Name: Ekstrakcja i sekcja udomowionego mózgu świni (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Poznaj protokół ekstrakcji i sekcji mózgu świni w badaniach neuroanatomicznych. Ta metoda umożliwia precyzyjne usuwanie struktur mózgowych i zachowanie tkanek do dalszej analizy.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować Jimowi Knoblauchowi i Martinowi-Boothowi Hodgesowi z College of Agricultural, Consumer and Environmental Sciences Information Technology and Communication Services za ich doświadczenie w nagrywaniu, nagrywaniu i edycji audio i wideo.

Procedury z udziałem zwierząt zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) na Uniwersytecie Illinois w Urbana-Champaign
UWAGA: Przed eutanazją, świnia została znieczulona poprzez wstrzyknięcie domięśniowe z kombinacją telazol:ketamina:ksylazyna (50,0 mg chlorowodorku tiletaminy plus 50,0 mg chlorowodorku zolazepamu odtworzonego w 2,50 ml ketaminy HCl (100 g/L) i 2,50 ml ksylazyny (100 g/L) i podawana w dawce 0,06 mg/kg m.c.). Po znieczuleniu świnia została poddana eutanazji poprzez dosercowe podanie pentobarbitalu sodu (390 mg/ml podawane w dawce 1 ml/5 kg masy ciała). W przypadku sekcji mózgu zaleca się, aby metoda eutanazji była wybrana w oparciu o pożądaną procedurę analityczną tkanki. Metoda eutanazji powinna powodować jak najmniejsze uszkodzenia mózgu.
1. Ekstrakcja mózgu świni
<ol>
	<li>Po humanitarnej eutanazji odetnij świnię poprzez nacięcie powyżej karku, między pierwszym a drugim kręgiem (odpowiednio atlasem i osią).</li>
	<li>Zamocuj głowę w unieruchomionym imadle stołowym zmodyfikowanym tak, aby zawierało kolce. Przed kontynuowaniem upewnij się, że głowa jest całkowicie unieruchomiona.
	<ol>
		<li>Za pomocą skalpela wykonaj strzałkowe cięcie wzdłuż linii środkowej czaszki, które ciągnie się do tylnej części głowy.</li>
		<li>Wykonaj drugie (poprzeczne) cięcie z tyłu głowy.</li>
		<li>Wykonaj trzecie (poprzeczne) cięcie na tylnym końcu pyska i w linii z oczami. Przetnij skórę jak najdalej od czaszki, aby zapewnić łatwy dostęp do czaszki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Za pomocą piły do kości wykonaj dwa nacięcia od przodu do tyłu po bokach do linii środkowej, rozciągające się od oczu do wierzchołka krzywizny czaszki. Skoś piłę w kierunku linii środkowej i naciąć na tyle głęboko, aby przebić czaszkę.
	<ol>
		<li>Powtórz powyższy proces na prostopadłych bokach, tworząc prostokątne "okno" w czaszce.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Za pomocą haka do mięsa podważ prostokątną część czaszki. Zacznij od umieszczenia haczyka w jednym z rogów sekcji i naciskaj w górę, aby poluzować kawałek czaszki. Należy uważać, aby umieścić hak na mięso tylko na poziomie czaszki, aby zapobiec przypadkowemu przebiciu tkanki mózgowej.</li>
	<li>Jeśli na mózgu pozostaną jakiekolwiek warstwy opon mózgowych, użyj kleszczy i nożyczek (lub alternatywnie skalpela), aby delikatnie usunąć warstwy bez nacinania mózgu.</li>
	<li>Użyj skalpela, aby odciąć mięśnie i tłuszcz w tylnej części głowy, odsłaniając tylną część czaszki.
	<ol>
		<li>Wykonaj dwa poprzeczne nacięcia wzdłuż tylnej części czaszki. Pamiętaj, aby nie ciąć tkanki mózgowej.</li>
		<li>Zabezpiecz głowę, kładąc twardą dłoń na pysku i naciskaj do tyłu, aby oderwać tylną część czaszki, odsłaniając móżdżek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zdejmij głowę z imadła stołowego i połóż na macie chirurgicznej.</li>
	<li>Użyj długiego, smukłego narzędzia, takiego jak koniec skalpela, aby usunąć mózg. Odwróć głowę i delikatnym ruchem nabierającym, aby wydostać mózg z jamy czaszki bez uszkadzania powierzchni mózgu. 
	UWAGA: Konieczne będzie przecięcie nerwów czaszkowych w celu usunięcia mózgu. Rób to delikatnie i nie próbuj wyciągać mózgu na siłę. Mózg wypadnie samoistnie, gdy zostanie prawidłowo i całkowicie odłączony od czaszki i kręgosłupa.</li>
</ol>
2. Sekcja mózgu świni
UWAGA: Pomocne może być użycie atlasu mózgu lub przewodnika po sekcjach włókien14 jako wizualnej reprezentacji podczas procedur preparacji. Upewnij się, że wypreparowane próbki tkanek są odpowiednio przechowywane zgodnie z potrzebami specyficznymi dla projektu po usunięciu każdej próbki (opisane bardziej szczegółowo poniżej). Ponadto należy pamiętać, że na potrzeby tego filmu wszystkie pokazane obszary mózgu zostały wypreparowane z prawej półkuli, ale może się to różnić w zależności od laboratorium w zależności od celów eksperymentalnych.
<ol>
	<li>Aby usunąć pień mózgu (głównie rdzeń), wykonaj koronalne cięcie ogonowe do móżdżku.</li>
	<li>Aby usunąć móżdżek, wykonaj cięcie koronalne z tyłu kory. Wyizoluj pożądane obszary (np. robak, kłaczek itp.) móżdżku z tej próbki. Pamiętaj, aby nie dołączać do tej próbki żadnych części pnia mózgu.</li>
	<li>Oddziel dwie półkule mózgu, wykonując cięcie w połowie strzałki wzdłuż podłużnej szczeliny. Wykonaj to cięcie jako ruch ciągły, aby zapobiec uszkodzeniu kory.</li>
	<li>Aby usunąć śródmózgowie, wypreparuj żądaną ilość tkanki tylko brzusznie do górnej i dolnej części szyjki.</li>
	<li>Aby usunąć hipokamp, umieść koniec skalpela w tylnej części ciała modzelowatego i delikatnie rozwałkuj hipokamp, wykonując ruch "J", zaczynając od tylnej części ciała modzelowatego; cały róg hipokampa ma kształt "fasoli".</li>
	<li>Prążkowie (przede wszystkim pokazane jest jądro ogoniaste) to szaro-biały obszar w paski materii tuż poniżej ciała modzelowatego i przed hipokampem. Skoś skalpel i usuń ten obszar, odsłaniając prążkowaną tkankę po usunięciu.</li>
	<li>Aby usunąć przyśrodkową korę przedczołową, wypreparuj tkankę od zakrętu czołowego do ciała modzelowatego, usuwając najbardziej przyśrodkową część tego odcinka. Prawa kora powinna pozostać po usunięciu przyśrodkowej kory przedczołowej.</li>
	<li>Aby usunąć wzgórze, usuń strukturę przypominającą bańkę w środku środkowej powierzchni mózgu i rostralną do śródmózgowia. Wzgórze ma kulisty kształt i będzie wyglądać na nieco ciemniejsze niż otaczająca tkanka.</li>
</ol>
3. Po sekcji
<ol>
	<li>Po zakończeniu sekcji należy odpowiednio zabezpieczyć próbki tkanek do kolejnych analiz. Pominięcie tego kroku spowoduje znaczną autolizę i degradację w ciągu zaledwie 20 minut.</li>
	<li>Pozostaw każdy obszar mózgu nienaruszony w momencie sekcji, jeśli zostaną przeprowadzone analizy strukturalne, lub zmiel tkanki, aby stworzyć jednorodną próbkę tkanki przed konserwacją. Typowe metody konserwacji próbek tkanek mózgowych obejmują kriokonserwację i utrwalanie chemiczne przy użyciu środków sieciujących15.</li>
	<li>W przypadku standardowych testów laboratoryjnych (np. ekspresji genów lub białek) należy zanurzyć w ciekłym azocie lub roztworach, które stabilizują materiał genetyczny przed długotrwałym przechowywaniem w temperaturze -80 °C, aby zapewnić wygodne i opłacalne metody konserwacji.</li>
	<li>Jeśli utrzymanie struktury tkanki jest priorytetem, należy zachować tkanki mózgowe za pomocą tradycyjnych metod utrwalania (np. przy użyciu utrwalaczy na bazie aldehydu do sieciowania białek), bez lub z perfuzją zwierzęcia lub narządu będącego przedmiotem zainteresowania przed sekcją tkanki.</li>
</ol>

<ol><li>Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Swine in cardiovascular research.</a> Laboratory Animal Science. 36 (4), 348-350 (1986).</li>
<li>Yen, J. Anatomy of the Digestive System and Nutritional Physiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYen%2C+J+%22Biology+of+the+Domestic+Pig%22">Biology of the Domestic Pig</a>. , 31-63 (2001).</li>
<li>Pond, W. G. Of Pigs and People. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPond%2C+WG+%22Swine+Nutrition%22">Swine Nutrition</a>. , 3-24 (2001).</li>
<li>Odle, J., Lin, X., Jacobi, S. K., Kim, S. W., Stahl, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Suckling+Piglet+as+an+Agrimedical+Model+for+the+Study+of+Pediatric+Nutrition+and+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">The Suckling Piglet as an Agrimedical Model for the Study of Pediatric Nutrition and Metabolism.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 419-444 (2014).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+G%C3%B6ttingen+minipig+as+a+model+of+diabetes%2C+with+special+focus+on+type+1+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of the Göttingen minipig as a model of diabetes, with special focus on type 1 diabetes research.</a> ILAR Journal. 45 (3), 303-313 (2004).</li>
<li>Lehmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minipig+in+general+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">The minipig in general toxicology.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 25, 59-62 (1998).</li>
<li>Richer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sacrococcygeal+and+transsacral+epidural+anesthesia+in+the+laboratory+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Radiologic+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Sacrococcygeal and transsacral epidural anesthesia in the laboratory pig.</a> Surgical Radiologic Anatomy. 20, 431-435 (1998).</li>
<li>Lind, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+Modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 31 (5), 728-751 (2007).</li>
<li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 311, 79-83 (1979).</li>
<li>Aurich, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsurgical+training+model+with+nonliving+swine+head.+Alternative+for+neurosurgical+education%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Microsurgical training model with nonliving swine head. Alternative for neurosurgical education.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 29 (6), 405-409 (2014).</li>
<li>Bassi, T., Rohrs, E., Fernandez, K., Ornowska, M., Reynolds, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+excision%3A+An+easier+method+to+harvest+the+pig%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct brain excision: An easier method to harvest the pig's brain.</a> Interdisciplinary Neurosurgery. 14, 37-38 (2018).</li>
<li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+the+pig+CNS+for+histological+analysis%3A+A+manual+for+decapitation%2C+skull+opening%2C+and+brain+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Exposure of the pig CNS for histological analysis: A manual for decapitation, skull opening, and brain removal.</a> Journal of Visualized Experiments. 122, e55511(2017).</li>
<li>Pascalau, R., Szabo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+dissection+and+sectional+study+of+the+major+porcine+cerebral+white+matter+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomia%2C+Histologia%2C+Embryologia%22%5BJournal%5D)">Fibre dissection and sectional study of the major porcine cerebral white matter tracts.</a> Anatomia, Histologia, Embryologia. 46, 378-390 (2017).</li>
<li>McFadden, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+in+brain+banking%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica+Communications%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146(2019).</li>
<li>Félix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1(1999).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Techniki opisane w niniejszym dokumencie zostały opracowane dla świń w wieku około 4 tygodni. Bardzo ważne jest, aby wykonać te kroki natychmiast po humanitarnej eutanazji świni, aby zapewnić zachowanie integralności struktury tkanki mózgowej, zwłaszcza przy rozważaniu kolejnych testów biochemicznych. Pomocne jest korzystanie z atlasu lub przewodników po sekcjach włókien16 podczas pierwszej nauki technik. Zaleca się, aby eksperymentator przećwiczył kilka ekstrakcji i sekcji mózgu przed pobraniem p...

Świnia została dobrze udokumentowana i zaakceptowana jako przekładalny model zwierzęcy do badań nad układami sercowo-naczyniowymi1, układy żołądkowo-jelitowe2, odżywianie3,4, cukrzyca5, toksykologia6, oraz techniki chirurgiczne7. Użycie świni w neurobiologii zaczyna rosnąć, ponieważ wyszukiwanie w PubMed słów kluczowych "model zwierzęcy mózgu świni" daje czterokrotnie więcej wyników z lat 1996-2005 niż w poprzednim okresie 10 lat8, a obecnie nawet więcej wyników. Głównym powodem, dla którego popularność modelu świni rośnie, są jego podobieństwa we wzroście, strukturze i funkcji mózgu w porównaniu z ludźmi. W porównaniu z ludzkim mózgiem, mózg świni wykazuje podobny wzór wirowy, unaczynienie i rozmieszczenie istoty szarej i białej9. Co więcej, mózg świni był wykorzystywany w procedurach neuroobrazowania, wywoływaniu zapisu potencjału oraz w ustalaniu technik neurochirurgicznych8,9. Jednak w przeciwieństwie do innych modeli zwierzęcych, świnie i ludzie doświadczają okołoporodowego wzrostu mózgu, w przeciwieństwie do gwałtownego wzrostu przed lub po urodzeniu. Po urodzeniu mózg człowieka i świni waży odpowiednio około 27 i 25 procent masy mózgu dorosłego osobnika, w porównaniu z mózgiem szczura, który waży 12 procent masy mózgu dorosłego człowieka, a mózgiem małpy rezus 76 procent masy ciała dorosłego osobnika10.
Jednym z powodów, dla których świnia dopiero powoli staje się modelem zwierzęcym dla neurobiologii, jest to, że wielu badaczy nie zna tego zwierzęcia w tym kontekście. Badacze mogą nie zdawać sobie sprawy z jego potencjalnych zastosowań w terenie lub mogą nie znać odpowiednich technik wymaganych do korzystania z takiego modelu. Ponieważ wykorzystanie świni jako modelu biomedycznego i przedklinicznego zyskuje na znaczeniu i jest wykorzystywane w neurobiologii, konieczne jest ustanowienie ustandaryzowanych procedur usuwania tkanek, aby zapewnić dokładne porównanie danych z badań. Chociaż sekcja zwłok i techniki chirurgiczne z udziałem mózgu świni zostały opublikowane gdzie indziej11,12,13, istnieje potrzeba prostych i ustandaryzowanych protokołów pobierania tkanki mózgowej świni, zwłaszcza do wykorzystania w testach biochemicznych. W związku z tym celem tego filmu jest dostarczenie wiedzy niezbędnej do umożliwienia naukowcom przeprowadzenia standaryzowanej ekstrakcji i sekcji mózgu. Ten film ilustruje jedną z właściwych technik usuwania mózgu świni przy jednoczesnym zachowaniu nienaruszonej kory mózgowej i pnia mózgu, a następnie przegląd metod preparowania kilku kluczowych obszarów mózgu.

<table><tbody><tr><td>#22 Ostrza skalpela do uchwytów #4 Ted</td><td>Pella, inc.</td><td>549-4S-22</td><td></td></tr><tr><td>11 1/2" Piła do kości Satterlee</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI13425</td><td></td></tr><tr><td>5 1/2" Łamacz czaszek z końcówką dłuta (hak do mięsa)</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI37636</td><td></td></tr><tr><td>5-calowe imadło warsztatowe Pony</td><td></td><td>29050</td><td></td></tr><tr><td>Nóż rzeźniczy 25cm</td><td>Victorinox</td><td>5.7403.25</td><td>Naostrz przed użyciem</td></tr><tr><td>CM40 Light Duty Drop Kute zaciski C</td><td>Bessey</td><td>00655BC3120</td><td></td></tr><tr><td>Diamentowy nóż do szlifowania Shaper</td><td>Szef kuchni s Choice</td><td>436-3</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt ostrza skalpela ze stali nierdzewnej Shandon #4</td><td>ThermoScientific</td><td>5334</td><td></td></tr><tr><td>Kleszczyki do tkanek</td><td>Henry Schein</td><td>101-5132</td><td></td></tr><tr><td>Winylowa podkładka preparcyjna</td><td>Carolina</td><td>629006</td><td></td></tr></tbody></table>

ekstrakcja i sekcja udomowionego mózgu świni

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Użycie świni jako przedklinicznego i możliwego do przetłumaczenia modelu zwierzęcego zostało dobrze udokumentowane i zaakceptowane przez pola badawcze badające układy sercowo-naczyniowe, żołądkowo-jelitowe i żywienie, a świnia jest coraz częściej używana jako duży model zwierzęcy w neurobiologii. Co więcej, świnia jest akceptowanym modelem do badania rozwoju neurologicznego, ponieważ wykazuje wzorce wzrostu i rozwoju mózgu podobne do tego, co występuje u ludzi. Jako rzadziej spotykany model zwierzęcy w neurobiologii, zabiegi chirurgiczne i preparacyjne na świniach mogą nie być tak znane lub dobrze praktykowane wśród badaczy. Dlatego ustandaryzowany protokół wizualny szczegółowo opisujący spójne metody ekstrakcji i sekcji może okazać się cenny dla badaczy pracujących ze świnią. Poniższy film przedstawia technikę usuwania mózgu świni przy jednoczesnym zachowaniu nienaruszonej kory i pnia mózgu oraz omawia metody preparowania kilku powszechnie badanych obszarów mózgu, w tym pnia mózgu, móżdżku, śródmózgowia, hipokampa, prążkowia, wzgórza i przyśrodkowej kory przedczołowej. Celem tego filmu jest dostarczenie naukowcom narzędzi i wiedzy niezbędnej do konsekwentnego przeprowadzania ekstrakcji i sekcji mózgu czterotygodniowej świni.

W tej sekcji opisano przykłady wyników uzyskanych po prawidłowym wyjęciu i sekcji mózgu 4-tygodniowego prosięcia. Rycina 1 przedstawia kształt poszczególnych obszarów mózgu, który może służyć jako pomoc podczas sekcji. Część pnia mózgu może pozostać w czaszce po usunięciu móżdżku (Rycina 1B). Można ją usunąć podczas izolowania pożądanego regionu móżdżku. Tabela 1 przedstawia średnią masę (średnia ± błąd standardowy średniej) dla każdego z wysekc...

Ten protokół szczegółowo opisuje technikę usuwania mózgu świni w całości i sekcji kilku obszarów mózgu, które są powszechnie badane w neurobiologii.

Ekstrakcja i sekcja udomowionego mózgu świni

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

Poniższy film jest demonstracją usuwania i preparowania mózgu świni. Pomocne może być zapoznanie się z atlasem lub przewodnikiem po preparowaniu włókien przed lub w trakcie zabiegu. Duży nóż rzeźniczy najlepiej nadaje się do dekapitacji, ponieważ pozwoli na jedno czyste cięcie między atlasem a osią.Upewnij się, że nóż jest ostry przed rozpoczęciem nowego tematu. Do usunięcia czaszki używa się haka do mięsa. Długie, smukłe narzędzie, takie jak rękojeść skalpela, służy do usuwania mózgu z czaszki.Imadło ze lub występami jest niezbędne do zabezpieczenia głowy podczas cięcia czaszki. Gdy zwierzę zostanie humanitarnie uśpione zgodnie z ustalonymi protokołami, postępuj w następujący sposób. Wycięcie tuż nad karkiem, między ramionami a czubkiem głowy.Zabezpiecz świnię i odsuń lata z drogi podczas dekapitacji. Użyj skalpela, aby wykonać nacięcia, aby oddzielić skórę od czaszki. Wykonaj początkowe nacięcie na środku czaszki, które ciągnie się do tylnej części głowy.Drugie poprzeczne cięcie powinno znajdować się z tyłu głowy. Trzecie cięcie, również poprzeczne, rozpocznie się z tyłu tego pyska i będzie w linii z oczami, aby zapewnić łatwy dostęp do czaszki. Użyj piły do kości, aby wykonać cięcia z przodu i z tyłu z boku do linii środkowej.Zacznij od lekkiego zaznaczenia obszaru cięcia piłą, a następnie rozpocznij piłowanie, aż napotkasz mniejszy opór ze strony czaszki. Podczas cięcia lekko skośnie piłę w kierunku linii środkowej, ponieważ zapewni to cięcie najcieńszej części czaszki. Jeśli nacięcie znajduje się zbyt blisko ucha, trudno będzie usunąć czaszkę.Ale jeśli nacięcie jest zbyt blisko linii środkowej, otwór będzie zbyt mały, aby usunąć mózg. Powtórz ten proces na prostopadłych bokach, aby utworzyć prostokątne okno. Upewnij się, że każdy róg okna jest całkowicie przecięty, tak aby część czaszki mogła zostać usunięta, aby odsłonić mózg pod spodem.Następnie użyj haka do mięsa lub zakrzywionego narzędzia, aby podważyć prostokątną część czaszki. Zacznij od umieszczenia haczyka w jednym z rogów i wywarcia nacisku, aby zdjąć jarmułkę. W niektórych przypadkach opony mózgowe pozostaną w mózgu.A jeśli tak się stanie, ostrożnie użyj kleszczy i nożyczek lub alternatywnie skalpela, aby usunąć opony mózgowe bez przecinania mózgu. Dla porównania, mózg powinien wyglądać następująco przed i po usunięciu warstw opon mózgowych. Przetnij mięśnie i tłuszcz z tyłu głowy, aby przygotować się do odsłonięcia móżdżku.Aby odsłonić móżdżek, wykonaj dwa poprzeczne nacięcia wzdłuż tylnej części czaszki. Podczas wykonywania tych cięć należy uważać, aby nie przeciąć odsłoniętego mózgu. Po wykonaniu nacięć połóż jedną rękę na pysku, a drugą na czaszce i naciskaj do tyłu, aby odciągnąć tylną część czaszki od reszty głowy.Jak podkreślono tutaj, móżdżek jest schowany za pozostałymi warstwami opon mózgowych. Użyj końca narzędzia, takiego jak rękojeść skalpela, aby ostrożnie oddzielić mózg od czaszki, uważając, aby nie uszkodzić mózgu w tym procesie. Lekko odwróć głowę, aby pomóc wydostać mózg z czaszki, i użyj delikatnego ruchu zgarniania, aby przeciąć nerwy czaszkowe i usunąć mózg.Proces ten wymaga cierpliwości i praktyki, aby wyeliminować wszystkie pozostałe połączenia między mózgiem a jamą czaszkową. Odwrócenie głowy świni może być pomocne podczas tego procesu. Kontynuuj wykonywanie zamaszystych ruchów narzędziem, aby uwolnić mózg.Jak podkreślono tutaj, móżdżek i pień mózgu mogą być trudne do usunięcia, ponieważ są schowane w jamie czaszki. Zachowaj ostrożność podczas usuwania móżdżku i rdzenia lub pnia mózgu. Mózg powinien wypaść samoistnie, gdy jest całkowicie oderwany od czaszki.Jama czaszki powinna wyglądać tak, jak pokazano po usunięciu mózgu. Przygotowując się do sekcji obszaru mózgu, upewnij się, że wstępnie oznakowane pojemniki są zorganizowane i znajdują się w bliskiej odległości. Przykładowe metody konserwacji obejmują błyskawiczne zamrażanie próbek w ciekłym azocie lub zanurzanie ich w roztworze konserwującym.Po wydobyciu z jamy czaszki cały mózg powinien wyglądać następująco. Aby usunąć rdzeń lub pień mózgu, wykonaj koronalne cięcie ogonowe do móżdżku. Aby usunąć móżdżek, wykonaj cięcie koronalne z tyłu kory.Aby oddzielić półkule, wykonaj cięcie śródstrzałkowe wzdłuż podłużnej szczeliny, wykonując ciągły ruch, aby zapobiec uszkodzeniom. Na potrzeby tego filmu pokażemy tylko sekcje z prawej półkuli. Aby usunąć śródmózgowie, poszukaj górnych i dolnych wzgórków, które są dwoma guzkami w tylnej części mózgu.Usuń pożądaną ilość tkanki mózgowej tylko brzusznie do tych regionów. Aby usunąć hipokamp, umieść rękojeść skalpela na tylnej stronie ciała modzelowatego i delikatnie rozwiń hipokamp. Cały róg hipokampa będzie miał kształt fasoli.Hipokamp powinien łatwo się rozwijać, gdy zgarniasz palec ruchem j, zaczynając od tylnego ciała modzelowatego. Aby usunąć prążkowie lub jądro ogoniaste, usuń przednią część ciała modzelowatego. Jądro ogoniaste to prążkowany lub prążkowany obszar w kolorze szarym i białym, znajdujący się tuż pod ciałem modzelowatym.Za pomocą rękojeści skalpela ustawionej pod kątem usuń ten obszar, który obejmuje głównie jądro ogoniaste. Po usunięciu tej tkanki powinieneś być w stanie zobaczyć prążkowany wzór w miejscu, w którym znajdował się obszar mózgu. Aby usunąć przyśrodkową korę przedczołową, wypreparowano tkankę z zakrętu czołowego do ciała modzelowatego, biorąc najbardziej przyśrodkową część tego odcinka.Prawa kora powinna pozostać po usunięciu przyśrodkowej kory przedczołowej. Aby usunąć wzgórze, usuń strukturę przypominającą bańkę pośrodku powierzchni środkowej strzałkowej. Wzgórze ma wyraźny kulisty kształt i będzie wyglądać na nieco ciemniejsze niż otaczająca tkanka.Po zakończeniu sekcji próbki tkanek powinny być odpowiednio zabezpieczone w oparciu o określone wyniki eksperymentalne. Pokazano tutaj wypreparowane obszary mózgu, w tym względny rozmiar i kształt oczekiwany podczas pracy z młodymi świniami. Po opanowaniu tych technik cała procedura ekstrakcji i sekcji mózgu zajmie mniej niż 15 minut na osobę badaną i przyniesie spójne wyniki.

extraction-and-dissection-of-the-domesticated-pig-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Opisujemy szczurzy model zespołu stresu pourazowego (PTSD), który wykazuje trwałe zmiany w funkcji neuroendokrynnej oraz opóźnioną, długotrwałą i nasiloną reakcję lękową, charakterystyczną dla pacjentów z PTSD. Opisany tutaj model zwierzęcy oraz metody są przydatne do korelacji biomarkerów w jądrach mózgu, które mają charakter mechanistyczny, ale nie mogą być mierzone u pacjentów, z biomarkerami w obwodowych leukocytach, które podlegają pomiarowi.

Biomarkery w modelu zwierzęcym służące do ujawnienia korelatów neuronalnych, hematologicznych i behawioralnych PTSD

Ten film demonstruje metodę przygotowania organotypowych kultur wycinków hipokampa z mózgu szczeniaka szczura. Przedstawia etapy związane z sekcją hipokampa, krojeniem i warunkami hodowli wymaganymi do promowania żywotności i wzrostu komórek w wycinkach hipokampa, ostatecznie generując organotypowe kultury warstwowe.

Przygotowanie organtypowych kultur plasterkowych z hipokampa szczeniaka szczura

Ten film pokazuje proces powstawania neurosfery i jej ekspansji z tkanki hipokampa. Nerwowe komórki macierzyste i progenitorowe z postnatalnej tkanki zakrętu zębatego myszy proliferują i tworzą pierwotne neurosfery, które są następnie ponownie zasiewane, tworząc neurosfery wtórne.

Tworzenie i rozszerzanie neurosfer z tkanki hipokampa

Wykorzystanie modelu prosiąt do badania neurotoksyczności rozwojowej wywołanej znieczuleniem (AIDN): podejście neurologiczne translacyjne

Celem tego artykułu i filmu instruktażowego jest opisanie jak odsłonić i usunąć pośmiertny mózg świni i przysadkę mózgową w stanie nienaruszonym, nadającym się do późniejszej analizy makroskopowej i histologicznej.

Ekspozycja OUN świni do analizy histologicznej: podręcznik dekapitacji, otwierania czaszki i usuwania mózgu

Ten artykuł opisuje szczegółową metodologię uzyskiwania spłaszczonych przekrojów stycznych z kory mózgowej ssaków i wizualizacji modułów korowych za pomocą metod histochemicznych i immunohistochemicznych.

Wizualizacja modułów korowych w spłaszczonych korach ssaków

Przedstawiamy praktyczny, krok po kroku, szybki protokół usuwania mózgu myszy i preparowania dyskretnych obszarów z świeżej tkanki mózgowej. Pozyskiwanie regionów mózgu do analizy molekularnej stało się rutyną w wielu laboratoriach neurobiologicznych. Te obszary mózgu są natychmiast zamrażane w celu uzyskania wysokiej jakości danych transkryptomicznych do analizy na poziomie systemu.

Mikrodysekcja mózgu myszy na funkcjonalnie i anatomicznie różne regiony

Ten artykuł przedstawia krok po kroku protokół bezpośredniego wszczepienia kaniuli w cisterna magna świń.<br...

Bezpośrednia implantacja kaniuli w Cisterna magna świń

Tutaj prezentujemy metodę długoterminowej oceny wydajności i bezpieczeństwa miękkich matryc elektrod podtwardówkowych w modelu minipig, opisując metodę i narzędzia chirurgiczne, pooperacyjny rezonans magnetyczny, elektrofizjologię kory słuchowej, właściwości elektrochemiczne implantu oraz immunochemię pośmiertną.

Implantacja matrycy podtwardówkowej miękkiej elektrokortykografii (ECoG) i długotrwała rejestracja kory mózgowej u świnek miniaturowych

Ten protokół opisuje wykonanie kraniektomii przy użyciu szybkoobrotowej wiertarki pneumatycznej na 3-miesięcznej duńskiej świni rasy Landrace. Dostęp odbywa się przez kość czołową i odsłania brzuszną oponę twardą i leżące poniżej półkule mózgowe. Procedura ta pozwala na dostęp do dużej części mózgu świni.

Dostęp do mózgu świni za pomocą szybkoobrotowej wiertarki pneumatycznej Kraniektomia

Opisano innowacyjną metodę budowy rozszerzalnych macierzy mózgu do cięcia koronalnych lub strzałkowych plasterków do stosowania u noworodkowych prośiąt. To przystępne cenowo podejście wykorzystuje akrylowe płytki rzeźbione szablonami z agarozowego żelu do formowania mózgu, stosuje się do wielu gatunków i pozwala na rozszerzanie się w celu rozwoju mózgu.

Wytwarzanie rozszerzalnej matrycy mózgu, którą można dostosować na różne etapy rozwoju

Poznaj protokół ekstrakcji i sekcji mózgu świni w badaniach neuroanatomicznych. Ta metoda umożliwia precyzyjne usuwanie struktur mózgowych i zachowanie tkanek do dalszej analizy.

Ekstrakcja i sekcja udomowionego mózgu świni

Przeglądaj więcej filmów