Name: Skuteczna metoda inokulacji Phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-16T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Poznaj skuteczną metodę inokulacji Phytophthora capsici na czarnym pieprzu poprzez nakłucie podstawy łodygi. Ta technika poprawia stabilność tradycyjnych metod i wspiera badania nad interakcjami roślina-patogen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była finansowana przez Narodowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin (2020YFD1001200), Chiński System Badań Rolniczych (CARS-11), specjalny fundusz badawczy Platformy Innowacji dla Akademików Prowincji Hainan (YSPTZX202154), Fundację Nauk Przyrodniczych Prowincji Hainan w Chinach (321RC652) oraz Chińską Fundację Nauk Przyrodniczych (nr 31601626).

1. Przygotowanie sadzonek czarnego pieprzu do infekcji
<ol>
	<li>Weź pięciowęzłowe cięcie o długości około 40 cm i średnicy 0,5 cm ze zdrowej i silnie rosnącej ortotropowej gałęzi czarnego pieprzu za pomocą zdezynfekowanego noża do przycinania lub sekatora. Przycinaj dolne trzy węzły gałęzi plagiotropowych, pozostawiając dwa górne węzły z nienaruszonymi około 10 liśćmi.</li>
	<li>Przygotuj podłoże ukorzeniające zawierające glebę i obornik zwierzęcy (krowie lub owcze) w stosunku 1:1. Podłoże ukorzeniające należy sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 20 minut.</li>
	<li>Umieść sadzonki w podłożu ukorzeniającym pod kątem około 50°, przy czym trzeci węzeł dotyka powierzchni podłoża, a pączek pachowy w tym węźle powyżej podłoża. 
	UWAGA: Użyta tutaj torba ma następujące wymiary: wysokość 40-60 cm, średnica 25-30 cm.</li>
	<li>Zalej korzenie rośliny 10-20 l wody. Umieść sadzonki w szklarni z 90% cieniem w temperaturze 25-30 °C w celu ukorzenienia i wzrostu.</li>
</ol>
2. Rozmnażanie Phytophthora capsici (P. capsici)
UWAGA: Zapas kultur Phytophthora capsici jest przechowywany w laboratorium ochrony roślin Instytutu Badań nad Przyprawami i Napojami, Chińskiej Akademii Tropikalnych Nauk Rolniczych7.
<ol>
	<li>Bulwy ziemniaka rozsmarować i oczyścić pod bieżącą wodą z kranu, a następnie pokroić 200 g ziemniaków w kostkę o długości 1 cm3. Umieść część kostek w zlewce zawierającej 800 ml podwójnie destylowanej wody (ddH2O) i gotuj przez 20 minut.</li>
	<li>Przefiltruj bulion przez podwójną gazę za pomocą filtracji grawitacyjnej. Przygotować agar z dekstrozą ziemniaczaną (PDA), dodając 20 g dekstrozy i 15 g agaru do filtratu i uzupełniając objętość do 1 lddH2O. Mieszaninę należy sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 20 min8.</li>
	<li>Wlej 20 ml wysterylizowanego PDA w postaci płynnej do okrągłej szalki Petriego o średnicy 9 cm wewnątrz okapu z laminarnym przepływem powietrza. Pozostaw na noc płyty PDA z otwartymi pokrywkami wewnątrz okapu z laminarnym przepływem powietrza, aby zapobiec kondensacji.</li>
	<li>Użyj pętli inokulacyjnej, aby pobrać grzybnię z bulionu Phytophthora capsici z wnętrza probówki. Umieścić inokulum stroną grzybni stykającą się z PDA na szalce Petriego.</li>
</ol>
3. Zakażenie czarnym pieprzem
<ol>
	<li>Inkubacja
	<ol>
		<li>Zidentyfikuj obszar 5 cm nad powierzchnią podłoża i w pobliżu korzeni na łodydze do zaszczepienia.</li>
		<li>Wydrążyć krążek grzybni o średnicy 0,5 cm na rosnącym brzegu kultury Phytophthora capsici na PDA na szalce Petriego za pomocą świdra korkowego.</li>
		<li>Uszkodzić łodygę za pomocą igły strzykawkowej i zrobić trzy otwory w trójkątny wzór w wybranym obszarze inokulacji. Przykryj każdy otwór krążkiem grzybni. Umieść otwory blisko siebie, aby upewnić się, że zraniony obszar jest całkowicie pokryty krążkami grzybni.</li>
		<li>Przykryj krążki grzybni wysterylizowanymi, zwilżonymi wacikami, aby zapobiec wysuszeniu. Przywiąż podkładkę do trzpienia za pomocą paska polietylenu, aby utrzymać pozycję krążków zaszczepiających. 
		UWAGA: Po 8 godzinach od inokulacji zaszczepione otwory zmieniły kolor na, a zmiana powiększyła się w miarę upływu czasu. Liście żółkły i opadały, a zaszczepiona roślina obumarła 7-10 dni po zaszczepieniu. W roślinach kontrolnych nie rozwinęły się zmiany chorobowe. Większość genów uległa ekspresji inaczej po inokulacji Phytophthora capsici w porównaniu z grupą kontrolną. Analiza histopatologiczna zakażonych tkanek wykazała, że Phytophthora capsici skolonizowała ksylem.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pobrać próbki interesujących materiałów roślinnych i przechowywać je w temperaturze -80 °C w ciekłym azocie do wykorzystania w kolejnych badaniach. 
	UWAGA: Ciekły azot, plastikowe torby, markery, nożyce do gałęzi i inne materiały zostały przygotowane przed eksperymentami.</li>
	<li>Po pobraniu próbek z określonych materiałów roślinnych do ich wykorzystania, należy przelać w autoklawie wszystkie pozostałe materiały roślinne, resztki kultury i pożywki hodowlanej Phytophthora capsici oraz wszystkie narzędzia i sprzęt laboratoryjny używane w tej pracy związanej z zaszczepianiem.</li>
</ol>

<ol><li>Gordo, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+sequencing+of+black+pepper+root+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput sequencing of black pepper root transcriptome.</a> BMC Plant Biology. 12 (1), (2012).</li>
<li>Leonian, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+and+fruit+blight+of+Peppers+caused+by+Phytophthora+capsici+sp.+Nov%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Stem and fruit blight of Peppers caused by Phytophthora capsici sp. Nov.</a> Phytopathology. 12 (9), 401-408 (1922).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+maize+resistance+by+its+neighbors%3A+Activating+1%2C4-benzoxazine-3-ones+synthesis+and+defense+gene+expression+to+alleviate+leaf+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Priming maize resistance by its neighbors: Activating 1,4-benzoxazine-3-ones synthesis and defense gene expression to alleviate leaf disease.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 830(2015).</li>
<li>Fonseca, C. E. L., Vianda, D. R., Hansen, J. L., Pell, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+among+forage+quality+traits%2C+vigor%2C+and+disease+resistance+in+alfalfa%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Science%22%5BJournal%5D)">Associations among forage quality traits, vigor, and disease resistance in alfalfa.</a> Crop Science. 39 (5), 1271-1276 (1999).</li>
<li>Altier, N. A., Thies, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+resistance+to+Pythium+seedling+disease+in+Alfalfa+using+a+culture+plate+method%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification of resistance to Pythium seedling disease in Alfalfa using a culture plate method.</a> Plant Disease. 79 (4), 341-345 (1995).</li>
<li>Pratt, R. G., Rowe, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+simplified+leaf+inoculation+procedures+for+identification+of+quantitative+resistance+to+Sclerotinia+trifoliorum+in+Alfalfa+seedling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Evaluation of simplified leaf inoculation procedures for identification of quantitative resistance to Sclerotinia trifoliorum in Alfalfa seedling.</a> Plant Disease. 82 (10), 1161-1164 (1998).</li>
<li>Hao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+transcriptome+sequencing+of+black+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+an+analysis+of+genes+involved+in+phenylpropanoid+metabolism+in+response+to+Phytophthora+capsici%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">De novo transcriptome sequencing of black pepper (Piper nigrum L.) and an analysis of genes involved in phenylpropanoid metabolism in response to Phytophthora capsici.</a> BMC Genomics. 17 (1), 1-14 (2016).</li>
<li>Dong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+inoculation+and+classification+of+maize+ear+rot+caused+by+Fusarium+verticillioides%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Field inoculation and classification of maize ear rot caused by Fusarium verticillioides.</a> Bio-protocol. 8 (23), 3099(2018).</li>
<li>English, J. T., Laday, M., Bakonyi, J., Schoelz, J. E., Érsek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+molecular+characterization+of+species+hybrids+derived+from+induced+fusion+of+zoospores+of+Phytophthora+capsica+and+Phytophthora+nicotianae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycological+Research%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and molecular characterization of species hybrids derived from induced fusion of zoospores of Phytophthora capsica and Phytophthora nicotianae.</a> Mycological Research. 103 (8), 1003-1008 (1999).</li>
<li>Chatterjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+activity+of+some+phenolic+constituents+from+green+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+fresh+nutmeg+mace+%28Myristica+fragrans%29%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Antioxidant activity of some phenolic constituents from green pepper (Piper nigrum L.) and fresh nutmeg mace (Myristica fragrans).</a> Food Chemistry. 101 (2), 515-523 (2007).</li>
<li>Pfender, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+sporangia+and+release+of+zoospores+by+Phytophthora+megasperma+in+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Production of sporangia and release of zoospores by Phytophthora megasperma in soil.</a> Phytopathology. 67 (5), 657-663 (1977).</li>
<li>Nagila, A., Schutte, B. J., Sanogo, S., Idowu, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chile+pepper+sensitivity+to+mustard+seed+meal+applied+after+crop+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Chile pepper sensitivity to mustard seed meal applied after crop emergence.</a> HortScience. 56 (2), 1-7 (2021).</li>
<li>Lamour, K. H., Stam, R., Jupe, J., Huitema, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oomycete+broad-host-range+pathogen+Phytophthora+capsica%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The oomycete broad-host-range pathogen Phytophthora capsica.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 329-337 (2012).</li>
<li>Hardham, A., Gubler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+of+attachment+of+zoospores+of+a+root+pathogen+and+pre-alignment+of+the+emerging+germ+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International+Reports%22%5BJournal%5D)">Polarity of attachment of zoospores of a root pathogen and pre-alignment of the emerging germ tube.</a> Cell Biology International Reports. 14 (11), 947-956 (1990).</li>
</ol>

W tym badaniu główka podstawy została nakłuta w celu uszkodzenia i zapewnienia skutecznego systemu inokulacji w roślinie czarnego pieprzu. Granulki grzybni następnie przykryły trzy otwory, aby zatrzymać wilgoć i umożliwić patogenowi dobre zainfekowanie rośliny. Po zaszczepieniu liście żółknęły i opadały, a zaszczepione rośliny obumarły. W roślinach kontrolnych nie rozwinęły się zmiany chorobowe. Większość genów uległa ekspresji inaczej po inokulacji Phytophthora capsici w porównaniu z grupą kontrolną. Choroby gr...

Pieprz (Piper nigrum L.) to drzewiaste pnącze i jedna z najważniejszych roślin przyprawowych. Jest znany jako "Król Przypraw"1 i jest uprawiany w ponad 40 krajach i regionach w Azji, Afryce i Ameryce Łacińskiej. Zgnilizna korzeni Phytophthora jest najbardziej niszczycielską chorobą czarnego pieprzu i jest wywoływana przez lęgniowce Phytophthora capsici. Patogen ten infekuje również dyniowate, bakłażany, papryczki chili i pomidory2,3. W przypadku czarnego pieprzu cała uprawa może czasami zostać zdziesiątkowana przez tę chorobę. Ekspansja obszarów nasadzeń papryki jest ograniczona w wyniku niedostępności odmian odpornych, co znacznie utrudniło rozwój chińskiego przemysłu pieprzu czarnego. Skuteczna inokulacja i precyzyjny system pobierania próbek Phytophthora capsici na roślinach pieprzu czarnego są niezbędne do zbadania tej interakcji między rośliną a patogenem.
Identyfikacja i badanie przesiewowe odporności zasobów plazmy zarodkowej jest podstawowym wymogiem dla badań nad patogennością patogenu oraz hodowli i wykorzystania odpornych odmian. Szeroko stosowanym podejściem jest stosowanie różnych metod identyfikacji w oparciu o gatunki roślin i grupy patogenów. Obecne metody identyfikacji obejmują identyfikację populacji, identyfikację osobniczą, identyfikację narządów, identyfikację tkanek, identyfikację komórek, identyfikację biochemiczną i identyfikację molekularną, które zostały opracowane w ostatnich latach4,5. W tych dziedzinach odniesiono sukces, ale jest też wiele problemów. Bez względu na to, która metoda zostanie wybrana, podstawowe wymagania dotyczące identyfikacji odporności roślin są spójne, w tym jasne cele, wiarygodne wyniki oraz metody, które są proste, szybkie i łatwe do standaryzacji. Zasada ta musi być również przestrzegana przy określaniu odporności na pieprz.
W naturalnych warunkach polowych, na identyfikację odporności na choroby może mieć wpływ wiele czynników środowiskowych. W związku z tym zaproponowano, aby oderwane liście i nawadniane korzenie były używane w laboratorium w celu identyfikacji odporności na choroby. Młode liście zdrowych roślin zaszczepiono in vitro w laboratorium, a obszar chorych liści zmierzono poprzez zaszczepienie patogenu w celu zidentyfikowania odporności roślin na choroby6. Jednak inokulacja liści in vitro może być stosowana tylko do ogólnej identyfikacji oporności, a nie do badań interakcji molekularnych. Mimo to status odporności na chorobę często występuje w nawadnianej inokulacji korzeni, co powoduje niepewność w dalszym badaniu hodowli molekularnej pod kątem odporności na choroby. Dlatego niezbędne są szybkie i proste metody wykrywania w pomieszczeniach. Niniejsze badanie ma na celu opracowanie metody identyfikacji oporności w laboratorium.

<table><tbody><tr><td>Proszek agarowy</td><td>Solarbio</td><td>A8190</td><td></td></tr><tr><td>Czysta ławka</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dekstroza</td><td>Xilong Scientific 15700501</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piec do sterylizacji w wysokiej temperaturze</td> Talerze na płytki <td>Petriego Zaelway</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>BS-90-D</td><td></td></tr></tbody></table>

skuteczna metoda inokulacji phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu

An Effective Inoculation Method for Phytophthora capsici on Black Pepper Plants

Piper nigrum L. (pieprz) to typowa drzewiasta odmiana winorośli, która jest gospodarczo ważną uprawą przypraw na całym świecie. Na produkcję czarnego pieprzu znaczący wpływ ma choroba zgnilizny korzeni wywoływana przez Phytophthora capsici, która poważnie wpłynęła na rozwój branży jako problem "punktu przewężenia". Jednak molekularny genetyczny mechanizm oporności czarnego pieprzu jest niejasny, co prowadzi do powolnego postępu w opracowywaniu nowych odmian czarnego pieprzu. Skuteczny system inokulacji i precyzyjnego pobierania próbek Phytophthora capsici na roślinach pieprzu czarnego jest niezbędny do zbadania tej interakcji między roślinami a patogenami. Głównym celem tego badania jest zademonstrowanie szczegółowej metodologii, w której podstawowa główka czarnego pieprzu jest inokulowana Phytophthora capsici, przy jednoczesnym zapewnieniu odniesienia do inokulacji drzewiastych roślin winorośli. Podstawowa główka rośliny czarnego pieprzu została nakłuta, aby ją uszkodzić, a granulki grzybni pokryły trzy otwory, aby zatrzymać wilgoć, aby patogen mógł dobrze zainfekować roślinę. Ta metoda zapewnia lepszy sposób rozwiązania niestabilności, która jest spowodowana tradycyjnymi metodami inokulacji, w tym zraszaniem gleby lub zanurzaniem korzeni. Stanowi również obiecujący sposób badania sposobu działania między roślinami a innymi patogenami roślin przenoszonymi przez glebę w rolniczej hodowli precyzyjnej.

Rysunek 1 przedstawia objawy na liściach pieprzu czarnego po inokulacji P. capsici. Rysunek 2 przedstawia objawy na łodygach pieprzu czarnego po inokulacji P. capsici. Patogen zainfekował pieprz czarny w dolnej części łodygi; stopniowo pojawiały się objawy obejmujące żółknięcie liści, więdnięcie, brązowienie ksylemu oraz czernienie naczyń. Rysunek 3 przedstawia większość genów wykazujących różną ekspresję po inokul...

Nakłuwanie podstawowej główki rośliny czarnego pieprzu to krótka i oszczędzająca czas metoda jej uszkodzenia. Tutaj przedstawiliśmy szczegółowe instrukcje wraz z filmem dotyczącym infekowania roślin czarnego pieprzu.

Skuteczna metoda inokulacji Phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu

Piper nigrum L. (black pepper) is a typical woody vine that is an economically important spice crop across the world. Black pepper production is ...

Poniższy eksperyment przedstawia skuteczną metodę inokulacji i precyzyjnego pobierania próbek dla Phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu. pieprz, który jest typową drzewiastą winoroślą, jest ważną gospodarczo uprawą przypraw. Na produkcję czarnego pieprzu największy wpływ ma choroba zgnilizny korzeni wywoływana przez Phytophthora capsici, która poważnie wpłynęła na rozwój przemysłowy.Skuteczna inokulacja i precyzyjny system pobierania próbek Phytophthora capsici na roślinach pieprzu czarnego jest ważny dla badania interakcji między roślinami a patogenami. Głównym celem tego badania jest zademonstrowanie szczegółowej metodologii, w której podstawowa główka czarnego pieprzu została zaszczepiona Phytophthora capsici, a także dostarczenie odniesienia do inokulacji drzewiastych roślin winorośli. Ta metoda zapewnia lepszy sposób na rozwiązanie niestabilności spowodowanej tradycyjną metodą inokulacji, taką jak zraszanie gleby lub zanurzanie korzeni.Procedury eksperymentalne. Sadzonki czarnej papryki sadzi się w kontrolowanym środowisku przez dwa miesiące. Subkulturuj Phytophthora capsici i wysiaduj przez pięć dni w temperaturze poniżej 25 stopni Celsjusza.W dniu zakażenia bloki agaru przykrywa się trzema otworami wbitymi przez igłę. I na koniec scharakteryzuj objawy chorobowe. Przygotowanie roślin do cięcia czarnego pieprzu do infekcji.Wytnij gałęzie ortotropowe na 40 centymetrów długości i 0,5 centymetra średnicy, a także usuń plagiotropowe gałęzie w dolnych węzłach za pomocą sterylnego noża i sekatora. Ścięta gałąź powinna zawierać dwa węzły i pięć liści u góry, aby zmniejszyć utratę wody. Przytnij górną część do płaskiego cięcia, a dolną część do ukośnego cięcia.Podłoże ukorzeniające do cięcia czarnego pieprzu przygotowywano w postaci mieszanki zawierającej glebę i obornik zwierzęcy, taki jak krowie, owcze i tak dalej, w stosunku jeden do jednego. Gleba była sterylizowana w autoklawie w temperaturze około 121 stopni Celsjusza przez 20 minut. Użyj worków hodowlanych o średnicy 30 centymetrów i wysokości 50 centymetrów, aby umieścić podłoża ukorzeniające.Przygotuj nachylenie 50 stopni, aby wypełnić podłoża. Sadzonki umieszczono pod kątem 50 stopni, z więcej niż trzema węzłami poniżej podłoża. Zostały one pokryte podłożem ukorzeniającym, a część pomocnicza powinna być przyklejona do podłoża.Na koniec sadzonki zostały w pełni zinfiltrowane. Do wstawienia cięcia przyjęto cięcie proste. Przygotowanie kultur Phytophthora capsici.Wybieraj ziemniaki wolne od chorób. Ziemniaki oczyścić i pokroić w małe kwadraty. Umieść 200 gramów ziemniaków w 800 mililitrach podwójnie destylowanej wody i gotuj przez 20 minut.Następnie przefiltruj mieszaninę. Dodaj 20 gramów dekstrozy. Napełnij mieszaninę do jednego litra wodą podwójnie destylowaną.Dodać 15 gramów proszku agarowego do filtratu. Dozować pożywkę do kolb i uszczelnić za pomocą Parafilmu. Autoklawować pożywkę w temperaturze 121 stopni Celsjusza przez 20 minut.Obliczoną pożywkę z agaru ziemniaczanego dozowano do szalek Petriego i schładzano na sterylnej ławce w celu zestalenia. Igła do zaszczepiania została zdezynfekowana przez podgrzanie za pomocą lampy spalającej alkohol i chłodzenie przez kilka sekund. Pobrać małe kawałki próbek grzybów za pomocą sterylnego zaszczepiania i umieścić na PDA.Grzybnia pokrywa około trzech czwartych płytki. Kultury są gotowe do dalszych eksperymentów. Infekcja czarnej papryki.Za miejsce inkubacji uznano położenie w odległości pięciu centymetrów od powierzchni podłoża. Miejsce inkubacji nie powinno znajdować się daleko od korzenia, mając na celu uniknięcie wydłużenia czasu infekcji. Szczegółowe kroki nakłuwania są następujące.Osad grzybni Phytophthora capsici zebrano za pomocą świdra korkowego. Warto zauważyć, że nowo opracowane granulki grzybni na krawędzi płytki zostały preferencyjnie wybrane ze względu na ich wyższą aktywność zakaźną. Wysterylizuj łodygę przy użyciu 75% etanolu i weź trzy trójkątne pory w wysterylizowanej pozycji za pomocą igły do zaszczepiania.Trzy trójkątne pory w miejscu inokulacji zostały zablokowane za pomocą igły do zaszczepiania, a granulki grzybni zostały pokryte trzema porami. Po ośmiu godzinach pory ogólnie stały się czarne. Dylatacja została zwiększona wraz z wydłużeniem inkubacji.Po siedmiu do dziesięciu dniach liście żółkną i opadają, aż pieprz obumrze. Prezentowane wyniki są następujące. Po infekcji na roślinach czarnego pieprzu pojawiają się objawy, w tym żółknięcie i więdnięcie liści, brązowienie ksylemu i czernienie naczyń.Większość genów uległa ekspresji inaczej po inokulacji Phytophthora capsici w porównaniu z grupą kontrolną. Analiza histopatologiczna zakażonych tkanek wykazała obecność Phytophthora capsici skolonizowanej w ksylemie. Konkluzja. W tym badaniu zastosowano nakłuwanie głowy podstawy, aby ją uszkodzić, aby zapewnić skuteczne szczepienie, oraz system podwajania w czarnym pieprzu.Tymczasem protokół ten stanowi również bardziej efektywny sposób na zapewnienie odniesienia do inkubacji za pomocą - Nasza metoda może dać więcej czasu i działać krócej. Protokół ten zapewnia lepsze wyniki, co umożliwia silną interakcję między jedną rośliną a patogenem przenoszonym przez glebę. Co jest widoczne i wygodne do wykrycia dynamicznego procesu między roślinami a ich patogenami.W naszej metodzie zaczynamy nakłuwać podstawową główkę rośliny czarnego pieprzu, aby je uszkodziła. Następnie uszkodzony obszar jest bezpośrednio pokryty Phytophthora capsici i utrzymuje wilgoć. Aby patogen mógł zainfekować roślinę.Zapewniamy również obiecujący sposób badania sposobu działania między roślinami a innymi patogenami roślin przenoszonymi przez glebę w rolniczej hodowli precyzyjnej.

an-effective-inoculation-method-for-phytophthora-capsici-on-black

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetyka

Źródło: Rufián, J. S., et.al. Analiza ekspresji genów strzykawki pseudomonas w tkance roślinnej na poziomie pojedynczych komórek. J. Vis. Exp. (2022)Ten film demonstruje metodę infiltracji próżniowej polegającą na wprowadzeniu patogenu bakteryjnego do liści rośliny Arabidopsis . Podejście to wykorzystuje przygotowaną zawiesinę bakteryjną oraz impulsy próżniowe, aby umożliwić równomierne przenikanie przez szparki szparkowe, co skutkuje kontrolowanym zakażeniem liści.

Szczepienie patogena bakteryjnego do liści Arabidopsis poprzez infiltrację próżniową

Ten film demonstruje test hamowania wzrostu siewek w roślinie Arabidopsis thaliana. Określa się wpływ zwiększonego stężenia elicytora peptydów immunologicznych na wzrost siewek.

Pomiar indukowanego przez układ odpornościowy zahamowania wzrostu siewek

Ten protokół demonstruje dwie metody inokulacji w celu wprowadzenia entomopatogenu grzyba Beauveria bassiana jako endofitu do fasoli zwyczajnej (Phaseolus vulgaris), w ramach przygotowań do kolejnych ocen endofitycznej kontroli biologicznej.

Ustanawianie entomopatogenów grzybów jako endofitów: w kierunku endofitycznej kontroli biologicznej

Opisano użycie metody iniekcji igłą do inokulacji roślin kukurydzy i teosinte biotroficznym patogenem Ustilago maydis.  Metoda inokulacji igłowej ułatwia kontrolowane dostarczanie patogenu grzybowego między liście rośliny, gdzie patogen dostaje się do rośliny poprzez tworzenie appresorii. Metoda ta jest bardzo skuteczna, umożliwiając powtarzalne inokulacje U. maydis.

Szybka i skuteczna metoda oceny patogenności Ustilago maydis na liniach kukurydzy i teosinte

Agroinfiltracja i agroinfekcja PVX to rutynowe testy funkcjonalne dla przejściowej ektopowej ekspresji genów w roślinach. Metody te są skutecznymi testami w strategiach efektoromicznych (szybkie odkrywanie genów oporności i wirulencji) i mają kluczowe znaczenie dla nowoczesnych badań w zakresie molekularnej patologii roślin. Spełniają one zapotrzebowanie na solidną, wysokowydajną analizę funkcjonalną w zakładach.

Agroinfiltracja i agroinfekcja PVX u ziemniaka i Nicotiana benthamiana

Kwantyfikacja wzrostu patogenów jest potężnym narzędziem do charakteryzowania różnych odpowiedzi immunologicznych Arabidopsis thaliana (dalej: Arabidopsis). Opisana tutaj metoda przedstawia zoptymalizowany test infiltracji strzykawki w celu ilościowego określenia Pseudomonas syringae pv. Maculicola powiedział: Wzrost ES4326 w dorosłych liściach Arabidopsis.

Test infiltracji bakteryjnych liści w celu dokładnej charakterystyki reakcji obronnych roślin przy użyciu patosystemu Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae

Tutaj prezentujemy protokół do testowania zjadliwości roślin z patogenem roślinnym Magnaporthe grisea. Raport ten przyczyni się do zakrojonych na szeroką skalę badań przesiewowych patotypów izolatów grzybów i posłuży jako doskonały punkt wyjścia do zrozumienia mechanizmów oporności roślin podczas hodowli molekularnej.

Test infekcji roślin: inokulacja w sprayu i za pośrednictwem ran patogenem roślinnym Magnaporthe Grisea

Przedstawiamy protokół budowy prostego systemu dystrybucji zarodników, składającego się z pudełka do zaszczepiania z siatką ~50 μm i przezroczystej komory z tworzywa sztucznego. Można to wykorzystać do równomiernego zaszczepienia roślin zarodnikami mączniaka prawdziwego, umożliwiając w ten sposób dokładną i odtwarzalną ocenę fenotypów chorobowych badanych roślin.

Łatwa i elastyczna metoda inokulacji do dokładnej oceny fenotypów infekcji mączniakiem prawdziwym Arabidopsis i innych roślin

Ten protokół przedstawia szczegółowe podsumowanie strategii inokulacji korzeni roślin mikrobami przenoszonymi przez glebę. Na przykładzie grzybów Verticillium longisporum i Verticillium dahliae opisano trzy różne systemy infekcji korzeni. Przedstawiono potencjalne zastosowania i możliwe dalsze analizy, a także omówiono zalety i wady każdego systemu.

Strategie inokulacji w celu infekowania korzeni roślin mikroorganizmami przenoszonymi przez glebę

Ten protokół przedstawia zoptymalizowany system testów biologicznych z oderwanymi liśćmi do oceny skuteczności grzybów entomopatogenicznych (EPF) przeciwko mszycy musztardowej (Lipaphis erysimi (Kalt.)), owadowi partenogenetycznemu. Metoda ta przedstawia w zarysie proces gromadzenia danych podczas eksperymentów na szalce Petriego, umożliwiając naukowcom konsekwentne mierzenie zjadliwości EPF wobec mszyc musztardowych i innych owadów partenogenetycznych.

Ocena wpływu mszyc grzybów entomopatogenicznych na owada partenogenetycznego, mszycę musztardową, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Protokół testu biologicznego z oderwanymi liśćmi został opracowany dla masowej hodowli wciornastków chili przy użyciu zmodyfikowanej metody oderwanych liści w szklanych pojemnikach zawierających agar, zapewniając wysoką przeżywalność i zsynchronizowany rozwój. System ten umożliwia skuteczne badania przesiewowe zjadliwości grzybów entomopatogenicznych przeciwko larwom w drugimstadium rozwojowym i zapewnia niezawodne dostarczanie wciornastków do ocen laboratoryjnych, szklarniowych i terenowych.

Ustanowienie systemu hodowli wciornastków chili (Scirtothrips dorsalis hood) do badań przesiewowych zjadliwości grzybów entomopatogenicznych

Poznaj skuteczną metodę inokulacji Phytophthora capsici na czarnym pieprzu poprzez nakłucie podstawy łodygi. Ta technika poprawia stabilność tradycyjnych metod i wspiera badania nad interakcjami roślina-patogen.

Skuteczna metoda inokulacji Phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu

Przeglądaj więcej filmów