Name: Mysia kolostomia dystalna, nowy model dywersyjnego zapalenia jelita grubego u myszy C57BL / 6 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Poznaj model kolostomii dystalnej u myszy C57BL/6 do badania zapalenia jelita grubego wywołanego wykluczeniem z przewodu pokarmowego. Ta metoda pozwala analizować interakcje układu immunologicznego z mikrobiomem bez konieczności stosowania zwierząt genetycznie modyfikowanych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez rządowy organ weterynaryjny (Landesamt für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, (LALLF M-V)).
1. Opieka przedoperacyjna i przygotowanie zwierzęcia
<ol>
	<li>Po przybyciu do obiektu dla zwierząt podziel zwierzęta (C57Bl/6) na grupy o podobnej wielkości, umieść każdą grupę razem w klatce i utrzymuj stałe grupy przez cały czas trwania eksperymentów. 
	UWAGA: Używaj zwierząt tej samej płci. Opisane wyniki uzyskano na samcach myszy. 
	UWAGA: Jeśli wykorzystywane są samce, klatki grupuje się razem, zaczynając od 7 tygodnia życia, aby można było ustalić hierarchię, minimalizując w ten sposób ryzyko agresywnego zachowania podczas eksperymentów.</li>
	<li>Co najmniej tydzień przed zabiegiem należy przejść na wysokoenergetyczną (>14 MJ/kg) i wysokobiałkową (>20%) karmę zawierającą wszystkie niezbędne pierwiastki śladowe i witaminy (szczegóły znajdują się na liście materiałów). 
	UWAGA: Upewnij się, że wszystkie myszy ważą co najmniej 25 g podczas operacji.</li>
	<li>Wywołać znieczulenie i znieczulenie poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie ketaminy (87 mg/kg i.p.) i chlorowodorku ksylazyny (13 mg/kg i.p.). Poczekaj, aż mysz zatoleruje stymulację mechaniczną, np. skok palców, bez reakcji motorycznej.</li>
	<li>Zabezpiecz narkotyzowaną mysz taśmami w pozycji leżącej na podkładzie grzewczym umieszczonym na stole operacyjnym, gwarantując stabilne ułożenie podczas pracy i unikając przytłaczającej utraty ciepła ciała. 
	UWAGA: Podkład grzewczy powinien mieć temperaturę powierzchni od 36 °C do 40 °C; temperatura na sali operacyjnej powinna wynosić 21 °C.</li>
</ol>
2. Operacja kolostomii dystalnej
<ol>
	<li>Ogol włosy na brzuchu. Przed przystąpieniem do zabiegu należy trzykrotnie zdezynfekować pole operacyjne przy użyciu alkoholu 70% i jodoforu. Ułóż pole robocze, aby zagwarantować warunki aseptyki.</li>
	<li>Wykonaj laparotomię pośrodkową 15 mm, nacinając mięśnie brzucha i otrzewną wzdłuż kresy białej, minimalizując w ten sposób utratę krwi.</li>
	<li>Użyj dwóch atraumatycznych kleszczy DeBakeya, ostrożnie wyciągnij jelito ślepe, końcowe jelito kręte oraz okrężnicę wstępującą i poprzeczną z jamy otrzewnej. 
	UWAGA: Należy uważać, aby ściśle ograniczyć mechaniczną manipulację jelitem, aby zapobiec uszkodzeniu struktur krezkowych.</li>
	<li>Zidentyfikuj biegun jelita ślepego, okrężnicę wstępującą i jelito cienkie (ryc. 1a i 1b). 
	UWAGA: Prawidłowa identyfikacja okrężnicy wstępującej ma fundamentalne znaczenie dla prawidłowego umieszczenia kolostomii. W przypadkach, gdy anatomia okolicy krętniczo-kątniczej jest niejednoznaczna, obecność plam Peyera identyfikuje jelito cienkie, a obecność utworzonego stolca charakteryzuje okrężnicę.</li>
	<li>Użyj linijki, aby określić pozycję przyszłej kolostomii. W przypadku kolostomii dystalnej należy umieścić go 20 mm dystalnie do zastawki krętniczo-kątniczej.</li>
	<li>Wykonaj drugie 3-milimetrowe nacięcie w ścianie brzucha w prawym górnym kwadrancie. Przeciągnij wcześniej zidentyfikowany segment okrężnicy przez to nacięcie, aby utworzyć pętlę, uważając, aby nie zniekształcić pętli.</li>
	<li>Ostrożnie przełóż elastyczną kaniulę dożylną o rozmiarze 22 przez mezookrężnicę. Uważaj, aby nie uszkodzić krezkowych struktur naczyniowych.</li>
	<li>Wróć jelito do jamy otrzewnej.</li>
	<li>Przymocuj oba końce elastycznej rurki do skóry za pomocą prostych szwów i wchłanialnego szwu (np. poliglaktyna 910 lub polyfil 4-0 1/2c).</li>
	<li>Przed zamknięciem laparotomii należy przeprowadzić resuscytację płynową za pomocą dootrzewnowego wstrzyknięcia 0,5 ml 0,9% soli fizjologicznej.</li>
	<li>Zamknij otrzewną i warstwę mięśniową szwem ciągłym za pomocą szwu wchłanialnego (np. poliglaktyna 910 lub polyfil 4-0 1/2c). Zamknąć skórę szwem ciągłym za pomocą szwu wchłanialnego (np. poliglaktyna 910 lub polyfil 4-0 1/2c).</li>
	<li>Otwórz zewnętrzną pętlę okrężnicy, wykonując częściową transsekcję za pomocą cienkich nożyczek. Unikaj wszelkich obrażeń krezki. Nie należy całkowicie przeciąć okrężnicy.</li>
	<li>Przymocuj każdy otwór kolostomii za pomocą trzech pojedynczych szwów o pełnej grubości do otrzewnej i skóry za pomocą monofilu, wchłanialnego szwu (np. polidioksanonu lub monofilu 6-0 3/8s). Pętla aferentna, która jest funkcjonalną kolostomią końcową, i pętla odprowadzająca, która jest przetoką śluzową, są w tym momencie wyraźnie oddzielone (<silna klasa="xfig">Rysunek 1c). 
	UWAGA: Czas pracy powinien być krótszy niż 20 minut, aby ograniczyć straty płynów i ciepła.</li>
	<li>Po zakończonym zabiegu należy zdezynfekować narzędzia za pomocą bezaldehydowego roztworu do dezynfekcji w kąpieli ultradźwiękowej zgodnie z zaleceniami producenta.</li>
</ol>
3. Operacja pozorowana (kolotomia)
<ol>
	<li>Wykonaj kroki od 1.1. do 2.4.</li>
	<li>Użyj linijki, aby określić przyszłą pozycję kolotomii. Kolotomia powinna być umieszczona w tej samej odległości od zastawki krętniczo-kątniczej, co kolostomia w grupie eksperymentalnej.</li>
	<li>Otwórz okrężnicę na co najmniej dwie trzecie jej obwodu za pomocą cienkich nożyczek.</li>
	<li>Zamknij kolotomię jednowarstwowym, przerywanym szwem o pełnej grubości za pomocą monofilu, wchłanialnego szwu (np. Polidioksanon, monofil 6-0 3/8s). 
	UWAGA: Czas operacji powinien być krótszy niż 20 minut dla doświadczonego chirurga, co ogranicza straty płynów i ciepła.</li>
	<li>Wykonaj kroki 2.10. , 2.11. i 2.14.</li>
</ol>
4. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Wróć zwierzęta do ich klatek. Zapewnić dobrze nagrzaną atmosferę o temperaturze 37 °C (np. za pomocą lampy podczerwonej) do momentu, gdy myszy całkowicie się obudzą. Następnie trzymaj myszy w środowisku o regulowanej temperaturze i wilgotności (21 °C; 30% ± 10% wilgotności względnej). Zapewnij swobodny dostęp do jedzenia i wody pitnej. Aby ułatwić pobieranie płynów, należy zapewnić dodatkową paszę dla zwierząt nasączoną wodą.</li>
	<li>Analgezję pooperacyjną należy rozpocząć od wstrzyknięcia 0,1 mg/kg masy ciała buprenorfiny s.c., gdy zwierzęta wykazują reakcję na stymulację mechaniczną. Uważaj, aby uniknąć depresji oddechowej.</li>
	<li>Uzupełnij wodę pitną o 1 mg/ml tramadolu w celu kontynuacji działania przeciwbólowego w pierwszym tygodniu po operacji.</li>
	<li>Aby zrekompensować zmniejszone spożycie płynów z powodu ograniczonej mobilności, w pierwszym tygodniu po operacji należy umieścić w klatce stałą wkładkę do picia</li>.
	<li>Waż zwierzęta i oceniaj zachowanie zwierząt codziennie w pierwszym tygodniu, co drugi dzień przez pozostałą część pierwszego miesiąca i co trzeci dzień w drugim miesiącu, korzystając z oceny ciężkości choroby opisanej w Kleinwort i wsp.6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

Wszyscy autorzy oświadczają, że nie mają sprzecznych interesów.

Mysi model DC przedstawiony w tym protokole wiarygodnie odtwarza cechy histopatologiczne ludzkiego DC (np. rozwój de novo pęcherzyków limfatycznych w błonie podśluzówkowej odcinków jelit objętych stanem zapalnym, skrócenie krypty i zmniejszenie liczby komórek kubkowych). Oprócz tej zalety, model ten jest indukowany przez bardzo podobny czynnik wyzwalający i ma przebieg kliniczny o umiarkowanym lub łagodnym nasileniu, jak ma to miejsce u większości ludzi dotkniętych chorobą.
A...

W ostatnich latach znaczna liczba niezakaźnych jednostek zapalenia jelita grubego różni się od klasycznych chorób zapalnych jelit (IBD; tj. choroba Leśniowskiego-Crohna lub zapalenie jelita grubego wrzodzie) zostały klinicznie i histopatologicznie scharakteryzowane u ludzi. Mechanizmy patofizjologiczne prowadzące do rozwoju tych form zapalenia jelita grubego nie są w pełni zrozumiałe, częściowo dlatego, że brakuje odpowiednich modeli zwierzęcych. Dywersyjne zapalenie jelita grubego jest jedną z tych niedawno opisanych jednostek. Chociaż termin ten został ukuty w 1980 roku przez Glotzer1, wstępny opis podobnego fenotypu został podany w 1972 roku przez Morson2. Choroba rozwija się u 50% do 91% pacjentów z enterostomią odwracającą kierunek, a jej intensywność kliniczna jest różna3,4. Biorąc pod uwagę roczną zapadalność około 120 000 pacjentów z kolostomią w Stanach Zjednoczonych Ameryki, ta jednostka chorobowa stanowi poważny problem zdrowotny.
Ogólnym celem opracowania tego protokołu było dostarczenie mysiego modelu DC, który opiera się na wyzwalaczu zapalenia jelita grubego podobnym do tego obserwowanego u człowieka DC i który odtwarza podstawowe cechy histopatologiczne ludzkiej choroby. W przeciwieństwie do innych modeli mysiego zapalenia jelita grubego, indukcja zapalenia jelita grubego w naszym modelu nie wymaga genetycznie modyfikowanych zwierząt (np. myszy transgenicznych IL-7, myszy ujemnych z dominacją N-kadheryny lub myszy TGFβ-/-), stosowania substancji drażniących chemicznie (np. zapalenie jelita grubego wywołane siarczanem sodu dekstranu (DSS) lub zapalenie jelita grubego wywołane kwasem trinitrobenzenosulfonowym (TNBS)) ani transferu określonych populacji komórek u myszy z niedoborem odporności (jak wprzypadku haju CD45RB Model transferowy zapalenia jelita grubego) (aby zapoznać się z przeglądem, zobacz<klasa SUP="xref">5). W przeciwieństwie do innych modeli, nienaruszony układ odpornościowy naszego modelu DC pozwala na ocenę mechanizmu immunologicznego zaangażowanego w rozwój DC. Ograniczenie stanu zapalnego błony śluzówkowej do wyłączonego odcinka jelita pozwala na ocenę jego wpływu na odporność błony śluzowej w innych częściach przewodu pokarmowego, na homeostazę immunologiczną w innych przedziałach immunologicznych przewodu pokarmowego (np. plastry Peyera i węzły chłonne krezkowe) oraz na homeostazę immunologiczną całego organizmu. Wreszcie, nasz model stanowi odpowiednie narzędzie do badania mechanizmów kontrolujących miejscowe bodźce zapalne wynikające ze zmian w normalnym środowisku lokalnym zarówno dla lokalnego mikrobiomu, jak i antygenów pokarmowych.

<table><tbody><tr><td>Materiał eksploatacyjny</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>podkład grzewczy, 6 W</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 70% (z metyloetyloketonem)</td><td>Apteka Szpitala Uniwersyteckiego w Greifswaldzie</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aplikatory drewniane, mała bawełniana główka jednostronna, drewniany patyczek, długość 150 mm</td><td>Centramed GmbH, Niemcy</td><td>8308370</td><td>do dezynfekcji pola operacyjnego</td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Atraumatyczne kleszcze DeBakey</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt na igły</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v. kaniula 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Niemcy</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 fioletowy pleciony; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 ml (Strzykawki z igłą ze sterylnym wnętrzem)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Niemcy</td><td>18824-01</td><td>dezynfekcja narzędzi chirurgicznych w kąpieli ultradźwiękowej</td></tr><tr><td>Leki</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamina 10%, 100 mg/ml (chlorowodorek ketaminy)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/ml (chlorowodorek ksylazyny)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Braun Melsungen AG, Niemcy</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0,3 mg/ml (buprenorfina)</td><td>Bayer, Niemcy</td><td>PZN: 01498870</td><td>0,1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Krople, 100 mg/ml (chlorowodorek tramadolu)</td><td>Gr&uuml; nenthal GmbH, Niemcy</td><td>10116838</td><td>1 mg/ml wody pitnej</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriakson)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Niemcy</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg masy ciała i.p.</td></tr><tr><td>metronidazol 5 mg/ml</td><td>Braun Melsungen AG, Niemcy</td><td>PZN: 05543515</td><td>12,5 mg/kg masy ciała i.p.</td></tr><tr><td>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Niemcy</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Napój stały Dehyprev Vit BIO, saszetki</td><td>TripleATrading, Holandia</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Sprzęt</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Niemcy</td><td></td><td>mikroskopia świetlna</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, USA</td><td>770-9000</td><td>Weterynaryjny analizator hematologiczny 50 &mikro; l żylna krew</td></tr><tr><td>EDTA Bandelin SONOREX (kąpiel ultradźwiękowa)</td><td>Bandelin electronics, Niemcy</td><td>RK 100 H</td><td>dezynfekcja narzędzi chirurgicznych</td></tr><tr><td>Oprogramowanie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie NIS-Element BR4</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Niemcy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mysia kolostomia dystalna, nowy model dywersyjnego zapalenia jelita grubego u myszy c57bl / 6

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Dywersyjne zapalenie jelita grubego (DC) jest częstym stanem klinicznym występującym u pacjentów z odcinkami jelit wyłączonymi ze strumienia kału w wyniku enterostomii odwracającej. Etiologia tej choroby pozostaje słabo określona, ale wydaje się, że różni się od klasycznej choroby zapalnej jelit, takiej jak choroba Leśniowskiego-Crohna i wrzodziejące zapalenie jelita grubego. Badania mające na celu rozszyfrowanie mechanizmów patofizjologicznych prowadzących do rozwoju tej choroby były poważnie utrudnione przez brak odpowiedniego modelu mysiego. Protokół ten generuje mysi model DC, który ułatwia badanie roli układu odpornościowego i jego interakcji z mikrobiomem w rozwoju DC. W tym modelu wykorzystującym zwierzęta C57BL/6 dystalne części jelita grubego są wykluczane ze strumienia kału poprzez utworzenie dystalnej kolostomii, wywołując rozwój łagodnego do umiarkowanego stanu zapalnego w wykluczonych segmentach jelita i rozmnażając charakterystyczne zmiany charakterystyczne dla ludzkiego DC z umiarkowaną ogólnoustrojową reakcją zapalną. W przeciwieństwie do modelu szczurzego, dostępna jest duża liczba genetycznie zmodyfikowanych modeli myszy na tle C57BL/6. Połączenie tych zwierząt z naszym modelem pozwala na potencjalne role poszczególnych cytokin, chemokin lub receptorów cząsteczek bioaktywnych (np. interleukiny (IL)-17; IL-10, chemokina CXCL13, receptory chemokiny CXCR5 i CCR7 oraz receptor sfingozyno-1-fosforanu 4) do oceny w patogenezie DC. Dostępność kongenicznych szczepów myszy na tle C57BL/6 znacznie ułatwia eksperymenty transferowe w celu ustalenia ról różnych typów komórek zaangażowanych w etiologię DC. Wreszcie, model daje możliwość oceny wpływu interwencji miejscowych (np. modyfikacji lokalnego mikrobiomu lub miejscowej terapii przeciwzapalnej) na odporność błony śluzowej w chorych i niedotkniętych odcinkach jelit oraz na ogólnoustrojową homeostazę immunologiczną.

Zabieg chirurgiczny jest dobrze tolerowany zarówno w grupie eksperymentalnej (kolostomia), jak i w grupie pozorowanej (kolotomia). Śmiertelność okołooperacyjna nie powinna przekraczać 10%, jeśli zabieg i opieka okołooperacyjna są przeprowadzone prawidłowo. W pierwszym tygodniu po operacji w obu grupach – eksperymentalnej i pozorowanej – obserwuje się znaczną utratę masy ciała. Zwierzęta z grupy pozorowanej osiągają najniższą masę ciała zazwyczaj około czwartego dnia po operacji, natomiast...

Mysia dystalna kolostomia dostarcza mysiego modelu dla ludzkiego dywersyjnego zapalenia jelita grubego, głównie limfocytarnego zapalenia jelita grubego w segmencie okrężnicy wykluczonym ze strumienia kału.

Mysia kolostomia dystalna, nowy model dywersyjnego zapalenia jelita grubego u myszy C57BL / 6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Ogólnym celem tego protokołu jest ułatwienie badania roli układu odpornościowego i jego interakcji z mikrobiomem w rozwoju dywersyjnego zapalenia jelita grubego. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania dotyczące dywersyjnego zapalenia jelita grubego, które występuje w obu segmentach wykluczonych ze strumienia kału i dotyka do 90% pacjentów z enterostomią odwracającą. Główną zaletą tej techniki jest to, że nie wymaga ona genetycznie modyfikowanych zwierząt, stosowania substancji drażniących chemicznie ani przenoszenia określonych populacji komórek do myszy z niedoborem odporności w celu wywołania zapalenia jelita grubego.Po przybyciu do obiektu dla zwierząt podziel myszy na grupy o podobnej wielkości. Umieść każdą grupę w klatce razem i utrzymuj grupy na stałym poziomie przez cały czas trwania eksperymentów. Co najmniej tydzień przed zabiegiem należy przejść na wysokoenergetyczną i wysokobiałkową paszę zawierającą wszystkie niezbędne pierwiastki śladowe i witaminy.Aby przygotować się do operacji po znieczuleniu zwierzęcia zgodnie z protokołem tekstowym, należy użyć taśmy, aby ustabilizować zwierzę w pozycji leżącej na poduszce grzewczej, aby zapobiec utracie ciepła ciała. Następnie sprawdź, czy mysz toleruje stymulację mechaniczną, np. szczypanie palca u nogi bez reakcji motorycznej.Przed przystąpieniem do zabiegu należy trzykrotnie zdezynfekować pole operacyjne przy użyciu alkoholu 70% i joty 4. Ułóż pole robocze, aby zagwarantować warunki aseptyki. Wykonaj średnią laparotomię 15 mm, nacinając mięśnie brzucha i otrzewną wzdłuż kresy białej, minimalizując w ten sposób utratę krwi.Następnie, za pomocą dwóch debakey atraumatycznych kleszczy, ostrożnie wyciągnij jelito ślepe, końcowe jelito kręte oraz okrężnicę zstępującą i poprzeczną z jamy otrzewnej. Należy uważać, aby ograniczyć mechaniczną manipulację jelitem, aby uniknąć uszkodzenia struktur krezkowych i utrzymać optymalną obfitość jelita. Następnie zidentyfikuj biegun jelita ślepego, okrężnicę wstępującą i jelito cienkie.Jeśli anatomia okolicy krętniczo-kątniczej jest niejednoznaczna, obecność plam Peyera identyfikuje jelito cienkie, a obecność form ature charakteryzuje okrężnicę. Użyj linijki, aby określić pozycję przyszłej kolostomii. W przypadku kolostomii dystalnej należy umieścić go 20 mm dystalnie do zastawki krętniczo-kątniczej.Wykonaj drugie 3 mm nacięcie w ścianie brzucha w prawym górnym kwadrancie. Następnie przeciągnij wcześniej zidentyfikowany segment okrężnicy przez to nacięcie, aby utworzyć pętlę, uważając, aby nie zniekształcić pętli. Ostrożnie przełóż elastyczną kaniulę dożylną o rozmiarze 22 przez mezookrężnicę, uważając, aby nie uszkodzić krezkowych struktur naczyniowych.Następnie wróć z powrotem do jamy otrzewnej. Za pomocą prostych szwów i wchłanialnego szwu przymocuj oba końce elastycznej rurki do skóry. Przed zamknięciem laparotomii należy przeprowadzić resuscytację płynową za pomocą iniekcji dootrzewnowej 0,5 ml 0,9% soli fizjologicznej.Zamknij otrzewną i warstwę mięśniową ciągłym szwem resorbowalnym. Następnie zamknij skórę w podobny sposób. Za pomocą cienkich nożyczek otwórz zewnętrzną pętlę okrężnicy, wykonując przecięcie częściowe.Unikaj wszelkich urazów krezki i nie przecinaj całkowicie okrężnicy. Za pomocą wchłanialnego szwu monofilowego przymocuj każdy otwór kolostomii za pomocą trzech pojedynczych szwów o pełnej grubości do otrzewnej i skóry. Pętla aferentna, która jest funkcjonalną kolostomią końcową, i pętla odprowadzająca, która jest przetoką śluzową, są w tym miejscu wyraźnie oddzielone.Aby przeprowadzić kolotomię, po zidentyfikowaniu bieguna jelita ślepego, okrężnicy wstępującej i jelita cienkiego, jak pokazano w przypadku kolostomii dystalnej, użyj linijki, aby określić przyszłą pozycję kolotomii, która powinna znajdować się w tej samej odległości od zastawki krętniczo-kątniczej co kolostomia. Za pomocą cienkich nożyczek otwórz okrężnicę na co najmniej dwie trzecie jej obwodu. Za pomocą wchłanialnego szwu monofilowego zamknij kolotomię szwem przerywanym o pełnej grubości przed przeprowadzeniem resuscytacji płynowej i zamknięciem otrzewnej i skóry, jak poprzednio.Po wykonaniu procedury należy umieścić zwierzęta w klatkach i umieścić je pod lampą podczerwieni o temperaturze 37 stopni Celsjusza, aż w pełni się obudzą, zanim ponownie przejdą do środowiska o kontrolowanej temperaturze i wilgotności. Gdy zwierzęta wykazują reakcję na stymulację mechaniczną, należy rozpocząć analgezję pooperacyjną, wstrzykując 0,1 mg na kg masy ciała buprenorfiny SC. Dokładnie sprawdź, czy nie ma oznak depresji oddechowej. Uzupełnij wodę pitną o 1 mg na ml tramadolu w celu kontynuacji działania przeciwbólowego w pierwszym tygodniu po operacji.Aby zrekompensować zmniejszone spożycie płynów spowodowane ograniczoną mobilnością, w pierwszym tygodniu po operacji należy umieścić w klatce stałą wkładkę do picia. Na koniec zważ zwierzęta i oceniaj ich zachowanie codziennie w pierwszym tygodniu, co drugi dzień przez pozostałą część pierwszego miesiąca i co trzeci dzień w drugim miesiącu. Chirurgia jest dobrze tolerowana zarówno w grupie eksperymentalnej, jak i pozorowanej.Utrata masy ciała jest bardziej wyraźna w grupie eksperymentalnej, osiągając 21,7% początkowej masy ciała. Natomiast zwierzęta pozorowane tracą 10,8% swojej początkowej masy ciała. Całkowita śmiertelność w ciągu pierwszych 60 dni po operacji wynosi około 40% w grupie kolostomii i około 10% w grupie pozorowanej.Większość zgonów miała miejsce w pierwszym tygodniu po operacji, a przyczyny zgonu przedstawiono na tym rysunku. Kolostomia dystalna u myszy powoduje rozwój głównie limfocytarnego zapalenia jelita grubego, odtwarzającego charakterystyczne cechy histologiczne ludzkiego DC.Długość Crypt ulega znacznemu skróceniu w wykluczonych odcinkach jelita i osiąga znaczenie statystyczne po 14 dniach odprowadzania kału. Długość krypty zawierającej komórki kubkowe zmniejsza się po 30 dniach w wykluczonych segmentach jelita.Bezwzględna liczba komórek kubkowych jest również znacznie zmniejszona w kryptach w wyłączonym segmencie jelita po 14 dniach po operacji. Charakterystyczna zmiana DC, rozwój pęcherzyków limfatycznych w błonie śluzowej, wymaga dłuższego czasu trwania odchylenia stolca. Chociaż zwiększoną liczbę pęcherzyków limfatycznych można zaobserwować już po dwóch tygodniach, różnice stają się znaczące po dwóch miesiącach.Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać mysią kolostomię dystalną. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w mniej niż 20 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Model ten można połączyć z innymi genetycznie zmodyfikowanymi modelami lub eksperymentami transferowymi w kongenicznych szczepach myszy, w celu zbadania roli mediatorów stanu zapalnego określonych populacji komórek oraz patogenezy dywersji zapalenia jelita grubego.

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Dekstran siarczan sodu (DSS) podawany w wodzie pitnej jest uznanym mysim modelem uszkodzenia zapalnego w przebiegu ostrego colitis. Niniejszy protokół opisuje metodę podawania DSS oraz przygotowania tkanek.

Modelowanie zapalenia jelita grubego u myszy z użyciem dekstranu siarczanu sodu (DSS)

Przedstawiamy protokół, w którym podanie genotoksycznego czynnika azoksymetanu (AOM), a następnie trzy cykle podania prozapalnego dekstranu siarczanu sodu (DSS), pozwala na szybkie i powtarzalne wywołanie guzów okrężnicy u myszy, wykazujących podobieństwa morfologiczne i molekularne do nowotworów związanych z zapaleniem jelita grubego u ludzi.

Modelowanie raka związanego z zapaleniem jelita grubego z wykorzystaniem azoksymetanu (AOM) i dekstranu siarczanowego sodu (DSS)

W tym filmie opisujemy procedurę chirurgiczną polegającą na generowaniu pętli proksymalnej okrężnicy myszy lub segmentu pcLoop, po której następuje doświetlna iniekcja markerów fluorescencyjnych do segmentu w celu zbadania przepuszczalności nabłonka jelitowego.

Generowanie mysiego modelu pętli proksymalnej jelita grubego: procedura chirurgiczna mająca na celu wygenerowanie pętli proksymalnej jelita grubego i pomiar przepuszczalności jelit poprzez wykrycie markerów fluorescencyjnych w surowicy po wstrzyknięciu doświetlnym

Ten film demonstruje technikę generowania chemicznie wywołanego mysiego modelu zapalenia jelita grubego - choroby zapalnej jelit. Mysz może spożywać roztwór siarczanu sodu dekstranu (DSS) przez odpowiedni czas. Po spożyciu DSS uszkadza barierę warstwy śluzu i nabłonka w okrężnicy, umożliwiając drobnoustrojom jelitowym przedostanie się do leżącej poniżej tkanki – gdzie są wyczuwane przez rezydujące komórki odpornościowe, aby pośredniczyć w przesadnej odpowiedzi immunologicznej, powodując stan...

Technika generowania mysiego modelu zapalenia jelita grubego wywołanego siarczanem sodu

Zakażenie gryzoniami Citrobacter stanowi cenny model do badania infekcji bakteryjnych jelit, jak również odpowiedzi immunologicznych gospodarza i zapalenia jelita grubego u myszy. Protokół ten określa pomiar integralności bariery, obciążenia patogenem i uszkodzeń histologicznych, co pozwala na dokładne scharakteryzowanie udziału patogenu i gospodarza w zakaźnym zapaleniu jelita grubego u myszy.

Mysi model Citrobacter rodentium: badanie udziału patogenów i gospodarza w zakaźnym zapaleniu jelita grubego

W ciągu ostatnich kilku lat, endoskopy nowej generacji stały się ważnymi diagnostycznymi pomocami badawczymi do oceny mysiego zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego. Przedstawiamy tutaj szczegółowy protokół endoskopowej oceny stanu zapalnego i guzów jelita grubego u myszy, a także nowatorski system punktacji, który wykorzystuje identyfikatory dziesiętne do dokumentowania endoskopowego nasilenia zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego.

Elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej

Przedstawiono protokół tworzenia genetycznie modyfikowanego mysiego modelu raka jelita grubego poprzez segmentowe zakażenie adeno-cre i jego nadzorowanie za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości.

Genetycznie zmodyfikowany mysi model sporadycznego raka jelita grubego

Niedrożność jelit to częściowe lub całkowite zablokowanie jelita, które może powodować silne bóle brzucha, nudności, wymioty i uniemożliwiać oddawanie stolca. Ta procedura tworzenia częściowych zatkań jelit u myszy jest wiarygodna w badaniu mechanizmów leżących u podstaw patologicznego wzrostu i śmierci komórek w jelicie.

Mysi model częściowej niedrożności jelit

Nieszczelność zespolenia lub awaria po operacji jest główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności pooperacyjnej. Nasz zabieg chirurgiczny do tworzenia zespolenia jelita grubego jest wiarygodną i powtarzalną metodą badania mechanizmów gojenia się zespoleń.

Tworzenie zespolenia okrężnicy u myszy

Prezentowany protokół opisuje łatwe chirurgiczne usunięcie wyrostka robaczkowego (łaty kątniczej) u myszy, a następnie indukcję raka jelita grubego związanego z chorobą jelit grubego. Ten mysi model wyrostka robaczkowego umożliwia badanie biologicznej roli wyrostka robaczkowego w patogenezie chorób przewodu pokarmowego u ludzi.

Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej

Opisujemy mysi model pooperacyjnej niedrożności jelit generowany przez manipulację jelitową. Funkcję pasażu pokarmowego, zmiany patologiczne i aktywację komórek odpornościowych oceniano 24 godziny po zabiegu.

Pooperacyjny model mysiej niedrożności jelit

Poznaj model kolostomii dystalnej u myszy C57BL/6 do badania zapalenia jelita grubego wywołanego wykluczeniem z przewodu pokarmowego. Ta metoda pozwala analizować interakcje układu immunologicznego z mikrobiomem bez konieczności stosowania zwierząt genetycznie modyfikowanych.

Mysia kolostomia dystalna, nowy model dywersyjnego zapalenia jelita grubego u myszy C57BL / 6

Przeglądaj więcej filmów