Name: Zastosowanie technologii mikroprzepływowej Biochip do wykrywania immunoglobuliny E (sIgE) swoistej dla alergenu w surowicy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Poznaj technologię mikroprzepływową z chemiluminescencją do wykrywania swoistej immunoglobuliny E w surowicy. Ta metoda umożliwia szybką i ekonomiczną diagnostykę alergii oddechowych, pokarmowych i skórnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują profesor Mei Jiang za pomoc w analizie statystycznej oraz panu Hammer Tsui w przygotowaniu manuskryptu. Badanie to było wspierane przez Guangzhou Science and Technology Foundation (201804020043) oraz Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (NSFC 81572063 i NSFC 81802076). Grupy finansujące zgodziły się z projektem badania, analizą danych, przygotowaniem manuskryptu i decyzją o publikacji. Nie otrzymano żadnego innego finansowania na to badanie.

To badanie i użycie próbek ludzkiej surowicy zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Pierwszego Szpitala Stowarzyszonego Uniwersytetu Medycznego w Kantonie (GYYY-2016-73). Wszyscy uczestnicy wyrazili pisemną zgodę samodzielnie lub za pośrednictwem rodziców (w przypadku dzieci).
1. Podstawowe informacje o grupie badanej
UWAGA: Repozytorium Informacji o Alergiach Państwowego Kluczowego Laboratorium Chorób Układu Oddechowego (AIR-SKLRD) to duży bank surowicy założony w Instytucie Szpitala Oddechowego w Kantonie (GIRH). Zainicjowany w ostatniej dekadzie projekt AIR-SKLRD rozpoczął już zbieranie i przechowywanie próbek surowicy od pacjentów z chorobami alergicznymi wraz z ich informacjami klinicznymi (Tabela 1)4,5. Obecne badanie przeprowadzono z użyciem surowic z AIR-SKLRD.
<ol>
	<li>Przeszukaj bazę danych AIR-SKLRD w poszukiwaniu surowic pobranych od stycznia 2015 r. do czerwca 2018 r. i wybierz pacjentów z chorobą alergiczną, u których stwierdzono wrażliwość na alergeny powszechne w regionie.</li>
	<li>Upewnij się, że wszyscy wybrani pacjenci mają choroby związane z alergią, takie jak alergiczny nieżyt nosa i/lub astma, alergiczne zapalenie skóry i/lub pokrzywka, oraz że surowica tych pacjentów zawiera wielokrotne uczulenie na immunoglobulinę E swoistą dla alergenu w surowicy (sIgE) na powszechne alergeny w tym regionie, wykryte przez System 1.</li>
	<li>Wykluczenie pacjentów z niekompletną dokumentacją medyczną, tych, którzy zostali utraceni w związku z obserwacją, tych, którzy odmawiają wyrażenia świadomej zgody na wykorzystanie ich próbek surowicy do celów naukowych, pacjentów ze zidentyfikowanym niedoborem odporności, osób obecnie stosujących immunoterapię lub leki immunomodulujące lub tych, u których stwierdzono infekcje pasożytnicze.</li>
	<li>Upewnij się, że przed pobraniem surowicy nie podano żadnego leczenia ani recepty na leki, aby zminimalizować zakłócenia w wynikach badań laboratoryjnych. Wszystkie próbki surowicy, które nie spełniały kryteriów, zostały odrzucone.</li>
</ol>
2. Przebieg badania i interesujące pomiary
UWAGA: System mikroprzepływowy potrzebuje 100 μL surowicy do określenia 19 alergenów. Krew żylną (5 ml) pobrano od każdego pacjenta za pomocą próżniowego naczynia krwionośnego zawierającego żel separacyjny. Po odwirowaniu przez 10 minut w stężeniu 1 000 x g pobrano górną warstwę do testów. Niewykorzystaną surowicę przechowywano w temperaturze -80 °C. Przed badaniem surowicę przechowywano w temperaturze pokojowej przez 30 minut i wstrząsano mieszadłem wirowym. Uniknięto powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania.
<ol>
	<li>Przede wszystkim należy przebadać próbki surowicy pod kątem sIgE do całych alergenów Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), sierści kotów (e1), sierści psów (e5), trawy bermudzkiej (g2), tymotki łąki (g6), karaluchów (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), ambrozji (w1), białka jaja kurzego (f1), mleka (f2), pszenicy (f4), orzeszków ziemnych (f13), soi (f14), migdałów (f20), kraba (f23), i krewetki (F24). Postępuj zgodnie z instrukcjami podanymi w sekcji 3. 
	UWAGA: Oznaczenie sIgE wykonano za pomocą zestawu do oznaczania IgE swoistego dla alergenu (patrz Tabela materiałów) i zmierzono za pomocą analizatora chemiluminescencji.</li>
	<li>Losowo wybrać trzy próbki spośród próbek zawierających wystarczającą ilość surowicy (co najmniej 900 μl) do badania odtwarzalności. Utrzymując wszystkie warunki bez zmian, mierz trzy surowice na obecność alergenów sIgE codziennie przez 9 kolejnych dni (tj. łącznie 100 x 9 = 900 μl surowicy).</li>
</ol>
3. Procedura testu półautomatycznego systemu mikroprzepływowego
UWAGA: System 2 to integracja automatycznej technologii mikroprzepływowej, mikromacierzy białek, analizy zimnego światła, równoległej analizy IgE i technologii przetwarzania obrazu. Protokół testowy jest podzielony na cztery części: przygotowanie sprzętu, ładowanie próbki, inkubacja i pomiar.
<ol>
	<li>Przygotowanie sprzętu
	<ol>
		<li>Włącz komputer i analizator power. 
		UWAGA: Włącznik zasilania znajduje się po lewej stronie podstawy.</li>
		<li>Uruchom program LabIT na komputerze. Jeśli pojawi się okno ostrzegawcze Dark Frame, kliknij OK, aby uruchomić test szczelności. Następnie kliknij środkowe logo, aby przejść do interfejsu operacyjnego. 
		UWAGA: System przypomni użytkownikowi o uruchomieniu testu szczelności, jeśli jest bezczynny przez ponad 24 godziny.</li>
		<li>Sprawdź temperaturę reakcji i temperaturę CCD (urządzenie sprzężone z ładunkiem) w prawym dolnym rogu ekranu. Temperatura reakcji powinna wzrosnąć do 37 °C ± 1 °C w ciągu około 10 minut, a temperatura CCD powinna spaść do -15 °C ± 1 °C.</li>
		<li>Uruchom test SZCZELNOŚCI, gdy temperatura CCD spadnie do -15 °C ± 1 °C. Przed uruchomieniem testu SZCZELNOŚCI upewnij się, że w przyrządzie nie pozostały żadne inne przedmioty i zamknij drzwi. Kliknij Narzędzia | Test systemu | Test szczelności. Nie otwieraj drzwi podczas testowania. Po zakończeniu testu pojawi się okno raportu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ładowanie próbki
	<ol>
		<li>Dodać 620 μl buforu do przemywania płuczkę, 120 μl buforu blokującego, 60 μl koniugatów A i B, 60 μl substratu A i B oraz 100 μl próbek surowicy do odpowiedniego zbiornika odczynnika we wkładzie mikroprzepływowym.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Inkubacja
	<ol>
		<li>Kliknij Identyfikator kasety, użyj skanera kodów kreskowych, aby zeskanować numer seryjny wkładu, wprowadź identyfikator próbki, włóż kasetę do analizatora i zamknij drzwiczki, a następnie kliknij Analyzer and Run (Analizator i uruchom), aby rozpocząć analizę.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>pomiar
	<ol>
		<li>Eksport wyników do oprogramowania statystycznego (np. Excel) po wykonaniu pomiaru. 
		UWAGA: Po 30 minutach inkubacji analizator automatycznie wykonuje pomiar i podaje wynik.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wyłączanie analizatora
	<ol>
		<li>W celu rutynowej konserwacji, po zakończeniu testu, wyjmij wkład i delikatnie przetrzyj wewnętrzne żelazko grzewcze analizatora i elektromagnes 75% alkoholem. 
		UWAGA: Nie naciskaj mocno ani nie potrząsaj elektromagnesem.</li>
		<li>Zamknij okno LabIT. Pojawi się okno monitorowania temperatury. Wyłączy się automatycznie, gdy CCD nagrzeje się do trybu ochrony 5 °C. Do tego czasu będzie można bezpiecznie wyłączyć zasilanie analizatora i komputera. 
		UWAGA: Nie zamykaj ręcznie okna monitorowania temperatury, zanim temperatura CCD wzrośnie do 5 °C i nie wyłączaj zasilania analizatora ani komputera podczas nagrzewania CCD.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Definicja reaktywności sIgE
UWAGA: Dla próbki surowicy nierozcieńczonej, zakres wykrywania Systemu 2 wynosi 0,21–100 IU/ml.
<ol>
	<li>Na podstawie wartości progowej 0,35 IU/ml należy uznać, że poziom sIgE przekraczający 0,35 IU/ml jest dodatni6,7. Oceń reaktywność testów sIgE jako8: klasa 1 (≥0,35 i <0,70 IU/ml), klasa 2 (≥0,70 i <3,50 IU/ml), klasa 3 (≥3,50 i <17,50 IU/ml), klasa 4 (≥17,50 i <50,00 IU/ml), klasa 5 (≥50,00 i <100,00 IU/ml) i klasa 6 (≥100,00 IU/ml).</li>
</ol>
5. Analiza statystyczna
<ol>
	<li>Użyj histogramu, aby pokazać dodatni wskaźnik 19 alergenów (<silna klasa="xfig">Rysunek 1) i użyj krzywej Leveya-Jenningsa, aby zademonstrować powtarzalność systemu wykrywania (<silna klasa="xfig">Rysunek 2)9.</li>
	<li>Wybierz trzy najczęstsze alergeny wziewne i alergeny pokarmowe (w sumie sześć alergenów) i porównaj wyniki z I System 1, aby ocenić jego kliniczną skuteczność diagnostyczną10,11. Jako kryteria oceny należy uwzględnić współczynnik zgodności, czułość, swoistość, dodatnie i ujemne wartości predykcyjne oraz obszar pod krzywą charakterystyki operacyjnej odbiornika (ROC) (AUC).</li>
	<li>Zastosuj analizę korelacji Spearmana12, aby opisać korelacje między dwoma systemami i użyj wartości kappa dla spójności. Skategoryzuj wartość kappa jako prawie idealną (0,8–1,0), znaczną (0,6–0,8), umiarkowaną (0,4–0,6), dostateczną (0,2–0,4) lub słabą (<0,2)13. Użyj analizy statystycznej SPSS 23.0 i MedCalc 11.0 i zdefiniuj P < 0,05 jako istotność statystyczną.</li>
</ol>

<ol><li>Kamble, S., Bharmal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incremental+Direct+Expenditure+of+Treating+Asthma+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asthma+Research%22%5BJournal%5D)">Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States.</a> Journal of Asthma Research. 46 (1), 73-80 (2009).</li>
<li>Paganelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+antibodies+in+the+diagnosis+of+atopic+disease.+Clinical+evaluation+of+a+new+in+vitro+test+system%2C+UniCAP%2C+in+six+European+allergy+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics.</a> Allergy. 53 (8), 763-768 (1998).</li>
<li>Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+serum+allergy+%28ige%29+tests+performed+by+different+assay+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (5), 1219-1224 (2008).</li>
<li>Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-sensitization+to+silkworm+moth+%28Bombyx+mori%29+and+9+inhalant+allergens+among+allergic+patients+in+Guangzhou%2C+Southern+China%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China.</a> PLoS ONE. 9 (5), e94776(2014).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component-Resolved+Diagnostic+Study+of+Dermatophagoides+Pteronyssinus+Major+Allergen+Molecules+in+a+Southern+Chinese+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigational+Allergology+%26+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort.</a> Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25 (5), 343-351 (2015).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((grass+pollen+allergens+and+components+detected+in+a+southern+Chinese+cohort+of+patients+with+allergic+rhinitis+and%2For+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma.</a> Molecular Immunology. 78 (2016), 105-112 (2016).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+profiles+of+serum+specific+IgE+and+IgG4+to+Dermatophagoides+pteronyssinus+allergen+and+its+major+components+during+allergen+immunotherapy+in+a+cohort+of+southern+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children.</a> Molecular Immunology. 74 (2016), 1-9 (2016).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+measurement+using+AdvanSure%28R%29+system%3A+comparison+of+detection+performance+with+ImmunoCAP%28R%29+system+in+Korean+allergy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients.</a> Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).</li>
<li>Eckels, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control%2C+analysis+and+secure+sharing+of+Luminex%28R%29+immunoassay+data+using+the+open+source+LabKey+Server+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform.</a> Bmc Bioinformatics. 14 (1), 145(2013).</li>
<li>Bland, J. M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+methods+for+assessing+agreement+between+two+methods+of+clinical+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement.</a> Lancet. 327 (8476), 307-310 (1986).</li>
<li>Carletta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Agreement+on+Classification+Tasks%3A+The+Kappa+Statistic%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+Linguistics%22%5BJournal%5D)">Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic.</a> Computational Linguistics. 22 (2), 249-254 (1996).</li>
<li>Shyur, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multiple+allergen-specific+IgE+by+microfluidic+immunoassay+cartridge+in+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings.</a> Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).</li>
<li>Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+measurement+methods%3A+an+endless+application+of+wrong+statistical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods.</a> Intensive Care Medicine. 37 (6), 1038-1040 (2011).</li>
<li>Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Singleplex+Specific+IgE+Detection+Immunoassays%3A+ImmunoCAP+Phadia+250+and+Immulite+2000+3gAllergy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy.</a> Annals of Laboratory Medicine. 38 (1), 23-31 (2018).</li>
<li>Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+rhinitis+and+asthma+have+generally+good+outcome+and+little+effect+on+quality+of+life+-+a+20-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up.</a> Allergy. 66 (8), 1123-1125 (2011).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+type+I+sensitization+to+alpha-gal+in+forest+service+employees+and+hunters%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters.</a> Allergy. 72 (10), 1540-1547 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicentre+study+assessing+the+prevalence+of+sensitizations+in+patients+with+asthma+and%2For+rhinitis+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China.</a> Allergy. 64 (7), 1083-1092 (2009).</li>
<li>Ahlstedt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+usefulness+of+specific+IgE+blood+tests+in+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 32 (1), 11-16 (2002).</li>
<li>Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+IgE+antibody+laboratory+results%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Allergy+Asthma+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accuracy of IgE antibody laboratory results.</a> Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100 (2), 288-289 (2008).</li>
<li>Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+testing+needs+better+standardization--test+results+from+different+laboratories+lack+comparability+mostly+due+to+missing+effective+standards%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards.</a> International Archives of Allergy & Immunology. 108 (1), 82-88 (1995).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podobnie jak wyniki wielu innych badań 15,16,17, wyniki systemu mikroprzepływowego opartego na surowicy od 293 alergicznych pacjentów wykazały, że roztocza kurzu domowego (w tym D. pteronyssinus, D. farinae i B. tropicalis) są głównymi alergenami wziewnymi prowadzącymi do chorób alergicznych w południowych Chinach, podczas gdy w przypadku żywności mleko, orzeszki ziemne, krewetki i kraby są najczęstszy...

Częstość występowania alergii stale wzrastała w ostatnich dziesięcioleciach i dotyka 20%-30% światowej populacji1. Identyfikacja alergenów wywołujących choroby ma ważne znaczenie w leczeniu chorób. W Chinach, ponieważ zarejestrowane punktowe testy skórne in vivo nie są dostępne w tym kraju, oznaczanie in vitro IgE specyficznych dla surowicy jest najważniejszym i najczęściej stosowanym narzędziem do diagnozowania alergii typu I2. Jest to podobne do praktyk stosowanych w świecie zachodnim, ale chociaż system ImmunoCAP (System 1), system immunoenzymatyczny sprzężony z enzymami fluorescencyjnymi, jest postrzegany jako złoty standard w diagnostyce alergii in vitro3, jego zastosowanie w Chinach jest bardzo ograniczone ze względu na wysoki sprzęt i cenę odczynników. Dlatego pilnie potrzebny jest nowy, alternatywny system diagnostyki alergii o wysokim stosunku ceny do wydajności.
System BioIC (System 2) to system oparty na kartridżu mikroprzepływowym oparty na zasadzie chemiluminescencji do multipleksowanych testów IgE specyficznych dla surowicy. Wkład mikroprzepływowy o wymiarach 7 cm x 4 cm składa się z trzech warstw tworzywa sztucznego formowanego wtryskowo. Górna część wykonana jest z przezroczystego poliwęglanu o grubości 3 mm, który zapewnia dobrą stabilność podczas procesów montażu termicznego. Wraz z dolną warstwą o grubości 3 mm, wykonaną z kopolimeru akrylonitrylu, butadienu i styrenu (ABS), tworzy warstwę środkową o grubości 0,5 mm wykonaną z kauczuku silikonowego. Będąc w kolorze czarnym, środkowa warstwa zapewnia niższe tło podczas detekcji chemiluminescencyjnej. Na wierzch żelu krzemionkowego rozpylana jest cienka warstwa membrany nitrocelulozowej (membrana NC) w pozycji odpowiadającej strefie reakcji, co umożliwia plamienie różnych białek alergizujących. Celem tego badania jest ocena skuteczności klinicznej układu mikroprzepływowego do multipleksowego oznaczania IgE swoistych dla alergenu w surowicy.

<table><tbody><tr><td>Analizator Agnitio BioIC</td><td>Agnitio Nauka & Technologia (Tajwan, Chiny)</td> <td>BA-G2000</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do wykrywania IgE specyficzny dla alergenu BioIC</td><td>Agnitio Science & Technologia (Tajwan, Chiny)</td><td>DR17A12</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Cartrideg Płyta umieszczająca</td><td>Agnitio Science & Technologia (Tajwan, Chiny)</td> Dozownik odczynnika <td>T20SET</td><td></td></tr><tr><td>BioIC</td><td>Agnitio Science & Technologia (Tajwan, Chiny)</td> <td>DS-1</td><td></td></tr><tr><td>Obraz dwuwymiarowy maszyna do kodów kreskowych</td><td>Agnitio Science & Technologia (Tajwan, Chiny)</td> Pakiet oprogramowania <td>NLS-HR200</td><td></td></tr><tr><td>, LabIT</td><td>Agnitio Science & Technologia (Tajwan, Chiny)</td> <td>Wersja 2.4.12</td><td></td></tr><tr><td>VORTEX-5 Vortex Mixer</td><td>Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd.</td><td>WIR-5</td><td></td></tr></tbody></table>

zastosowanie technologii mikroprzepływowej biochip do wykrywania immunoglobuliny e (sige) swoistej dla alergenu w surowicy

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Choroba alergiczna jest powszechna zarówno u dorosłych, jak i u dzieci. Identyfikacja alergenów wywołujących chorobę ma istotne znaczenie w leczeniu i zapobieganiu chorobie. Jednak w Chinach kontynentalnych brakuje specyficznego systemu pomiaru immunoglobuliny E (IgE) o wysokim stosunku ceny do wydajności, zwłaszcza w szpitalach podstawowej opieki zdrowotnej. W artykule opisano zasadę działania i procedury działania systemu chemiluminescencji opartego na kartridżu mikroprzepływowym do wykrywania IgE swoistych dla alergenu w surowicy. Wyniki porównano z wynikami ImmunoCAP (System 1), standardu przemysłowego, i oceniono odtwarzalność systemu do wykrywania pacjentów uczulonych na powszechne alergeny. Wyniki pokazały, że w porównaniu z ImmunoCAP (System 1), BioIC System (System 2) charakteryzuje się dobrą precyzją i czułością w wykrywaniu IgE specyficznych dla surowicy wobec różnych alergenów wziewnych i pokarmowych, ale przy znacznie niższych kosztach. Może służyć jako dobra alternatywa dla Systemu 1 w szpitalach podstawowej opieki zdrowotnej w Chinach kontynentalnych, które mają niższą przystępność finansową.

Odsetki wyników dodatnich dla 19 częstych alergenów 
Wyniki dla 293 próbek surowicy przedstawiono na Rysunku 3. Wśród wszystkich alergenów wziewnych najwyższy odsetek wyników dodatnich odnotowano dla D. farinae (80,89%, 273/293), a następnie dla D. pteronyssinus (78,84%, 231/293). Wśród alergenów pokarmowych najwyższy odsetek wyników dodatnich wykazano dla kraba (20,48%, 60/293), a następnie dla krewetki (13,65%,...

Ten artykuł przedstawia protokół wykrywania specyficznej dla surowicy immunoglobuliny E za pomocą mikroprzepływowego systemu chemiluminescencji opartego na kartridżu oraz ocenę jego przydatności w diagnostyce alergii.

Zastosowanie technologii mikroprzepływowej Biochip do wykrywania immunoglobuliny E (sIgE) swoistej dla alergenu w surowicy

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

System technologii mikroprzepływowej biochip to sekcja oparta na kartridżu mikroprzepływowym, która wykorzystuje zasadę chemiluminescencji do oceny surowicy IGE. W porównaniu z innymi metodami wykrywania, systemy bioIC mają tę zaletę, że są tanie i wymagają mniejszej ilości surowicy do wykrywania IGE w surowicy. Implikacje tej techniki mają tendencję do diagnozowania chorób alergicznych, takich jak nieżyt nosa i astma, ponieważ wielu z tych pacjentów jest uczulonych na powszechne wykrywalne alergeny.Chociaż metoda ta może zapewnić wgląd w choroby alergiczne układu oddechowego, może być również stosowana w innych sytuacjach, takich jak alergie pokarmowe i skórne. Ponieważ technika ta jest łatwiejsza w użyciu i ma obniżoną metodę szkolenia operatorów, osoby nowe w systemie mogą szybko nauczyć się z niej korzystać. Żywe pokazanie tej kwestii ma kluczowe znaczenie, ponieważ decyduje o tym, czy test jest udany i wymaga umiejętnej obsługi ręcznej.Aby przetestować próbki surowicy na obecność przeciwciał immunoglobuliny E w surowicy przeciwko całym alergenom, losowo wybierz trzy próbki z co najmniej 900 mikrolitrami surowicy, weź chip z zestawu i ponumeruj go. Następnie włącz komputer i za

application-biochip-microfluidic-technology-to-detect-serum-allergen

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Film demonstruje test komórkowy do wykrywania anty-akwaporyny-4 immunoglobuliny G za pomocą biochipa zawierającego komórki nietransfekowane i transfekowane komórki wyrażające akwaporynę-4. Metoda ta ma zastosowanie w diagnostyce zaburzeń ze spektrum zapalenia nerwu wzrokowego, potwierdzonych silną zieloną fluorescencją na biochipie.

Test do wykrywania immunoglobuliny G antyakwaporyny-4 w surowicy

Ten film prezentuje wykrywanie autoprzeciwciał wysp trzustkowych w ludzkiej surowicy. Przeciwciała w surowicy łączą antygen sprzężony rutenem z biotynylowanym antygenem wychwytującym, tworząc kompleksy, które są wykrywane za pomocą pomiarów elektrochemiluminescencyjnych.

Wykrywanie ludzkich autoprzeciwciał wysp trzustkowych za pomocą testu elektrochemiluminescencyjnego

Ten film demonstruje protokół wykrywania specyficznej dla surowicy immunoglobuliny E za pomocą systemu chemiluminescencji opartego na kartridżu mikroprzepływowym. IgE w surowicy oddziałują z odrębnymi alergenami unieruchomionymi w strefie reakcji wkładu, które są następnie wykrywane za pomocą przeciwciał anty-IgE sprzężonych z peroksydazą i substratu chemiluminescencyjnego, co pozwala na jednoczesne wykrywanie wielu IgE specyficznych dla alergenu.

Oparty na kartridżu mikroprzepływowym system wykrywania swoistej dla alergenu E immunoglobuliny E

W tym artykule prezentujemy mikroprzepływowy chip do analizy pojedynczych komórek. Umożliwia ilościowe oznaczanie wewnątrzkomórkowych białek, enzymów, kofaktorów i drugich przekaźników za pomocą testów fluorescencyjnych lub testów immunologicznych.

Mikroprzepływowy chip do wszechstronnej analizy chemicznej pojedynczych komórek

Proponowana praca ocenia potencjał diagnostyczny testów bezpośredniego i wzmocnionego powierzchniowego rezonansu plazmonów (SPRi), szczególnie do wykrywania rekombinowanego ludzkiego hormonu wzrostu w wzbogaconej ludzkiej surowicy, poprzez bezpośrednie porównanie wyników SPRi z dostępnym na rynku zestawem do testów immunoenzymatycznych (ELISA).

Analiza porównawcza ludzkiego hormonu wzrostu w surowicy przy użyciu testów SPRi, Nano-SPRi i ELISA

Opisujemy tutaj metodę generowania konfigurowalnych mikromacierzy antygenowych, które mogą być używane do jednoczesnego wykrywania autoprzeciwciał IgG i IgM w surowicy od ludzi i myszy. Macierze te pozwalają na wysokoprzepustowe i ilościowe wykrywanie przeciwciał przeciwko dowolnemu antygenom lub epitopom.

Generacja dwukolorowych mikromacierzy antygenowych do jednoczesnego wykrywania autoprzeciwciał IgG i IgM

Ta praca opisuje protokół, który wykorzystuje podejście komponentowe do badania wrażliwości na alergeny pyłków traw w kohorcie pacjentów z południowych Chin z alergicznym nieżytem nosa i/lub astmą.

Podejście diagnostyczne z rozdzielczością komponentową w badaniu alergenów pyłków traw u mieszkańców Chin z południa z alergicznym nieżytem nosa i/lub astmą

Tutaj przedstawiliśmy metody wykrywania autoprzeciwciał ludzkich wysp trzustkowych za pomocą testów elektrochemiluminescencyjnych (ECL). Protokół, stosowany do przewidywania cukrzycy typu 1, może być rozszerzony o wykrywanie autoprzeciwciał przeciwko innym chorobom autoimmunologicznym.

Testy elektrochemiluminescencyjne dla autoprzeciwciał ludzkich wysp trzustkowych

Ta praca pokazuje potencjał technologii drukowanych tablic glikanowych (PGA) do analizy krążących przeciwciał antywęglowodanowych u małych zwierząt.

Drukowana matryca glikanów: czuła technika analizy repertuaru krążących przeciwciał antywęglowodanowych u małych zwierząt

W tym artykule opisujemy protokół charakteryzujący odpowiedzi immunoglobuliny (Ig) zależnej od T i niezależnej od T u myszy za pomocą testu ELISA. Ta metoda stosowana samodzielnie lub w połączeniu z cytometrią przepływową pozwoli naukowcom zidentyfikować różnice w odpowiedziach izotypu Ig za pośrednictwem komórek B u myszy po immunizacji antygenu T zależnej i niezależnej od T.

Charakterystyka odpowiedzi izotypu immunoglobuliny zależnej i niezależnej od grasicy u myszy przy użyciu testu immunoenzymatycznego

Test komórkowy jest powszechnie stosowaną metodą wykrywania immunoglobuliny G anty-akwaporyny-4 w surowicy. Metoda ta może być stosowana w diagnostyce klinicznej i badaniach naukowych nad zaburzeniami spektrum optycznego zapalenia nerwu i szpiku.

Wykrywanie immunoglobuliny G anty-akwaporyny-4 w ludzkiej surowicy za pomocą testu komórkowego

Poznaj technologię mikroprzepływową z chemiluminescencją do wykrywania swoistej immunoglobuliny E w surowicy. Ta metoda umożliwia szybką i ekonomiczną diagnostykę alergii oddechowych, pokarmowych i skórnych.

Zastosowanie technologii mikroprzepływowej Biochip do wykrywania immunoglobuliny E (sIgE) swoistej dla alergenu w surowicy

Przeglądaj więcej filmów