Name: Pomiar aktywnego i pasywnego oswajania oddzielnie u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Poznaj protokoły pomiaru aktywnego i pasywnego oswajania u myszy w kontekście neurobiologii zachowania. Metody te umożliwiają osobną ocenę obu komponentów oswajania i wspierają badania genetyczne związane z udomowieniem zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) w następujący sposób: 15H05724, 16H01491 i 15H04289.

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi dla eksperymentów na zwierzętach z National Institute of Genetics (NIG), a wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Komitet NIG ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (zatwierdzenie nr 26-9).
1. Zwierzęta
<ol>
	<li>Hodowla selektywna
	<ol>
		<li>Stwórz dzikie stado heterogeniczne (WHS)6 myszy, krzyżując 8 szczepów wsobnych (MSM, HMI, BLG2, PGN2, KJR, CHD, NJL i BFM/2), unikając chowu wsobnego (krzyżowania między rodzeństwem lub kuzynami)7. Przeprowadź hodowlę selektywną, zaczynając od trzeciego pokolenia (G3), wybierając myszy, które wykazują dłuższy "czas kontaktu" (wybrana grupa, 16 rodzin par godowych) zgodnie z testem aktywnego oswajania (patrz krok 3.1).</li>
		<li>Wygeneruj niewybraną grupę kontrolną (również 16 rodzin par godowych) poprzez losowe krycie od G3 wzwyż. W reprezentatywnym eksperymencie użyj myszy uzyskanych z wybranych (S1) i niewybranych (C1) grup myszy WHS, aby pokazać wzorzec zarówno aktywnego, jak i pasywnego oswojenia za pomocą trzech testów oswajania (patrz kroki 3.1 - 3.3). Do eksperymentów użyj 10 myszy G15 na grupę (S1 i C1).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Reprezentatywne zwierzęta objęte badaniem
	<ol>
		<li>Odstaw wszystkie myszy od rodziców w wieku 3 tygodni i trzymaj je w grupach tej samej płci z rodzeństwem z miotu, używając standardowych rozmiarów plastikowych klatek zawierających wióry drzewne, aż do testu. Utrzymuj wszystkie zwierzęta w obiekcie dla zwierząt NIG w 12/12-godzinnym cyklu światła/ciemności (światła włączone od 06:00 do 18:00) i stałej temperaturze (23 ± 2 °C).</li>
		<li>Upewnij się, że jedzenie i woda są dostępne ad libitum. Przetestuj myszy w wieku 6 tygodni w okresie świetlnym, aby przeanalizować ich interakcje z ludźmi w tej części dnia, kiedy ludzie są zazwyczaj aktywni.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Protokół postępowania
	<ol>
		<li>Użyj dużej pęsety pokrytej silikonowymi rurkami, aby przenieść myszy do nowych klatek, delikatnie podnosząc je za ogony. Użyj pęsety, aby oddzielić je od rodziców podczas odsadzania i przesuwać je podczas eksperymentów. Żadna z myszy nie powinna być traktowana przed testami oswojenia.</li>
		<li>Przenieś myszy do pokoju eksperymentalnego tuż przed testami oswajania.</li>
		<li>Po teście trzymaj samce myszy oddzielnie od siebie, aby uniknąć agresji między samcami u myszy WHS.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Wyposażenie
<ol>
	<li>Użyć aparatu do pracy w otwartym polu (400 x 400 x 400 mm, szarawy polichlorek winylu).</li>
	<li>Oświetl otwarte pole za pomocą lampy zaciskowej z neutralną białą żarówką (100 luksów) zamocowaną na wysokości 450 mm nad otwartym polem (<silna klasa="xfig">Rysunek 1).</li>
	<li>Rejestruj wszystkie zachowania za pomocą dostępnego na rynku kompaktowego aparatu cyfrowego umieszczonego na wysokości 850 mm nad otwartym polem za pomocą statywu (<silna klasa="xfig">Rysunek 1).</li>
	<li>Noś rękawiczki z tkaniny pod rękawiczkami lateksowymi, aby chronić dłonie przed ugryzieniem podczas testu pasywnego oswojenia (rzadka reakcja).</li>
	<li>Zmierz okres testowy za pomocą stopera.</li>
</ol>
3. Testy
Uwaga: Pierwsze dwa testy (aktywne i pasywne oswajanie) były przeprowadzane przez 1 minutę każdy, a test pozostania pod ręką był przeprowadzany przez mniej niż 1 minutę. Wszystkie trzy testy zostały przeprowadzone w aparacie otwartym i zarejestrowane za pomocą kamery cyfrowej. Procedura dezynfekcji jodoforem powinna być wykonana na wszystkich aparatach przed jakimikolwiek badaniami behawioralnymi.
<ol>
	<li>Procedury aktywnego testu oswajania
	<ol>
		<li>Włącz aparat cyfrowy i rozpocznij nagrywanie.</li>
		<li>Delikatnie podnieś mysz za ogon za pomocą dużej pęsety (patrz krok 1.3.1) i przenieś ją z klatki domowej do środka aparatu na otwartym polu.</li>
		<li>Uruchom stoper.</li>
		<li>Połóż lewą rękę w lewym dolnym rogu urządzenia.</li>
		<li>Trzymaj dłoń skierowaną do góry i poruszaj palcami powoli i stabilnie, aby upewnić się, że mysz łączy dłoń z człowiekiem. Średni czas poruszania wszystkimi czterema palcami od małego palca do palca wskazującego powinien wynosić około 0,5 s, przy stale powtarzanym cyklu ruchów.</li>
		<li>Przesuwaj rękę w kierunku myszy powoli, ze średnią prędkością około 13 cm/s, zatrzymując się w odległości 10 cm od boku ciała myszy.</li>
		<li>Zachowaj tę samą odległość, jeśli mysz próbuje się oddalić. Jeśli mysz się zbliży, trzymaj rękę w tej samej pozycji i kontynuuj lekkie poruszanie palcami. Jeśli mysz spróbuje wspiąć się na ramię, przywróć ją na pole za pomocą wolnej ręki.</li>
		<li>Zakończ test po 1 minutzie, wycofaj rękę i przejdź do testu pasywnego oswojenia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Procedury testu pasywnej oswajalności
	<ol>
		<li>Postępuj zgodnie z tymi samymi krokami, co w przypadku aktywnego testu oswajania, ale zamiast zatrzymywać się 10 cm od ciała myszy, powoli dotykaj myszy opuszkami palców.</li>
		<li>Pozostaw palce w tej samej pozycji, stykając się z myszą, aż mysz się odsunie. Gdy mysz próbuje zerwać kontakt, podążaj za nią, poruszając się ze średnią prędkością około 23 cm/s, i ponownie zainicjuj dotyk.</li>
		<li>Zakończ test po 1 minutach. Natychmiast uruchom ponownie stoper, aby rozpocząć test pozostania w ręce.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Procedury dotyczące testu "stay on-hand"
	<ol>
		<li>Podnieś mysz za ogon za pomocą dużej pęsety i delikatnie połóż ją na lewej dłoni. Trzymaj rękę blisko podłogi aparatu do pracy w otwartym polu.</li>
		<li>Delikatnie przesuwaj mysz ze średnią prędkością 0.5 s/skok lewym kciukiem, aż opuści dłoń.</li>
		<li>Powtórz kroki 3.3.1 - 3.3.2 3x.</li>
		<li>Po trzeciej próbie przerwij nagrywanie wideo; wszystkie testy oswajania są teraz zakończone.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Procedury poeksperymentalne
	<ol>
		<li>Zważ mysz i policz liczbę kału i moczu pozostawionych na otwartym polu.</li>
		<li>Oznacz mysz indywidualnie za pomocą dziurkacza do uszu.</li>
		<li>Przetrzyj aparat i rękawice eksperymentatora ręcznikiem papierowym nasączonym 0,2% środkiem odkażającym Iodophor.</li>
		<li>Wyczyść urządzenie suchym ręcznikiem papierowym.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Analizy behawioralne
Uwaga: Nagrania wideo zostały ocenione za pomocą tanaMove w wersji 0.01 (Windows 7), oprogramowania do nagrywania zdarzeń do analiz behawioralnych (Rysunek 2). Oprogramowanie jest dostępne bezpłatnie (Materiały uzupełniające 1) oraz na naszej stronie internetowej (http://www.mgrl-lab.jp/MGRL_software.html). Osoba, która była ślepa na warunki testowe, oceniła cały materiał filmowy. Czas trwania wszystkich wskaźników behawioralnych mierzono w krokach co 0,1 s. Podczas oceniania obserwator naciskał odpowiednią literę na klawiaturze (patrz krok 4.1) po odnotowaniu danego zachowania.
<ol>
	<li>Przypisanie kluczy do analizy wideo
	<ol>
		<li>Przypisz klucze do każdego indeksu zachowania. Użycie odpowiednich kluczy dla każdego indeksu behawioralnego ma kluczowe znaczenie dla automatycznego podsumowania danych w kroku 4.3. 
		Uwaga: Przypisania użyte w tym badaniu są pokazane w <silna klasa="xfig">Rysunek 3.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza wideo
	<ol>
		<li>Przeanalizuj każde nagranie wideo 3x pod kątem różnych wskaźników behawioralnych (<silna klasa="xfig">Rysunek 3B). Zachowanie związane z samoopieką nie zostało ocenione. Upewnij się, że wbudowany głośnik komputera jest włączony, aby słyszeć dźwięk timera w filmie.</li>
		<li>Uruchom tanaMove.</li>
		<li>Przeciągnij i upuść plik wideo, który ma zostać przeanalizowany, do okna tanaMove. Upewnij się, że plik został załadowany oraz że ścieżka i nazwa wyjściowego pliku CSV w polu Plik danych [.csv] jest poprawna.</li>
		<li>Kliknij przycisk Gotowe. Spowoduje to aktywację nowego okna, w którym można wprowadzić przypisane.</li>
		<li>Kliknij przycisk Odtwórz, aby uruchomić plik wideo. Kliknij przycisk Zatrzymaj, aby wstrzymać plik wideo.</li>
		<li>Naciśnij A, gdy zauważysz, że mysz "zmierza" w kierunku ręki lub zbliża się do niej, w tym stojąc, aby powąchać. Naciśnij R, gdy zauważysz, że mysz "porusza się" bez kierowania się w stronę ręki podczas aktywnego testu oswajania.</li>
		<li>Naciśnij W przez co najmniej 0.3 s (co najmniej trzy interwały w oknie), gdy dźwięk timera będzie słyszalny po 60 s.</li>
		<li>Zainicjuj analizę testu pasywnego oswajania po wejściu lewej ręki na wideo. Naciśnij A, gdy zaobserwujesz, że mysz zmierza w kierunku ręki lub zbliża się do niej, a R, gdy zaobserwuje się, że mysz porusza się bez kierowania się w stronę ręki podczas testu pasywnego oswojenia.</li>
		<li>Naciśnij W przez co najmniej 0.3 s (co najmniej trzy interwały w oknie), gdy dźwięk timera będzie słyszalny po 60 s.</li>
		<li>Naciśnij T, gdy zauważysz, że mysz "pozostaje" na dłoni w teście pozostania przy dłoni.</li>
		<li>Po wykonaniu testu "nie trzymaj ręki" kliknij przycisk Zatrzymaj, aby zatrzymać obserwację wideo.</li>
		<li>Kliknij przycisk Wstecz i wpisz nową nazwę pliku wyjściowego danych CSV.</li>
		<li>Kliknij przycisk Gotowy, aby aktywować nowe okno w celu wprowadzenia przypisanych.</li>
		<li>Kliknij przycisk Odtwórz, aby ponownie uruchomić materiał wideo i rozpocząć obserwację aktywnego testu oswajania.</li>
		<li>Naciśnij T, gdy zaobserwujesz, że mysz "kontaktuje się" z człowiekiem, co obejmuje wszystkie dobrowolne zachowania związane z kontaktem, ale nie przypadkowe kontakty, takie jak lądowanie na dłoni po skoku, podczas aktywnego testu oswajania.</li>
		<li>Naciśnij W przez co najmniej 0.3 s (co najmniej trzy interwały w oknie), gdy dźwięk timera będzie słyszalny po 60 s.</li>
		<li>Naciśnij T, gdy mysz pozwoli eksperymentatorowi dotknąć swojego ciała podczas pasywnego testu oswajania.</li>
		<li>Naciśnij W przez co najmniej 0.3 s (co najmniej trzy interwały w oknie), gdy dźwięk timera będzie słyszalny po 60 s.</li>
		<li>Kliknij przycisk Zatrzymaj, aby zatrzymać wideo.</li>
		<li>Kliknij przycisk Wstecz i wpisz nową nazwę pliku wyjściowego danych CSV.</li>
		<li>Kliknij przycisk Gotowy, aby aktywować nowe okno w celu wprowadzenia przypisanych.</li>
		<li>Kliknij przycisk Odtwórz, aby ponownie uruchomić materiał wideo i rozpocząć obserwację aktywnego testu oswajania.</li>
		<li>Naciśnij J, gdy zaobserwujesz, że mysz "skacze" podczas aktywnego testu oswojenia.</li>
		<li>Naciśnij W przez co najmniej 0.3 s (co najmniej trzy interwały w oknie), gdy dźwięk timera będzie słyszalny po 60 s. Następnie rozpocznij obserwację testu pasywnego oswojenia.</li>
		<li>Naciśnij J, gdy zaobserwujesz, że mysz "skacze" podczas testu pasywnego oswojenia.</li>
		<li>Kliknij przycisk Stop, aby zatrzymać obserwację wideo, gdy dźwięk timera będzie słyszalny przez 60 sekund.</li>
		<li>Kliknij przycisk Wstecz i wpisz nową nazwę pliku wyjściowego danych CSV.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Podsumowywanie danych
	<ol>
		<li>Zapisz wszystkie pliki danych pierwotnych (CSV) w tym samym folderze co plik uzupełniający 2.xlsm (Materiały uzupełniające 2).</li>
		<li>Otwórz plik Supplementary 2.xlsm i kliknij przycisk Summarie (Podsumuj).</li>
		<li>Zapisz wyniki jako osobny plik i użyj go do dalszej analizy zachowania oswajania.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Albert, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+differences+in+behavior%2C+physiology+and+neurochemistry+between+rats+selected+for+tameness+and+for+defensive+aggression+towards+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Phenotypic differences in behavior, physiology and neurochemistry between rats selected for tameness and for defensive aggression towards humans.</a> Hormones and Behavior. 53 (3), 413-421 (2008).</li>
<li>Belyaev, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Destabilizing+selection+as+a+factor+in+domestication%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Heredity%22%5BJournal%5D)">Destabilizing selection as a factor in domestication.</a> Journal of Heredity. 70 (5), 301-308 (1978).</li>
<li>Trut, L. <a target="_blank" href="https://www.jstor.org/stable/27857815">Early canid domestication: the farm-fox experiment.</a> American Scientist. 87 (2), 160-169 (1999).</li>
<li>Price, E. O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPrice%2C+EO+%22Animal+Domestication+and+Behavior%22">Animal Domestication and Behavior</a>. , CABI Publishing. New York, NY. (2002).</li>
<li>Goto, T., Tanave, A., Moriwaki, K., Shiroishi, T., Koide, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+for+reluctance+to+avoid+humans+during+the+domestication+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Selection for reluctance to avoid humans during the domestication of mice.</a> Genes, Brain and Behavior. 12 (8), 760-770 (2013).</li>
<li>Matsumoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+breeding+and+selection+mapping+using+a+novel+wild-derived+heterogeneous+stock+of+mice+revealed+two+closely+linked+loci+for+tameness%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Selective breeding and selection mapping using a novel wild-derived heterogeneous stock of mice revealed two closely linked loci for tameness.</a> Scientific Reports. 7, 4607(2017).</li>
<li>Koide, T., Goto, T., Takano-Shimizu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+mixing+to+elucidate+the+genetic+system+of+complex+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Genomic mixing to elucidate the genetic system of complex traits.</a> Experimental Animals. 61 (5), 503-509 (2012).</li>
<li>Albert, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+architecture+of+tameness+in+a+rat+model+of+animal+domestication%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic architecture of tameness in a rat model of animal domestication.</a> Genetics. 182 (2), 541-554 (2009).</li>
<li>Cottle, C. A., Price, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+nonagouti+pelage-color+allele+on+the+behavior+of+captive+wild+Norway+rats+%28Rattus+norvegicus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Psychology%22%5BJournal%5D)">Effects of the nonagouti pelage-color allele on the behavior of captive wild Norway rats (Rattus norvegicus).</a> Journal of Comparative Psychology. 101 (4), 390-394 (1987).</li>
<li>Hayssen, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+nonagouti+coat-color+allele+on+behavior+of+deer+mice+%28Peromyscus+maniculatus%29%3A+a+comparison+with+Norway+rats+%28Rattus+norvegicus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Psychology%22%5BJournal%5D)">Effects of the nonagouti coat-color allele on behavior of deer mice (Peromyscus maniculatus): a comparison with Norway rats (Rattus norvegicus).</a> Journal of Comparative Psychology. 111 (4), 419-423 (1997).</li>
<li>Arakawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+male-specific+QTL+for+social+interaction+behavior+in+mice+mapped+with+automated+pattern+detection+by+a+hidden+Markov+model+incorporated+into+newly+developed+freeware%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A male-specific QTL for social interaction behavior in mice mapped with automated pattern detection by a hidden Markov model incorporated into newly developed freeware.</a> Journal of Neuroscience Methods. 234, 127-134 (2014).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Reprezentatywne wyniki obejmują dziewięć wskaźników behawioralnych z testów oswajania aktywnego, oswajania pasywnego i pozostawania w ręce. Porównanie wyników między grupą badaną a grupą kontrolną wykazało wyraźne różnice w łagodzeniu. Wyniki te pokazują, że te trzy testy są ważne do pomiaru oswajalności u myszy.
Poziomy oswojenia u zwierząt mogą być trudne do empirycznego określenia. Opracowano kilka metod oceny oswajalności u jeleni, myszy i szczurów 8,9,10...

Selektywna hodowla podczas udomowienia zmieniła cechy udomowionych zwierząt, aby lepiej przystosowały się do życia z ludźmi1,2,3. "Oswojenie" to powszechna cecha behawioralna obserwowana u udomowionych zwierząt. Badania nad selektywną hodowlą w celu oswojenia zwierząt ujawniają, jak zmieniały się ich fenotypy w trakcie udomowienia. W słynnym badaniu lisy były selektywnie hodowane w celu oswojenia i ustalono grupę lisów, które wykazywały wysoki poziom oswajania2. Lisy wykazywały również inne zmiany fenotypowe obejmujące morfologię, rozmnażanie, kolor sierści i cechy fizjologiczne. Selektywna hodowla w celu oswojenia u myszy, popularnego zwierzęcia laboratoryjnego, może pomóc w ujawnieniu mechanizmu leżącego u podstaw zmian w różnych fenotypach podczas udomowienia.
Oswajanie ma dwa składniki behawioralne: aktywne podejście do ludzi (aktywne oswajanie) i zmniejszenie unikania ludzi (pasywne oswajanie)4. W poprzednim badaniu ustaliliśmy trzy testy behawioralne, aby scharakteryzować poziomy oswajania u myszy: aktywne oswojenie, pasywne oswajanie i testy pozostania pod ręką5. Pierwszy test miał na celu ilościowe określenie aktywnej oswajalności myszy poprzez pomiar opóźnienia jej spontanicznego podejścia do człowieka i czasu, jaki spędziła w kontakcie z ludzką ręką. Drugi test miał na celu ilościowe określenie biernego oswojenia poprzez zmierzenie, jak długo mysz toleruje dotyk ludzkiej dłoni. Test "zostań przy ręce" miał na celu ilościowe określenie behawioralnego unikania łagodnego głaskania ludzką ręką. Te trzy oceny wymagają jedynie aparatury do pracy w terenie, aparatu cyfrowego i dużej pęsety. Mogą być one wykonywane sekwencyjnie w ciągu 3 minut, co pozwala na zebranie dużej ilości danych dziennie.
W poprzednim badaniu scharakteryzowaliśmy i porównaliśmy zachowania związane z oswajaniem, używając szeregu szczepów wsobnych myszy: 10 dzikich szczepów, jeden japoński szczep wywodzący się od myszy, oraz sześć szczepów laboratoryjnych5. Większość udomowionych szczepów wykazywała znacznie wyższą pasywną oswajalność niż dzikie odmiany, ale aktywne oswajanie nie różniło się między obiema grupami. Na podstawie tych wyników doszliśmy do wniosku, że udomowione myszy, które są założycielami szczepów laboratoryjnych, były głównie selekcjonowane ze względu na ich pasywne oswojenie, ale nie na aktywne oswajanie, w ich historii hodowlanej.
Następnie przeprowadziliśmy selektywną hodowlę z ośmioma dzikimi szczepami myszy, aby wygenerować genetycznie heterogeniczną populację6. Wybraliśmy zwierzęta, które uzyskały wysokie wyniki w teście aktywnego oswajania i skutecznie zwiększały swoją aktywną oswajalność w kolejnych pokoleniach, w porównaniu z grupą kontrolną. Wynik ten wskazuje, że testy wiarygodnie mierzą oswojenie u myszy.
Tutaj opisujemy kompleksową metodę pomiaru wskaźników behawioralnych za pomocą trzech testów behawioralnych. Najpierw wyjaśniamy konfigurację i niezbędną aparaturę. Następnie szczegółowo opisujemy krok po kroku procedurę przeprowadzania eksperymentów, zbierania danych za pomocą wideo i analizowania tych danych za pomocą opracowanego przez nas darmowego oprogramowania. Na koniec pokazujemy reprezentatywne wyniki porównujące pulę selektywnie hodowanych myszy z grupą kontrolną.

<table><tbody><tr><td>aparatura do pracy w otwartym polu</td><td>O' Hara & Sp. z o.o.</td><td>OF-3102</td><td>400 razy; 400 razy; 400 mm, szarawy kompaktowy aparat cyfrowy z polichlorku winylu</td></tr><tr><td></td><td>Ricoh Company, Ltd.</td>Produkcja <td>CX-5</td><td>w firmie to rękawice</td></tr><tr><td>lateksowe</td><td>AS ONE</td><td>BioLab, stoper IKG-8002</td><td></td></tr><tr><td></td><td>SEIKO</td><td>SSBJ018</td><td></td></tr><tr><td>Płyn do dezynfekcji Jodoforu</td><td>Ecolab G.K. (CLEA Japan)</td><td>CL-4123</td><td>Mikro Klene</td></tr></tbody></table>

pomiar aktywnego i pasywnego oswajania oddzielnie u myszy

Measuring Active and Passive Tameness Separately in Mice

Udomowione zwierzęta, takie jak psy i myszy laboratoryjne, wykazują wysoki poziom oswajania, co jest ważne dla ludzi, aby łatwo sobie z nimi poradzić. Oswojenie ma dwa komponenty behawioralne: niechęć do unikania ludzi (pasywne oswojenie) i motywację do zbliżania się do ludzi (aktywne oswajanie). Aby określić ilościowo te składniki u myszy, opracowaliśmy wcześniej testy behawioralne dla aktywnego oswojenia, pasywnego oswojenia i gotowości do pozostania na ludzkiej ręce, z których każdy został zaprojektowany tak, aby można go było ukończyć w ciągu 3 minut. Uzyskane dane wykorzystano do selektywnej hodowli, w której analizowano dużą liczbę myszy na pokolenie. Aktywny test oswajania mierzy ruch myszy w kierunku ludzkiej dłoni i kontakt, w jaki się angażuje. Pasywny test oswajania mierzy czas, w którym mysz toleruje ludzki dotyk. W teście pozostania w dłoni mysz umieszcza się na ludzkiej dłoni i powoli dotyka kciukiem tej ręki; Mierzy się czas, w którym zwierzę pozostaje na ręce. W tym miejscu opisujemy konfigurację testową i aparaturę, wyjaśniamy procedury i omawiamy odpowiednią analizę danych. Na koniec wyjaśniamy, jak interpretować wyniki.

Wcześniej przeprowadziliśmy selektywną hodowlę myszy pod kątem aktywnej oswojenia i z sukcesem uzyskaliśmy myszy wykazujące wysoki poziom aktywnej oswojenia.6Reprezentatywne wyniki testów oswojenia dla wybranych i niewybranych grup myszy w 15.th generacja (G15) przedstawiona jest w Rysunek 4Myszy z wybranej grupy uzyskały wyższe wyniki w teście aktywnego oswojenia, wykazując znacząco dłuższy czas kontaktu z ludzką dłonią niż...

Oswajanie u zwierząt obejmuje zmniejszenie reakcji unikania wobec ludzi (pasywne oswajanie) i wzrost aktywnych podejść do ludzi (aktywne oswajanie). W tym miejscu opisujemy szczegółowe protokoły dla trzech testów behawioralnych (aktywne oswojenie, pasywne oswojenie i testy pozostania przy ręce), aby oddzielnie zmierzyć aktywną i pasywną oswajalność myszy.

Pomiar aktywnego i pasywnego oswajania oddzielnie u myszy

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two ...

Metoda ta może ocenić poziom oswojenia u każdej myszy, a dane będą bardzo przydatne do dalszych badań nad oswojeniem, takich jak mapowanie genetyczne genów związanych z oswojeniem. Główną zaletą tej techniki jest to, że przy użyciu tej metody może ona ocenić dwa główne składniki oswajania: oswajanie aktywne i pasywne, oddzielnie. Procedurę zademonstrują pan Hiromichi Nagayama, doktorant i pani Motoko Nihei, technik z mojego laboratorium.Aby rozpocząć, włącz aparat cyfrowy i rozpocznij nagrywanie. Następnie użyj dużej pęsety, aby delikatnie podnieść mysz za ogon. Przenieś mysz z jej klatki domowej na środek aparatu na otwartym polu.Po uruchomieniu stopera umieść dłoń w dolnym, lewym rogu aparatu. Trzymając dłoń skierowaną do góry, poruszaj palcami, powoli i równomiernie. Powoli przesuń rękę w kierunku myszy i zatrzymaj się w odległości 10 centymetrów od boku ciała myszy.Zachowaj tę odległość, jeśli mysz próbuje się oddalić. Jeśli mysz zbliży się do dłoni, trzymaj dłoń w tej samej pozycji i kontynuuj powolne i równomierne poruszanie palcami. Usuń mysz wolną ręką, jeśli próbuje wspiąć się na ramię.Po minucie zakończ test. Po ustawieniu myszy w aparacie umieść lewą rękę w aparacie. Następnie powoli i równomiernie przesuwaj dłoń w kierunku myszy i delikatnie dotykaj myszy opuszkami palców.Kontynuuj dotykanie myszy opuszkami palców, aż się odsunie. Gdy mysz spróbuje zerwać kontakt, podążaj za nim ręką i ponownie zainicjuj kontakt. Zakończ test po jednej minucie.Natychmiast po zakończeniu poprzedniego testu użyj dużej pęsety, aby podnieść mysz za ogon i delikatnie połóż ją na lewej dłoni. Delikatnie pogłaszcz mysz lewym kciukiem, aż opuści dłoń. Następnie umieść mysz z powrotem na dłoni za pomocą pęsety.Po trzeciej próbie zatrzymaj nagrywanie wideo i zważ mysz. Po powrocie myszy do klatki domowej zapisz ilość kału i moczu pozostawionych w otwartym polu aparatu. Następnie wytrzyj aparat i rękawice ręcznikiem papierowym nasączonym 0,2% środkiem odkażającym jodoforowym i wytrzyj urządzenie suchym ręcznikiem papierowym.Po przypisaniu kluczy do każdego indeksu zachowań, uruchom oprogramowanie tanaMove. Następnie przeciągnij i upuść plik wideo do analizy w oknie. Upewnij się, że plik został załadowany i że informacje w pliku danych.Pole CSV jest poprawne. Kliknij przycisk Gotowe i wprowadź przypisane klucze dla każdego indeksu zachowania w kolejnym oknie. Następnie kliknij przycisk Odtwórz, aby uruchomić plik wideo i Zatrzymaj się, aby go wstrzymać.Naciśnij A, gdy zaobserwujesz, że mysz zmierza w kierunku ręki lub się do niej zbliża. Naciśnij R, gdy zaobserwujesz, że mysz porusza się bez kierowania się w stronę ręki podczas aktywnego testu oswajania. Naciśnij i przytrzymaj W, gdy usłyszysz dźwięk timera po 60 sekundach, aby zaznaczyć koniec aktywnego testu oswajania.Gdy lewa ręka znajdzie się w kadrze, rozpocznij analizę do Testu Pasywnego Oswojenia. Naciśnij A, gdy zaobserwujesz, że mysz zmierza w kierunku ręki i R, gdy zaobserwujesz, że mysz porusza się bez kierowania się w stronę ręki. Następnie naciśnij i przytrzymaj W, gdy usłyszysz dźwięk timera po 60 sekundach.Zainicjuj pasywną analizę oswajania, gdy zauważysz, że lewa ręka wchodzi w kadr. Podczas odtwarzania wideo naciśnij A, gdy zauważysz, że mysz zbliża się do ręki i R, gdy zauważysz, że mysz porusza się bez kierowania się w stronę dłoni. Jeszcze raz naciśnij W, gdy usłyszysz minutnik po 60 sekundach.Następnie naciskaj T za każdym razem, gdy mysz pozostaje na dłoni podczas testu. Po zakończeniu testu kliknij przycisk Zatrzymaj. Następnie kliknij przycisk Wstecz, aby aktywować nowe okno, i wprowadź nową nazwę pliku do wprowadzania danych CSV.Następnie kliknij przycisk Gotowy i wprowadź odpowiednie klucze w nowym oknie. Następnie kliknij przycisk Odtwórz, aby ponownie uruchomić wideo i rozpocząć analizę Aktywnego Testu Okiełznania. Podczas odtwarzania wideo naciśnij T za każdym razem, gdy mysz dobrowolnie skontaktuje się z programem obsługi.Gdy licznik czasu zabrzmi po 60 sekundach, naciśnij i przytrzymaj W. Podczas testu pasywnego oswajania naciśnij T, gdy mysz pozwoli przewodnikowi dotknąć swojego ciała. Następnie naciśnij i przytrzymaj W, gdy minutnik zabrzmi po 60 sekundach. Następnie kliknij przycisk Zatrzymaj, a następnie przycisk Wstecz przed wprowadzeniem nazwy pliku do wyjścia danych CSV.Następnie kliknij przycisk Gotowy, aby aktywować nowe okno w celu wprowadzenia przypisanych. Następnie kliknij przycisk Odtwórz, aby rozpocząć aktywny test oswajania. Gdy zobaczysz, że mysz skacze, naciśnij J. Następnie naciśnij W, gdy po 60 sekundach zabrzmi minutnik.Kliknij przycisk Zatrzymaj, aby zatrzymać obserwację wideo, a licznik czasu włączy się ponownie po 60 sekundach. Następnie kliknij przycisk Wstecz i wprowadź nazwę pliku wyjściowego danych CSV. Następnie zapisz wszystkie pliki danych surowych w folderze zawierającym dwa dodatkowe pliki.Otwórz dwa dodatkowe pliki i kliknij przycisk Podsumuj. Na koniec zapisz wyniki jako osobny plik do dalszych analiz. Stosując selektywną hodowlę, wyprodukowano myszy o wysokim poziomie aktywnego oswajania.Myszy z selektywnych grup hodowlanych uzyskały wyższe wyniki w teście aktywnej oswajalności, wykazując dłuższy czas kontaktu z ludzką ręką niż myszy kontrolne. Myszy z obu grup nie różniły się istotnie pod względem kursowania, lokomocji czy czasu skakania. Jednak wybrane myszy uzyskały wyższe wyniki w teście pasywnej oswajalności.Ponadto wybrane myszy pozostawały na ludzkiej dłoni znacznie dłużej niż myszy kontrolne w teście Stay-On-Hand. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać, aby unikać dotykania myszy do czasu wykonania testu oswajania, ponieważ doświadczenie w obsłudze może znacząco wpłynąć na oswojenie każdej myszy.

measuring-active-and-passive-tameness-separately-in-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Deficyty siły mięśniowej występują w wielu stanach klinicznych, takich jak choroba neuronu ruchowego. Opisane tutaj testy odwróconego sita oraz podnoszenia ciężarów mierzą siłę u myszy niemal wyłącznie, przy minimalnym wpływie czynników takich jak koordynacja.

Pomiar siły myszy

Niniejszy artykuł przedstawia protokół testów w labiryncie T z wykorzystaniem zmodyfikowanego zautomatyzowanego aparatu do oceny funkcji uczenia się i pamięci u myszy.

Zadania wymuszonej alternacji w labiryncie T oraz dyskryminacji lewo-prawo w celu oceny pamięci operacyjnej i referencyjnej u myszy

Poziomy aktywności w otwartym polu są używane do oceny poziomu aktywności lokomotywy i zachowania. Protokół ten zapewnia dobrze zaprojektowany, ustandaryzowany protokół do stosowania w badaniach przedklinicznych dotyczących zaburzeń nerwowo-mięśniowych.

Pomiary behawioralne i ruchowe z wykorzystaniem otwartego systemu monitorowania aktywności w chorobach mięśni szkieletowych

Zapewniony jest protokół korzystania z labiryntu otwartego pola w celu uzyskania dostępu do ogólnej aktywności lokomotorycznej, lęku i emocjonalności w laboratoryjnym modelu myszy.

Wykorzystanie labiryntu otwartego pola do pomiaru zachowań lokomotorycznych i lękowych u myszy

Ten protokół opisuje metodę ilościowego określania towarzyskości myszy. Myszy są filmowane, gdy poruszają się i wchodzą w interakcje w specjalnej klatce. Przetwarzanie filmów pozwala na zautomatyzowaną kwantyfikację towarzyskości z doskonałą dokładnością i niezawodnością.

Eksperymentalna ocena towarzyskości myszy przy użyciu podejścia do zautomatyzowanego przetwarzania obrazu

Ten protokół mierzy przestrzenne uczenie się i pamięć za pomocą labiryntu Barnesa. Nowatorski paradygmat damy w niebezpieczeństwie służy do oceny aktywności lokomotorycznej i zachowań prospołecznych u myszy.

Analiza uczenia się przestrzennego i zachowań prospołecznych u myszy przy użyciu paradygmatów labiryntu Barnesa i damy w niebezpieczeństwie

Ten artykuł opisuje, jak przeprowadzać testy zachowań seksualnych u samców myszy.

Ocena zachowań seksualnych samców myszy

Mechaniczny test unikania konfliktów jest używany jako nierefleksyjny odczyt wrażliwości na ból u myszy, który może być wykorzystany do lepszego zrozumienia reakcji afektywno-motywacyjnych w różnych modelach bólu myszy.

Mechaniczny test unikania konfliktów do pomiaru zachowania bólowego u myszy

Aby badać zachowania związane z lotem w kontekście strachu, wprowadzamy zmodyfikowany protokół warunkowania strachu. Protokół ten zapewnia, że myszy konsekwentnie wykazują zachowania związane z lotem podczas prezentacji wskazówek w warunkowaniu strachu.

Zmodyfikowane warunkowanie strachu w celu wywołania zachowań związanych z lotem u myszy

Modele gryzoni są cennymi narzędziami do badania podstawowych zachowań związanych z zaburzeniami ze spektrum autyzmu (ASD). W tym artykule wyjaśniamy dwa testy behawioralne do modelowania podstawowych cech ASD u myszy: samopielęgnację, który ocenia powtarzające się zachowanie, oraz trzykomorowy test interakcji społecznych, który dokumentuje upośledzenia społeczne.

Strategie oceny zachowań podobnych do autystycznych u myszy

Ten protokół opisuje skuteczny model dobrowolnego działania w kółko, który może być zaimplementowany w różnych kontekstach badawczych. W przeciwieństwie do innych modeli uruchamiania dobrowolnego, ta metoda pozwala uniknąć izolacji podczas śledzenia metryk biegania u poszczególnych myszy.

Śledzenie indywidualnych wskaźników biegania u myszy przy użyciu dobrowolnego protokołu uruchamiania koła, który minimalizuje izolację społeczną

Poznaj protokoły pomiaru aktywnego i pasywnego oswajania u myszy w kontekście neurobiologii zachowania. Metody te umożliwiają osobną ocenę obu komponentów oswajania i wspierają badania genetyczne związane z udomowieniem zwierząt.

Pomiar aktywnego i pasywnego oswajania oddzielnie u myszy

Przeglądaj więcej filmów