Name: Zwężenie lewego przedsionka wywołane tętnicą żylną płuc i nadciśnienie płucne grupy 2 u szczura (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Poznaj technikę zwężenia lewego przedsionka u szczura, modelu nadciśnienia płucnego grupy 2. Ta metoda chirurgiczna z klipsem tytanowym pozwala badać arterjalizację żył płucnych i mechanizmy choroby.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują za letni program Mitacs-Japan Society for the Promotion of Science (JSPS). Ping Yu Xiong otrzymał wsparcie finansowe z Letniego Programu Mitacs-JSPS na wizytę w Jikei University School of Medicine. Dr Minamisawa jest częściowo wspierany przez Ministerstwo Edukacji, Kultury, Sportu, Nauki i Technologii Japonii (S.M.), Program wspierany przez MEXT dla Fundacji Badań Strategicznych na Uniwersytetach Prywatnych (S.M.), Fundację Upamiętniającą Wyścigi Pojazdów (S.M.) oraz Fundusz Badań Podyplomowych Uniwersytetu Jikei (S.M.) ze wsparciem finansowym dla tego projektu. Dr Archer jest częściowo wspierany przez amerykańskie Narodowe Instytuty Zdrowia (NIH), granty NIH 1R01HL113003-01A1 (S.L.A.) i NIH 2R01HL071115-08 (S.L.A.), Canada Foundation for Innovation, Tier 1 Canada Research Chair in Mitochondrial Dynamics and Translational Medicine (S.L.A.), William J. Henderson Foundation, Canadian Vascular Network oraz Queen's Cardiopulmonary Unit (QCPU).
Autorzy dziękują Panu Tadashi Kokubo, Szefowi Usług Fotograficznych Akademickiego Centrum Informacyjnego w Jikei University School of Medicine, za nakręcenie filmu.

Protokół eksperymentalny LAS został zatwierdzony przez Komitet Opieki nad Zwierzętami Jikei University School of Medicine oraz Uniwersytecki Komitet ds. Badań i Etyki (protokół #2015-118).
1. Przygotowanie przedoperacyjne
<ol>
	<li>Po przybyciu do obiektu dla zwierząt należy zapewnić 5-tygodniowym samcom szczurów Sprague Dawley o wadze od 150 do 200 g z 1 tygodniem na aklimatyzację w nowym domu przed operacją.</li>
	<li>Przed zabiegiem należy przygotować następujący sprzęt przez autoklawowanie: 1) respirator dla małych zwierząt, 2) urządzenie do znieczulenia, 3) zestaw do intubacji (składający się z pary kleszczy hemostatycznych, depresora języka i angiocewnika 18 G), 4) narzędzia chirurgiczne (w tym para zakrzywionych kleszczy, para kleszczy prostych, wkrętak igły, zwijacz klatki piersiowej, para nożyczek, szew monofilamentowy 5-0, aplikator z klipsem, średnio-duże klipsy i rurka na klatkę piersiową 23 G).</li>
	<li>Przygotuj sterylne patyczki higieniczne i gazę, aby poradzić sobie z krwawieniem.</li>
	<li>Użyj poduszki grzewczej, aby utrzymać temperaturę ciała zwierzęcia około 37 °C podczas zabiegu.</li>
</ol>
2. Anestezjologia i intubacja dotchawicza
<ol>
	<li>Znieczulić szczura w komorze indukcyjnej z 5% izofluranem zmieszanym z 2 l/min powietrza w pomieszczeniu</li>.
	<li>Przed intubacją zgol włosy na klatce piersiowej szczura za pomocą golarki do włosów i nałóż krem do depilacji, aby usunąć cienkie włosy.</li>
	<li>Sprawdź odruch pedałowania, aby potwierdzić skuteczne znieczulenie przed intubacją.</li>
	<li>Zaczep przednie zęby sznurkiem i zabezpiecz sznurek dwoma kołkami.</li>
	<li>Otwórz usta szczura za pomocą kleszczy hemostatu i włóż depresor języka do ust.</li>
	<li>Podnieś depresor języka, aby uwidocznić strunę głosową. 
	UWAGA: Pomocne jest świecenie silnym światłem na obszar głowy szczura, aby pomóc w wizualizacji strun głosowych.</li>
	<li>Wprowadzić cewnik naczyniochłonny 18 G jako rurkę dotchawiczą do tchawicy, a następnie szybko podłączyć cewnik do respiratora.</li>
	<li>Ustaw objętość oddechową na 10 μl na gram przy częstości oddechów 100 oddechów/minutę.</li>
	<li>Utrzymać znieczulenie za pomocą 2% izofluranu zmieszanego z 2 l/min powietrza w pomieszczeniu</li>.
</ol>
3. Przygotowanie pola operacyjnego
<ol>
	<li>Przygotować miejsce operacji za pomocą naprzemiennych peelingów z chlorheksydyny i alkoholu x3.</li>
	<li>Buprenorfinę podawać podskórnie w dawce 0,01 mg/kg.</li>
	<li>Przykryj szczura sterylną zasłoną.</li>
	<li>Sprawdź odruch pedałowania, aby potwierdzić pomyślną intubację i utrzymanie znieczulenia.</li>
</ol>
4. Operacja zwężenia lewego przedsionka
<ol>
	<li>Zaznacz miejsce nacięcia 2 cm poniżej lewej pachy szczura za pomocą linijki.</li>
	<li>Wykonaj 2 cm lewe boczne nacięcie ściany klatki piersiowej nożyczkami.</li>
	<li>Oddziel mięśnie międzyżebrowe między czwartym a piątym żebrem, używając prostych i zakrzywionych kleszczy, aż do wejścia do jamy klatki piersiowej.</li>
	<li>Włóż zwijacz klatki piersiowej do jamy klatki piersiowej. Kontynuuj używanie prostych i zakrzywionych kleszczy do oddzielenia mięśnia międzyżebrowego, aby uzyskać bezpośrednią wizualizację grasicy i serca.</li>
	<li>Podnieś grasicę za pomocą prostych kleszczy. Usuń grasicę pokrywającą serce nożyczkami. Unikaj cięcia lub wbijania się w główne naczynia krwionośne.</li>
	<li>Ostrożnie przełóż szew monofilamentowy 5-0 przez powierzchnię lewej komory, tuż poniżej uszka lewego przedsionka. Unikaj przechodzenia igły przez główne tętnice wieńcowe.</li>
	<li>Po założeniu szwu i braku znaczącego krwawienia zawiąż luźny węzeł.</li>
	<li>Pociągnij nić do szwów w górę i do przodu, aby wyjąć serce z klatki piersiowej.</li>
	<li>Gdy serce zostanie wyjęte z klatki piersiowej, szybko przyłóż średnio-duży klips do lewego przedsionka, tuż nad zastawką mitralną. 
	UWAGA: Klips jest zamknięty do połowy, a końcówka klipsa uciska lewy przedsionek, powodując zwężenie lewego przedsionka.</li>
	<li>Szybko włóż serce z powrotem do klatki piersiowej. Upewnij się, że serce nie znajduje się poza klatką piersiową dłużej niż 30 sekund.</li>
	<li>Usuń szew podtrzymujący używany do podnoszenia serca.</li>
	<li>Zamknij klatkę piersiową szwem monofilamentowym 5-0, używając prostego przerywanego wzoru.</li>
	<li>Włożyć rurkę do klatki piersiowej o pojemności 23 g dołączoną do strzykawki o pojemności 10 ml do klatki piersiowej, a następnie przystąpić do zamykania mięśni i skóry ściany klatki piersiowej za pomocą prostych przerywanych szwów.</li>
	<li>Pobrać powietrze, krew i wysięk opłucnowy przez włożoną rurkę do klatki piersiowej za pomocą dołączonej strzykawki o pojemności 10 cm3, a następnie pociągnąć rurkę.</li>
	<li>Zamknij warstwę skóry szwem monofilamentowym 5-0, używając prostego przerywanego wzoru.</li>
	<li>Buprenorfinę podawać podskórnie w dawce 0,01 mg/kg.</li>
	<li>Wyłącz izofluran.</li>
	<li>Odłącz respirator po zaobserwowaniu spontanicznego oddychania.</li>
	<li>Trzymaj szczura zaintubowanego i pozwól mu dojść do siebie na poduszce grzewczej, aż się obudzi.</li>
	<li>Bezpiecznie ekstubować szczura po zaobserwowaniu jednego lub więcej z następujących objawów: szczur zaczyna poruszać czterema kończynami, odzyskuje odruch prostowania, odzyskuje odruch wymiotny lub wykazuje spontaniczne mikcie.</li>
</ol>
5. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Co 8 - 12 godzin podawać podskórnie buprenorfinę w dawce 0,01 mg/kg. Karprofen w dawce 5 mg/kg mc. podaje się podskórnie codziennie przez 2 dni, a następnie, w razie potrzeby, jeśli szczur nie porusza się dobrze i wygląda, jakby odczuwał ból.</li>
	<li>Zaraz po operacji należy podać podskórnie 5 ml zwykłej soli fizjologicznej, ponieważ szczur może mieć trudności z piciem z kranu z wodą, bezpośrednio po operacji.</li>
</ol>
6. Potwierdzenie sukcesu zwężenia lewego przedsionka za pomocą echokardiografii
<ol>
	<li>Wykonaj echokardiografię przezklatkową 2 tygodnie po operacji, aby określić prędkość napływu lewej komory.</li>
	<li>Znieczulić szczura, postępując zgodnie z krokami opisanymi w sekcji 1.</li>
	<li>Po indukcji znieczulenia należy utrzymać znieczulenie za pomocą stożka nosowego z 2% izofluranem zmieszanym z 2 l/min powietrza w pomieszczeniu.</li>
	<li>Ogol ścianę klatki piersiowej szczura golarką do włosów i użyj kremu do depilacji, aby usunąć pozostałe włosy.</li>
	<li>Umieść sondę ultrasonograficzną na wierzchołku serca, który znajduje się wokół piątej przestrzeni międzyżebrowej po lewej stronie klatki piersiowej. Przesuwaj sondę w tym obszarze, aż uzyskasz dobry widok z czterech komór.</li>
	<li>Zmierz prędkość dopływu lewej komory za pomocą trybu Dopplera fali pulsacyjnej tuż nad pierścieniem zastawki mitralnej.</li>
	<li>Prędkość dopływu lewej komory większa niż 2,0 m/s jest wymagana do rozwoju umiarkowanego nadciśnienia płucnego po 8 - 10 tygodniach od operacji LAS.</li>
</ol>
7. Operacja pozorowana
<ol>
	<li>Z wyjątkiem zastosowania klipsa (krok 4.9), wykonaj wszystkie powyższe kroki, aby stworzyć szczury kontrolne (SOC) w tym samym wieku.</li>
</ol>

<ol><li>McGuire, L. B., Nolan, T. B., Reeve, R., Dammann Jr, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cor+Triatriatum+as+a+Problem+of+Adult+Heart+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cor Triatriatum as a Problem of Adult Heart Disease.</a> Circulation. 31, 263-272 (1965).</li>
<li>Strange, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension%3A+prevalence+and+mortality+in+the+Armadale+echocardiography+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension: prevalence and mortality in the Armadale echocardiography cohort.</a> Heart. 98 (24), 1805-1811 (2012).</li>
<li>Moreira, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+Pulmonary+Hypertension+in+the+General+Population%3A+The+Rotterdam+Study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Prevalence of Pulmonary Hypertension in the General Population: The Rotterdam Study.</a> PLoS ONE. 10 (6), e0130072(2015).</li>
<li>Wijeratne, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+Incidence+and+Prevalence+of+World+Health+Organization+Groups+1+to+4+Pulmonary+Hypertension%3A+A+Population-Based+Cohort+Study+in+Ontario%2C+Canada%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Cardiovascular+Quality+and+Outcomes%22%5BJournal%5D)">Increasing Incidence and Prevalence of World Health Organization Groups 1 to 4 Pulmonary Hypertension: A Population-Based Cohort Study in Ontario, Canada.</a> Circulation: Cardiovascular Quality and Outcomes. 11 (2), (2018).</li>
<li>Briongos Figuero, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+persistent+pulmonary+hypertension+after+mitral+valve+replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+and+Vessels%22%5BJournal%5D)">Predictors of persistent pulmonary hypertension after mitral valve replacement.</a> Heart and Vessels. 31 (7), 1091-1099 (2016).</li>
<li>Jiang, B. H., Tardif, J. C., Shi, Y., Dupuis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bosentan+does+not+improve+pulmonary+hypertension+and+lung+remodeling+in+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Society%22%5BJournal%5D)">Bosentan does not improve pulmonary hypertension and lung remodeling in heart failure.</a> European Respiratory Society. 37 (3), 578-586 (2011).</li>
<li>Dayeh, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+validation+of+pulmonary+hypertension+due+to+heart+failure+with+reduced+ejection+fraction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic validation of pulmonary hypertension due to heart failure with reduced ejection fraction in mice.</a> Scientific Reports. 8, (2018).</li>
<li>Yin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sildenafil+preserves+lung+endothelial+function+and+prevents+pulmonary+vascular+remodeling+in+a+rat+model+of+diastolic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Sildenafil preserves lung endothelial function and prevents pulmonary vascular remodeling in a rat model of diastolic heart failure.</a> Circulation: Heart Failure. 4 (2), 198-206 (2011).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effects+and+Mechanism+of+Atorvastatin+on+Pulmonary+Hypertension+Due+to+Left+Heart+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The Effects and Mechanism of Atorvastatin on Pulmonary Hypertension Due to Left Heart Disease.</a> PLoS ONE. 11 (7), e0157171-e0157171 (2016).</li>
<li>Hunt, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+veins+in+the+normal+lung+and+pulmonary+hypertension+due+to+left+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Pulmonary veins in the normal lung and pulmonary hypertension due to left heart disease.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 305 (10), L725-L736 (2013).</li>
<li>Fujimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+due+to+left+heart+disease+causes+intrapulmonary+venous+arterialization+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension due to left heart disease causes intrapulmonary venous arterialization in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 154 (5), 1742-1753 (2017).</li>
<li>Katz, M. G., Fargnoli, A. S., Hajjar, R. J., Hadri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hypertension+arising+from+left+heart+disease+causes+intrapulmonary+venous+arterialization+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hypertension arising from left heart disease causes intrapulmonary venous arterialization in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (1), 281-282 (2018).</li>
<li>Alsoufi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Not+a+Cinderella+story%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Not a Cinderella story.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (1), 282-284 (2018).</li>
<li>Kato, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vein+stenosis+and+the+pathophysiology+of+%26%2334%3Bupstream%26%2334%3B+pulmonary+veins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vein stenosis and the pathophysiology of &#34;upstream&#34; pulmonary veins.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (1), 245-253 (2014).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Szczur LAS jest nowym modelem PH grupy 2, który spotkał się już z dużym zainteresowaniem ze strony naukowców z tej dziedziny12,13. W porównaniu z dwoma istniejącymi modelami grupy 2, a mianowicie zwężeniem żyły płucnej (PVS) model14, wykorzystującym prosięta,oraz modelem szczura z pasmem nadwieńcowym aorty (SAB) 8,9,10, model szczurzy LAS ma kilka zalet.<sup class="xref"...

Celem tego artykułu jest pokazanie krok po kroku, jak przeprowadzić operację LAS u szczurów. Chirurgicznie indukowany LAS ściśle naśladuje stwardnienie rozsiane i triatriatum u ludzi, co wiąże się z powstaniem mechanicznej przeszkody w lewym przedsionku1. Niedrożność dopływu do lewej komory (LV) często powoduje przekrwienie krążenia żylnego w płucach, a u pacjentów stopniowo rozwija się PH. Światowa Organizacja Zdrowia klasyfikuje PH spowodowane chorobami lewego serca jako grupę 2, która jest najbardziej rozpowszechnioną grupą PH2,3,4. Rozpoznanie PH u pacjentów z chorobami lewego serca wiąże się z ponad siedmiokrotnym wzrostem standaryzowanej śmiertelności w ciągu 1 roku4. Obecnie nie ma zatwierdzonej terapii PH grupy 2 poza leczeniem podstawowych chorób lewego serca (np. chirurgiczna wymiana zwężonej zastawki mitralnej). Jednak nawet skuteczna wymiana zastawki mitralnej nie rozwiązuje w pełni pH nawet u połowy pacjentów z MS5. To utrzymujące się pH jest spowodowane niekorzystną przebudową naczyń płucnych, która jest słabo poznana. W związku z tym modele zwierzęce są ważne dla lepszego zrozumienia mechanizmów molekularnych leżących u podstaw niekorzystnej przebudowy naczyń płucnych w PH grupy 2.
Istnieje kilka modeli zwierzęcych grupy 2 PH. Podwiązanie tętnic wieńcowych6,7 i poprzeczne pasmo aorty8,9,10 u gryzoni są najczęściej używanymi modelami zwierzęcymi PH grupy 2. Główną wadą tych modeli jest udział LV, co sprawia, że wynik badań PH grupy 2 jest trudny do interpretacji. Natomiast LV pozostaje nienaruszony w modelu LAS. Co więcej, model LAS jest klinicznie istotny, ponieważ powoduje powolny i postępujący rozwój PH w okresie 10 tygodni11. U ludzi stwardnienie rozsiane jest uważane za znaczące, jeśli prędkość przepływu dopplerowskiego jest większa niż 2,0 m/s11, a także używamy tej liczby jako punktu odcięcia w celu określenia, czy operacja LAS spowodowała znaczne zwężenie. Ponadto, mimo że model LAS generuje łagodne lub umiarkowane PH, wykazuje charakterystyczne zmiany histologiczne, podobne do tych u ludzi, a mianowicie rozwój tętnicy żylnej wewnątrzpłucnej11. Model szczura LAS jest nowatorskim i klinicznie istotnym modelem PH grupy 2 z zachowaną funkcją lewej komory. Nadaje się do badania patofizjologii trwałej przebudowy naczyń płucnych, identyfikacji celów molekularnych i testowania nowych terapii PH grupy 2.

<table><tbody><tr><td>5-0 Szew prolenowy</td><td>Johnson & Johnson - Ethicon</td><td>8725H</td><td>Szew polipropylenowy z technologią HEMO-SEAL</td></tr><tr><td>Aparat do znieczulenia</td><td>Wakenyaku Co., Ltd.</td><td>BRTK-100A Pompa</td><td>powietrza i aparat do znieczulania</td></tr><tr><td>Drut prowadnikowy angiocewnika</td><td>Samodzielnie wykonany</td><td></td><td>prowadnik 10 cm przyklejony do strzykawki o pojemności 1 cm&nbsp;</td></tr><tr><td>Retraktor klatki piersiowej</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td><td>F-2</td><td></td></tr><tr><td>Rurka na klatkę piersiową 23G</td><td>Samodzielnie wykonana</td><td></td><td>strzykawka o pojemności 10 ml przymocowana do igły 23G plus plastikowa rurka</td></tr><tr><td>Zakrzywione kleszcze</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td><td>A-14</td><td></td></tr><tr><td>Poduszka grzewcza</td><td>Vivaria</td><td>MP-916-NV</td><td>Utrzymuj temperaturę ciała na poziomie 37 stopni Celsjusza</td></tr><tr><td>Klipsy podwiązywalne Horizon</td><td></td><td>Teleflex REF 003200</td><td>Rozmiar Średnio-duży</td></tr><tr><td>Aplikator do podwiązywania Horizon do średniego i dużego rozmiaru Horizon</td><td>Teleflex</td><td>REF 337085</td><td>Klipsy do podwiązywania Kątowa szczęka, (20 cm)</td></tr><tr><td>Uchwyt na igłę</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td><td>MC-40</td><td></td></tr><tr><td>Respirator dla gryzoni</td><td>CWE Inc</td><td>SAR-830/P</td><td>Respirator dla małych zwierząt</td></tr><tr><td>Nożyczki</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td><td>B-12</td><td>Nożyczki proste, najlepiej z okrągłymi końcówkami</td></tr><tr><td>Kleszcze proste</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td><td>A-7</td><td></td></tr><tr><td>Depresor języka</td><td>Uchida Yoko Co., Ltd.</td><td>8-615-2417</td><td>Użyj szerokiego końca</td></tr></tbody></table>

zwężenie lewego przedsionka wywołane tętnicą żylną płuc i nadciśnienie płucne grupy 2 u szczura

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

Mechanizm indukowanej zwężeniem zastawki mitralnej tętnicy żylnej płucnej i nadciśnienia płucnego grupy 2 (PH) jest niejasny. Nie ma modelu PH grupy 2 u gryzoni ze względu na zwężenie zastawki mitralnej (SM), co ułatwiłoby badanie mechanizmów chorobowych i potencjalnych strategii terapeutycznych. Przedstawiamy nowy szczurzy model tętnicy żylnej płuc wywołanej przekrwieniem żylnym płuc i PH grupy 2 spowodowanej zwężeniem lewego przedsionka (LAS). LAS uzyskuje się poprzez zwężenie lewego przedsionka za pomocą półzamkniętego tytanowego klipsa. Po operacji LAS model szczura z prędkością napływu strumieniowego większą lub równą 2,0 m/s w badaniu echokardiograficznym stopniowo rozwija tętnicę żylną płuc i PH grupy 2 w okresie od 8 do 10 tygodni. W tym protokole przedstawiamy krok po kroku procedurę, jak wykonać operację LAS. Prezentowany model szczurzy LAS naśladuje stwardnienie rozsiane u ludzi i jest przydatny do badania mechanizmu molekularnego leżącego u podstaw tętnic żylnych płuc oraz do przedklinicznej oceny terapii PH grupy 2.

Skuteczność LAS jest potwierdzana za pomocą echokardiografii 2 tygodnie po operacji. Szczury z prędkością przepływu wlotowego do LV przekraczającą 2,0 m/s, mierzoną w rzucie czterojamowym, uznaje się za zwierzęta z rozwiniętą istotną stenozą (Rycina 1), u których w 8–10 tygodniu po zabiegu LAS niezawodnie rozwija się umiarkowana PH oraz arterjalizacja żył płucnych.
Dziesięć tygodni po operacji LAS s...

Zwężenie lewego przedsionka (LAS) jest nowatorską techniką chirurgiczną używaną do badania nadciśnienia płucnego grupy 2 (PH) i mechanizmów leżących u podstaw tętnicy żylnej płucnej. Tutaj przedstawiamy protokół zwężania lewego przedsionka za pomocą tytanowego klipsa w celu spowodowania tętnicy żylnej płuc i umiarkowanego PH u szczura.

Zwężenie lewego przedsionka wywołane tętnicą żylną płuc i nadciśnienie płucne grupy 2 u szczura

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

Dziękujemy za obejrzenie naszych filmów. Nazywam się Susumu Minamisawa i pracuję w Jikei University School of Medicine w Tokio w Japonii. Nasza szansa na nadciśnienie płucne u zwierząt spowodowane chorobą serca szczurów, która jest klasyfikowana jako nadciśnienie płucne grupy drugiej.Światowa Organizacja Zdrowia klasyfikuje nadciśnienie płucne w pięciu grupach. Szczur ze zwężeniem lewego przedsionka jest nadciśnieniem płucnym grupy drugiej grupy zwierzęcej, które jest najbardziej rozpowszechnioną postacią nadciśnienia płucnego i obecnie nie ma zatwierdzonych terapii dla tej grupy nadciśnienia płucnego. W tych filmach pokazujemy krok po kroku, jak przeprowadzić operację zwężenia lewego przedsionka u szczurów.Chirurgicznie utworzone zwężenie prawego przedsionka naśladuje zwężenie zastawki mitralnej u człowieka. Kiedy używamy go do badania możliwości i poniżej nadciśnienia płucnego grupy drugiej. Zacznijmy.Przed zabiegiem należy przygotować następujący sprzęt: respirator dla małych zwierząt i maszynę do znieczulenia. Zestaw do inkubacji składa się z pary kleszczy do hemostatu, depresora języka i cewnika naczynio-cewnika o rozmiarze 18. Narzędzia chirurgiczne obejmują parę zakrzywionych kleszczy, parę kleszczy prostych, wkrętak igły, zwijacz klatki piersiowej, nożyczki, szew monofilamentowy 5-0, aplikator klipsowy, średnio duży klips i rurkę piersiową o rozmiarze 23.Znieczulij szczura w komorze indukcyjnej pięcioprocentowym izofluranem zmieszanym z powietrzem w pomieszczeniu z prędkością dwóch metrów na minutę. Przed intubacją należy ogolić włosy na klatce piersiowej. Nałóż krem do depilacji, aby usunąć cienkie włosy, które nie zostały usunięte przez golarkę.Zaczep przednie zęby sznurkiem i przymocuj sznurki do kołków. Po zabezpieczeniu sznurka otwórz usta kleszczami do hemostatu i włóż depresor języka do ust. Podnieś depresor języka, aby uwidocznić strunę głosową.Wprowadź angiocewnik o rozmiarze 18 jako rurkę dotchawiczą do tchawicy, a następnie szybko podłącz cewnik do respiratora. Ustaw objętość oddechową na 10 mikrolitrów na gram przy częstości oddechów 100 oddechów na minutę. Utrzymuj znieczulenie za pomocą dwuprocentowego izofluranu zmieszanego z powietrzem w pomieszczeniu o stężeniu dwa metry na minutę.Wysterylizuj miejsce operowane naprzemiennie peelingami z chlorheksydyny i alkoholu. Podawać podskórnie buprenorfinę w dawce 01 miligrama na kilogram. Przykryj szczura sterylną zasłoną.Sprawdź odruch pedałowania, aby potwierdzić skuteczne znieczulenie przed operacją. Zaznacz miejsce nacięcia dwa centymetry poniżej pachy. Wykonaj dwucentymetrowe nacięcie lewej bocznej ściany klatki piersiowej nożyczkami.Ostrożnie oddziel mięsień międzyżebrowy między czwartym a piątym żebrem za pomocą prostych i zakrzywionych kleszczy, aż wejdzie do jamy klatki piersiowej. Włóż zwijacz klatki piersiowej do jamy klatki piersiowej. Użyj pewnej siły, aby otworzyć zwijacz klatki piersiowej, aby rozdzielić czwarte i piąte żebro na około jeden centymetr.Podnieś grasicę za pomocą prostych kleszczy. Ostrożnie usuń grasicę pokrywającą serce nożyczkami. Ostrożnie przełóż szew monofilamentowy 5-0 przez powierzchnię lewej komory tuż poniżej uszka lewego przedsionka.Należy zachować ostrożność, aby nie przechodzić przez główne tętnice wieńcowe. Po założeniu szwu i braku znaczącego krwawienia zawiąż luźny węzeł. Pociągnij nić do szwów w górę i do przodu, aby wyjąć serce z klatki piersiowej.Gdy serce zostanie uniesione na zewnątrz klatki piersiowej, szybko przyłóż średnio duży klips do lewego przedsionka tuż nad zastawką mitralną. Ostrożnie zdejmij szew sztagowy używany do podnoszenia serca. Rozpocznij od zamknięcia klatki piersiowej za pomocą szwu monofilamentowego 5-0, używając prostego przerywanego wzoru.Włożyć rurkę do klatki piersiowej o rozmiarze 23 przymocowaną do strzykawki o pojemności 10 ml do jamy klatki piersiowej. A następnie przystąp do zamykania skrzyni. Wyciągnij powietrze, krew i wysięk opłucnowy w pobliżu włożonej rurki klatki piersiowej za pomocą dołączonej strzykawki o pojemności 10 cm3.A następnie pociągnij rurkę, gdy nic nie wychodzi. Zamknij obszar skóry szwem monofilamentowym 5-0 za pomocą prostego przerywanego wzoru. Zdejmij obłożenie chirurgiczne.Podawać podskórnie buprenorfinę w dawce 01 miligrama na kilogram. Wyłącz izofluran. Wykop szczura, gdy zacznie się budzić.Dwa tygodnie po operacji użyj kardiografii echo, aby potwierdzić powodzenie operacji zwężenia lewego przedsionka. Skuteczność zwężenia lewego przedsionka potwierdzono za pomocą echokardiografii dwa tygodnie po operacji. Uważa się, że u szczurów, u których prędkość napływu do lewej komory jest większa niż dwa metry na sekundę, mierzona w widoku czterokomorowym, rozwinęło się znaczne zwężenie.10 tygodni po operacji zwężenia lewego przedsionka szczury w grupie LAS wykazują powiększenie lewego przedsionka, przekrwienie płuc, przeciążenie ciśnienia w prawej komorze i zwiększony przepływ żylny w płucach w porównaniu ze szczurami w grupie operowanej pozorowanej. Ponadto występuje znaczny wzrost ciśnienia skurczowego prawej komory w grupie ze zwężeniem lewego przedsionka w porównaniu z grupą operowaną pozorowaną. Jednak ciśnienie skurczowe lewej komory pozostaje takie samo w obu grupach.W badaniu histologicznym długiego przekroju poprzecznego wybarwionego elastycznym barwnikiem Van Giesona wykazano zwiększoną chorobę tętnic płucnych i średniej choroby żylnej płuc. Zwiększony wymiar żyły płucnej w grupie ze zwężeniem lewego przedsionka w porównaniu z grupą operowaną pozorowaną był bardziej mięśniem gładkim działającym w barwieniu, wykazuje zwiększoną liczbę komórek mięśni gładkich w tętnicy płucnej i żyle płucnej w grupie zwężenia lewego przedsionka w porównaniu z grupą kontrolną. Mam nadzieję, że podobał Ci się ten film.Chociaż operacja jest stosunkowo prosta, należy zachować ostrożność podczas zakładania szwu na lewą komorę, aby uniknąć uderzenia w główne tętnice wieńcowe. Podczas podnoszenia serca pociągnij szew w kierunku głowy szczura, aby lewy przedsionek mógł być wyraźnie widoczny. Po przyłożeniu klipsa do lewego przedsionka szczelność klipsa powinna być wystarczająca, aby spowodować znaczne zwężenie lewego przedsionka, ale nie za ciasna, aby wywołać ostry obrzęk płuc i niewydolność prawego serca.Dziękuję za obejrzenie tego filmu. I powodzenia w eksperymencie.

left-atrial-stenosis-induced-pulmonary-venous-arterialization-group-2

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przewlekłe zakrzepowo-zatorowe nadciśnienie płucne (CTEPH) i dysfunkcja prawej komory (RV) były indukowane u prosiąt przez postępującą niedrożność tętnic płucnych. Konsekwencje były niezwykle podobne do tych obserwowanych u pacjentów z CTEPH. Ten model zwierzęcy byłby bardzo przydatnym narzędziem do patofizjologii i eksperymentów terapeutycznych dotyczących CTEPH i niepowodzenia RV.

Przewlekłe zakrzepowo-zatorowe nadciśnienie płucne i ocena funkcji prawej komory u prosiąt

Tętnicze nadciśnienie płucne (PAH) to choroba tętniczek płucnych, która prowadzi do ich zatarcia i rozwoju niewydolności prawej komory. Modele WWA u gryzoni mają kluczowe znaczenie dla zrozumienia patofizjologii WWA. Tutaj pokazujemy charakterystykę hemodynamiczną, z cewnikowaniem prawego serca i echokardiografią, u myszy i szczura.

Charakterystyka hemodynamiczna modeli tętniczego nadciśnienia płucnego u gryzoni

Ten protokół opisuje procedurę chirurgiczną mającą na celu stworzenie modelu tętniczego nadciśnienia płucnego wywołanego przepływem (PAH) u szczurów oraz procedury analizy głównych hemodynamicznych i histologicznych punktów końcowych w tym modelu.

Chirurgia zastawkowa, cewnikowanie prawego serca i morfometria naczyniowa w modelu szczurzym dla tętniczego nadciśnienia płucnego wywołanego przepływem

Przedstawiamy chirurgiczną metodę wywoływania przerostu i niewydolności prawej komory u szczurów.

Model pasma pnia płucnego przeciążenia ciśnieniem wywołanego przerostem i niewydolnością prawej komory

Lewa pneumonektomia gryzoni jest cenną techniką w badaniach nad nadciśnieniem płucnym. W tym miejscu przedstawiamy protokół opisujący procedurę pneumonektomii u szczurów i opiekę pooperacyjną w celu zapewnienia minimalnej zachorowalności i śmiertelności.

Lewa pneumonektomia w połączeniu z monokrotaliną lub Sugenem jako model nadciśnienia płucnego u szczurów

Tutaj oferujemy użyteczne podejście do badania mechanizmu niewydolności prawej komory. Wygodniejsze i skuteczniejsze podejście do zwężenia tętnicy płucnej ustala się za pomocą narzędzi chirurgicznych wykonanych we własnym zakresie. Ponadto przedstawiono metody oceny jakości tego podejścia za pomocą echokardiografii i cewnikowania.

Indukcja niewydolności prawej komory przez zwężenie tętnicy płucnej i ocena funkcji prawej komory u myszy

Opisujemy tworzenie szczurzego modelu umiarkowanego przemodelowania wywołanego przeciążeniem ciśnieniem i wczesnej dysfunkcji skurczowej, gdzie aktywowane są szlaki transdukcji sygnału zaangażowane w inicjację procesu przebudowy. Ten model zwierzęcy pomoże w identyfikacji celów molekularnych do zastosowania wczesnych strategii terapeutycznych zapobiegających przebudowie niewydolności serca.

Szczurzy model przeciążenia ciśnieniem wywołał umiarkowaną przebudowę i dysfunkcję skurczową, w przeciwieństwie do jawnej skurczowej niewydolności serca

Obecny protokół opisuje zabieg chirurgiczny mający na celu usunięcie pasma aorty wstępującej w szczurzym modelu nadciśnienia płucnego spowodowanego chorobą lewego serca. Technika ta bada endogenne mechanizmy odwrotnej przebudowy krążenia płucnego i prawego serca, dostarczając w ten sposób informacji o strategiach odwracania nadciśnienia płucnego i/lub dysfunkcji prawej komory.

Model odwróconej przebudowy naczyń krwionośnych w nadciśnieniu płucnym spowodowanym chorobą lewego serca przez odcięcie aorty u szczurów

Niniejszy protokół opisuje echokardiograficzną charakterystykę morfologii i funkcji prawej komory w szczurzym modelu tętniczego nadciśnienia płucnego.

Kompleksowa echokardiograficzna ocena funkcji prawej komory serca w szczurzym modelu tętniczego nadciśnienia płucnego

Niewydolność prawego serca (RHF) charakteryzuje się prawostronnym rozszerzeniem i przerostem serca, co prowadzi do nieprawidłowego funkcjonowania komór i przedsionków. Chorobom krążeniowo-oddechowym związanym z RHF towarzyszy zwiększone ryzyko zaburzeń rytmu serca. W artykule opisano standaryzowany model RHF indukowanego pasmami tętnic płucnych związanego ze zwiększoną arytmogenezą komorową i przedsionkową.

Szczurzy model prawostronnej przebudowy serca i arytmii z wykorzystaniem pasma tętnicy płucnej

Tutaj przedstawiono metodę wywoływania tętniczego nadciśnienia płucnego związanego ze zwłóknieniem płuc (PF-PH) model szczurzy poprzez wstrzykiwanie bleomycyny do dróg oddechowych. Zapewniamy również podejście krok po kroku do walidacji tego modelu zwierzęcego.

Ustalenie i walidacja szczurzego modelu tętniczego nadciśnienia płucnego związanego ze zwłóknieniem płuc

Poznaj technikę zwężenia lewego przedsionka u szczura, modelu nadciśnienia płucnego grupy 2. Ta metoda chirurgiczna z klipsem tytanowym pozwala badać arterjalizację żył płucnych i mechanizmy choroby.

Zwężenie lewego przedsionka wywołane tętnicą żylną płuc i nadciśnienie płucne grupy 2 u szczura

Przeglądaj więcej filmów