Skuteczna metoda inokulacji Phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu

Poniższy eksperyment przedstawia skuteczną metodę inokulacji i precyzyjnego pobierania próbek dla Phytophthora capsici na roślinach czarnego pieprzu. pieprz, który jest typową drzewiastą winoroślą, jest ważną gospodarczo uprawą przypraw. Na produkcję czarnego pieprzu największy wpływ ma choroba zgnilizny korzeni wywoływana przez Phytophthora capsici, która poważnie wpłynęła na rozwój przemysłowy.

Skuteczna inokulacja i precyzyjny system pobierania próbek Phytophthora capsici na roślinach pieprzu czarnego jest ważny dla badania interakcji między roślinami a patogenami. Głównym celem tego badania jest zademonstrowanie szczegółowej metodologii, w której podstawowa główka czarnego pieprzu została zaszczepiona Phytophthora capsici, a także dostarczenie odniesienia do inokulacji drzewiastych roślin winorośli. Ta metoda zapewnia lepszy sposób na rozwiązanie niestabilności spowodowanej tradycyjną metodą inokulacji, taką jak zraszanie gleby lub zanurzanie korzeni.

Procedury eksperymentalne. Sadzonki czarnej papryki sadzi się w kontrolowanym środowisku przez dwa miesiące. Subkulturuj Phytophthora capsici i wysiaduj przez pięć dni w temperaturze poniżej 25 stopni Celsjusza.

W dniu zakażenia bloki agaru przykrywa się trzema otworami wbitymi przez igłę. I na koniec scharakteryzuj objawy chorobowe. Przygotowanie roślin do cięcia czarnego pieprzu do infekcji.

Wytnij gałęzie ortotropowe na 40 centymetrów długości i 0,5 centymetra średnicy, a także usuń plagiotropowe gałęzie w dolnych węzłach za pomocą sterylnego noża i sekatora. Ścięta gałąź powinna zawierać dwa węzły i pięć liści u góry, aby zmniejszyć utratę wody. Przytnij górną część do płaskiego cięcia, a dolną część do ukośnego cięcia.

Podłoże ukorzeniające do cięcia czarnego pieprzu przygotowywano w postaci mieszanki zawierającej glebę i obornik zwierzęcy, taki jak krowie, owcze i tak dalej, w stosunku jeden do jednego. Gleba była sterylizowana w autoklawie w temperaturze około 121 stopni Celsjusza przez 20 minut. Użyj worków hodowlanych o średnicy 30 centymetrów i wysokości 50 centymetrów, aby umieścić podłoża ukorzeniające.

Przygotuj nachylenie 50 stopni, aby wypełnić podłoża. Sadzonki umieszczono pod kątem 50 stopni, z więcej niż trzema węzłami poniżej podłoża. Zostały one pokryte podłożem ukorzeniającym, a część pomocnicza powinna być przyklejona do podłoża.

Na koniec sadzonki zostały w pełni zinfiltrowane. Do wstawienia cięcia przyjęto cięcie proste. Przygotowanie kultur Phytophthora capsici.

Wybieraj ziemniaki wolne od chorób. Ziemniaki oczyścić i pokroić w małe kwadraty. Umieść 200 gramów ziemniaków w 800 mililitrach podwójnie destylowanej wody i gotuj przez 20 minut.

Następnie przefiltruj mieszaninę. Dodaj 20 gramów dekstrozy. Napełnij mieszaninę do jednego litra wodą podwójnie destylowaną.

Dodać 15 gramów proszku agarowego do filtratu. Dozować pożywkę do kolb i uszczelnić za pomocą Parafilmu. Autoklawować pożywkę w temperaturze 121 stopni Celsjusza przez 20 minut.

Obliczoną pożywkę z agaru ziemniaczanego dozowano do szalek Petriego i schładzano na sterylnej ławce w celu zestalenia. Igła do zaszczepiania została zdezynfekowana przez podgrzanie za pomocą lampy spalającej alkohol i chłodzenie przez kilka sekund. Pobrać małe kawałki próbek grzybów za pomocą sterylnego zaszczepiania i umieścić na PDA.

Grzybnia pokrywa około trzech czwartych płytki. Kultury są gotowe do dalszych eksperymentów. Infekcja czarnej papryki.

Za miejsce inkubacji uznano położenie w odległości pięciu centymetrów od powierzchni podłoża. Miejsce inkubacji nie powinno znajdować się daleko od korzenia, mając na celu uniknięcie wydłużenia czasu infekcji. Szczegółowe kroki nakłuwania są następujące.

Osad grzybni Phytophthora capsici zebrano za pomocą świdra korkowego. Warto zauważyć, że nowo opracowane granulki grzybni na krawędzi płytki zostały preferencyjnie wybrane ze względu na ich wyższą aktywność zakaźną. Wysterylizuj łodygę przy użyciu 75% etanolu i weź trzy trójkątne pory w wysterylizowanej pozycji za pomocą igły do zaszczepiania.

Trzy trójkątne pory w miejscu inokulacji zostały zablokowane za pomocą igły do zaszczepiania, a granulki grzybni zostały pokryte trzema porami. Po ośmiu godzinach pory ogólnie stały się czarne. Dylatacja została zwiększona wraz z wydłużeniem inkubacji.

Po siedmiu do dziesięciu dniach liście żółkną i opadają, aż pieprz obumrze. Prezentowane wyniki są następujące. Po infekcji na roślinach czarnego pieprzu pojawiają się objawy, w tym żółknięcie i więdnięcie liści, brązowienie ksylemu i czernienie naczyń.

Większość genów uległa ekspresji inaczej po inokulacji Phytophthora capsici w porównaniu z grupą kontrolną. Analiza histopatologiczna zakażonych tkanek wykazała obecność Phytophthora capsici skolonizowanej w ksylemie. Konkluzja. W tym badaniu zastosowano nakłuwanie głowy podstawy, aby ją uszkodzić, aby zapewnić skuteczne szczepienie, oraz system podwajania w czarnym pieprzu.

Tymczasem protokół ten stanowi również bardziej efektywny sposób na zapewnienie odniesienia do inkubacji za pomocą - Nasza metoda może dać więcej czasu i działać krócej. Protokół ten zapewnia lepsze wyniki, co umożliwia silną interakcję między jedną rośliną a patogenem przenoszonym przez glebę. Co jest widoczne i wygodne do wykrycia dynamicznego procesu między roślinami a ich patogenami.

W naszej metodzie zaczynamy nakłuwać podstawową główkę rośliny czarnego pieprzu, aby je uszkodziła. Następnie uszkodzony obszar jest bezpośrednio pokryty Phytophthora capsici i utrzymuje wilgoć. Aby patogen mógł zainfekować roślinę.

Zapewniamy również obiecujący sposób badania sposobu działania między roślinami a innymi patogenami roślin przenoszonymi przez glebę w rolniczej hodowli precyzyjnej.