Ortotopowy model przeszczepu nerki u szczura do odrzucania alloprzeszczepu nerki

Ortotopowe przeszczepienie nerki u szczurów jest ważnym modelem do badania mechanizmu odrzucania alloprzeszczepu nerki w badaniach przedklinicznych i może pomóc w opracowaniu nowego podejścia do poprawy długoterminowego przeżycia alloprzeszczepów nerkowych. Zespolenie naczyń nerkowych typu end-to-end w tej operacji pozwala uniknąć niedokrwienia dolnej części ciała i zakrzepicy żyły głównej dolnej, natomiast zespolenie moczowodu w metodzie tunelowej end-to-side zmniejsza pooperacyjny wyciek moczu i skręt moczowodu. Metoda ta dostarcza informacji na temat mechanizmów odrzucenia układu immunologicznego i uszkodzenia alloprzeszczepów nerkowych po przeszczepieniu nerki.

Zacznij od nacięcia brzucha za pomocą nożyczek chirurgicznych wzdłuż linii środkowej od spojenia łonowego do wyrostka mieczykowatego. Następnie rozciągnij nacięcie za pomocą retraktora. Wyjmij jelita z prawej strony nacięcia i owiń je zwilżoną gazą, aby zapobiec ich wysuszeniu.

Następnie odsłoń lewą nerkę. Oddziel lewą tętnicę nerkową i żyłę za pomocą mikrokleszczy i wacików bawełnianych pod 20-krotnym powiększeniem. W razie potrzeby podwiązać i przeciąć żyłę nadnerczy i żyłę płciową.

Oddziel moczowód za pomocą mikrokleszczyków, zachowując obwodowe tkanki łączne, aby zapewnić dopływ krwi do moczowodu. Oddzielić i przyciąć lub podwiązać aortę około pięciu milimetrów powyżej lewej tętnicy nerkowej za pomocą zacisku naczyniowego lub szwu monofilamentowego z poliamidu 4-0. Następnie przeciąć lewą żyłę nerkową dystalnie do połączenia lewej żyły płciowej i żyły nadnerczy.

Za pomocą igły skalpela o rozmiarze 24 przepłucz nerkę z aorty poniżej lewej tętnicy nerkowej lodowatym roztworem UW uzupełnionym 100 jednostkami na mililitr heparyny, aż krew wyblaknie. Przeciąć lewą tętnicę nerkową obok aorty, a następnie przeciąć moczowód obok pęcherza moczowego i oddzielić nerkę za pomocą mikrokleszczy i nożyczek. Zachowaj lewą nerkę dawcy w lodowatym roztworze UW.

Pod 20-krotnym powiększeniem oddziel lewą tętnicę nerkową i żyłę nerkową szczura biorcy za pomocą bawełnianych wacików i mikrokleszczyków. W razie potrzeby podwiązać żyłę nadnerczy i żyłę płciową. Przyciąć lewą tętnicę nerkową i żyłę nerkową u nasady za pomocą zacisków mikronaczyniowych, a następnie przeciąć tętnicę nerkową i żyłę nerkową w odległości trzech milimetrów od zacisku mikronaczyniowego.

Oddzielić i podwiązać lewy moczowód około dwóch do trzech centymetrów poniżej nerki za pomocą 8-0 Zszyć monofilament poliamidowy i przeciąć go na podwiązaniu. Wyciąć rodzimą lewą nerkę biorcy poprzez dysocjację nerki za pomocą mikrokleszczy i nożyczek. Wszczepić nerkę dawcy do lewego dołu nerkowego szczura biorcy i owinąć lodem wszczepioną nerkę dawcy

Przełącz się na 45-krotne powiększenie, a następnie zespolej tętnicę nerkową i żyłę nerkową dawcy z tętnicą nerkową i żyłą nerkową biorcy w sposób kompleksowy przy użyciu nici monofilamentowych z poliamidu 10-0. W celu zespolenia tętnicy nerkowej z przerwanymi szwami należy umieścić szwy podtrzymujące w pozycjach zespolenia na godzinie 12 i 6. Zszyj w równej odległości jedną stronę zespolenia między dwoma szwami podciągowymi za pomocą dwóch do trzech szwów.

Odwróć szwy sztywne i podobnie zszyj drugą stronę zespolenia między dwoma szwami szpilkowymi za pomocą dwóch do trzech szwów. Aby zespoleć żyłę nerkową ze szwami ciągłymi, należy umieścić szwy podtrzymujące w pozycji godziny szóstej i dwunastej zespolenia. Zszyj jedną stronę zespolenia od pozycji godziny 12 za pomocą czterech do pięciu szwów za pomocą szwów biegowych.

Odwrócić szwy sztagowe i podobnie zszyć drugą stronę zespolenia od pozycji godziny szóstej. Ponownie wykonać fuzję nerki dawcy poprzez uwolnienie nieinwazyjnego zacisku mikronaczyniowego żyły nerkowej, zidentyfikować miejsca krwawienia i w razie potrzeby założyć dodatkowe szwy. Następnie zwolnij nieinwazyjny zacisk mikronaczyniowy tętnicy nerkowej, zidentyfikuj miejsca krwawienia i w razie potrzeby wykonaj dodatkowe szwy.

Pod 20-krotnym powiększeniem podwiązać lub zszyć koniec moczowodu dawcy za pomocą nici z poliamidu 4-0 jako holu, aby przeciągnąć koniec przez tunel pęcherza biorcy. Zamocuj moczowód dawcy z pęcherzem biorcy, zszywając przydankę moczowodu dawcy z warstwą mięśniową pęcherza biorcy na zewnątrz w czterech równoodległych pozycjach za pomocą 8-0 Szew poliamidowy monofilamentowy. Następnie należy przeciąć koniec moczowodu dawcy szwem na zewnątrz pęcherza biorcy i pozwolić moczowodowi dawcy skurczyć się z powrotem do pęcherza biorcy.

Umieść jelita z powrotem w jamie brzusznej i zamknij nacięcie brzuszne ciągłymi szwami w warstwie mięśniowej, a następnie warstwie skóry szwem z monofilamentu poliamidowego 4-0. Po dziesięciu tygodniach od przeszczepu barwienie hematoksyliną i eozyną oraz barwienie okresowym przesunięciem kwasu ujawniło stwardnienie kłębuszków nerkowych, zwłóknienie śródmiąższowe, zanik kanalików i stwardnienie śródmiąższowe tętnicze w alloprzeszczepie nerkowym w przeciwieństwie do nerki izogenicznej. Zabarwienie srebrem wykazało pogrubienie błony podstawnej kłębuszków nerkowych w nerce przeszczepu alloidalnego w porównaniu z nerką przeszczepu isogenicznego, co wskazuje na sukces ortotopowego modelu przeszczepu nerki u szczurów.

Ponieważ otwór naczyniowy nerki jest bardzo cienki, aby uniknąć nieprawidłowego szycia, należy pamiętać o wykonaniu zespolenia w polu o dużym powiększeniu.