywać lewy przewód żółciowy nylonem 10-0. (<silna klasa="xfig">Rysunek 2B).</li>
	<li>Umieść jelito cienkie i grube w tej samej pozycji, co przed operacją, używając mokrych wacików.</li>
	<li>Upewnij się, że nie ma skrętu jelit i krwawienia z jamy brzusznej, a następnie zamknij mięsień i skórę w dwóch warstwach za pomocą vicrylu 4-0. Do zamknięcia skóry użyto szwu plecionego (Vicryl), ale preferowany jest monofilament, aby zmniejszyć prawdopodobieństwo infekcji. 
	UWAGA: Zamknij powięź przez ciągły szew od mieczyka mieczykowatego do kości łonowej i zamknij skórę przez ciągły szew od łona do mieczykowatego.</li>
	<li>Przerwij znieczulenie po zamknięciu nacięcia.</li>
</ol>
4. Leczenie pooperacyjne i obserwacja
<ol>
	<li>Tuż po operacji należy uszczypnąć skórę grzbietową myszy i wstrzyknąć podskórnie Buprenex (0,1 mg/kg) i Cefazolin (100 mg/kg), a następnie wstrzyknięcie Buprenex co 12 godzin przez 3 dni i Cefazolin co 24 godziny przez 3 dni11,12,13. Należy pamiętać, że pierwsza dawka leku przeciwbólowego może być podana przed operacją, aby zapobiec stymulacji receptorów bólu. Cefazolina i inne antybiotyki okołooperacyjne są konieczne tylko dla zwierząt z obniżoną odpornością, takich jak te stosowane w badaniach transplantacyjnych. 
	UWAGA: Jeśli operacja zakończy się sukcesem, mysz zwykle wraca do zdrowia w ciągu 30 minut. Aktywność myszy będzie prawie taka sama jak przed operacją.</li>
	<li>Codziennie sprawdzaj myszy pod kątem oznak niepokoju.
	<ol>
		<li>Złóż myszy w ofierze przez zwichnięcie szyjki macicy w znieczuleniu ogólnym, aby uzyskać próbki wątroby i innych tkanek w określonych punktach czasowych (tj. 7, 14, 21 dni) po pBDL.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Higgins, G. M., Anderson, R. <a target="_blank" href="https://www.scienceopen.com/document?vid=57858414-5eff-4c8d-a028-ccb3fc1c44a6">Experimental pathology of the liver - Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/path.1700350512/abstract">Ligation of the common bile duct.</a> The Journal of Pathology and Bacteriology. 35 (5), 769-798 (1932).</li>
<li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+bile+duct+obstruction%3A+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Barua, L., Bowen, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transdifferentiation+of+rat+hepatocytes+into+biliary+cells+after+bile+duct+ligation+and+toxic+biliary+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Transdifferentiation of rat hepatocytes into biliary cells after bile duct ligation and toxic biliary injury.</a> Hepatology. 41 (3), 535-544 (2005).</li>
<li>Dipaola, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+intramural+epithelial+networks+linked+to+peribiliary+glands+that+express+progenitor+cell+markers+and+proliferate+after+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Identification of intramural epithelial networks linked to peribiliary glands that express progenitor cell markers and proliferate after injury in mice.</a> Hepatology. 58 (4), 1486-1496 (2013).</li>
<li>Guyot, C., Combe, C., Desmouliere, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+common+bile+duct+ligation+in+rat%3A+A+relevant+in+vivo+model+to+study+the+role+of+mechanical+stress+on+cell+and+matrix+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The common bile duct ligation in rat: A relevant in vivo model to study the role of mechanical stress on cell and matrix behaviour.</a> Histochem Cell Biol. 126 (4), 517-523 (2006).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+bile+duct+ligation+on+bile+acid+composition+in+mouse+serum+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Effect of bile duct ligation on bile acid composition in mouse serum and liver.</a> Liver Int. 32 (1), 58-69 (2012).</li>
<li>Tag, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+duct+ligation+in+mice%3A+induction+of+inflammatory+liver+injury+and+fibrosis+by+obstructive+cholestasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis.</a> J Vis Exp. (96), e52438(2015).</li>
<li>Osawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+mediators+induce+fibrogenic+effects+in+normal+liver+after+partial+bile+duct+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Systemic mediators induce fibrogenic effects in normal liver after partial bile duct ligation.</a> Liver Int. 26 (9), 1138-1147 (2006).</li>
<li>Khan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+Duct+Ligation+Induces+ATZ+Globule+Clearance+in+a+Mouse+Model+of+alpha-1+Antitrypsin+Deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Expr%22%5BJournal%5D)">Bile Duct Ligation Induces ATZ Globule Clearance in a Mouse Model of alpha-1 Antitrypsin Deficiency.</a> Gene Expr. 17 (2), 115-127 (2017).</li>
<li>Birkhead, H. A., Briggs, G. B., Saunders, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicology+of+cefazolin+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Toxicology of cefazolin in animals.</a> J Infect Dis. 128, 378(1973).</li>
<li>Kunst, M. W., Mattie, H., van Furth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+efficacy+of+cefazolin+and+cephradine+in+neutropenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infection%22%5BJournal%5D)">Antibacterial efficacy of cefazolin and cephradine in neutropenic mice.</a> Infection. 7 (1), 30-34 (1979).</li>
<li>Traul, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+studies+of+post-surgical+buprenorphine+therapy+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Safety studies of post-surgical buprenorphine therapy for mice.</a> Lab Anim. 49 (2), 100-110 (2015).</li>
<li>Carlson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+PiZ+alpha+1-antitrypsin+causes+liver+damage+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Accumulation of PiZ alpha 1-antitrypsin causes liver damage in transgenic mice.</a> J Clin Invest. 83 (4), 1183-1190 (1989).</li>
<li>Sifers, R. N., Finegold, M. J., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-1-antitrypsin+deficiency%3A+accumulation+or+degradation+of+mutant+variants+within+the+hepatic+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Alpha-1-antitrypsin deficiency: accumulation or degradation of mutant variants within the hepatic endoplasmic reticulum.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 1 (5), 341-345 (1989).</li>
<li>Rudnick, D. A., Shikapwashya, O., Blomenkamp, K., Teckman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indomethacin+increases+liver+damage+in+a+murine+model+of+liver+injury+from+alpha-1-antitrypsin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Indomethacin increases liver damage in a murine model of liver injury from alpha-1-antitrypsin deficiency.</a> Hepatology. 44 (4), 976-982 (2006).</li>
<li>Heinrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+bile+duct+ligation+in+mice%3A+a+novel+model+of+acute+cholestasis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis.</a> Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).</li>
<li>Glaser, S. S., Alpini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+cholehepatic+shunt+as+a+potential+therapy+for+primary+sclerosing+cholangitis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation of the cholehepatic shunt as a potential therapy for primary sclerosing cholangitis.</a> Hepatology. 49 (6), 1795-1797 (2009).</li>
<li>Gurpinar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+sulindac+derivative+inhibits+lung+adenocarcinoma+cell+growth+through+suppression+of+Akt%2FmTOR+signaling+and+induction+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel sulindac derivative inhibits lung adenocarcinoma cell growth through suppression of Akt/mTOR signaling and induction of autophagy.</a> Mol Cancer Ther. 12 (5), 663-674 (2013).</li>
<li>Alpini, G. G., Francis, H., Marzioni, M., Venter, J., Phinizy, J., LeSage, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK5974/">Madame Curie Bioscience Database</a>. , Landes Bioscience. Austin, TX. (2013).</li>
<li>Kirkland, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+surgical+model+of+biliary+inflammation+and+obstructive+jaundice+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice.</a> J Surg Res. 164 (2), 221-227 (2010).</li>
<li>Delhove, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+in+vivo+bioimaging+of+hepatocyte+transcription+factor+activity+following+cholestatic+liver+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Longitudinal in vivo bioimaging of hepatocyte transcription factor activity following cholestatic liver injury in mice.</a> Sci Rep. 7, 41874(2017).</li>
<li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homing+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+mediated+by+sphingosine+1-phosphate+contributes+to+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Homing of bone marrow mesenchymal stem cells mediated by sphingosine 1-phosphate contributes to liver fibrosis.</a> J Hepatol. 50 (6), 1174-1183 (2009).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+released+from+cholestatic+rat+livers+possibly+involved+in+inducing+bone+marrow+hepatic+stem+cell+priming%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Factors released from cholestatic rat livers possibly involved in inducing bone marrow hepatic stem cell priming.</a> Stem Cells Dev. 17 (1), 143-155 (2008).</li>
<li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propitious+role+of+bone+marrow-derived+mononuclear+cells+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model%3A+potential+clinical+implications+in+obstructive+cholangiopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Surg+Int%22%5BJournal%5D)">Propitious role of bone marrow-derived mononuclear cells in an experimental bile duct ligation model: potential clinical implications in obstructive cholangiopathy.</a> Pediatr Surg Int. 29 (6), 623-632 (2013).</li>
</ol>

Autorzy nie ujawnili żadnych informacji.

Chociaż cBDL jest najczęstszą techniką eksperymentalną w przypadku cholestazy obturacyjnej, może stanowić wiele wyzwań u gryzoni. W zależności od liczby dni pooperacyjnych wymaganych do osiągnięcia punktu końcowego, zwierzęta mogą doświadczać znacznej zachorowalności i śmiertelności w miarę upływu czasu. Stopień uszkodzenia tkanki i martwicy dróg żółciowych jest dodatkowo zaostrzony podczas pracy z niektórymi transgenicznymi mysimi modelami choroby wątroby, które wykazują nieprawidłową miąższ wątroby i jej funkcję na poc...

Chirurgiczne modele ostrego uszkodzenia i naprawy wątroby, takie jak częściowa hepatektomia lub podwiązanie przewodu żółciowego (cBDL), są używane od dziesięcioleci u gryzoni do badania regeneracji wątroby i patobiologii1,2. W cBDL wspólny przewód żółciowy (który odprowadza całą żółć wytwarzaną w wątrobie) jest podwiązany, co powoduje obturacyjną cholestazę, stan zapalny i zwłóknienie w ciągu pierwszych 2-3 tygodni po operacji, z ostateczną progresją do marskości wątroby3. Proliferacja dróg żółciowych, transdyferencjacja i indukcja rezydentnych komórek progenitorowych wątroby są również cechami cBDL4,5. Chociaż cBDL wyjaśnia specyficzne mechanizmy obturacyjnej cholangiopatii, które są dobrze scharakteryzowane z powtarzalnymi wynikami u myszy typu dzikiego i u szczepów z normalną wątrobą6,7,8, procedura może być technicznie wymagająca w niektórych transgenicznych mysich modelach chorób wątroby, wymagając większej liczby zwierząt niż oczekiwano ze względu na wyższą zachorowalność i śmiertelność z powodu niedrożności dróg żółciowych w czasie. Technika ta jest również korzystna w badaniu myszy transgenicznych z podstawową chorobą wątroby, które w przeciwnym razie mogłyby nie tolerować stresu związanego z długotrwałymi eksperymentami po cBDL.
pBDL może stanowić rozsądną alternatywę, która pomoże przezwyciężyć niektóre z tych wyzwań. Wstępne badania pBDL na myszach typu dzikiego miały na celu rozróżnienie miejscowo działających i ogólnoustrojowych mediatorów stanu zapalnego9. W pBDL główne zbieganie dróg żółciowych prawej i lewej wątroby nad wspólnym przewodem żółciowym jest dokładnie uwidocznione we wnęce, a tylko lewy przewód żółciowy wątroby jest podwiązany w celu wytworzenia miejscowej obturacyjnej cholestazy. pBDL ma kilka zalet w stosunku do cBDL. W pBDL niezwiązany, prawy płat służy jako identycznie dopasowana kontrola wewnętrzna dla związanego lewego płata, poddawana tym samym skutkom ogólnoustrojowym, takim jak stan odżywienia lub czynniki krążące. Chociaż obecne były ogólnoustrojowe mediatory prozapalne, Osawa i wsp. zaobserwowali mniej zwłóknienia i martwicy w nieligowanych płatach, ale zwiększoną ekspresję komórek zapalnych i transformującego czynnika wzrostu-β w podwiązanym płacie9.
Ostatnio pBDL został przedefiniowany do badania wpływu zatrzymanej żółci na miąższ wątroby10. Wykorzystując to samo zwierzę do kontroli wewnętrznej (nieligowana "pozorowana") i grup eksperymentalnych, pBDL skutecznie zmniejsza o połowę liczbę zwierząt potrzebnych na eksperyment, co z kolei jest bardziej opłacalne. Myszy znacznie lepiej tolerują działanie pBDL, dzięki czemu idealny eksperyment czasowy (≥2 tygodnie) można osiągnąć w podwiązanym płacie. Co najważniejsze, pBDL może rozróżniać bezpośrednie wewnątrzwątrobowe skutki obturacyjnej cholestazy i zatrzymane składniki żółciowe w podwiązanym płacie w porównaniu z niepodwiązanym płatem kontrolnym. Ogólnie rzecz biorąc, pBDL jest atrakcyjną metodą badania specyficznych dla płatów skutków miejscowej cholestazy w wątrobie.

<table><tbody><tr><td>Mikroskop-Leica Wild M650, 6&ndash; 40 i razy; powiększenie</td><td>Leica Microsystems</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Tec 3 parownik lejkowy z lejkiem do napełniania</td> Usługi <td>znieczulenia ogólnego nie</td><td>dotyczy</td><td></td></tr><tr><td>Stevens Nożyczki do tenotomii</td><td>Dokładne chirurgiczne i Scientific Instruments Corporation</td><td>ASSI.9193</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Adson</td><td>Narzędzia do precyzyjnej nauki</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>Komary klasyczne delikatne kleszcze hemostatyczne</td><td>Codman</td><td>30-4472</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-zwijacz</td><td>Murdock; Roboz Instrument chirurgiczny</td><td>RS-6550</td><td></td></tr><tr><td>Gąbki z włókniny z gazy</td><td>Fisherband</td><td>870-PC-DBL</td><td></td></tr><tr><td>Puritan 6 " Mały wacik bawełniany z drewnianą rączką</td><td>Puritan Medical Products Company</td><td>868-WCS</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Dumont SS - Końcówki standardowe/Proste/Inox/13,5 cm</td><td>Narzędzia do nauki</td><td>11203-23</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze Dumont SS - Końcówki standardowe/kątowe 45&deg;/Inox/13,5cm</td><td>Narzędzia do nauki</td> precyzyjnej <td>11203-25</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki sprężynowe Vannas - 3mm Krawędź tnąca</td><td>Narzędzia do nauki precyzyjnej</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt mikroigłowy</td><td>Aesculap Instrumenty chirurgiczne</td><td>FD231R</td><td></td></tr><tr><td>Micro AROSuture, sterylny szew nylonowy 10-0, 70 &micro; m, Punkty TAP</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>T4A10N07</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>J662H</td><td></td></tr><tr><td>5-ml Strzykawka</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>Naczynie do hodowli tkankowych Falcon, 60 i razy; 15 mm</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, Farmakopea Stanów Zjednoczonych (USP) płyn do inhalacji, 250 ml</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Buprenex do wstrzykiwań (chlorowodorek buprenorfiny)</td><td>Reckitt Benckiser Pharmaceuticals</td><td>NDC 12496-0757-1</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolina do wstrzykiwań, USP</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>NDC 63323-238-61</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór do peelingu PVP (powidon&ndash; Jod 7,5%)</td><td>Medline</td><td>NDC 12496-0757-1</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td>Decon Labs</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem bez wapnia i magnezu</td><td>LONZA</td><td>17-516F</td><td></td></tr><tr><td>Sirius Red</td><td>Sigma</td><td>365548</td><td></td></tr><tr><td>Hematolxylin</td><td>Fisher (Richard-Allan Scientific)</td><td>22-050-111 (7211)</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Anatech (Fisher)</td><td>832 (NC9686037)</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher</td><td>SF100-20</td><td></td></tr></tbody></table>

częściowe podwiązanie dróg żółciowych u myszy: kontrolowany model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

U gryzoni, pełne podwiązanie dróg żółciowych (cBDL) wspólnego przewodu żółciowego jest uznaną techniką chirurgiczną do badania obturacyjnej cholestazy i proliferacji dróg żółciowych. Jednak długotrwałe eksperymenty mogą prowadzić do zwiększonej zachorowalności i śmiertelności. W wybranych szczepach myszy z podstawową chorobą wątroby można dokonać znaczących porównań nawet przy podwiązaniu pojedynczego płata wątroby, co może zmniejszyć straty i wydatki zwierząt. Tutaj opisujemy częściowe podwiązanie dróg żółciowych (pBDL) u myszy, w którym podwiązany jest tylko lewy przewód żółciowy wątroby, powodując niedrożność dróg żółciowych w lewym płacie, ale nie w pozostałych płatach. Dzięki starannej technice mikrochirurgicznej eksperymenty z pBDL mogą być opłacalne, ponieważ niepodwiązany płat służy jako wewnętrzna kontrola dla podwiązanych płatów, gdy jest poddawany tym samym warunkom u tego samego zwierzęcia. W przeciwieństwie do cBDL, nie jest konieczna oddzielna grupa kontrolna obsługiwana pozorowo. pBDL jest bardzo przydatny do bezpośredniego porównywania miejscowych i ogólnoustrojowych skutków cholestazy i innych zatrzymanych składników żółci. pBDL może być również ponownie wykorzystany jako nowa metoda badania mechanizmów związanych z lekami i migracją komórek.

W tym typowym eksperymencie pBDL przeprowadzono w trzech powtórzeniach u myszy transgenicznych PiZ, które odzwierciedlają ludzką chorobę wątroby występującą przy niedoborze alfa-1-antytrypsyny (A1AT). Mysz PiZ nadmiernie ekspresuje transgen składający się z wielu genomowych fragmentów DNA zawierających regiony kodujące zmutowanego ludzkiego genu A1AT i promotor, wraz z intronami oraz obszarami flankującymi o długości około 2 kilobaz powyżej i poniżej sekwencji14<su...

Tutaj prezentujemy częściowe podwiązanie dróg żółciowych jako chirurgiczny model uszkodzenia i regeneracji wątroby u gryzoni.

Częściowe podwiązanie dróg żółciowych u myszy: kontrolowany model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

Ogólnym celem tej interwencji chirurgicznej jest obserwacja skutków miejscowej obturacyjnej cholestazy. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie hepatologii dotyczące tego, jak zidentyfikować mechanizmy regeneracji wątroby. Główną zaletą tej techniki jest to, że można dokonać znaczących porównań między podwiązanym płatem doświadczalnym a niepodwiązanym płatem kontrolnym w obrębie tego samego zwierzęcia.Dzisiejszą procedurę zademonstruje dr Toshimasa Nakao, doktor habilitowany z laboratorium chirurgii transplantacyjnej. Po potwierdzeniu braku reakcji na szczypanie palca u znieczulonej myszy C57 black 6 w wieku od 8 do 12 tygodni, ogol okolice brzucha maszynką do strzyżenia włosów i umieść zwierzę pod mikroskopem chirurgicznym. Przymocuj kończyny do stołu i za pomocą sterylnych wacików sekwencyjnie zdezynfekuj obszar operacyjny za pomocą 0,3 do 0,5 mililitra jodu powidonu i 70% etanolu.Następnie wykonaj nacięcie w linii środkowej od mieczyka mieczykowatego do kości łonowej i użyj mikro retraktora, aby otworzyć jamę brzuszną. Użyj kleszczyków do komarów, aby cofnąć mieczyk mieczykowaty w kierunku głowy myszy i użyj miękkiej gliny, aby przytrzymać kleszcze i mieczyk w tej pozycji. Nawodnij jamę brzuszną jednym do dwóch mililitrów wysterylizowanego PBS o temperaturze 37 stopni Celsjusza i użyj mokrych wacików, aby delikatnie przesunąć jelito cienkie w kierunku głowy myszy.Przetnij więzadła między jelitem cienkim a zaotrzewnową, aby uniknąć uszkodzenia tkanki i owiń jelito cienkie i grube mokrą gąbką z włókniny. Umieść tkankę jelita po ogonowej stronie jamy brzusznej i użyj małej mokrej gąbki z włókniny, aby delikatnie cofnąć całą wątrobę w kierunku mieczykowatej, aby odsłonić wnękę wątroby i więzadło wątrobowo-żumienne. Zlokalizuj wnękę wątroby, wspólny przewód żółciowy po brzusznej stronie żyły wrotnej oraz drogi żółciowe lewej i prawej wątroby, które spływają do głównego zbiegu dróg żółciowych we wnęce wątroby.Za pomocą nylonowego szwu 10-0 i strony igły do szwów podwiązaj lewy płat wątrobowego przewodu żółciowego. Po założeniu szwu należy przywrócić jelito cienkie i grube do ich anatomicznego położenia i potwierdzić brak skrętu jelita lub krwawienia śródbrzusznego. Następnie zdejmij kleszczyki do komarów, oddzielnie zamknij warstwy mięśni i skóry ciągłymi szwami 4-0 Vicryl i umieść mysz pod lampą grzewczą z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia.Porównanie biochemii wątroby w surowicy między myszami z częściowymi podwiązanymi drogami żółciowymi a myszami transgenicznymi z pełnymi podwiązanymi drogami żółciowymi w celu nierozpuszczalnej agregacji białek wątroby ujawnia minimalne uszkodzenie wątroby lub cholestazę u myszy z częściowymi podwiązanymi drogami żółciowymi oraz poważne uszkodzenie i nagromadzenie enzymów u zwierząt transgenicznych z kompletnymi podwiązanymi drogami żółciowymi. Ponieważ myszy poddane częściowemu podwiązaniu dróg żółciowych z czasem rozwinęły się specyficzna dla płata obturacyjna cholestaza, podwiązany płat wydaje się nieco jaśniejszy 14 dni po operacji w porównaniu z płatami niepodwiązanymi, które zachowały swój normalny ciemnoczerwonawo-brązowy kolor. Podwiązany płat wykazuje również wzrost proliferacji dróg żółciowych i zwłóknienia w porównaniu z płatami niepodwiązanymi w odpowiedzi na miejscową cholestazę wywołaną podwiązaniem.Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w ciągu 10 do 12 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Po tej procedurze można zastosować inne metody, takie jak śledzenie linii, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące naprowadzania komórek macierzystych do miejsc uszkodzenia i regeneracji wątroby. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak dokonywać znaczących porównań za pomocą częściowego podwiązania dróg żółciowych w celu zidentyfikowania skutków miejscowych i ogólnoustrojowych.

partial-bile-duct-ligation-mouse-controlled-model-localized

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Cholestaza jest stanem klinicznym często spotykanym zarówno w praktyce chirurgów, jak i gastroenterologów. Stworzenie odwracalnego modelu cholestazy u szczura może być trudne ze względu na niewielki rozmiar oraz specyficzną anatomię hepatopankreatobiliarnej tych zwierząt. Niniejszy artykuł wideo prezentuje sposób stworzenia odwracalnego modelu cholestazy.

Tworzenie odwracalnego modelu cholestazy u szczura

Ten film opisuje procedurę generowania modelu myszy z ostrym żółciowym zapaleniem trzustki poprzez trzustkowy wlew taurocholanu sodu. Model ten pomaga badać zmiany patofizjologiczne wywołane przez taurocholan sodu w trzustce.

Model ostrego żółciowego zapalenia trzustki: metoda generowania mysiego modelu ostrego żółciowego zapalenia trzustki za pomocą infuzji z przewodu trzustkowego

Zakłócenie przepływu żółci powoduje ciężkie zapalne cholestatyczne uszkodzenie wątroby z charakterystyczną, zależną od czasu sekwencją zmian morfologicznych. W tym miejscu przedstawiamy protokół chirurgicznego podwiązania przewodu żółciowego wspólnego u myszy, który pozwala na wywołanie silnej odpowiedzi zwłóknieniowej po 21 do 28 dniach.

Podwiązanie dróg żółciowych u myszy: indukcja zapalnego uszkodzenia wątroby i zwłóknienia przez chalestazę obturacyjną

Zależne od jelita cienkiego wchłanianie zwrotne kwasów żółciowych i hamowanie syntezy kwasów żółciowych w wątrobie jest ważne dla homeostazy i zdrowia całego organizmu. W tym badaniu opisujemy mysi model resekcji jelita krętego w celu oceny złego wchłaniania żółci wywołanego przez ileektomię, nadmiernej akumulacji i toksyczności w jelicie myszy.

Nadmierna akumulacja żółci wywołana ileektomią w jelicie myszy

Prezentujemy dość prostą i czułą metodę dokładnego oznaczania gęstości dróg żółciowych w wątrobie myszy. Metoda ta może pomóc w określeniu wpływu modyfikatorów genetycznych i środowiskowych oraz skuteczności potencjalnych terapii w mysich modelach chorób dróg żółciowych.

Określanie gęstości dróg żółciowych w wątrobie myszy

Przewlekłe zapalenie trzustki (CP) to choroba charakteryzująca się stanem zapalnym i zwłóknieniem trzustki, często związana z nieuleczalnym bólem brzucha. Ten artykuł koncentruje się na udoskonaleniu techniki generowania mysiego modelu CP poprzez infuzję dróg żółciowych z kwasem 2,4,6-trinitrobenzenosulfonowym (TNBS).

Mysi model przewlekłego zapalenia trzustki poprzez infuzję TNBS z dróg żółciowych

Do obserwacji zaburzeń dróg żółciowych u noworodków u myszy, niezbędny jest nienaruszony przewód żółciowy i skuteczne przygotowanie. W związku z tym z powodzeniem opracowano nowe podejście do izolowania całego pozawątrobowego układu dróg żółciowych u mysich noworodków przy zachowaniu integralności przewodu żółciowego.

Rozwarstwienie pozawątrobowego przewodu żółciowego i pęcherzyka żółciowego u dziewięciodniowych noworodków myszy

Stworzyliśmy mysi model przewlekłego zwłóknienia wątroby, który dostarcza odpowiedniego modelu zwierzęcego do mechanistycznego badania atrezji dróg żółciowych (BA) wywołanego przez wirusa i platformy dla przyszłych terapii BA.

Mysi model przewlekłego zwłóknienia wątroby do badania atrezji dróg żółciowych

Wykazano, że powiązanie podziału wątroby i podwiązania żyły wrotnej w przypadku etapowej hepatektomii (ALPPS) powoduje niezwykłą regenerację wątroby po kilku tygodniach od operacji pierwszego etapu. Modele zwierzęce, które przeszły ALPPS, zostały opracowane w celu zbadania potencjalnej zdolności regeneracji wątroby i osiągnięcia korzystnych wyników klinicznych.

Mysi model skojarzonej partycji wątroby i podwiązania żyły wrotnej do etapowego zabiegu hepatektomii wspomaganego mikroskopią

W tym filmie prezentujemy mikrofluidyczną sondę1 (MFP). Szczegółowo wyjaśniamy, jak złożyć MFP, zamontować ją na mikroskopie odwróconym i wycentrować względem powierzchni podłoża, a na koniec pokazujemy, jak wykorzystać ją do obróbki powierzchni podłoża zanurzonego w roztworze buforowym.

Sonda mikroprzepływowa: zasada działania i zastosowanie w lokalnej obróbce powierzchni

Poznaj technikę częściowego podwiązania dróg żółciowych u myszy jako model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej. Ta metoda pozwala badać mechanizmy regeneracji wątroby i porównywać płaty w tym samym zwierzęciu.

Częściowe podwiązanie dróg żółciowych u myszy: kontrolowany model zlokalizowanej cholestazy obturacyjnej

Przeglądaj więcej filmów