Przeszczep skóry u myszy
16 stycznia 2008
Allogeniczny przeszczep skóry jest standardowym modelem do oceny odpowiedzi limfocytów T gospodarza na antygeny dawcy o odmiennej strukturze MHC. Niniejszy artykuł wideo stanowi wizualny samouczek każdego etapu przeprowadzania przeszczepu skóry BALB/c-->C57BL/6.
Witamy w laboratorium dr. Michaela Kalena. Nazywam się Kim Gard. Dzisiaj zaprezentujemy model przeszczepu skóry z wykorzystaniem kombinacji allogenicznej szczepów BC i black six jako jeden z najbardziej rygorystycznych i najmniej wymagających technicznie modeli odrzucania przeszczepów tkanek.
Przeszczep skóry jest standardową techniką stosowaną do badania odpowiedzi allogenicznych i jest powszechnie wykorzystywana do oceny skuteczności różnych strategii indukcji tolerancji. Zatem zacznijmy. Procedura ta rozpoczyna się od pobrania skóry od myszy dawcy z linii BAB.
Najpierw przeprowadź eutanazję dawcy zgodnie z SOP Iacuc. Następnie zwilż alkohollem włosy na karku u podstawy, pobierz skórę, odcinając ucho jak najbliżej podstawy, i umieść je na lodzie. Następnie rozdziel każde ucho, usuwając kolagenową płat skórny od strony brzusznej, i pozostaw tkankę do pływania na lodzie.
Teraz skóra dawcy jest gotowa do przeszczepienia. Procedura transplantacji rozpoczyna się od znieczulenia zwierzęcia biorcy zgodnie z zatwierdzonymi procedurami. Gdy biorca zostanie odpowiednio znieczulony, należy wyjąć zwierzę z komory i podać bup i next IP w celu uśmierzenia bólu.
Umieść biorcę w pozycji bocznej i upewnij się, że zwierzę jest w pełni zsedowane, wykonując próbę uciskową palca. Namocz sierść alkoholem i ogol ją. Po dokładnym ogoleniu biorcy wykonaj nacięcie o długości około 1 do 2 centymetrów.
Umieść skan dawcy nad nacięciem i usuń nadmiar płynu za pomocą sterylnego patyczka higienicznego. Następnie ostrożnie odetnij nadmiar opatrunku z powłoki skórnej dawcy, zwierzęcia oraz bandaża. Upewnij się, że bandaż nie jest zbyt ciasny, oceniając oddech, a następnie sprawdź, czy kończyny górne mogą swobodnie się poruszać.
Następnie zabezpiecz opatrunek pojedynczym szwem. Umieść mysz w czystej klatce z lampą grzewczą, aż zwierzę dojdzie do siebie w ciągu pierwszych kilku dni. Po operacji należy monitorować zwierzę kilka razy dziennie pod kątem oznak stresu i w razie potrzeby podawać buprenorfinę w celu uśmierzenia bólu.
Od pięciu do siedmiu dni po operacji usuwa się opatrunki. Zademonstruję usuwanie opatrunku u biorcy w szóstym dniu po przeszczepieniu. Po pełnym znieczuleniu myszy należy usunąć szew, a następnie za pomocą nożyczek tępymi końcami przeciąć opatrunek i delikatnie go zdjąć, dbając o to, aby nie uszkodzić przeszczepu.
Przenieś zwierzę do czystej klatki i codziennie monitoruj pod kątem objawów odrzutu. W zależności od wybranej kombinacji szczepów większość przeszczepów skóry zostaje odrzucona, co zazwyczaj definiuje się jako 80% nekrozy w ósmym do dwunastego dnia. Ta mysz jest w ósmym dniu po operacji i otrzymała przeszczepy obustronne.
Po lewej stronie znajduje się kontrolny przeszczep syngeniczny czarnej szóstki, który nie zostanie odrzucony. Po prawej stronie znajduje się allogeniczny przeszczep BAB sea, który zostanie odrzucony. Oto kolejny przeszczep z innego terminu, który jest w trakcie odrzucania.
Na koniec przedstawiamy przeszczep z innego dnia, który został niemal całkowicie odrzucony. Te trzy przykłady obrazują zatem normalną zmienność kinetyki odrzucania przeszczepu skóry. W poprzednim doświadczeniu pokazaliśmy, jak wykonać lustrzany przeszczep skóry.
Model ten stanowi szybką i łatwą metodę monitorowania odpowiedzi allogenicznych i znajduje szerokie zastosowanie. Na przykład transplantacja skóry może być wykorzystana do oceny skuteczności różnych leków immunosupresyjnych, przeciwciał blokujących oraz protokołów indukcji tolerancji. To wszystko.
Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł wideo stanowi wizualny samouczek dotyczący wykonania modelu transplantacji skóry z wykorzystaniem allogenicznej kombinacji szczepów BALB/c i C57BL/6. Model ten jest niezbędny do badania odpowiedzi limfocytów T biorcy na antygeny dawcy różniące się pod względem MHC.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Immunologia
- Biologia transplantacji
Wstęp
- Przeszczep skóry jest standardową techniką oceny odpowiedzi allogenicznych.
- Model ten jest jednym z najmniej wymagających technicznie sposobów badania odrzucania przeszczepów tkanek.
- Jest on powszechnie stosowany do oceny różnych strategii indukcji tolerancji.
- Badanie obejmuje wykorzystanie specyficznych szczepów myszy do transplantacji.
Cel badania
- Przedstawienie procedury przeszczepu skóry.
- Zapewnienie wskazówek wizualnych dla badaczy zainteresowanych odpowiedziami allogenicznymi.
- Ułatwienie zrozumienia technicznych aspektów procedury.
Zastosowane metody
- Pobieranie skóry od myszy dawcy szczepu BALB/c.
- Przeprowadzenie transplantacji na mysz biorcę szczepu C57BL/6.
- Monitorowanie odpowiedzi limfocytów T gospodarza po transplantacji.
- Wykorzystanie formatu wideo w celu usprawnienia nauki i zrozumienia treści.
Główne wyniki
- Skuteczna demonstracja procedury przeszczepu skóry.
- Przedstawienie wizualne poszczególnych etapów procesu.
- Wgląd w odpowiedź immunologiczną wywołaną przez przeszczepioną tkankę.
- Ocena efektywności modelu w badaniu odrzutów przeszczepu.
Wnioski
- Film stanowi cenny zasób dla badaczy zajmujących się biologią transplantacji.
- Zwraca on uwagę na znaczenie modelu BALB/c do C57BL/6 w badaniach immunologicznych.
- Samouczek pomaga w zrozumieniu złożoności allogenicznego przeszczepu skóry.
Często zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Przeszczepianie skóry w modelach mysich dostarcza rygorystycznego, a jednocześnie technicznie dostępnego systemu do oceny odpowiedzi limfocytów T gospodarza na antygeny różniące się pod względem MHC, co bezpośrednio wspiera walidację celów w procesie odkrywania leków immunomodulujących. Badanie to umożliwia mechanistyczną redukcję ryzyka poprzez kwantyfikację kinetyki odrzucenia allogenicznego, dostarczając informacji niezbędnych do podejmowania decyzji o kontynuacji lub przerwaniu badań nad lekami immunosupresyjnymi i strategiami indukcji tolerancji. Jego powtarzalność oraz ilościowe odczyty przeżywalności przeszczepu zwiększają pewność prognostyczną w przedklinicznych procesach immunologicznych.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne etapy odkrywania leków i walidacja celu
- Wartość naukowa: Pozwala na weryfikację hipotez terapeutycznych poprzez pomiar odrzucania przeszczepu zależnego od limfocytów T jako funkcjonalnego wskaźnika odpowiedzi allogenicznej.
- Wartość operacyjna: Umożliwia szybką ocenę oddziaływania immunomodulatorów na cel molekularny z wykorzystaniem zestandaryzowanego modelu chirurgicznego.
- Wartość prognostyczna: Wspiera selekcję projektów w portfolio poprzez korelację przeżycia przeszczepu z mechanizmem działania w szlakach indukcji tolerancji.
Przesiewy i opracowanie testów
- Gotowość do analizy: Generuje ilościowe punkty końcowe oparte na martwicy (np. 80% martwicy do 8.–12. dnia) w celu przesiewania związków.
- Powtarzalność: Standaryzowane procedury pobierania i transplantacji zapewniają spójne przyjęcie przeszczepu w różnych eksperymentach.
- Skalowalność: Krótki czas procedury (<10 min) i minimalna złożoność techniczna wspierają wysokoprzepustową ocenę kandydatów.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Znaczenie chorobowe: Modeluje ludzkie odrzucenie przeszczepu allogenicznego, umożliwiając przedkliniczną ocenę schematów immunosupresyjnych.
- Ciągłość translacyjna: Łączy etap odkrywania z walidacją przedkliniczną poprzez zapewnienie funkcjonalnego testu odpowiedzi immunologicznej.
- Decyzje dostosowane do ryzyka: Kinetyka odrzucenia dostarcza informacji niezbędnych do doboru dawki i harmonogramu podawania kandydatów terapeutycznych.
Integracja rurociągów i przepływów pracy
Test przeszczepiania skóry wpisuje się w proces badawczy obejmujący etapy od walidacji celu, poprzez optymalizację związku wiodącego, aż po przedkliniczne badania skuteczności, dostarczając danych o odpowiedzi immunologicznej w kluczowych punktach decyzyjnych.
- Biologia odkrywcza: Badania nad modulacją odpowiedzi allogenicznych pośrednią przez cel, wyjaśniające udział konkretnych szlaków w odrzucaniu przeszczepu.
- Przesiewy: Dostarczanie ilościowych wskaźników przeżycia przeszczepu, umożliwiających porównanie kandydatów na leki immunosupresyjne.
- Analityka: Wyznaczanie czasu do odrzucenia oraz ocen nekrozy, które wspierają analizę statystyczną efektów terapeutycznych.
- Badania translacyjne: Powiązanie wyników mechanistycznych z efektami przedklinicznymi poprzez standaryzowaną ocenę odrzucania.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Ustanowienie powtarzalnej platformy immunologicznej do oceny wielu modalności terapeutycznych w różnych projektach.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwa
- Wartość naukowa: Dostarcza wglądu w mechanizmy odrzucania zależnego od limfocytów T, zmniejszając niejednoznaczność w zakresie działania immunomodulatorów.
- Wartość operacyjna: Dostarcza zestandaryzowany test o niskim progu technicznym z wysoką powtarzalnością między eksperymentami.
- Wartość strategiczna: Poprawia efektywność podejmowania decyzji go/no-go poprzez wczesne przewidywanie klinicznego potencjału immunosupresyjnego.
- Wpływ na portfolio: Umożliwia priorytetyzację skorygowaną o ryzyko w oparciu o ilościową kinetykę odrzucania i modulację celu.
Wskazówki dotyczące implementacji
- Wymaga doświadczenia w chirurgii myszy oraz stosowania technik aseptycznych podczas pobierania skóry i umieszczania przeszczepu.
- Zależne od użycia stereomikroskopów, narzędzi do szycia oraz kontrolowanych warunków środowiskowych (np. lamp grzewczych) w opiece pooperacyjnej.
- Wymaga standaryzowanych protokołów oceny martwicy przeszczepu w celu zapewnienia porównywalności wyników między zespołami.
- Należy uwzględnić kinetykę odrzucania specyficzną dla danej linii myszy przy przenoszeniu wyników między systemami modelowymi.
- Ograniczone do oceny odpowiedzi zależnych od limfocytów T; bez modyfikacji nie obejmuje mechanizmów odporności wrodzonej ani mechanizmów zależnych od przeciwciał.
