Name: Kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Poznaj model urazowego uszkodzenia mózgu u myszy z kontrolowanym uderzeniem kory mózgowej i przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych. Ta metoda pozwala ocenić skuteczność terapii komórkowych w neuroregeneracji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została wsparta grantem z Centrum Neuronauki i Medycyny Regeneracyjnej (CNRM, numer grantu G170244014). Doceniamy pomoc Mahimy Dewan i Clary Selbrede w badaniach pilotażowych dotyczących usuwania kleju. Kryslaine Radomski przeprowadziła wstępne operacje uszkodzenia mózgu i przeszczepu komórek. Amanda Fu i Laura Tucker z głównego laboratorium badań przedklinicznych USU CNRM udzieliły cennych porad na temat operacji na zwierzętach i testowania zachowania.

<ol><li>Maas, A. I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+integrated+approaches+to+improve+prevention%2C+clinical+care%2C+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research.</a> The Lancet Neurology. 16, 987-1048 (2017).</li>
<li>Murray, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disability-adjusted+life+years+%28DALYs%29+for+291+diseases+and+injuries+in+21+regions%2C+1990-2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Disability-adjusted life years (DALYs) for 291 diseases and injuries in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> The Lancet. 380, 2197-2223 (2012).</li>
<li>Taylor, C. A., Bell, J. M., Breiding, M. J., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+Brain+Injury-Related+Emergency+Department+Visits%2C+Hospitalizations%2C+and+Deaths+-+United+States%2C+2007+and+2013%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+mortality+weekly+report%3A+Surveillance+summaries%22%5BJournal%5D)">Traumatic Brain Injury-Related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths - United States, 2007 and 2013.</a> Morbidity and mortality weekly report: Surveillance summaries. 66, 1-16 (2017).</li>
<li>Fehily, B., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+Mild+Traumatic+Brain+Injury%3A+Potential+Mechanisms+of+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Repeated Mild Traumatic Brain Injury: Potential Mechanisms of Damage.</a> Cell Transplantation. 26, 1131-1155 (2017).</li>
<li>Kulbe, J. R., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+traumatic+encephalopathy-integration+of+canonical+traumatic+brain+injury+secondary+injury+mechanisms+with+tau+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Chronic traumatic encephalopathy-integration of canonical traumatic brain injury secondary injury mechanisms with tau pathology.</a> Progress in Neurobiology. 158, 15-44 (2017).</li>
<li>Romine, J., Gao, X., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+cortical+impact+model+for+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Controlled cortical impact model for traumatic brain injury.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51781(2014).</li>
<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Mishra, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+resting+functional+connectivity+after+traumatic+brain+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+ONE%22%5BJournal%5D)">Decreased resting functional connectivity after traumatic brain injury in the rat.</a> PloS ONE. 9, 95280(2014).</li>
<li>Sours, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Default+mode+network+interference+in+mild+traumatic+brain+injury+-+a+pilot+resting+state+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Default mode network interference in mild traumatic brain injury - a pilot resting state study.</a> Brain Research. 1537, 201-215 (2013).</li>
<li>Radomski, K. L., Zhou, Q., Yi, K. J., Doughty, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+contusion+injury+disrupts+olfactory+bulb+neurogenesis+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cortical contusion injury disrupts olfactory bulb neurogenesis in adult mice.</a> BMC Neuroscience. 14, 142(2013).</li>
<li>Wang, X., Gao, X., Michalski, S., Zhao, S., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+Brain+Injury+Severity+Affects+Neurogenesis+in+Adult+Mouse+Hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Traumatic Brain Injury Severity Affects Neurogenesis in Adult Mouse Hippocampus.</a> Journal of Neurotrauma. 33, 721-733 (2016).</li>
<li>Aertker, B. M., Bedi, S., Cox, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+CNS+repair+following+TBI%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Strategies for CNS repair following TBI.</a> Experimental Neurology. 275 (3), 411-426 (2016).</li>
<li>Kikuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+iPS+cell-derived+dopaminergic+neurons+function+in+a+primate+Parkinson%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Human iPS cell-derived dopaminergic neurons function in a primate Parkinson's disease model.</a> Nature. 548, 592-596 (2017).</li>
<li>Kondo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+transplantation+of+human+iPSC-derived+glial-rich+neural+progenitors+improves+lifespan+of+ALS+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Focal transplantation of human iPSC-derived glial-rich neural progenitors improves lifespan of ALS mice.</a> Stem Cell Reports. 3, 242-249 (2014).</li>
<li>Tong, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+interneuron+progenitor+transplantation+restores+normal+learning+and+memory+in+ApoE4+knock-in+mice+without+or+with+Abeta+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Inhibitory interneuron progenitor transplantation restores normal learning and memory in ApoE4 knock-in mice without or with Abeta accumulation.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34, 9506-9515 (2014).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li>
<li>Lischka, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+mouse+cortical+but+not+isogenic+human+astrocyte+feeder+layers+enhance+the+functional+maturation+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+neurons+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neonatal mouse cortical but not isogenic human astrocyte feeder layers enhance the functional maturation of induced pluripotent stem cell-derived neurons in culture.</a> Glia. 66, 725-748 (2018).</li>
<li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adhesive+removal+test%3A+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nature Protocols. 4, 1560-1564 (2009).</li>
<li>Fleming, S. M., Ekhator, O. R., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> Journal of Visualized Experiments. , e50303(2013).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates.+Compact+2nd+edn%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates. Compact 2nd edn</a>. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
<li>Jacobs, G. H., Williams, G. A., Cahill, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+novel+color+vision+in+mice+engineered+to+express+a+human+cone+photopigment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Emergence of novel color vision in mice engineered to express a human cone photopigment.</a> Science. 315, 1723-1725 (2007).</li>
<li>Lundell, T. G., Zhou, Q., Doughty, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenin1+expression+in+cell+lineages+of+the+cerebellar+cortex+in+embryonic+and+postnatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%3A+An+Official+Publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Neurogenin1 expression in cell lineages of the cerebellar cortex in embryonic and postnatal mice.</a> Developmental Dynamics: An Official Publication of the American Association of Anatomists. 238, 3310-3325 (2009).</li>
<li>Kempermann, G., Kuhn, H. G., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+hippocampal+neurons+in+adult+mice+living+in+an+enriched+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">More hippocampal neurons in adult mice living in an enriched environment.</a> Nature. 386, 493-495 (1997).</li>
<li>Piltti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+dose+alters+the+dynamics+of+human+neural+stem+cell+engraftment%2C+proliferation+and+migration+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Transplantation dose alters the dynamics of human neural stem cell engraftment, proliferation and migration after spinal cord injury.</a> Stem Cell Research. 15, 341-353 (2015).</li>
<li>Yu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+controlled+cortical+impact+traumatic+brain+injury+in+rats+and+mice+dictates+degree+of+behavioral+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Severity of controlled cortical impact traumatic brain injury in rats and mice dictates degree of behavioral deficits.</a> Brain Research. 1287, 157-163 (2009).</li>
<li>Kabadi, S. V., Hilton, G. D., Stoica, B. A., Zapple, D. N., Faden, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid-percussion-induced+traumatic+brain+injury+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats.</a> Nature Protocols. 5, 1552-1563 (2010).</li>
<li>Namjoshi, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+biomechanical+and+biological+threshold+of+murine+mild+traumatic+brain+injury+using+CHIMERA+%28Closed+Head+Impact+Model+of+Engineered+Rotational+Acceleration%29%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Defining the biomechanical and biological threshold of murine mild traumatic brain injury using CHIMERA (Closed Head Impact Model of Engineered Rotational Acceleration).</a> Experimental Neurology. 292, 80-91 (2017).</li>
<li>Shetty, A. K., Mishra, V., Kodali, M., Hattiangady, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+brain+barrier+dysfunction+and+delayed+neurological+deficits+in+mild+traumatic+brain+injury+induced+by+blast+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Blood brain barrier dysfunction and delayed neurological deficits in mild traumatic brain injury induced by blast shock waves.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, 232(2014).</li>
<li>Petraglia, A. L., Dashnaw, M. L., Turner, R. C., Bailes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+mild+traumatic+brain+injury%3A+translation+of+physiological+and+anatomic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Models of mild traumatic brain injury: translation of physiological and anatomic injury.</a> Neurosurgery. 75, Suppl 4 34-49 (2014).</li>
<li>Siebold, L., Obenaus, A., Goyal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Criteria+to+define+mild%2C+moderate%2C+and+severe+traumatic+brain+injury+in+the+mouse+controlled+cortical+impact+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Criteria to define mild, moderate, and severe traumatic brain injury in the mouse controlled cortical impact model.</a> Experimental Neurology. 310, 48-57 (2018).</li>
<li>Tucker, L. B., Fu, A. H., McCabe, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+Male+and+Female+C57BL%2F6J+Mice+on+Motor+and+Cognitive+Tasks+Commonly+Used+in+Pre-Clinical+Traumatic+Brain+Injury+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Performance of Male and Female C57BL/6J Mice on Motor and Cognitive Tasks Commonly Used in Pre-Clinical Traumatic Brain Injury Research.</a> Journal of Neurotrauma. 33, 880-894 (2016).</li>
<li>Rose, S. C., Fischer, A. N., Heyer, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+long+is+too+long%3F+The+lack+of+consensus+regarding+the+post-concussion+syndrome+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Injury%22%5BJournal%5D)">How long is too long? The lack of consensus regarding the post-concussion syndrome diagnosis.</a> Brain Injury. 29, 798-803 (2015).</li>
<li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taming+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7, 825-826 (2010).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+behavioral+testing+after+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+functional+recovery+and+the+effects+of+gender%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Chronic behavioral testing after focal ischemia in the mouse: functional recovery and the effects of gender.</a> Experimental Neurology. 187, 94-104 (2004).</li>
<li>Andersen, A. B., Finger, S., Andersen, C. S., Hoagland, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+cortical+lesion+effects+and+treatment+with+nimodipine%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor cortical lesion effects and treatment with nimodipine.</a> Physiology & Behavior. 47, 1045-1052 (1990).</li>
<li>Al-Ali, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mTOR+Substrate+S6+Kinase+1+%28S6K1%29+Is+a+Negative+Regulator+of+Axon+Regeneration+and+a+Potential+Drug+Target+for+Central+Nervous+System+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The mTOR Substrate S6 Kinase 1 (S6K1) Is a Negative Regulator of Axon Regeneration and a Potential Drug Target for Central Nervous System Injury.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 37, 7079-7095 (2017).</li>
<li>Pleasant, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rate+of+neurodegeneration+in+the+mouse+controlled+cortical+impact+model+is+influenced+by+impactor+tip+shape%3A+implications+for+mechanistic+and+therapeutic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Rate of neurodegeneration in the mouse controlled cortical impact model is influenced by impactor tip shape: implications for mechanistic and therapeutic studies.</a> Journal of Neurotrauma. 28, 2245-2262 (2011).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Łagodne CCI jako modelowy system do testowania eksperymentalnej terapii regeneracyjnej Model CCI jest cennym narzędziem do badania mechanizmów dysfunkcji tkanek po mechanicznym urazie kory mózgowej. Atrakcyjną cechą tego modelu jest możliwość dostrajania parametrów urazu. Zmiana głębokości uderzenia Z, prędkości lub czasu przebywania może zwiększyć lub zmniejszyć dotkliwość urazu, zgodnie z życzeniem badacza10,25. Łagodny model CCI stłuczone...

Urazowe uszkodzenie mózgu (TBI) to ogólne określenie na nabyte uszkodzenie mózgu spowodowane albo pośrednimi siłami mechanicznymi (przyspieszenie obrotowe/opóźnienie lub kontra-coup) od uderzeń w głowę lub bezpośrednim uszkodzeniem przez przedmioty lub fale uderzeniowe. Szacuje się, że TBI jest przyczyną około 9% zgonów na całym świecie i obserwuje się je w około 50 milionach przypadków rocznie1,2. W raporcie Centers for Disease Control and Prevention z 2017 r. oszacowano, że w 2013 r. w Stanach Zjednoczonych odnotowano łącznie 2,8 miliona wizyt w szpitalu i zgonów z powodu TBI3. Wiele łagodniejszych TBI nie jest zgłaszanych każdego roku. Poważne TBI może prowadzić do upośledzenia funkcji poznawczych, funkcji motorycznych i ogólnej jakości życia przez całe życie. Konsekwencje łagodnego TBI, zwłaszcza powtarzającego się TBI związanego ze sportem, dopiero niedawno zostały docenione ze względu na ich podstępne skutki zdrowotne4,5.  
Modelowanie przedkliniczne jest kluczowym elementem rozwoju nowych mechanistycznych spostrzeżeń i potencjalnej terapii naprawczej dla TBI. Model kontrolowanego uderzenia korowego (CCI) TBI jest modelem mechanicznego uszkodzenia kory mózgowej z otwartą głową. Parametry uderzenia mogą być modyfikowane w celu uzyskania obrażeń CCI, które wahają się od łagodnych do ciężkich6. Urazy CCI są ogniskowe, a nie rozlane, jak widać w przypadku innych modeli TBI z zamkniętą głową. CCI można wykonać w celu wywołania jednostronnego urazu, tak aby kora przeciwległa mogła służyć jako wewnętrzny komparator. Protokół ten demonstruje cechy łagodnego CCI dla części kory mózgowej, która obejmuje podstawowe regiony somatosensoryczne i motoryczne. Ten obszar kory mózgowej został wybrany ze względu na jego udział w zachowaniach sensomotorycznych, dla których liczne testy behawioralne mogą wykryć deficyty wywołane urazami7. Można również wykryć poprawę zachowania dzięki interwencjom terapeutycznym w TBI.
Cechą charakterystyczną TBI jest powszechna dysfunkcja neuronów w uszkodzonym obszarze. Uszkodzone neurony ulegają śmierci komórkowej, a łączność sieci neuronalnej zostaje zakłócona8,9. TBI zaburza rekrutację endogennych komórek macierzystych, co prowadzi do dalszych deficytów zachowań10,11. Przeszczep nerwowych komórek macierzystych i komórek pochodzących z komórek macierzystych został zbadany jako możliwość przywrócenia funkcji w uszkodzonym mózgu. Oprócz potencjału do przywrócenia uszkodzonych obwodów neuronalnych, przeszczepione komórki wywierają efekty parakrynne, które sprzyjają przetrwaniu neuronów i funkcjonalnemu odzyskiwaniu po TBI12. Różne typy komórek zostały przeszczepione przedklinicznie w celu oceny ich potencjału regeneracyjnego w modelach zaburzeń neurologicznych13,14,15. Niedawna popularyzacja technologii indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych16 ułatwiła rozwój wielu linii ludzkich komórek macierzystych do użytku eksperymentalnego. Badania przedkliniczne z wykorzystaniem komórek pochodzących z hiPSC są ważnym pierwszym krokiem do scharakteryzowania potencjalnej skuteczności terapeutycznej danej linii komórkowej przeciwko chorobom u ludzi. To laboratorium opracowało protokoły różnicowania hiPSC do fenotypów neuronalnych17 w poszukiwaniu komórek nadających się do przeszczepu, aby wspomóc powrót do zdrowia po urazowym uszkodzeniu mózgu.
Eksperymenty w tym protokole wykorzystują jednostronny CCI do indukowania TBI do lewej kory somatosensorycznej i ruchowej dorosłych myszy. Łagodny uraz CCI powoduje utrzymujący się deficyt funkcjonalny prawej przedniej łapy, który służy do śledzenia wpływu wszczepienia komórek nerwowych pochodzących z hiPSC na powrót do sprawności. Testy sensomotoryczne przedniej łapy w tym protokole zostały zaadaptowane z metodologii ustalonej przez Boueta i współpracowników18 i zademonstrowanej wcześniej przez Fleminga i współpracowników19. Protokół ten przedstawia kompletny przepływ pracy dla przeprowadzenia eksperymentalnego uszkodzenia mózgu, terapeutycznego przeszczepu komórek hiPS oraz behawioralnej i histologicznej analizy eksperymentalnych miar wyników.

<table><tbody><tr><td>Strzykawki 1 ml</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>&nbsp; </td><td></td>309659</tr><tr><td>1,7 ml probówki z klapką</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>10 mikrolitrów strzykawka</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>25G Igły do strzykawek Precision Glide</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>&nbsp; </td><td></td>305122</tr><tr><td>70% etanolu</td><td></td><td></td><td>Produkt do wyboru; różni się w zależności od regionu</td></tr><tr><td>Zawiesina doustna paracetamolu</td><td>Tylenol (dla dzieci)</td><td></td><td>Rozcieńczyć do 1 mg/ml w parowniku</td></tr><tr><td>znieczulającym</td> wodę <td>Vetland</td><td>521-11-22</td><td></td></tr><tr><td>ściereczka</td><td></td><td></td> do obsługi zwierząt <td>Zakup w domu towarowym</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue Produkty</td><td>NDC-67618-151-32</td><td></td></tr><tr><td>sprężony tlen</td><td></td><td></td><td>Produkt do wyboru; różni się w zależności od regionu</td></tr><tr><td>cyklosporyna A</td> Zestaw do barwienia <td>Sigma-Aldrich</td><td>30024-100mg</td><td></td></tr><tr><td>DAB</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>dimetylosulfotlenek (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418-500ml</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen (ThermoFisher)</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>przeciwciało IgG przeciwko mysim osiołkom, sprzężone z HRP</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-035-151</td><td></td></tr><tr><td>taśma izolacyjna</td><td>3M Corporation</td><td></td><td>Zakup w domu towarowym</td></tr><tr><td>drobna pęseta</td><td>Kleszcze Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr> Szklane pipety kapilarne <tr><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>91106-12</td><td></td></tr><tr><td>, średnica zewnętrzna 1 mm, średnica wewnętrzna</td> <td>0,58 mmWorld Precision Instruments</td><td>1B100F-3</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw mikrosilnika obrotowego o dużej prędkości</td><td>Foredom Electric Co.&nbsp;</td><td>K.1070 - K.107018</td><td></td></tr><tr><td>Idealny zestaw frezów do mikrowiertła z 5</td><td>punktami ogniwowymi Naukowy&nbsp;</td><td>60-1000</td><td></td></tr><tr><td>Impact One Stereotaxic Impactor dla CCI&nbsp;</td><td>Leica Biosystems</td><td>39463920</td><td></td></tr><tr><td>isofluran</td><td>Baxter</td><td>NDC-10019-360-60</td><td></td></tr><tr><td>zegary laboratoryjne</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-649-17</td><td></td></tr><tr><td>Ściągacz do mikropipet</td><td>MicroData Instruments, Inc.</td><td>PMP-102</td><td>Wystarczy dowolny ściągacz</td></tr><tr><td>Szkiełka nasadkowe mikroskopu</td><td>Fisherbrand</td><td>12-545-E Medium</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>do montażu szkiełek mikroskopowych</td><td>Produkt do wyboru</td></tr><tr><td>lustra</td><td></td><td></td><td>Zakup w domu towarowym</td></tr><tr><td>mysz przeciwciało antyludzkiego antygenu jądrowego</td><td>Millipore</td><td>MAB1281</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do blokowania myszy na myszy</td><td>Wektor Laboratoria</td><td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>uchwyt na igłę hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>maść okulistyczna</td><td>Falcon Pharmaceuticals</td><td>NDC-61314-631-36</td><td></td></tr><tr><td>okulistyczne nożyczki sprężynowe</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>plastikowe pudełko</td><td></td><td></td><td>Zakup w plastikowym</td></tr><tr><td>cylindrze</td><td></td> domu towarowego<td></td><td>Zakup w domu towarowym</td></tr><tr><td>Pompa strzykawkowa z napędem QSI</td><td>Stoelting</td><td>53311</td><td></td></tr><tr><td>Wyjmowana złączka uciskowa igła</td><td>Hamilton</td><td>55750-01</td><td></td></tr><tr><td>mała rama stereotaktyczna dla gryzoni</td> Małe nożyczki <td>Stoelting</td><td>51925</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase</td><td>Invitrogen (ThermoFisher)</td><td></td><td></td>A1110501</tr><tr><td>Sterylne waciki nasączone alkoholem</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>sterylne waciki bawełniane/końcówki Q Kendall</td><td>Tyco Healthcare</td><td>540500</td><td></td></tr><tr><td>Sterylna sól fizjologiczna</td><td>Hospira</td><td>NDC-0409-1966-07</td><td></td></tr><tr><td>Stopery (2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-662-56</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka mikroskopowe Superfrost Plus Gold</td><td>Fisherbrand</td><td>15-188-48</td><td></td></tr><tr><td>szwy - 5.0 jedwab z zakrzywioną igłą</td><td>Oasis</td><td>MV-682</td><td></td></tr></tbody></table>

kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

Urazowe uszkodzenie mózgu (TBI) jest główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności na całym świecie. Patologia choroby spowodowana TBI postępuje od pierwotnego mechanicznego uszkodzenia do wtórnych procesów urazowych, w tym apoptozy i stanu zapalnego. Modelowanie na zwierzętach okazało się cenne w poszukiwaniach mających na celu rozwikłanie mechanizmów urazów i ocenę potencjalnych terapii neuroprotekcyjnych. Protokół ten opisuje model kontrolowanego wpływu korowego (CCI) ogniskowego TBI z otwartą głową. W szczególności opisano parametry powodujące łagodne jednostronne uszkodzenie kory mózgowej. Behawioralne konsekwencje CCI są analizowane za pomocą testu obustronnej integracji sensomotorycznej z taśmą klejącą. Jeśli chodzi o eksperymentalną terapię patologii TBI, protokół ten ilustruje również proces przeszczepiania hodowanych komórek do mózgu. Hodowle komórek nerwowych pochodzące z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (hiPSC) zostały wybrane ze względu na ich potencjał do wykazywania lepszej odbudowy funkcjonalnej u pacjentów z TBI. Przewlekłe przeżycie hiPSC w tkance mózgowej myszy gospodarza wykrywa się za pomocą zmodyfikowanego procesu immunohistochemicznego DAB.

Operacja kraniektomii umożliwia eksperymentalne uszkodzenie mózgu i terapeutyczną transplantację komórek: model kontrolowanego uderzenia w korę (CCI) w celu wywołania uszkodzenia mózgu oraz następująca po nim terapia transplantacją komórek wymagają starannego usunięcia nadkładającej się czaszki. Kraniektomię można przeprowadzić na dowolnej grzbietowej powierzchni czaszki, aby umożliwić manipulacje w interesującym regionie mózgu. Schemat na Rysunku 1 przedstawia kraniektomię ...

Ten protokół demonstruje metodologie dla mysiego modelu urazowego mózgu z otwartą czaszką i przeszczepu hodowanych ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych do miejsca urazu. W skrócie opisano również testy behawioralne i histologiczne wyników tych procedur.

Kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...

Nasz protokół przedstawia kompleksowy przedkliniczny przebieg badań nad skutecznością terapeutyczną pluripotencjalnych komórek macierzystych indukowanych przez człowieka po urazie mózgu. Ten model urazowego uszkodzenia mózgu zapewnia wysoki stopień wszechstronności i odtwarzalności dzięki ścisłej kontroli parametrów siły mechanicznej, a tym samym zapewnieniu dobrze zdefiniowanego urazu. Procedury te mogą być wykorzystywane do badania urazów i procesów rekonwalescencji w innych obszarach mózgu, a metoda przeszczepu może być stosowana w przypadku wielu typów komórek.Wiercenie czaszki jest trudne, ponieważ technika ta wymaga zręczności manualnej, aby opanować odpowiedni nacisk, prędkość, głębokość i płynne ruchy. Dokumentuj wszystkie wydarzenia i obszernie ćwicz. Aby wykonać jednostronną kraniektomię, potwierdź brak reakcji na uszczypnięcie palca u znieczulonej myszy i zabezpiecz mysz w ramce stereotaktycznej.Nałóż antybiotykową maść okulistyczną na oczy za pomocą sterylnego wacika i roztworu na bazie jodu na ogoloną skórę głowy. Usuń jod z 70% etanolu i przykryj zwierzę zasłoną chirurgiczną z fenestracją. Wykonaj 1,5 do dwucentymetrowego nacięcia linii środkowej na skórze głowy i użyj sterylnych bawełnianych wacików, aby oczyścić ranę i oczyścić powięź na lewo od linii środkowej w bregma.Użyj sondy impaktorowej, aby zidentyfikować miejsce kraniektomii i ustaw x równe zero, y równa się zero stereotaktycznego punktu odniesienia na bregma. Ustaw sondę bocznie do dwóch milimetrów na lewo od linii środkowej. Użyj chirurgicznie bezpiecznego markera z cienką końcówką, aby zaznaczyć okrąg o średnicy pięciu milimetrów wokół przypuszczalnego obszaru uderzenia.Podnieś i obróć impaktor z pozycji i zakończ pięciomilimetrowy okrąg. Na krótko ustawić impaktor na miejscu, aby sprawdzić dokładność pięciomilimetrowego koła. Następnie podnieś i obróć impaktor z pozycji i użyj szybkoobrotowego zestawu mikrosilnika, narzędzia ręcznego wyposażonego w okrągłe wiertło do zadziorów o średnicy 0,6 lub 0,8 milimetra, aby wykonać otwarty otwór w czaszce z maksymalną prędkością od 70 do 80%.Wywieraj lekki nacisk na czaszkę, wiercąc wzdłuż pięciomilimetrowego obrysu obwodu w tej granicy i użyj kleszczy, aby podnieść powstały płat kostny. Wiercenie przez linie szwów może stanowić dodatkową trudność, ponieważ kość jest przerwana i wymaga dodatkowego nacisku. Naczynia krwionośne mogą być ze sobą ściśle powiązane i dlatego prawdopodobne jest krwawienie.Aby wywołać łagodne, kontrolowane uszkodzenie kory mózgowej, wyczyść sondę impaktora sterylnym wacikiem nasączonym alkoholem i przesuń sondę impaktora z powrotem na miejsce nad odsłoniętą korą. Opuść sondę, aż dotknie powierzchni opony twardej i oznacz tę pozycję jako z równe zero. Wycofaj tłok i przesuń się do z równa minus jeden milimetr i rozładuj tłok, aby uderzył w korę.Natychmiast podnieś tłok i przesuń ramię z pozycji i przepłucz korę dużą ilością soli fizjologicznej i użyj prostych przerywanych szwów i jedwabnego szwu 5-0, aby zamknąć nacięcie skóry głowy. Następnie podaj 10 miligramów na kilogram cyklosporyny A we wstrzyknięciu podskórnym do karku i umieść mysz w czystej, wstępnie ogrzanej klatce pooperacyjnej z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia. Około 24 godziny po kraniektomii umieść mysz z powrotem w ramce stereotaktycznej.Przykryj mysz zasłoniętą zasłoną chirurgiczną. Przepłukać miejsce nacięcia sterylną solą fizjologiczną, aby oczyścić miejsce i poluzować szwy. Użyj wacika nasączonego 70% etanolem, aby delikatnie wysterylizować miejsce nacięcia i użyj cienkiej pęsety i nożyczek okulistycznych, aby usunąć szwy.Następnie przepłukać miejsce operacji i kraniektomii dużą ilością sterylnej soli fizjologicznej. W kapturze bezpieczeństwa biologicznego do hodowli komórkowej delikatnie zakręć lub postukaj w rurkę z komórkami, aby zapewnić jednorodną zawiesinę komórek. Za pomocą mikropipety załadować około 7,5 mikrolitra komórek do strzykawki Hamiltona przez końcówkę tłoka.Trzymając strzykawkę pod kątem 120 stopni, z końcem tłoka skierowanym w dół, włożyć tłok, uważając, aby nie wprowadzić pęcherzyków powietrza między zawiesinę a końcówkę tłoka. Przymocować zespół uszczelki do igły do pipety i przymocować igłę do strzykawki. Nacisnąć tłok, aby przesunąć zawiesinę komórek do igły do pipety i podłączyć strzykawkę do stereotaktycznej pompy strzykawkowej.Przesunąć tłok, aby upewnić się, że zespół pompy strzykawkowej działa prawidłowo, a następnie przesunąć igłę do współrzędnych do wstrzykiwania. Wyrównaj końcówkę igły do bregma i ustaw współrzędne x i y na zero. Przesunąć końcówkę igły nad kraniektomią na dwa milimetry w bok i minus jeden milimetr do tyłu do bregmy i dotknąć końcówką igły do powierzchni opony twardej.Lekko podnieś igłę, a następnie wykonaj małe nacięcie w oponie twardej w miejscu, w którym igła się zetknęła. Ustaw współrzędną stereotaktyczną na z równa się zero i naciśnij tłok, aby potwierdzić, że zawiesina komórek przepływa odpowiednio przed wprowadzeniem igły do mózgu. Wprowadź igłę do mózgu na głębokość z równa się minus 1,4 milimetra, aby umieścić przeszczep na granicy istoty szarej / białej kory głębokiej.Uruchomić pompę strzykawkową, aby podawać zawiesinę komórek przez 15 minut. Użyj mikroskopu o dużej odległości roboczej, aby monitorować odpływ zawiesiny komórek, nawadniając miejsce operacji sterylną solą fizjologiczną podczas wstrzyknięcia, aby utrzymać nawodnienie tkanek. Po dostarczeniu wszystkich komórek należy powoli wycofać igłę do przeszczepu i przepłukać miejsce operacji dodatkową solą fizjologiczną przed zamknięciem nacięcia nowymi szwami.Następnie zapewnij opiekę pooperacyjną, jak pokazano. Aby wykonać test usuwania taśmy klejącej, najpierw użyj małego noża do golenia, aby pociąć żółte i czerwone kawałki taśmy izolacyjnej na paski o wymiarach trzy na pięć milimetrów na gładkiej szklanej powierzchni. Przyprowadź myszy do pomieszczenia do testowania zachowania na co najmniej 30 minut przed badaniem i użyj szmatki, aby przytrzymać mysz za kark i grzbiet tak, aby mysz trzymała przednie łapy z dala od ciała i głowy.Użyj pęsety, aby umieścić samoprzylepny pasek na podeszwowej powierzchni każdej przedniej łapy i delikatnie i konsekwentnie naciskaj palcem, aby przymocować paski do łap. Szybko umieść mysz w plastikowym cylindrze i uruchom dwa stopery, gdy mysz ma wszystkie cztery łapy na plastikowym pudełku testowym. Następnie użyj dwóch stoperów, aby zarejestrować opóźnienia powiadomienia o lewej łapie, usunięcia lewej łapy, powiadomienia o prawej łapie i usunięcia prawej łapy.W tym eksperymencie pilotażowym porównano funkcję kończyn przednich w samej kraniektomii, kontrolowanym uszkodzeniu korowym i myszach wcześniej nieleczonych. Myszy, które przeszły operację, wykazywały przejściowe zwiększone opóźnienia, aby zauważyć bodźce adhezyjne przez jeden do trzech dni bezpośrednio po operacji i przejściowe pooperacyjne deficyty w usuwaniu kleju z przedniej łapy ipsilateralnej. Myszy, które przeszły kontrolowane uderzenie korowe, wykazywały jednak znaczne deficyty sprawności motorycznej w przedniej łapie przeciwlegle do urazu w porównaniu z naiwnymi myszami po 28 dniu pooperacyjnym.Barwienie immunologiczne wycinków mózgu myszy pod kątem ludzkiego antygenu jądrowego ujawnia, że przeszczepy komórek ludzkich można wyraźnie odróżnić od tkanek gospodarza w przypadku uszkodzenia SHAM i kontrolowanego uderzenia korowego mózgu. Należy przestrzegać standardowych laboratoryjnych procedur bezpieczeństwa podczas obchodzenia się z hodowanymi komórkami ludzkimi oraz podczas obchodzenia się z igłami strzykawkowymi, które mają kontakt z gryzoniami lub lekami immunosupresyjnymi. Skrawki tkanki mózgowej mogą być analizowane pod kątem ekspresji markerów neurozapalnych, ponieważ cenna jest wiedza, w jaki sposób przeszczep wpływa na odpowiedź na uszkodzenie tkanki gospodarza i odwrotnie.Byliśmy zaskoczeni, gdy znaleźliśmy subtelne różnice między płciami w wynikach zachowań po urazie. Obecnie badamy, czy seks odgrywa rolę w odpowiedzi neuroimmunologicznej na uszkodzenie mózgu. Pewne ręce, cierpliwość i praktyka są kluczowe dla opracowania dobrej techniki kraniektomii.Uszkodzenia uboczne spowodowane niewłaściwą kraniektomią mogą zagrozić obszarowi, który chcesz wykorzystać do przeszczepu komórek.

controlled-cortical-impact-model-mouse-brain-injury-with-therapeutic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Źródło: Furmanski, O., et al. Kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych. J. Vis. Exp. (2019 rok)W tym filmie indukowane przez człowieka pluripotencjalne komórki nerwowe pochodzące z komórek macierzystych są stereotaktycznie wstrzykiwane do granicy istoty szarej i istoty białej kory głębokiej w mysim modelu urazowego uszkodzenia mózgu. Przeszczepione komórki...

Stereotaktyczny przeszczep zawiesiny komórek nerwowych myszy z urazowym uszkodzeniem mózgu

Ten film demonstruje procedurę wywoływania urazowego uszkodzenia mózgu u myszy w otwartej czaszce poprzez wykonanie nacięcia w linii środkowej czaszki, przewiercenie czaszki i usunięcie płata kostnego w celu odsłonięcia kory mózgowej oraz zastosowanie wysokiego ciśnienia w celu wywołania urazu. Rana jest następnie zszywana w celu przygotowania modelu myszy do kolejnych eksperymentów.

Generowanie mysiego modelu urazowego uszkodzenia mózgu za pomocą sondy impaktorowej

Źródło: Shahror, R. A. et al., Tracking Superparamagnetic iron oxide-labeled Mesenchymal Stem Cells using MRI after Intranosal Delivery in a Traumatic Brain Injury Murine Model. J. Vis. Exp. (2019 rok)Ten film przedstawia donosowe podawanie mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) w modelu mysim. MSCs wchłaniają się do tkanki nosowej, migrują do mózgu za pośrednictwem sygnałów cytokin i wydzielają czynniki neurotroficzne w miejscu urazu, oferując potencjał neuroterapeutyczny do naprawy...

Donosowe podawanie mezenchymalnych komórek macierzystych w mysim modelu urazowego uszkodzenia mózgu

Źródło: Parajuli, B., et.al. Przeszczepienie indukowanego przez człowieka pluripotencjalnego mikrogleju pochodzącego z komórek macierzystych w mózgu myszy immunokompetentnych drogą przeznosową. J. Vis. Exp. (2022).Ten film pokazuje przeznosowe przeszczepienie indukowanych pluripotencjalnych komórek ludzkiego mikrogleju pochodzących z ludzkich komórek macierzystych (iPSMG) do mózgu myszy. Hialuronidazę nakłada się na nozdrza myszy zubożonej w mikroglej w celu zwiększenia przepuszczalności.

Przeznosowe przeszczepienie indukowanych pluripotencjalnych ludzkich komórek mikrogleju pochodzących z ludzkich komórek gleju do mózgu myszy

Uraz rdzenia kręgowego to traumatyczny stan, który powoduje ciężką zachorowalność i wysoką śmiertelność. W niniejszej pracy szczegółowo opisano model kontuzji rdzenia kręgowego u myszy, po którym następuje przeszczepienie nerwowych komórek macierzystych.

Przeszczepienie nerwowych komórek macierzystych w eksperymentalnym modelu kontuzyjnym uszkodzenia rdzenia kręgowego

Tutaj prezentujemy protokół, zaprojektowany do wykorzystania narzędzi chemogenetycznych do manipulowania aktywnością komórek progenitorowych interneuronów korowych przeszczepionych do kory mózgowej myszy po urodzeniu.

Przeszczepienie chemogenetycznie zmodyfikowanych progenitorów interneuronów korowych do wczesnych postnatalnych mózgów myszy

Opisujemy intraparenchymalne przeszczepienie ludzkich nerwowych komórek progenitorowych transdukowanych podwójnym wektorem reporterowym wyrażającym lucyferazy-zielone białko fluorescencyjne (GFP) w mózgu myszy. Po przeszczepie sygnał lucyferazy jest wielokrotnie mierzony za pomocą bioluminescencji in vivo i przeszczepionych komórek wykazujących ekspresję GFP, identyfikowanych w sekcjach mózgu za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Przeszczep domózgowy i śledzenie bioluminescencji in vivo ludzkich nerwowych komórek progenitorowych w mózgu myszy

Przedstawiony tutaj protokół pozwala na przeszczepienie indukowanego pluripotencjalnego ludzkiego mikrogleju pochodzącego z komórek macierzystych (iPSMG) do mózgu drogą przeznosową u myszy immunokompetentnych. Przedstawiono metodę przygotowania i przeznosowego przeszczepienia komórek oraz podawania mieszaniny cytokin w celu utrzymania iPSMG.

Przeszczepienie indukowanego przez człowieka pluripotencjalnego mikrogleju pochodzącego z komórek macierzystych w mózgu myszy immunokompetentnych drogą przeznosową

Ten protokół opisuje długoterminowe hodowle organotypowe dorosłej ludzkiej kory mózgowej w połączeniu z dokorowym przeszczepem ex vivo indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych pochodzących z komórek macierzystych, które prezentują nowatorską metodologię do dalszego testowania terapii opartych na komórkach macierzystych dla ludzkich zaburzeń neurodegeneracyjnych.

Hodowle organotypowe kory mózgowej dorosłego człowieka jako model ex vivo do przeszczepiania i walidacji ludzkich komórek macierzystych

Przeszczepienie ludzkich pluripotencjalnych neuronów GABA-ergicznych pochodzących z komórek macierzystych, generowanych przez programowanie neuronalne, może być potencjalnym podejściem do leczenia zaburzeń neurorozwojowych. Protokół ten opisuje wytwarzanie i przeszczepianie prekursorów neuronów GABA-ergicznych pochodzących z ludzkich komórek macierzystych do mózgów nowonarodzonych myszy, umożliwiając długoterminowe badanie przeszczepionych neuronów i ocenę ich potencjału terapeutycznego.

Przeszczep ludzkich neuronów GABA-ergicznych pochodzących z ludzkich komórek macierzystych do wczesnopourodzeniowego hipokampa myszy w celu złagodzenia zaburzeń neurorozwojowych

Tutaj opisujemy protokół przeszczepu i śledzenia oznakowanych komórek nerwowych do ludzkich organoidów mózgowych.

Ludzki model organoidowy przeszczepu komórek nerwowych

Poznaj model urazowego uszkodzenia mózgu u myszy z kontrolowanym uderzeniem kory mózgowej i przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych. Ta metoda pozwala ocenić skuteczność terapii komórkowych w neuroregeneracji.

Kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych (Wideo) | JoVE Journal

Kontrolowany model wpływu kory mózgowej uszkodzenia mózgu myszy z terapeutycznym przeszczepem ludzkich pluripotencjalnych komórek nerwowych pochodzących z komórek macierzystych

Przeglądaj więcej filmów