Name: Ocena lokomotoryczna indukowanego przez 6-hydroksydopaminę modelu choroby Parkinsona u dorosłych ryb danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Poznaj metodę oceny zaburzeń ruchowych u dorosłych ryb danio pręgowanego po iniekcji 6-OHDA do podwzgórza. Technika ta wykorzystuje test otwartego zbiornika i analizę wideo do badania neuroregeneracji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Ministerstwo Szkolnictwa Wyższego Malezji w ramach Programu Grantów na Badania Podstawowe [600-IRMI/FRGS 5/3 (033/2019)].

Niniejsze badanie zostało zatwierdzone przez Komitet ds. Badań i Etyki Zwierząt (CARE), Universiti Technologi MARA (UiTM) [Numer referencyjny: UiTM CARE 346/2021, z dnia 7 maja 2021 r.].
UWAGA: Wykorzystano opublikowane protokoły22,25,26 dotyczące standardowej hodowli i utrzymania dorosłego modelu zebrafish PD z uszkodzeniem indukowanym przez 6-OHDA. Eksperymenty przeprowadzono na dorosłych samcach zebrafish (Danio rerio) w wieku powyżej pięciu miesięcy o ustandaryzowanej długości 3,2-3,7 cm.
1. Hodowla rybek zebrafish i przygotowania do mikroiniekcji przed-ICV
<ol>
	<li>Utrzymuj ryby w napowietrzanym zbiorniku z wodą w kontrolowanej temperaturze 28 ± 1.0 °C. Do hodowli i utrzymania rybek zebrafish przez cały czas trwania eksperymentu używaj wody destylowanej mineralizowanej komercyjną solą morską (1 g/L)27.</li>
	<li>Przechowuj maksymalnie 25 ryb w zbiorniku 45 L lub jedną rybę na 1.8 L wody i poddaj je cyklowi fotoperiodycznemu obejmującemu 14 h światła i 10 h ciemności. Karm ryby co najmniej dwa razy dziennie granulatami z dodatkiem liofilizowanych dżdżownic.</li>
	<li>Przygotuj skoncentrowany roztwór zapasowy metansulfonianu trikainy (MS-222), rozpuszczając 2.5 g MS-222 i 5 g wodorowęglanu sodu w 250 mL wody destylowanej. Rozcieńcz 2 mL roztworu zapasowego, aby przygotować 200 mL roboczego roztworu anestetycznego.</li>
	<li>Przygotuj 99.96 mM 6-OHDA, najpierw rozpuszczając 0.2 mg kwasu askorbinowego w 1 mL 0.9% w/v sterylnego filtrowanego NaCl. Przefiltruj roztwór przez filtr 0.2 mikrona przed dodaniem do niego 25 mg 6-OHDA w formie proszku. Przygotowuj roztwór na świeżo przed każdym wstrzyknięciem i przechowuj go w ciemności w temperaturze 4 °C. 
	UWAGA: Podczas pracy z odczynnikami należy używać odpowiedniego sprzętu ochrony osobistej (tj. rękawiczek, fartucha laboratoryjnego i maseczki ochronnej) oraz stosować zasady dobrej praktyki laboratoryjnej. Wszelkie czynności z odczynnikami powinny być wykonywane w komorze bezpieczeństwa biologicznego.</li>
</ol>
2. Znieczulenie i wstrzyknięcie do komór mózgowej (ICV) u rybek zebrafish
<ol>
	<li>Głodzić ryby przez 24 h, aby uniknąć wymiotów podczas znieczulenia. Znieczulić rybę poprzez zanurzenie jej w pojemniku zawierającym 0,01% w/v roztwór MS-222 przez około 1 min lub do momentu ustania wszelkich widocznych ruchów mięśniowych.</li>
	<li>Umieścić znieczuloną rybę na nasączonej wodą gąbce pod stereomikroskopem i regularnie zwilżać rybę.</li>
	<li>Zidentyfikować miejsce wstrzyknięcia na podstawie przecięcia szwu czołowego (metopic suture, MS), szwu wieńcowego (coronal suture, CS) i szwu strzałkowego (sagittal suture, SS), który łączy kości czołowe i ciemieniowe czaszki mózgu danio przebrany.</li>
	<li>Wyonać w czaszce mały otwór o powierzchni 1,0 mm2 za pomocą ostrej igły 27 G, kierując się konkretną pozycją anatomiczną na czaszce danio przebrany (Ryc. 1A,B).</li>
	<li>Obniżyć mikrokapilarny wtryskiwacz pod kątem 60°, aż osiągnie głębokość 1 200 µm od dachu czaszki danio przebrany (Ryc. 1C). Nacisnąć limit Z, aby utrwalić pozycję.</li>
	<li>Ustawić początkowe ciśnienie wtrysku na 4000 hPa i ciśnienie kompensacyjne na 10 hPa. Ustawić czas trwania wtrysku na 0,3 s. Zmniejszać intensywność wtrysku przy każdym kolejnym podaniu.</li>
	<li>Wstrzyknąć 0,5 µL neurotoksyny 6-OHDA o stężeniu 99,96 mM (lub 0,9% w/v soli fizjologicznej dla grupy kontrolnej sham) i pozostawić mikrokapilarę na 20 s. Przez cały proces wstrzykiwania nadal zwilżać rybę wodą destylowaną, aby zapobiec wysychaniu.</li>
	<li>Powoli wyciągnąć mikrokapilarę i reanimować rybę pod bieżącą wodą destylowaną. Umieścić rybę w izolowanym zbiorniku rekonwalescencyjnym i usunąć wszelkie czynniki rozpraszające, które mogłyby potencjalnie zakłócić proces powrotu do zdrowia.</li>
	<li>Przepłukać mikrokapilarę przed kolejnym wtryskiem, aby usunąć zatory i upewnić się, że intensywność wtrysku jest wystarczająca, by podać pożądaną objętość 0,5 µL 6-OHDA.</li>
</ol>
<img alt="Schemat techniki mikrokapilarnej dla badań neuronalnych u owadów; przekroje anatomiczne, kąty wprowadzania." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63355/63355fig01v2.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Miejsce iniekcji neurotoksyny 6-OHDA. (A) Punkt wprowadzenia mikrokapilary jest wyznaczony przez przecięcie się szwu czołowego (MS), szwu wieńcowego (CS) oraz szwu strzałkowego (SS), które łączy przednią i ciemieniową część czaszki mózgu danio prążkowanego (widok z góry). (B) Schematyczny rysunek (widok z góry) czaszki i mózgu danio prążkowanego przedstawia mikrokapilarę, która jest opuszczana bezpośrednio nad habenulą (Hab), oraz punkt jej wprowadzenia na przecięciu półkul. (C) Schematyczny rysunek (przekrój strzałkowy) mózgu danio prążkowanego przedstawia kąt iniekcji i głębokość penetracji. Czarna kropka reprezentuje miejsce uszkodzenia znajdujące się nad obszarem docelowym, brzuszna część podwzgłowia. Skróty: 6-OHDA: 6-hydroksydopamina, CS: szew wieńcowy, Dn: podwzgłowia, Hab: habenula, Hyp: podwzgórze, MS: szew czołowy, OB: opuszka węchowa, POA: obszar przedwzrokowy, PT: guzek tylny, SS: szew strzałkowy, Tec: dach mózgowia, Tel: koniec przedni. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63355/63355fig01largev2.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
3. Ocena funkcji lokomocyjnych
UWAGA: Ocena lokomocyjna danio przebranych (n = sześć / grupa; grupa kontrolna vs grupa po uszkodzeniu) była przeprowadzana indywidualnie za pomocą testu otwartego zbiornika zgodnie z uznanymi protokołami28,29 w trzecim dniu oraz 30. dniu po uszkodzeniu 6-OHDA.
<ol>
	<li>Rejestracja wideo
	<ol>
		<li>Umieścić zbiornik eksperymentalny (długość 20 cm, szerokość 11,5 cm, wysokość 13 cm) z ściankami oklejonymi białym papierem na podwyższonej platformie (Rysunek 2A).</li>
		<li>Oświetlić zbiornik od dołu za pomocą źródła światła. Napełnić zbiornik wodą destylowaną (wypełnienie w 80%-90%) i utrzymać temperaturę na poziomie 28 ± 1,0 °C. Temperaturę mierzyć termometrem i regulować za pomocą komercyjnego grzałki akwariowej.</li>
		<li>Po minimum 2 min aklimatyzacji zarejestrować zachowanie pływackie ryb z rzutu w górę w płaszczyźnie dwuwymiarowej (2D) areny eksperymentalnej za pomocą kamery wideo przez 5 min (Rysunek 2B). Aby uniknąć niespójności w zachowaniu pływackim między pierwszą a ostatnią serią nagrań, czas aklimatyzacji nie powinien przekroczyć 10 min30.</li>
		<li>Przeanalizować materiały wideo przy użyciu oprogramowania do śledzenia wideo z protokołem open-tank w celu pozyskania danych o przebytej odległości (cm) i średniej prędkości (cm/s) każdego osobnika.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Schemat ustawienia eksperymentalnego do badania ruchu ryb: kamera, zbiornik, platforma z źródłem światła." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63355/63355fig02.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Ustawienie eksperymentalne testu w otwartym zbiorniku do oceny zachowania lokomocyjnego danio pręgowanych. (A) Zbiornik eksperymentalny (widok z przodu) umieszczony jest na podwyższonej platformie, która jest oświetlona od dołu. Cztery ściany zbiornika są obklejone białym papierem, a nagrania są rejestrowane osiowo. Temperaturę mierzy się za pomocą termometru i reguluje na poziomie 28 ± 1.0 °C przy użyciu komercyjnego grzałki akwariowej. (B) Zrzut ekranu (widok z góry) z nagrania wideo zarejestrowanego za pomocą opisanego układu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63355/63355fig02large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<ol start="2">
	<li>Analiza danych
	<ol>
		<li>Kliknij dwukrotnie ikonę, aby otworzyć oprogramowanie do śledzenia wideo. Kliknij kartę File i wybierz Create New Empty Experiment. Pozwoli to użytkownikowi na dostosowanie parametrów eksperymentu zgodnie z celami badania.</li>
		<li>Kliknij kartę Protocol, wybierz Video Sources, a następnie kliknij Add New Video Source. Kliknij dostępną listę rozwijaną i wybierz opcję Video File. Spowoduje to wyświetlenie okna przeglądania plików, z którego można wybrać interesujące nagrania wideo.</li>
		<li>Kliknij podkartę Apparatus i wybierz ikonę Rectangular, aby skonfigurować aparaturę. Przeciągnij prostokątną ikonę tak, aby pokryła całą arenę eksperymentalną. Odpowiednio ustaw pasek skali i wprowadź wartość liczbową pomiaru skali użytego w sekcji długości linijki. W niniejszym eksperymencie do testu otwartego zbiornika użyto skali 10 mm.</li>
		<li>Ustaw kolor zwierząt, wybierając opcję The Animals are Darker than The Apparatus Background. Pozostałe dostępne opcje w sekcji Tracking pozostaw zgodnie z domyślnymi ustawieniami.</li>
		<li>W podkarcie Zones kliknij wcześniej narysowany aparat. Strefa ta jest ustawiona jako strefa standardowa, której położenie jest takie samo dla wszystkich testów.</li>
		<li>W sekcjach harmonogramu testów i raportu danych testowych wybierz następujące opcje: Test Duration, Total Distance Traveled oraz Average Speed. Pozostałe dostępne testy na liście są opcjonalne i zależą od zainteresowań badawczych naukowca.</li>
		<li>W karcie Experiment przypisz zwierzęta do ich grup testowych, wpisując nazwę grupy w sekcji Name oraz liczbę zwierząt w grupie w sekcji Number of Animals.</li>
		<li>Przejdź do karty Tests, aby uruchomić eksperyment. Kliknij ikonę Start Test i poczekaj, aż wszystkie filmy zostaną przeanalizowane.</li>
		<li>W karcie Results kliknij ikonę View the Report, aby wyświetlić dane lokomocyjne w formie raportu tekstowego.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

W ramach prowadzonych prac udało się przeprowadzić ocenę lokomotoryczną znanego modelu PD opartego na dorosłym daniu pręgowanym, indukowanym przez 6-OHDA. Cały eksperyment składał się z trzech głównych etapów: preparatów do mikroiniekcji przed ICV, mikroiniekcji ICV u danio pręgowanego oraz oceny lokomotorycznej. Aby zapewnić zdrowy powrót do zdrowia dorosłych ryb danio pręgowanego po procedurze mikroiniekcji ICV i dobre wyniki eksperymentalne, w niniejszym badaniu zalecono pewne dobre praktyki dla każdego etapu.
<p ...

Choroba Parkinsona (PD), choroba charakteryzująca się sztywnością mięśni, drżeniem spoczynkowym i bradykinezją, jest najszybciej rozwijającą się chorobą neurologiczną na świecie1,2. Ryzyko i częstość występowania PD gwałtownie wzrastają wraz z wiekiem, szczególnie u osób w wieku 50 lat i starszych3. Etiologia i patogeneza choroby Parkinsona do tej pory pozostawała słabo poznana. To często sprawia, że wczesny początek choroby Parkinsona pozostaje niezdiagnozowany. Obecnie brak dopaminy i utrata neuronów dopaminergicznych (DpN) u pacjentów z chorobą Parkinsona są silnie związane z manifestacją objawów motorycznych4. Wykorzystując ten związek, zaprojektowano kilka metod leczenia, które działają bezpośrednio jako substytucja dopaminy (tj. lewodopa) lub kompensują utratę DpN (tj. głęboką stymulację mózgu). Chociaż terapie te przynoszą korzyści objawowe, nie modyfikują pogarszającego się przebiegu choroby5. W związku z tą istotną słabością zaproponowano terapię wymiany komórek. Skuteczność tego podejścia jest jednak niespójna, biorąc pod uwagę wyzwania związane z przygotowaniem przeszczepu, kontrolą wzrostu komórek i niestabilnością fenotypu. Terapia zastępcza komórek, która wzbudziła obawy etyczne, stwarza również ryzyko wywołania guzów mózgu i niepożądanych reakcji immunologicznych6,7.
Ograniczenia obecnych strategii terapeutycznych doprowadziły do większego nacisku na regenerację DpN jako potencjalne podejście w leczeniu PD. Regeneracja DpN lub neuroregeneracji okazała się jednym z obiecujących przełomów w leczeniu PD, nie tylko ze względu na jej potencjał jako nowej metody terapeutycznej, ale także jako sposób na zrozumienie mechanizmu choroby8, 9. Podejście to koncentruje się na przywróceniu funkcji neuronalnych poprzez różnicowanie, migrację i integrację istniejących komórek progenitorowych z uszkodzonymi obwodami10. W celu dokładniejszego zbadania neuroregeneracji przeprowadzono różne badania in vivo. Stwierdzono, że kręgowce, takie jak ssaki, i, generują nowe komórki mózgowe po urazie11,12. Wśród kręgowców bardziej poszukiwane są ssaki ze względu na ich genetyczne podobieństwo do ludzi. Ssaki wykazują jednak ograniczoną i słabą zdolność naprawczą w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN), która może przetrwać do dorosłości po ulegnięciu uszkodzeniu mózgu13. Ogólnie rzecz biorąc, ssaki nie nadają się jako modele zwierzęce do zrozumienia neuroregeneracji, biorąc pod uwagę, że niewielka liczba wytwarzanych neuronów nie będzie wystarczająca do przywrócenia uszkodzonych obwodów nerwowych obserwowanych w PD. W związku z tym model oparty na teleostach, szczególnie u danio pręgowanego, jest bardzo preferowany ze względu na jego wysoką szybkość proliferacji, zdolność do ciągłego samoodnawiania się i bliską homologię mózgu z ludźmi14,15.
Danio pręgowany jest najczęściej używany do badania zaburzeń ruchowych w PD16. Model PD oparty na danio pręgowanym jest zwykle indukowany przez neurotoksyny, które obejmują 1-metylo-4-fenylo-1,2,3,6-tetrahydropirydynę (MPTP) i 6-hydroksydopaminę (6-OHDA)17. Chociaż skuteczne w indukowaniu specyficznej utraty DpN i spadku poziomu dopaminy, modele oparte na MPTP nie naśladują ściśle warunków PD, ponieważ utrata DpN nie jest ograniczona wyłącznie do klasy CNS<sup="xref">18. Niezdolność 6-OHDA do przekroczenia bariery krew-mózg ograniczyła jego wpływ na zmiany komórkowe i funkcjonalne w mózgu, gdy jest podawany doczaszkowo, a nie domięśniowo19. Obwodowe podawanie 6-OHDA spowodowało globalne obniżenie poziomu dopaminy w całym układzie nerwowym20. Podczas gdy podanie 6-OHDA do płynu mózgowo-rdzeniowego spowodowało ablację DpN w całym OUN21, co nie naśladuje stanu widocznego w PD, w którym utrata DpN następuje specyficznie w istocie czarnej ludzkiego mózgu. Wręcz przeciwnie, podanie ICV 6-OHDA specyficznie wywołało znaczną ablację DpN w obszarze brzusznego Dn w mózgu danio pręgowanego, co bardzo przypominało istotę czarną (substantia nigra22. Co ciekawe, powrót do zdrowia DpN odnotowano 30 dni po zmianie wywołanej przez 6-OHDA, a neurony te przetrwały w ciągu życia23,24. Funkcjonalne odzyskiwanie DpN wykazano poprzez lokomotoryczną ocenę przebytej odległości (cm) i średniej prędkości (cm/s) przy użyciu modelu PD opartego na indukowanym przez 6-OHDA dorosłego danio pręgowanego22.

<table><tbody><tr><td>Materiały</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-hydroksydopamina (6-OHDA)</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>162957</td><td></td></tr><tr><td>Kwas askorbinowy</td><td>Thermo Fisher Scientific, Kalifornia, USA</td><td>FKC#A/8882/53</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowa pipeta Pasteura, 3 ml</td><td>Thermo Fisher Scientific, Kalifornia, USA</td><td>FB55348</td><td></td></tr><tr><td>Probówka do mikrowirówek, 0,2 ml</td><td>Eppendorf, Hamburg, Niemcy</td><td>30124332</td><td></td></tr><tr><td>Nice kolba stożkowa, 100 ml</td><td>Evergreen Engineering & Zasoby, Semenyih, Malezja</td><td>SumYau0200</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, USA</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, USA</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Chlorek sodu</td><td>Merck, Darmstadt, Niemcy</td><td>106404</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop stereoskopowy</td><td>Nikon, Tokio, Japonia</td><td>SMZ745</td><td></td></tr><tr><td>Trikaina metanosulfonian (MS-222)</td><td>Sigma-Aldrich, Missouri, Stany Zjednoczone</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ANY-labirynt oprogramowanie</td><td>Stoelting Co., Illinois, USA-wersja</td><td></td> <td>7.0; oprogramowanie do śledzenia wideo</td></tr><tr><td>Cubis II Micro Lab Balance</td><td>Sartorius, G&ouml; ttingen, Niemcy</td><td>SE 2</td><td></td></tr><tr><td>Mikrowtryskiwacz FemtoJet IV</td><td>Eppendorf, Hamburg, Niemcy</td><td>5192000035</td><td></td></tr><tr><td>Femtotip II, sterylna kapilara iniekcyjna</td><td>Eppendorf, Hamburg, Niemcy</td><td>5242957000</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipulator InjectMan 4</td><td>Eppendorf, Hamburg, Niemcy</td><td>5192000027</td><td></td></tr><tr><td>Przenośna lampa LED</td><td>MR. DIY, Selangor, Malezja</td><td>9023251</td><td>20 mAh</td></tr><tr><td>PELCO Pro Superstop, offset, drobne końcówki</td><td>Ted Pella, Kalifornia, USA</td><td>5367-12NM</td><td></td></tr><tr><td>Grzejnik akwariowy Shanda</td><td>Akwarium Yek Fong, Selangor, Malezja</td> Termometr <td>SDH-228</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sera Precision, Heinsberg, Niemcy</td><td>52525</td><td></td></tr><tr><td>Kamera wideo</td><td>Nikon, Tokio, Japonia</td><td>D3100</td><td></td></tr></tbody></table>

ocena lokomotoryczna indukowanego przez 6-hydroksydopaminę modelu choroby parkinsona u dorosłych ryb danio pręgowanego

Locomotor Assessment of 6-Hydroxydopamine-induced Adult Zebrafish-based Parkinson's Disease Model

Ograniczenia obecnych metod leczenia opóźniającego utratę neuronów dopaminergicznych w chorobie Parkinsona (PD) zwiększają zapotrzebowanie na alternatywne terapie, które mogą przywrócić te neurony. Obecnie wiele wysiłku poświęca się lepszemu zrozumieniu zjawiska neuroregeneracji przy użyciu przedklinicznych modeli in vivo. Ta zdolność regeneracyjna do samonaprawy jest jednak nieefektywna u ssaków. Zwierzęta inne niż ssaki, takie jak danio pręgowany, stały się zatem doskonałym modelem neuroregeneracyjnym ze względu na jego zdolność do ciągłego samoodnawiania się i bliskiej homologii mózgu do ludzi. W ramach wysiłków na rzecz wyjaśnienia zdarzeń komórkowych związanych z neuroregeneracją in vivo, ustaliliśmy indukowany przez 6-hydroksydopaminę (6-OHDA) model PD oparty na dorosłym danio pręgowanym. Osiągnięto to dzięki zoptymalizowanemu mikrowstrzyknięciu domózgowo-komorowemu (ICV) 99,96 mM 6-OHDA w celu specyficznej ablacji neuronów dopaminergicznych (DpN) w brzusznym międzymózgowiu (Dn) mózgu danio pręgowanego. Immunofluorescencja wykazała ponad 85% ablacji DpN w trzecim dniu po zmianie chorobowej i pełne przywrócenie DpN w miejscu zmiany chorobowej 30 dni po zmianie. W niniejszym badaniu określono upośledzenie, a następnie powrót do pływania danio pręgowanego po uszkodzeniu za pomocą testu w otwartym polu, za pomocą którego określono ilościowo dwa parametry, przebytą odległość (cm) i średnią prędkość (cm/s). Lokomocję oceniano poprzez analizę nagrań poszczególnych ryb z każdej grupy (n = 6) za pomocą oprogramowania do śledzenia wideo. Wyniki wykazały znaczne (p < 0,0001) zmniejszenie prędkości (cm/s) i przebytej odległości (cm) u zespogól zmienionego inaczej w 3 dni po zmianie w porównaniu z pozorowanym. Danio pręgowany, u którego wystąpiła zmiana, wykazywał pełną regenerację zachowań związanych z pływaniem 30 dni po zmianie. Obecne wyniki sugerują, że dorosły danio pręgowany z uszkodzeniami 6-OHDA jest doskonałym modelem o powtarzalnej jakości, który ułatwia badania nad neuroregeneracją w chorobie Parkinsona. Przyszłe badania nad mechanizmami leżącymi u podstaw neuroregeneracji, a także wewnętrznymi i zewnętrznymi czynnikami, które modulują ten proces, mogą dostarczyć ważnych informacji na temat nowych strategii leczenia zastępowania komórek przeciwko PD.

W niniejszym eksperymencie oceniono zmiany w zachowaniu pływakowym dorosłych danio pręgowanych po mikroiniekcji dokomorowej (ICV) 6-OHDA. Wybór 6-OHDA jako neurotoksyny wynikał z faktu, że substancja ta nie przenika przez barierę krew-mózg, co pozwoliło na specyficzną i ukierunkowaną ablację DpN w obszarze zainteresowania – brzusznej części diencefalonu (Dn)16. Subpopulacja DpN w tym miejscu wykazuje podobieństwo anatomiczne do subpopulacji DpN w ludzkiej istocie czarnej, części zwartej (substanti...

Niniejszy protokół opisuje wstrzykiwanie domózgowo-komorowe (ICV) dorosłej danio pręgowanej neurotoksycznej 6-hydroksydopaminy (6-OHDA) w brzuszne międzymózgowie (Dn) oraz ocenę upośledzenia i późniejszej regeneracji zachowania podczas pływania po zmianie za pomocą testu otwartego zbiornika, któremu towarzyszy analiza za pomocą oprogramowania do śledzenia wideo.

Ocena lokomotoryczna indukowanego przez 6-hydroksydopaminę modelu choroby Parkinsona u dorosłych ryb danio pręgowanego

The limitations of current treatments in delaying dopaminergic neuronal loss in Parkinson&#39;s disease (PD) raise the need for alternative therapies that ...

Protokół jest istotny w wykazywaniu upośledzenia motorycznego danio pręgowanego i późniejszego powrotu do zdrowia po wstrzyknięciu neurotoksyny 6-hydroksydopaminy do śródmózgowia. Technika ta demonstruje zmiany w efektach funkcjonalnych, które odpowiadają specyficznej ablacji neuronów dopaminergicznych w brzusznym międzymózgowiu dorosłego danio pręgowanego z uszkodzeniem 6-OHDA, przy użyciu bardzo prostej konfiguracji. Przyszłe badania nad mechanizmami leżącymi u podstaw neuroregeneracji, a także nad wewnętrznymi i zewnętrznymi czynnikami, które modulują ten proces, mogą dostarczyć ważnych informacji na temat strategii leczenia zastępowania komórek przeciwko chorobie Parkinsona.Trzymaj ryby w napowietrzonym zbiorniku z destylowaną wodą zmineralizowaną z jednym gramem na litr komercyjnej soli morskiej, w temperaturze kontrolnej 28, plus minus jeden stopień Celsjusza. Umieść maksymalnie 25 ryb w 45-litrowym zbiorniku i wystaw je na 14-godzinny fotoperiod światła i 10-godzinny ciemny fotoperiod. Karm ryby co najmniej dwa razy dziennie granulkami spożywczymi, uzupełnionymi liofilizowanymi robakami.Przygotować roztwór podstawowy metanosulfonianu trikainy, rozpuszczając dwa i pół grama m

locomotor-assessment-6-hydroxydopamine-induced-adult-zebrafish-based

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Choroba Parkinsona jest spowodowana utratą unerwienia dopaminergicznego prążkowia, którą można wywołać eksperymentalnie za pomocą 6-OH-dopaminy. Opisujemy sposób wykonania stereotaktycznej lekcji oraz monitorowania zachowania rotacyjnego indukowanego apomorfiną u myszy. Model ten jest użyteczny i wiarygodny w testowaniu nowych terapii choroby Parkinsona.

Model mysi choroby Parkinsona: od uszkodzenia dopaminergicznego 6-OHDA do testów behawioralnych

Danio pręgowany to doskonały model do badania funkcji mięśni i chorób. Podczas wczesnej embriogenezy danio pręgowany rozpoczyna regularne skurcze mięśni, powodując rytmiczne zachowanie podczas pływania, które zmienia się, gdy mięsień jest zakłócony. W tym miejscu opisujemy reakcję wywołaną dotykiem i test lokomocji, aby zbadać wydajność pływania jako miarę funkcji mięśni.

Wykorzystanie reakcji wywołanej dotykiem i testów lokomocji do oceny wydajności i funkcji mięśni u danio pręgowanego

Opisujemy ustanowienie mysiego modelu choroby Parkinsona za pomocą MPTP, oraz oceny behawioralne za pomocą testów cylindrycznych i otwartych do pomiaru funkcji motorycznych. Następnie używamy L-DOPA jako jednego z przykładów, aby pokazać, jak zastosować ten model w badaniu leków na chorobę Parkinsona.

Behawioralna ocena spontanicznej lokomocji w mysim modelu choroby Parkinsona wywołanym MPTP

Tutaj prezentujemy protokół rozwoju i charakterystyki epilepsji u danio pręgowanego, wynikającej z przejściowego zahamowania genu DEPDC5.

Analiza behawioralna i fizjologiczna w modelu padaczki danio pręgowanego

Model 6-hydroksydopaminy (6-OHDA) jest używany od dziesięcioleci do pogłębiania wiedzy na temat choroby Parkinsona. W tym protokole pokazujemy, jak wykonać jednostronne zmiany nigrostriatalne u szczura poprzez wstrzyknięcie 6-OHDA w pęczek przyśrodkowy przodomózgowia, ocenić deficyty motoryczne i przewidzieć zmiany za pomocą testu krokowego.

Szczurzy model choroby Parkinsona z 6-hydroksydopaminą

Modele dyskinez wywołanych przez L-DOPA są nieocenionymi narzędziami do identyfikowania interwencji terapeutycznych w celu osłabienia rozwoju lub złagodzenia objawów, które pojawiają się w wyniku wielokrotnego podawania L-DOPA. Protokół ten pokazuje, jak indukować i analizować ruchy podobne do dyskinetycznych w jednostronnie zmienionym 6-OHDA szczurzym modelu choroby Parkinsona.

Ocena dyskinez wywołanych L-DOPA w jednostronnie szczurzym modelu choroby Parkinsona z 6-OHDA

Ten artykuł opisuje metody wywoływania i oceny dyskinez wywołanych lewodopą w szczurzym modelu choroby Parkinsona. Protokół zawiera szczegółowe informacje dotyczące intensywności i częstotliwości szeregu zachowań dyskkinetycznych, zarówno dystonicznych, jak i hiperkinetycznych, zapewniając niezawodne narzędzie do testowania terapii ukierunkowanych na tę niezaspokojoną potrzebę medyczną.

Indukcja i ocena dyskinez wywołanych lewodopą w szczurzym modelu choroby Parkinsona

Protokół ten ustanawia paradygmat fenotypowania behawioralnego u larw danio objętych zabiegiem MPTP, aby ocenić deficyty ruchowe i niemotoryczne podobne do choroby Parkinsona.

Profilowanie fenotypowe fenotypów behawioralnych podobnych do parkinsońskiego wywołanych MPTP u larw danio pręgowanego na podstawie eksperymentu behawioralnego

Lokomocja jest często badana jako wynik behawioralny w różnych modelach chorób w dziedzinach takich jak neuronauka i ortopedia. Niniejszy artykuł wideo ma na celu opisanie metody pomiaru sił reakcji podłoża oraz kinematyki u szczurów podczas swobodnej lokomocji.

Wyznaczanie kinematyki i siły reakcji podłoża: demonstracja ilościowej oceny zdolności lokomocyjnych szczurów młodych, dorosłych w średnim wieku oraz geriatrycznych

Choroba Parkinsona jest zaburzeniem neurodegeneracyjnym, które wynika ze zwyrodnienia neuronów dopaminergicznych w ośrodkowym układzie nerwowym, powodując zaburzenia lokomocji. Rotenon modeluje chorobę Parkinsona u Drosophila. W artykule przedstawiono dwa testy, które charakteryzują zarówno spontaniczne, jak i wywołane przez przerażenie niedobory lokomocji spowodowane rotenonem.

Metody charakteryzowania spontanicznej i indukowanej przez odstraszenie lokomocji w modelu choroby Parkinsona wywołanym rotenonem Drosophila

Poznaj metodę oceny zaburzeń ruchowych u dorosłych ryb danio pręgowanego po iniekcji 6-OHDA do podwzgórza. Technika ta wykorzystuje test otwartego zbiornika i analizę wideo do badania neuroregeneracji.

Ocena lokomotoryczna indukowanego przez 6-hydroksydopaminę modelu choroby Parkinsona u dorosłych ryb danio pręgowanego

Przeglądaj więcej filmów