Name: Systematyczne podejście do identyfikacji nowych cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zapobiegania próchnicy zębów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Poznaj uproszczony protokół identyfikacji związków przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów roślinnych skierowanych przeciw Streptococcus mutans. Metoda ta umożliwia odkrywanie naturalnych kandydatów na środki zapobiegające próchnicy zębów poprzez badania mikrobiologiczne i frakcjonowanie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wyrażamy naszą wdzięczność Núcleo de Bioensaios, Biossíntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais (NuBBE) z Instytutu Chemii UNESP, Araraquara/SP za udostępnienie laboratoriów do przygotowania materiału roślinnego. Dziękujemy również Laboratorium Mikrobiologii Stosowanej Zakładu Materiałów Stomatologicznych i Protetyki Stomatologicznej, UNESP, Araraquara/SP. Badania te były wspierane przez grant badawczy Fundacji Badawczej São Paulo (FAPESP #2013/07600–3 dla AJC) oraz stypendia oraz fundusze ogólne (FAPESP #2017/07408–6 i FAPESP #2019/23175-7 dla SMR; #2011/21440–3 i #2012/21921–4 dla PCPB). Krajowa Rada Rozwoju Naukowego i Technologicznego we współpracy z FAPESP udzieliła dodatkowego wsparcia (INCT CNPq #465637/2014–0 i FAPESP #2014/50926–0 dla AJC).

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Głównymi wyzwaniami związanymi z pracą z naturalnymi ekstraktami surowymi są ich złożony skład oraz niedoskonałości klasycznych badań izolacji sterowanej biologicznie. Chociaż proces ten jest powolny, jest skuteczny i doprowadził do ważnych odkryć w badaniach nad nanocząsteczkami. Aby zracjonalizować, potrzebne są badania oparte na priorytetyzacji. W związku z tym zastosowanie nowoczesnych podejść do profilowania chemicznego do analizy CE i dereplikacji przed izolacją jest ważne dla scharakteryzowania badanego materiału ...

Najwcześniejsze modele medycyny stosowane w społeczeństwach opierały się na produktach naturalnych (NPs). Od tego czasu ludzie poszukują w naturze nowych związków chemicznych, które można przekształcić w leki1. Poszukiwania te doprowadziły do ciągłego doskonalenia technologii i metod przesiewowych w zakresie etnobotaniki1,2,3. Produkty naturalne stanowią bogate źródło strukturalnie zróżnicowanych substancji o szerokim spektrum aktywności biologicznej, przydatnych w opracowywaniu terapii alternatywnych lub wspomagających. Jednak ze względu na naturalną złożoność macierzy roślinnej, izolacja i identyfikacja związków aktywnych jest zadaniem wymagającym i czasochłonnym4.
Leki lub formulacje oparte na nanocząstkach (NPs) mogą być stosowane w zapobieganiu i/lub leczeniu wielu schorzeń jamy ustnej, w tym próchnicy zębów4. Próchnica zębów, jedna z najpowszechniejszych przewlekłych chorób na świecie, wynika z oddziaływania diety bogatej w cukry oraz biofilmu mikrobiologicznego (płytki nazębnej) tworzącego się na powierzchni zęba, co prowadzi do demineralizacji wywołanej przez kwasy organiczne powstające w wyniku metabolizmu mikrobiologicznego, a w przypadku braku leczenia – do utraty zębów5,6. Choć mogą z tym procesem być powiązane inne mikroorganizmy7, Streptococcus mutans jest kluczową bakterią kariogenną, ponieważ wykazuje właściwości acidogenne i aciduryczne oraz zdolność do budowy macierzy zewnątrzkomórkowej. Gatunek ten koduje liczne egzoenzymy (np. glikozylotransferazy lub Gtfs), które wykorzystują sacharozę jako substrat8 do budowy macierzy zewnątrzkomórkowej bogatej w egzopolisacharydy, które stanowią determinant wirulencji9. Ponadto grzyb Candida albicans może stymulować produkcję tej macierzy zewnątrzkomórkowej7. Chociaż fluor, podawany w różnych formach, pozostaje podstawą zapobiegania próchnicy zębów10, konieczne jest opracowanie nowych podejść jako środków wspomagających w celu zwiększenia jego skuteczności. Dodatkowo dostępne metody usuwania płytki nazębnej opierają się na stosowaniu mikrobójczych środków o szerokim spektrum działania (np. chlorheksydyny)1. Alternatywnie, NPs stanowią potencjalne terapie w kontrolowaniu biofilmów i zapobieganiu próchnicy zębów12,13.
Dalsze postępy w odkrywaniu nowych związków bioaktywnych pochodzenia roślinnego obejmują niezbędne kroki lub podejścia, takie jak: (i) stosowanie wiarygodnych i powtarzalnych protokołów pobierania próbek, biorąc pod uwagę, że rośliny często wykazują zmienność wewnątrzgatunkową; (ii) przygotowywanie kompleksowych ekstraktów i ich odpowiednich frakcji w małej skali; (iii) charakteryzację i/lub dereplikację ich profili chemicznych poprzez pozyskiwanie danych wielowymiarowych, np. GC-MS, LC-DAD-MS lub NMR; (iv) wykorzystanie wydajnych i wysokoproduktywnych modeli do oceny bioaktywności; (v) wybór potencjalnych nowych hitów w oparciu o wielowymiarową analizę danych lub inne narzędzia statystyczne; (vi) przeprowadzenie izolacji i oczyszczania docelowych związków lub obiecujących kandydatów; oraz (vii) walidację odpowiadających im działań biologicznych z wykorzystaniem wyizolowanych związków2,14.
Dereplikacja jest procesem szybkiej identyfikacji znanych związków w surowym ekstrakcie, co pozwala na odróżnienie nowych związków od tych, które zostały już przebadane. Ponadto proces ten zapobiega izolacji w przypadku, gdy bioaktywność określonych związków została już opisana, i jest szczególnie pomocny w wykrywaniu tzw. „frequent hitters”. Metoda ta jest stosowana w różnych nieukierunkowanych schematach badawczych – od identyfikacji głównych związków lub przyspieszenia frakcjonowania sterowanego aktywnością, aż po profilowanie chemiczne zbiorów ekstraktów. Może być w pełni zintegrowana z badaniami metabolomicznymi w celu nieukierunkowanego profilowania chemicznego CE lub ukierunkowanej identyfikacji metabolitów. Wszystko to prowadzi w ostateczności do priorytetyzacji ekstraktów przed przeprowadzeniem procedur izolacyjnych1,15,16,17.
W związku z tym w niniejszej publikacji opisujemy systematyczne podejście do identyfikacji cząsteczek o działaniu przeciwdrobnoustrojowym i przeciwbiofilmowym z ekstraktów i frakcji roślinnych. Obejmuje ono cztery multidyscyplinarne etapy: (1) pobranie materiału roślinnego; (2) przygotowanie ekstraktów surowych (CE) i frakcji (CEF), a następnie analizę ich profilu chemicznego; (3) bioassay; oraz (4) analizy danych biologicznych i chemicznych (Rysunek 1). Przedstawiamy zatem protokół opracowany w celu analizy aktywności przeciwdrobnoustrojowej i przeciwbiofilmowej ekstraktów i frakcji Casearia sylvestris przeciwko Streptococcus mutans oraz Candida albicans13, a także procedury charakterystyki fitochemicznej i analizy danych. Dla uproszczenia, głównym celem jest tutaj zademonstrowanie podejścia do przesiewania związków naturalnych z wykorzystaniem bakterii.
<img alt="Analiza ekstraktów roślinnych: Schemat profilowania UHPLC-DAD-HRMS, testów biologicznych i etapów analizy danych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61773/61773fig01v2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 1"> 
Rysunek 1: Schemat blokowy systematycznego podejścia do identyfikacji aktywnych cząsteczek z ekstraktów i frakcji roślinnych. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61773/61773fig01v2large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

<table><tbody><tr><td>Mikropłytki 96-dołkowe&nbsp;</td><td>Kasvi</td><td>Płaskie dno</td><td></td></tr><tr><td>Węgiel aktywny</td><td>LABSYNTH</td> Etap <td></td><td>czyszczenia i/lub frakcjonowania</td></tr><tr><td>Młyn analityczny</td><td>Ika LabortechniK</td><td>Model A11 Podstawowy</td><td></td></tr><tr><td>Płytki agarowe z krwią</td><td>Laborclin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kolumna chromatograficzna C18</td><td>Phenomenex Kinetex</td><td>150 &times; 2,1 mm, 2,6 &micro; m, 100&Acirc;</td><td></td></tr><tr><td>Sulcotlenek dimetylu&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Rozwiązanie</td><td></td></tr><tr><td>nośnikowe Czytnik płytek ELISA</td><td>Biochrom Ez</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>J. T. Baker</td><td>Do etapów ekstrakcji i frakcjonowania oraz składu</td><td></td>fazy ruchomej</tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Roztwór</td><td></td>nośnikowy</tr><tr><td>Octan etylu J</td><td>. T. Baker</td><td>Etap</td><td></td>frakcjonowania</tr><tr><td>GraphPad Software</td><td>La Jolla</td><td>GraphPad Prism7</td><td></td></tr><tr><td>Hexane</td><td>J. T. Baker</td> Etap <td></td><td>frakcjonowania</td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>J. T. Baker</td><td>Do etapu</td><td></td></tr><tr><td>ekstrakcji Liofilizator (liofilizator)</td><td>Savant</td><td>Modulyo</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Millipore</td><td>LAC</td><td>0,22 i mikro; m x 13 mm</td><td></td></tr><tr><td>Wytrząsarka orbitalna</td><td>Quimis</td><td>Model G816&thinsp; M20</td><td></td></tr><tr><td>Poliamidowy wkład ekstrakcyjny do fazy stałej</td><td>Macherey-Nagel</td><td>Etap oczyszczania i/lub frakcjonowania</td> Żel krzemionkowy Merck 40&ndash;<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td> 63&cienkie; &mu; m, 60&thinsp; &Acirc;</td><td></td></tr><tr><td>Chlorek sodu (NaCl)</td><td>Synteza</td><td>0,89% w wodzie</td><td></td></tr><tr><td>Wkłady do ekstrakcji do fazy stałej (SPE)</td><td>Macherey-Nagel</td><td>Etap oczyszczania i/lub frakcjonowania</td><td></td></tr><tr><td>Trypton</td><td>Difco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UHPLC-DAD</td><td>Dionex</td><td>Ultimate 3000 RS</td><td></td></tr><tr><td>Kąpiel ultradźwiękowa</td><td>UNIKALNY</td><td>Model USC 2800</td><td></td></tr><tr><td>Ekstrakt drożdżowy</td><td>Firma Difco</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

systematyczne podejście do identyfikacji nowych cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zapobiegania próchnicy zębów

Systematic Approach to Identify Novel Antimicrobial and Antibiofilm Molecules from Plants' Extracts and Fractions to Prevent Dental Caries

Produkty naturalne dostarczają strukturalnie różnych substancji, o niezliczonych aktywnościach biologicznych. Jednak identyfikacja i izolacja związków czynnych z roślin jest wyzwaniem ze względu na złożoną matrycę roślinną oraz czasochłonne procedury izolacji i identyfikacji. W związku z tym przedstawiono stopniowe podejście do badań przesiewowych naturalnych związków z roślin, w tym izolację i identyfikację potencjalnie aktywnych cząsteczek. Obejmuje zbieranie materiału roślinnego; przygotowanie i frakcjonowanie ekstraktów surowych; chromatografia i spektrometria (UHPLC-DAD-HRMS i NMR) do analizy i identyfikacji związków; testy biologiczne (działanie przeciwbakteryjne i przeciwbiofilmowe; bakteryjna "siła przylegania" do błonki ślinowej i początkowa matryca glukanowa poddana wybranym zabiegom); i analiza danych. Model jest prosty, powtarzalny i umożliwia wysokoprzepustowe badania przesiewowe wielu związków, stężeń i etapów uzdatniania, które mogą być konsekwentnie kontrolowane. Uzyskane dane stanowią podstawę do przyszłych badań, w tym preparatów z najbardziej aktywnymi ekstraktami i/lub frakcjami, izolacji cząsteczek, modelowania cząsteczek do określonych celów w komórkach drobnoustrojów i biofilmach. Na przykład jednym z celów kontroli biofilmu próchnicotwórczego jest hamowanie aktywności glukozylotransferaz Streptococcus mutans, które syntetyzują glukany macierzy zewnątrzkomórkowej. Hamowanie tych enzymów zapobiega tworzeniu się biofilmu, zmniejszając jego zjadliwość.

Przedstawiamy przykład zastosowania systematycznego podejścia do przesiewowej oceny aktywności biologicznej ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zidentyfikowania potencjalnie aktywnych cząsteczek do możliwych nowych terapii przeciwpróchnicowych: aktywność przeciwdrobnoustrojową i przeciwbiofilmową ekstraktów z Casearia sylvestris pochodzących z różnych biomów brazylijskich wobec Streptococcus mutans oraz Candida albicans13.
Wstęp</st...

Produkty naturalne stanowią obiecujące punkty wyjścia dla rozwoju nowych leków i środków terapeutycznych. Jednak ze względu na dużą różnorodność chemiczną znalezienie nowych związków terapeutycznych z roślin jest trudnym i czasochłonnym zadaniem. Opisujemy uproszczone podejście do identyfikacji cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i antybiofilmu z ekstraktów i frakcji roślinnych.

Systematyczne podejście do identyfikacji nowych cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zapobiegania próchnicy zębów

Natural products provide structurally different substances, with a myriad of biological activities. However, the identification and isolation of active ...

Przedstawiony protokół służy do prawidłowego badania przesiewowego i analizy kandydatów bioaktywnych w produktach naturalnych w celu kontroli biofilmów jamy ustnej. Można go również dostosować do zastosowań w innych dziedzinach badań nad biofilmem. Ta metoda badania przesiewowego i analizy skrobi umożliwia jednoczesne usuwanie składników bioaktywnych.Próchnica zębów jest bardzo rozpowszechnioną chorobą przewlekłą pochodzącą z diety biofilmowej. Protokół ten może pomóc w identyfikacji naturalnych produktów do kontroli biofilmu, a co za tym idzie, próchnicy. Rozpocząć od przygotowania rozpuszczalnika ekstrakcyjnego z mieszaniną wodno-alkoholową.Pobiera się próbki o stężeniach od 50 do 100 miligramów na mililitr rozpuszczalnika ekstrakcyjnego i wykonuje się 15-minutowe ekstrakcje wspomagane ultradźwiękami w mikroprobówkach. Powtórz ekstrakcję trzy razy. Po każdym etapie ekstrakcji odwirować próbkę, aby usunąć osad stały i usunąć supernatant.Połączyć supernatanty z każdego etapu ekstrakcji i przefiltrować je. Zapisz podwielokrotności do analizy chemicznej i testów biologicznych. W celu frakcjonowania rozcieńczyć próbkę ekstraktu surowego, aby uzyskać roztwór 100 miligramów na mililitr, używając rozpuszczalnika do ekstrakcji wstępnej.Następnie przenieś jeden mililitr tej próbki do wstępnie kondycjonowanego wkładu ekstrakcyjnego do fazy stałej z jednym gramem absorbentu o pojemności sześciu mililitrów. Przeprowadzić frakcjonowanie, używając około trzech martwych objętości każdej jednostki LUN do ekstrakcji, i zebrać jedną frakcję według składu jednostki LUN. Zapisz podwielokrotności do analizy chemicznej i testów biologicznych.Usuń rozpuszczalnik w próżni, przepływie azotu lub liofilizacji i zarejestruj masę i wydajność. Rozpuść suchą masę w najlepszych możliwych rozpuszczalnikach. Obliczyć stężenie rozpuszczalnika w roztworze podstawowym, korzystając ze wzoru zawartego w manuskrypcie.Reaktywuj szczep mikrobiologiczny S.mutans UA 159 na agarze z krwią i hoduj go w płynnej pożywce hodowlanej. Wykonaj rozcieńczenie od 1 do 20 początkowej kultury przy użyciu tej samej pożywki hodowlanej i inkubuj ją, aż osiągnie fazę wzrostu środkowej logarytmu. Przygotować inokulum z określoną populacją w TYEG do testów przeciwdrobnoustrojowych i TYE z 1% sacharozą do testów biofilmu.Aby uzyskać aktywność przeciwdrobnoustrojową, określ stężenie próbki do analizy i dodaj ją do płytki 96-dołkowej. Do każdej płyty dołącz zestaw kontrolek, zgodnie z opisem w rękopisie tekstowym. Za pomocą TYEG dostosuj objętość do 100 mikrolitrów, zaszczepij 100 mikrolitrów kultury drobnoustrojów i inkubuj płytkę przez 24 godziny w temperaturze 37 stopni Celsjusza w 5% dwutlenku węgla.Przeanalizuj wzrost bakterii w zależności od zmętnienia poprzez oględziny studni. Zaszczepić podwielokrotność pożądanego rozcieńczenia na określonych płytkach agarowych w dwóch egzemplarzach i inkubować płytki. Po inkubacji wykonaj liczenie kolonii.Zważyć kulki hydroksyapatytu w mikroprobówkach i wysterylizować je. Następnie umyj kulki za pomocą buforu adsorpcyjnego Ab. Dodaj 500 mikrolitrów śliny do mikroprobówek, aby utworzyć film ślinowy, i inkubuj w temperaturze 37 stopni Celsjusza z 24 obrotami na minutę przez 40 minut. Usunąć supernatant śliny i umyć kulki trzykrotnie Ab, aby przygotować je do dalszych testów.Dodać 500 mikrolitrów próbki lub próbki kontrolnej do każdej mikroprobówki zawierającej kulki z błonką śliny i inkubować je z prędkością 24 obrotów na minutę i w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 minut. Umyj koraliki trzykrotnie za pomocą Ab. Dodaj 500 mikrolitrów kultury drobnoustrojów do każdej mikroprobówki i inkubuj probówki w podobnych warunkach przez godzinę. Następnie przemyj niezwiązane komórki trzykrotnie buforem Ab.Ponownie zawiesić każdą próbkę z jednym mililitrem buforu Ab i wyceścić na siedem watów przez 30 sekund. Porcje każdej zawiesiny należy rozcieńczyć dziesięciokrotnie i umieścić je na specjalnych płytkach agarowych. Inkubuj płytki przez 48 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza w 5% dwutlenku węgla i policz kolonie.W celu analizy danych wprowadź surowe dane do testów biologicznych do arkusza kalkulacyjnego i oblicz log zahamowania wzrostu drobnoustrojów przez każdy zabieg oraz logarytm procentowy zahamowania wzrostu drobnoustrojów w porównaniu z kontrolą. Skoryguj gęstość optyczną odczytów i oblicz procentowy udział zahamowania biomasy. Przedstawiono tutaj profil chemiczny biologicznych badań przesiewowych dla ilości diterpenów typu Clerodane i glikozylowanych flawonoidów w trzech odmianach ekstraktów C. sylvestris, a mianowicie sylvestris, intermediate i lingua.Po analizie surowych danych, cztery ekstrakty wykazały pozytywną odpowiedź. Dane chromatograficzne tych czterech ekstraktów wskazują na jednoczesną obecność diterpenów typu Clerodane i flawonoidów glikozylowanych. Ponadto obejmują ten sam biom i różnorodność.Obliczony procent CFU poddanych działaniu środka komórek planktonowych, procent biomasy poddanych działaniu biofilmów oraz procent CFU biofilmu poddanego działaniu środka są pokazane tutaj. Żaden surowy ekstrakt nie wpływał istotnie na usuwanie komórek S. mutans przylegających do błonki ślinowej. Adhezja komórek S. mutans do matrycy glukanu została osłabiona przez trzy surowe ekstrakty.Ponieważ każdy gatunek rośliny wymaga zoptymalizowanych i specyficznych metod analizy chemicznej, najlepsza frakcja rozpuszczalnika i metoda analityczna muszą być wybrane z poprzednich raportów lub określone przez projekt doświadczalny. Bardzo ważne jest przygotowanie preparatów z najbardziej aktywnym ekstraktem i frakcjami surowymi oraz przetestowanie ich na złożonych modelach, aby zapobiec rozwojowi biofilmów i ubytków.

systematic-approach-to-identify-novel-antimicrobial-antibiofilm

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Biofilmy tworzące się na powierzchniach zębów są wysoce złożone i narażone na stałe wrodzone oraz egzogenne wyzwania środowiskowe, które modulują ich architekturę, fizjologię oraz transkryptom. Opracowaliśmy zestaw narzędzi do badania składu, organizacji strukturalnej i ekspresji genów w biofilmach jamy ustnej, które można zaadaptować do innych obszarów badań nad biofilmami.

Analityczny zestaw narzędzi do kompleksowej oceny biochemicznej, strukturalnej i transkrypcyjnej biofilmów jamy ustnej indukowanych przez paciorkowce z grupy mutans

Przedstawiamy protokół analizy strukturalnej i składu naturalnego biofilmu jamy ustnej pobranego z aparatów ortodontycznych z wykorzystaniem hybrydyzacji in situ fluorescencyjnej (FISH) oraz konfokalnej skaningowej mikroskopii laserowej (CLSM). Próbki biofilmu jamy ustnej pobrano z aparatów do rozszerzania podniebienia, zeskrobując z ich powierzchni płatki żywicy akrylowej i przekazując je do obróbki molekularnej.

Analiza biofilmu jamy ustnej w aparatach do rozszerzania podniebienia z wykorzystaniem hybrydyzacji in situ fluorescencyjnej i konfokalnej skaningowej mikroskopii laserowej

Celem tego artykułu jest opisanie użycia systemu mikroprzepływowego do tworzenia wielogatunkowych biofilmów, które zawierają gatunki typowo identyfikowane w ludzkiej naddziąsłowej płytce nazębnej. Podkreślono metody opisu architektury biofilmu, żywotności biofilmu oraz podejścia do zbierania biofilmu do analiz zależnych od kultury lub niezależnych od kultury.

Zastosowanie wysokowydajnego systemu mikroprzepływowego in vitro do tworzenia wielogatunkowych biofilmów w jamie ustnej

Większość infekcji bakteryjnych wytwarza biofilm. Ze względu na środowisko, w którym działają, bakterie związane z biofilmem są często fenotypowo odporne na leki. Nowe cząsteczki przeciwbakteryjne, które zabijają bakterie w biofilmach, mają zatem wysoki priorytet. Opracowujemy test do szybkiego badania przesiewowego pod kątem związków przeciwdrobnoustrojowych, które są skuteczne w zwalczaniu biofilmów.

Celowanie w Staphylococcus aureus związany z biofilmem za pomocą testu wrażliwości na leki opartego na resazurynie

To badanie przedstawia rozwój powtarzalnych metodologii badania inhibitorów biofilmu i ich wpływu na wielokomórkowość Bacillus subtilis.

Metodologie badania biofilmów B. subtilis jako modelu charakteryzującego małocząsteczkowe inhibitory biofilmu

Infekcje biofilmowe wykazują wysoką tolerancję na chemioterapię. Żaden pojedynczy test nie oddaje złożoności biofilmów. Zamiast tego potrzebne są testy uzupełniające. Przedstawiamy platformę przesiewową (opracowaną dla S. aureus), która łączy testy żywotności, biomasy i matrycy biofilmu. Pozwala to na odkrywanie leków przeciwbiofilmowych, w tym ocenę długoterminowych efektów chemioterapeutycznych.

Platforma testów antybiofilmowych dostosowana do eksploracji bibliotek związków naturalnych

Przedstawiamy protokół charakterystyki przeciwdrobnoustrojowej zaawansowanych materiałów. W tym przypadku aktywność przeciwdrobnoustrojowa na powierzchniach materiałów jest mierzona za pomocą dwóch metod, które wzajemnie się uzupełniają: jedna opiera się na teście dyfuzji krążka agarowego, a druga jest standardową procedurą opartą na normie ISO 22196:2007.

Charakterystyka przeciwdrobnoustrojowa zaawansowanych materiałów do zastosowań bioinżynieryjnych

Tutaj prezentujemy protokół oceny tworzenia biofilmu w jamie ustnej na materiałach tytanowych i cyrkonowych dla łączników protez dentystycznych, w tym analizę żywotności komórek bakteryjnych i cech morfologicznych. Do analizy biofilmu w jamie ustnej wykorzystuje się model in situ związany z potężnymi technikami mikroskopowymi.

Tworzenie biofilmu w jamie ustnej na różnych materiałach do implantów dentystycznych

Protokół oparty na 96-dołkowej płytce mikromiareczkowej przy użyciu testu redukcji 2,3-bis(2-metoksy-4-nitro-5-sulfofenylo)-5-karboksyanilid-2H-tetrazolium (XTT) jest opisany tutaj, w celu zbadania wpływu przeciwciał na biofilmy utworzone przez C. tropicalis. Ten protokół in vitro może być wykorzystany do sprawdzenia wpływu potencjalnych nowych związków przeciwgrzybiczych na aktywność metaboliczną komórek gatunku Candida w biofilmach.

Rozpuszczalny test redukcyjny na bazie tetrazoliu do oceny wpływu przeciwciał na biofilmy Candida tropicalis

Pomiary funkcji mięśni przyczyniają się do oceny potencjalnych metod leczenia patologii mięśni, jak również do określenia mechanizmów leżących u podstaw fizjologii tej tkanki.   Zademonstrujemy przygotowanie mięśni prostownika długiego palca i przepony do testów funkcjonalnych. Pokazane zostaną protokoły skurczów izometrycznych i ekscentrycznych, a także różnice w wynikach między mięśniami dystroficznymi, reprezentującymi stan patologiczny, a mięśniami typu dzikiego.

Izometryczna i ekscentryczna ocena generowania sił mięśni szkieletowych wyizolowanych z mysich modeli dystrofii mięśniowych

Poznaj uproszczony protokół identyfikacji związków przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów roślinnych skierowanych przeciw Streptococcus mutans. Metoda ta umożliwia odkrywanie naturalnych kandydatów na środki zapobiegające próchnicy zębów poprzez badania mikrobiologiczne i frakcjonowanie.

Systematyczne podejście do identyfikacji nowych cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zapobiegania próchnicy zębów (Wideo) | JoVE Journal

Systematyczne podejście do identyfikacji nowych cząsteczek przeciwdrobnoustrojowych i przeciwbiofilmowych z ekstraktów i frakcji roślinnych w celu zapobiegania próchnicy zębów

Przeglądaj więcej filmów