Name: Przeszczep skóry mysiej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Poznaj technikę przeszczepu skóry mysiej między szczepami BALB/c a C57BL/6 w celu badania odpowiedzi immunologicznej i odrzucania przeszczepu. Metoda ta umożliwia ocenę strategii indukcji tolerancji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Grant szkoleniowy NIH w dziedzinie immunologii T32 AI 60573 (KRG) oraz grant NIH GM 41514 (MDC)

Przed rozpoczęciem eksperymentu:
<ul>
<li>Uzyskać zgodę IACUC</li>
<li>Zsterylizować narzędzia chirurgiczne i patyczki higieniczne</li>
</ul>
I. Pobieranie tkanki dawcy
<ol>
<li>Uśmierć mysz dawcę (zgodnie z SOP instytucji)</li>
<li>Zwilżyć alkohollem sierść z tyłu u podstawy ucha</li>
<li>Pobrać skórę dawcy, odcinając ucho u nasady</li>
<li>Umieścić tkankę na płytce w lodzie</li>
<li>Rozdzielić ucho: ująć pęsetą z ząbkami strony brzuszną i grzbietną tkanki u podstawy ucha; delikatnie rozdzielić tkankę; umieścić tkankę grzbietową powierzchnią wewnętrzną do dołu w PBS w lodzie; odrzucić kolagenową płat brzuszny</li>
</ol>
II. Przygotowanie biorcy do transplantacji
<ol>
<li>Zanestezjować mysz zgodnie z zatwierdzoną procedurą</li>
<li>Podać lek przeciwbólowy w celu uśmierzenia bólu pooperacyjnego (np. 0,05-0,1 mg/g Bupernex ip)</li>
<li>Ułożyć mysz w pozycji bocznej</li>
<li>Wykonać ucisk palca stopy, aby upewnić się, że zwierzę jest odpowiednio uspokojone</li>
<li>Zmoczyć sierść alkoholem i ogolić klatkę piersiową</li>
<li>Oczyścić obszar za pomocą gazika nasączonego alkoholem</li>
</ol>
III. Przeszczep skóry
<ol>
<li>Wykonaj nacięcie o długości ~ 1 cm: unieś skórę za pomocą pęsety ząbkowej i przetnij tkankę ~ 0,25-0,5 cm poniżej pęsety</li>
<li>Wyjmij skórę dawcy z PBS, umieść ją na łożu przeszczepu (wewnętrzną stroną skóry ucha skierowaną w stronę łoża) i usuń nadmiar PBS za pomocą sterylnego patyczka do uszu</li>
<li>Ostrożnie odetnij nadmiar skóry dawcy, aby przeszczep przylegał płasko do łoża (upewniając się, że brzegi przeszczepu nie są podwinięte i że przeszczep nie wystaje poza obszar łoża na skórę tułowia biorcy)</li>
<li>Owiń biorcę sterylnym bandażem (umieszczając nieprzylepny fragment gazy nad przeszczepem skórnym)</li>
<li>Upewnij się, że bandaż nie jest zbyt ciasny (oceń oddychanie zwierzęcia) oraz że kończyny górne mogą się swobodnie poruszać</li>
<li>Zabezpiecz bandaż pojedynczym szwem z jedwabnej nici 2-0</li>
<li>Umieść zwierzę w czystej klatce (pod lampą grzewczą, aż zwierzę w pełni wybudzi się z narkozy)</li>
<li>Monitoruj biorcę 1-2 razy dziennie pod kątem objawów stresu i podawaj leki przeciwbólowe w razie potrzeby</li>
</ol>
IV. Zdjęcie opatrunku (6–7 dni po przeszczepieniu)
<ol>
<li>Zanurzyć mysz w znieczuleniu zgodnie z zatwierdzoną procedurą</li>
<li>Przeciąć i usunąć szew jedwabny</li>
<li>Za pomocą nożyczek z tępym końcem ostrożnie przeciąć opatrunek (dbając o to, aby nie uszkodzić przeszczepu) i delikatnie go usunąć</li>
<li>Przenieść mysz do czystej klatki</li>
<li>Około 8 h po usunięciu opatrunku sprawdzić przeszczep pod kątem oznak strupienia lub kurczenia się. Jeśli wystąpią, można uznać, że unaczynienie przeszczepu nie powiodło się, co należy traktować jako błąd techniczny</li>
<li>Monitorować codziennie pod kątem oznak odrzucenia (zazwyczaj definiowanego jako ok. 80% martwicy tkanki dawcy)</li>
<li>Allogeniczne przeszczepy skóry są zazwyczaj odrzucane między 8. a 12. dniem po operacji</li>
</ol>
V. Przydatne wskazówki
<ol>
<li>Pobranie tkanki donora blisko podstawy ucha pozwoli na: 1) maksymalizację wielkości przeszczepu oraz 2) uzyskanie nierównego brzegu brzusznego, który ułatwi rozdzielanie</li>
<li>Do golenia biorcy zawsze należy używać nowej żyletki</li>
<li>Jeśli lek przeciwbólowy ma być podany d.o.p., należy go podać przed procedurą transplantacji, aby zminimalizować manipulacje pooperacyjne (zmniejszyć ryzyko uszkodzenia przeszczepu)</li>
<li>Jeśli to możliwe, należy zdjąć rękawiczki przed nałożeniem bandaża. Rękawiczki mają tendencję do przyklejania się do bandaża, co utrudnia jego aplikację</li>
<li>Umieszczenie pojedynczego szwu na końcu bandaża zminimalizuje ryzyko jego przedwczesnego usunięcia</li>
<li>Bandaż należy owinąć tak ciasno, jak to możliwe, a następnie ocenić oddychanie PRZED nałożeniem szwu. Jeśli bandaż będzie zbyt ciasny, zwierzę przestanie oddychać. Jeśli bandaż będzie zbyt luźny, zwierzę go usunie.</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Jak wykazano w niniejszym artykule wideo, model przeszczepu skóry jest szybką i prostą metodą monitorowania allogenicznych odpowiedzi limfocytów T. Allogeniczne przeszczepy skóry znajdują szerokie zastosowanie i są wykorzystywane do oceny skuteczności różnych czynników immunosupresyjnych i protokołów indukcji tolerancji, a także do badania biologicznych efektów różnych przeciwciał blokujących.

<table><tbody><tr><td>Pęseta mikrosekcyjna (zakrzywiona)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Pęseta ząbkowana do szczurów (1x2 zęby, prosta)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>Nożyczki do zeza (tępy koniec)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Pęseta irydowa (zakrzywiona)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki sprężynowe (kątowe)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Mikroigłownik Halsey</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Płytki 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex (hydrochlorowodorek buprenorfiny)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki insulinowe (29 Ga)</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>Patyczki higieniczne (Q-tips)</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>Jednostronne żyletki (#9)</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>Sznur jedwabny (2-0; PS-2)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

przeszczep skóry u myszy

Murine Skin Transplantation

Przeszczep skóry, będący jednym z najbardziej rygorystycznych i najmniej wymagających technicznie modeli, jest standardową metodą oceny odpowiedzi limfocytów T biorcy na antygeny dawcy różniące się pod względem MHC. Celem niniejszego artykułu wideo jest przedstawienie widzowi krok po kroku wizualnej demonstracji przeszczepu skóry z wykorzystaniem modelu mysiego. Protokół został podzielony na 5 głównych elementów: 1) pobieranie skóry dawcy; 2) przygotowanie biorcy do przeszczepu; 3) przeszczep skóry; 4) usuwanie opatrunku i monitorowanie odrzucenia przeszczepu; 5) pomocne wskazówki. Po osiągnięciu biegłości sama procedura powinna zająć mniej niż 10 min.

Allogeniczny przeszczep skóry jest standardowym modelem do oceny odpowiedzi limfocytów T gospodarza na antygeny dawcy o odmiennej strukturze MHC. Niniejszy artykuł wideo stanowi wizualny samouczek każdego etapu przeprowadzania przeszczepu skóry BALB/c--&gt;C57BL/6.

Przeszczep skóry u myszy

Jako jeden z najbardziej rygorystycznych i najmniej wymagających pod względem technicznym modeli, przeszczep skóry jest standardową metodą oceny odpowiedzi limfocytów T gospodarza na ...

Witamy w laboratorium dr. Michaela Kalena. Nazywam się Kim Gard. Dzisiaj zaprezentujemy model przeszczepu skóry z wykorzystaniem kombinacji allogenicznej szczepów BC i black six jako jeden z najbardziej rygorystycznych i najmniej wymagających technicznie modeli odrzucania przeszczepów tkanek.Przeszczep skóry jest standardową techniką stosowaną do badania odpowiedzi allogenicznych i jest powszechnie wykorzystywana do oceny skuteczności różnych strategii indukcji tolerancji. Zatem zacznijmy. Procedura ta rozpoczyna się od pobrania skóry od myszy dawcy z linii BAB.Najpierw przeprowadź eutanazję dawcy zgodnie z SOP Iacuc. Następnie zwilż alkohollem włosy na karku u podstawy, pobierz skórę, odcinając ucho jak najbliżej podstawy, i umieść je na lodzie. Następnie rozdziel każde ucho, usuwając kolagenową płat skórny od strony brzusznej, i pozostaw tkankę do pływania na lodzie.Teraz skóra dawcy jest gotowa do przeszczepienia. Procedura transplantacji rozpoczyna się od znieczulenia zwierzęcia biorcy zgodnie z zatwierdzonymi procedurami. Gdy biorca zostanie odpowiednio znieczulony, należy wyjąć zwierzę z komory i podać bup i next IP w celu uśmierzenia bólu.Umieść biorcę w pozycji bocznej i upewnij się, że zwierzę jest w pełni zsedowane, wykonując próbę uciskową palca. Namocz sierść alkoholem i ogol ją. Po dokładnym ogoleniu biorcy wykonaj nacięcie o długości około 1 do 2 centymetrów.Umieść skan dawcy nad nacięciem i usuń nadmiar płynu za pomocą sterylnego patyczka higienicznego. Następnie ostrożnie odetnij nadmiar opatrunku z powłoki skórnej dawcy, zwierzęcia oraz bandaża. Upewnij się, że bandaż nie jest zbyt ciasny, oceniając oddech, a następnie sprawdź, czy kończyny górne mogą swobodnie się poruszać.Następnie zabezpiecz opatrunek pojedynczym szwem. Umieść mysz w czystej klatce z lampą grzewczą, aż zwierzę dojdzie do siebie w ciągu pierwszych kilku dni. Po operacji należy monitorować zwierzę kilka razy dziennie pod kątem oznak stresu i w razie potrzeby podawać buprenorfinę w celu uśmierzenia bólu.Od pięciu do siedmiu dni po operacji usuwa się opatrunki. Zademonstruję usuwanie opatrunku u biorcy w szóstym dniu po przeszczepieniu. Po pełnym znieczuleniu myszy należy usunąć szew, a następnie za pomocą nożyczek tępymi końcami przeciąć opatrunek i delikatnie go zdjąć, dbając o to, aby nie uszkodzić przeszczepu.Przenieś zwierzę do czystej klatki i codziennie monitoruj pod kątem objawów odrzutu. W zależności od wybranej kombinacji szczepów większość przeszczepów skóry zostaje odrzucona, co zazwyczaj definiuje się jako 80% nekrozy w ósmym do dwunastego dnia. Ta mysz jest w ósmym dniu po operacji i otrzymała przeszczepy obustronne.Po lewej stronie znajduje się kontrolny przeszczep syngeniczny czarnej szóstki, który nie zostanie odrzucony. Po prawej stronie znajduje się allogeniczny przeszczep BAB sea, który zostanie odrzucony. Oto kolejny przeszczep z innego terminu, który jest w trakcie odrzucania.Na koniec przedstawiamy przeszczep z innego dnia, który został niemal całkowicie odrzucony. Te trzy przykłady obrazują zatem normalną zmienność kinetyki odrzucania przeszczepu skóry. W poprzednim doświadczeniu pokazaliśmy, jak wykonać lustrzany przeszczep skóry.Model ten stanowi szybką i łatwą metodę monitorowania odpowiedzi allogenicznych i znajduje szerokie zastosowanie. Na przykład transplantacja skóry może być wykorzystana do oceny skuteczności różnych leków immunosupresyjnych, przeciwciał blokujących oraz protokołów indukcji tolerancji. To wszystko.Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Przeszczep skóry mysiej

W niniejszym raporcie opisujemy trójwymiarowy model rekonstrukcji skóry, który naśladuje architekturę i skład ludzkiej skóry. Wykorzystując model rekonstrukcji skóry, badano fizjologię melanocytów, progresję czerniaka oraz losy dermalnych komórek macierzystych. Model ten jest również przydatny jako narzędzie przedkliniczne do oceny leków.

Trójwymiarowy model rekonstrukcji ludzkiej skóry: narzędzie do badania normalnej skóry i progresji czerniaka

Analiza specyficzna dla tkanki w modelu regeneracji mieszka włosowego z wykorzystaniem lentiwirusów do mediacji funkcji wzmocnionej (gain-of-function) lub utraconej (loss-of-function).

Szybka analiza genetyczna sygnalizacji nabłonkowo-mezenchymalnej podczas regeneracji włosa

Ten film demonstruje metodę przeszczepiania ludzkiej skóry myszy z niedoborem odporności z obniżoną reakcją neutrofili. Metoda polega na nałożeniu ludzkiej skóry o podzielonej grubości na podłoże przeszczepu myszy, uszczelnieniu jej i przykryciu w celu odzyskania. W końcu ludzka skóra przylega do skóry myszy, ustanawiając unaczynienie i krążenie, co skutkuje udanym ksenoprzeszczepem skóry.

Technika przeszczepiania ludzkiej skóry w modelu mysim

Neisseria meningitidis to specyficzny dla człowieka patogen, który infekuje naczynia krwionośne. W tym protokole ludzkie mikronaczynia są wprowadzane do myszy poprzez przeszczepienie ludzkiej skóry myszom z obniżoną odpornością. Bakterie w dużym stopniu przylegają do ludzkich naczyń, prowadząc do uszkodzenia naczyń krwionośnych i rozwoju wysypki plamistej zwykle obserwowanej u ludzi.

Humanizowany model myszy do badania infekcji bakteryjnych ukierunkowanych na mikrokrążenie

Przeszczep skóry ogona jest potężnym modelem do badania zależnego od limfocytów T odrzucania i indukcji tolerancji podczas allogenicznych odpowiedzi immunologicznych u myszy. Zaletami tego protokołu są drobne inwazyjne zabiegi chirurgiczne oraz łatwość monitorowania bez konieczności poświęcania myszy biorcy.

Przeszczep skóry ogona w celu zbadania allogenicznych odpowiedzi limfocytów T CD4 u myszy

Przeszczep skóry pełnej grubości myszy jest dobrze znanym modelem do badania odrzucenia w środowisku alloimmunologicznym. W tym miejscu przedstawiamy samouczek dotyczący każdego kroku związanego z wykonaniem przeszczepu skóry pełnej grubości BALB/c--&gt;C57BL/6.

Mysi przeszczep skóry o pełnej grubości

Proponujemy protokół, który pokazuje, jak różnicować indukowane pluripotencjalne keratynocyty i fibroblasty pochodzące z komórek macierzystych oraz generować organoid skóry 3D, używając tych keratynocytów i fibroblastów. Protokół ten zawiera dodatkowy krok generowania humanizowanego modelu myszy. Przedstawiona tutaj technika usprawni badania dermatologiczne.

Generowanie organoidu 3D skóry z pluripotencjalnych komórek macierzystych indukowanych krwią pępowinową

Celem tego badania było opracowanie mysiego modelu gojenia się ran po oparzeniach. Oparzenie termiczne wywołano na skórze grzbietowej myszy za pomocą podgrzanego mosiężnego szablonu. Spaloną tkankę oczyszczono i pokryto przeszczepem skóry pobranym z ogona genetycznie podobnej myszy dawcy.

Mysi model rany oparzeniowej zrekonstruowany za pomocą allogenicznego przeszczepu skóry

Obecny protokół opisuje, jak przeszczepić ludzką skórę nieotyłym myszom z cukrzycą (NOD)-scid z receptorem łańcucha gamma interleukiny-2 (NSG). W raporcie zawarto szczegółowy opis przygotowania skóry ludzkiej do przeszczepu, przygotowania myszy do przeszczepu, przeszczepu skóry ludzkiej o podzielonej grubości oraz procedury rekonwalescencji po przeszczepie.

Model skóry ksenoprzeszczepu do manipulowania ludzkimi odpowiedziami immunologicznymi in vivo

Niniejszy artykuł opisuje zmodyfikowaną technikę heterotopowego przeszczepu unaczynionego serca z zaktualizowaną techniką aseptyczną, analgezją i znieczuleniem.

Zmodyfikowany protokół przeszczepu serca heterotopowego u myszy zgodny ze współczesnymi standardami techniki aseptycznej, anestezjologii i analgezji

Przedstawiamy powtarzalny model myszy heterotopowej allotransplantacji naczyń tylnych kończyn do szyi, unaczynionej allotransplantacji. Ten protokół supermikrochirurgiczny, obejmujący anastomozę naczyń o średnicy 0,3-0,5 mm, integruje naprowadzanie z włókna nylonowego oraz mankietowanie żylne. Stanowi wiarygodną platformę do badań translacyjnych nad tolerancją, uszkodzeniem niedokrwienia i reperfuzją oraz mechanizmami immunologicznymi w naczyniowej allotransplantacji złożonej.

Heterotopowa transplantacja kończyny tylnej do szyi u myszy: supermikrochirurgiczny model unaczynionej alotransplantacji kompozytowej

Poznaj technikę przeszczepu skóry mysiej między szczepami BALB/c a C57BL/6 w celu badania odpowiedzi immunologicznej i odrzucania przeszczepu. Metoda ta umożliwia ocenę strategii indukcji tolerancji.

Przeszczep skóry u myszy

Przeglądaj więcej filmów