9 czerwca 2021
Ten artykuł przedstawia częściowy protokół heterotopowego przeszczepu płata kostno-skórnego u szczurów i jego potencjalne wyniki w obserwacji średnioterminowej.
Przedstawiamy wiarygodny i powtarzalny model chirurgiczny heterotopowego przeszczepu kończyn tylnych u szczurów. Technika ta jest idealna do krótkoterminowych badań nad zachowaniem lub odrzuceniem immunologicznym w VCA. Opis krok po kroku pozwoli kursantom szybko opanować operację.
Na początek wykonaj nacięcie obwodowe na skórze powyżej kostki w dystalnej jednej trzeciej nogi. Zeszkieletuj i kauteryzuj tętnicę odpiszczelową i końcową gałąź tętnicy podkolanowej za pomocą kleszczy dwubiegunowych. Kauteryzuj i przetnij mięśnie brzuchatego łydki, płaszczkowatego, piszczelowego przedniego i dwugłowego uda, aż kość piszczelowa zostanie odsłonięta.
Wykonaj 2,5-centymetrowe nacięcie w prawym zagięciu pachwinowym i wypreparuj pachwinową poduszeczkę tłuszczową. Użyj zwijacza haczyka na ryby, aby chwycić więzadło pachwinowe. Przytrzymaj pachwinową poduszkę tłuszczową dystalnie za pomocą kleszczy zaciskowych i wsuń poduszeczkę tłuszczową, aby odsłonić naczynia udowe.
Wypreparuj naczynia udowe, zindywidualizuj gałęzie Murphy'ego i podwiązaj za pomocą nylonowych opasek 8/0. Heparynizacja szczura dawcy poprzez wstrzyknięcie heparyny do żyły grzbietowej prącia za pomocą igły o rozmiarze 27,5. Zakończ nacięcie skóry wokół biodra.
Użyj kleszczy dwubiegunowych, aby kauteryzować mięśnie dwugłowe uda i pośladkowe powierzchowne, a następnie kauteryzuj i przetnij nerw kulszowy na połowie długości kości udowej. Odsłoń kość udową proksymalnie na poziomie tylnego grzebienia kości udowej i podwiąż naczynia udowe nylonowymi opaskami na poziomie więzadła pachwinowego. Wykonaj arteriotomię na tętnicy udowej tuż poniżej więzadła i rozszerz się, aby wprowadzić angiocewnik o rozmiarze 24.
Kauteryzuj i przetnij pozostały mięsień pod szypułką, aby odsłonić przednią stronę kości udowej. Użyj noża do kości, aby przeciąć kość piszczelową proksymalnie i przeciąć kość udową tak dystalnie, jak to możliwe. Przepłukać częściową kończynę tylną dwoma mililitrami soli fizjologicznej heparyny, aby uzyskać wyraźny odpływ żylny.
Umieść tylną kończynę na lodzie w sterylnej gazie do momentu transferu mikronaczyniowego. Rozetnij pachwinową poduszeczkę tłuszczową i odchyl pachwinową poduszkę tłuszczową dystalnie, aby odsłonić naczynia udowe. Użyj haczyka, aby cofnąć więzadło pachwinowe i kleszczy zaciskowych, aby przytrzymać pachwinową poduszeczkę tłuszczową dystalnie.
Wypreparuj naczynia udowe, zindywidualizuj gałęzie Murphy'ego i podwiązaj za pomocą nylonowych opasek, jak pokazano. Podwiązać oba naczynia powyżej naczyń nadbrzusza za pomocą nylonowych opasek. Umieść zaciski aproksymatora proksymalnie, rozszerz soczewkę naczynia i spłucz solą fizjologiczną heparyny.
Wykonaj nacięcie na lewym boku nad biodrem i utwórz kieszeń podskórną z podskórnym tunelem do zgięcia pachwinowego. Umieść bliższą część częściowej kończyny i pachwinową poduszkę tłuszczową przez tunel podskórny w celu transferu mikronaczyniowego. Wykonaj zespolenia żylne i tętnicze za pomocą szwów nylonowych.
Usuń oba zaciski aproksymatora i obserwuj rewaskularyzację kończyny. Wykonaj próbę udojową na obu naczyniach, aby ocenić drożność każdego zespolenia. Wykonaj podłużne nacięcie skóry po przyśrodkowej stronie przeszczepionej kończyny i wprowadź przeszczep.
Usunąć nadmiar skóry z przeszczepu i zamknąć ranę oddzielnymi szwami i szwem ciągłym za pomocą wchłanialnych szwów 4/0. Zszyć ze sobą pachwinowe poduszeczki tłuszczowe przeszczepionej kończyny i biorcy za pomocą dwóch oddzielnych szwów wchłanialnych i zamknąć bruzdę pachwinową po ostatniej kontroli zespolenia mikronaczyniowego. Ewolucję heterotopowego modelu kończyn tylnych monitorowano do końca badania.
Odrost włosów obserwowano w pierwszym tygodniu po operacji, a retrakcja skórna pojawiła się po dwóch tygodniach. Niepowodzenie allotransplantacji unaczynionej kompozytu może wystąpić w pierwszym tygodniu po operacji z powodu zakrzepicy mikronaczyniowej. Zakrzepica żylna była przyczyną wczesnej eutanazji w 20% przypadków, z których wszystkie miały miejsce przed piątą dą po operacji.
Skóra wydawała się niebieska i z każdym dniem stawała się ciemniejsza. Samookaleczenie jest poważnym problemem w przypadku przeszczepów niewrażliwych i często występuje między drugim a siódmym dniem po operacji. Jeśli ogranicza się do mniej niż jednej trzeciej powierzchni przeszczepu i dotyczy tylko skóry, chirurgiczne oczyszczenie i zszycie za pomocą szwów niewchłanialnych można omówić z lekarzem weterynarii.
Zapobieganie samookaleczaniu polega na używaniu e-obroży przyszytej do szyi do siódmego dnia po operacji i oczyszczaniu krwi lub strupów z ran chirurgicznych zwierzęcia. Ciężka autofagia wielu warstw przeszczepu prowadzi do eutanazji zwierzęcia. Torbiele skóry pojawiły się po 14 dniu pooperacyjnym, czasami z martwiczym centrum skóry przed przetoką.
Bardzo ważne jest, aby upewnić się, że umieszczenie przeszczepu nie przeszkodzi zwierzęciu w poruszaniu się i że szypułka nie jest załamana ani ciasna podczas wkłuwania przeszczepu. Nasz zespół przeprowadził badania konserwatorskie w pobranych kończynach przed przeszczepem. Oceniono wpływ różnych czasów statycznego przechowywania w chłodni, a także różnych protokołów perfuzji kończyn.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Niniejsza praca przedstawia wiarygodny model chirurgiczny heterotopowej transplantacji kończyny tylnej u szczurów. Technika ta została opracowana na potrzeby krótkoterminowych badań nad konserwacją lub odrzuceniem immunologicznym w alotransplantacji złożonych tkanek unaczynionych (VCA).
Niniejszy model stanowi powtarzalną platformę do oceny konserwacji unaczynionego przeszczepu złożonego oraz mechanizmów odrzucania immunologicznego w systemie gryzoni. Umożliwia on wczesne etapy ograniczania ryzyka mechanistycznego w biologii transplantacji poprzez kontrolowaną ocenę żywotności przeszczepu, zakrzepicy oraz odpowiedzi gospodarza. Niezawodność modelu i niska śmiertelność ułatwiają iteracyjne testowanie strategii konserwacji oraz podejść immunomodulacyjnych w warunkach badawczych.
Model ten wpisuje się w kontinuum od odkryć do badań przedklinicznych w zakresie opracowywania unaczynionych złożonych allograftów, w szczególności w obszarze nauki o konserwacji tkanek oraz profilowania wczesnej odpowiedzi immunologicznej.