Name: Poprawa unerwienia nerek łagodziła nadciśnienie indukowane przez infuzję angiotensyny II (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Poznaj procedurę denerwacji nerki w myszy z nadciśnieniem indukowanym przez angiotensynę II. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów regulacji ciśnienia tętniczego i przerostu serca.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (81770420), Komisję Nauki i Technologii Gminy Szanghaj (20140900600), Szanghajskie Kluczowe Laboratorium Klinicznej Medycyny Geriatrycznej (13dz2260700), Szanghajską Miejską Kluczową Specjalizację Kliniczną (shslczdzk02801) oraz Centrum geriatrycznej choroby wieńcowej, Szpital Huadong Stowarzyszony z Uniwersytetem Fudan.

Wszystkie procedury eksperymentalne na zwierzętach były zgodne z odpowiednim Przewodnikiem etycznym dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych (publikacja NIH nr 85-23, poprawiona w 2011 roku) i zostały zatwierdzone przez komitety ds. badań na zwierzętach szpitala Huadong afiliowanego przy Uniwersytecie Fudan. Czternastotygodniowe samce myszy C57BL/6 (28-30g) zostały losowo podzielone na cztery grupy: grupa Sham, grupa Sham+Ang II, grupa RDN, grupa RDN+Ang II, n = 6 w każdej grupie. Wszystkie zwierzęta utrzymywano w określonych zamkniętych warunkach wolnych od czynników chorobotwórczych w pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze 24 ± 1 °C z 12-godzinnym cyklem światła/ciemności i swobodnym dostępem do standardowej karmy dla gryzoni i wody ad libitum.
1. Przygotowanie pola operacyjnego
<ol>
	<li>Zdezynfekuj stół operacyjny 70% etanolem. Ustaw temperaturę poduszki grzewczej na 37 °C.</li>
	<li>Upewnij się, że wszystkie narzędzia chirurgiczne są sterylizowane przed zabiegiem w temperaturze 121 °C przez 30 minut lub innymi metodami. Ta procedura wymaga mikronożyczek chirurgicznych, dwóch cienkich prostych kleszczy, dwóch cienkich zakrzywionych kleszczy, kleszczyków hemostatycznych, sterylnych gaz i bibułek do ważenia.</li>
</ol>
2. Nadciśnienie wywołane angiotensyną II
<ol>
	<li>Podaj meloksykam (0,5 mg/kg, SC) myszom C57BL/6 na krótko przed indukcją znieczulenia. Następnie znieczul myszy za pomocą wstrzyknięcia pentobarbitalu sodu, jak opisano wcześniej20,21. W razie potrzeby można również zastosować izofluran. Potwierdź głębokość znieczulenia za pomocą ujemnego odruchu szczypania palca u nogi.</li>
	<li>Usuń włosy z tyłu za pomocą golarki. Nałóż maść weterynaryjną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia.</li>
	<li>Umieść zwierzę na stole operacyjnym w pozycji grzbietowej. Przetrzyj i przetrzyj ogolony obszar jodonem powidonu, a następnie trzema chusteczkami z 70% etanolem.</li>
	<li>Wykonaj 1 cm nacięcie za pomocą sterylnego ostrza skalpela, prostopadle do ogona, za uchem nad łopatką przedniej nogi.</li>
	<li>Użyj sterylnego hemostatu, aby wykonać podskórny tunel pod skórą i utwórz kieszeń na pompę22. Delikatnie włożyć pompę osmotyczną wypełnioną angiotensyną II (1 000 ng/kg/min) do kieszeni. Upewnij się, że jest wystarczająco dużo wolnego miejsca, aby zszyć ranę bez rozciągania skóry.</li>
	<li>Zszyj mięsień przerwanymi szwami 6-0 Vicryl i zamknij skórę przerwanymi szwami nylonowymi 4-0. Pobrać wymaz i przetrzeć miejsce rany jodonem powidonu. Wykonaj tę samą operację z równą objętością soli fizjologicznej dla grupy kontrolnej.</li>
	<li>Umieść wszystkie narzędzia chirurgiczne w sterylizatorze na 10 sekund i wymieniaj sterylne rękawiczki między operacjami. Monitoruj wszystkie myszy, aż do całkowitego wyzdrowienia.</li>
	<li>Ściśle monitoruj i obserwuj gojenie się ran u myszy co najmniej dwa razy dziennie w pierwszym tygodniu, a następnie raz dziennie, w tym zaczerwienienie, obrzęk i infekcję. Natychmiast wykonaj sekcję, jeśli myszy umrą podczas infuzji Ang II.</li>
	<li>Mierz ciśnienie krwi na początku badania i co tydzień po infuzji Ang II za pomocą metody pletyzmografii mankietu ogonowego23 u świadomych myszy. Upewnij się, że eksperymenty z pomiarem ciśnienia krwi są przeprowadzane w cichym miejscu, w temperaturze 22 ± 2 °C, gdzie myszy są aklimatyzowane przez 1 godzinę przed rozpoczęciem eksperymentu. Przyzwyczajaj myszy przez co najmniej 5 kolejnych dni przed wyjściowymi pomiarami ciśnienia krwi23,24.</li>
</ol>
3. Obustronne odnerwienie nerek
<ol>
	<li>Wybierz myszy z podwyższonym ciśnieniem krwi (BP) ≥140/90 mmHg lub 25% wzrostem skurczowego ciśnienia tętniczego/rozkurczowego ciśnienia krwi, 1 tydzień po infuzji Ang II.</li>
	<li>Zapisz masę ciała zwierzęcia przed operacją i wybierz zwierzęta o minimalnej wadze 24 g do operacji odnerwienia nerek.</li>
	<li>Znieczulij myszy za pomocą pentobarbitalu sodu. Potwierdź głębokość znieczulenia za pomocą ujemnego odruchu szczypania palca u nogi.</li>
	<li>Usuń włosy na brzuchu za pomocą golarki. Wykonaj tę procedurę ostrożnie i dokładnie, aby uniknąć zanieczyszczenia chirurgicznego.</li>
	<li>Umieść myszy na stole operacyjnym, trzymając brzuch w górze i przymocuj jego kończyny taśmą. Zdezynfekuj skórę brzucha jodonem powidonu, a następnie użyj trzech chusteczek z 70% etanolem.</li>
	<li>Wykonaj 2 cm brzuszne nacięcie brzucha w linii środkowej za pomocą ostrza skalpela. Odciągnąć jelito gazą nasączoną solą fizjologiczną o temperaturze 37 °C, aby odsłonić lewą tętnicę nerkową. Ostrożnie, ale tępo wypreparuj tłuszcz z tętnicy nerkowej za pomocą zakrzywionej pęsety. (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A-C).</li>
	<li>Pokrój papier wagowy na prostokąt o tym samym rozmiarze co tętnica nerkowa sterylnymi ostrymi nożyczkami. Dla porównania, przytnij papier do ważenia w tym samym rozmiarze, jak pokazano na przerywanej linii w <silna klasa="xfig">Rysunek 1C. 
	UWAGA: Jest to krytyczna część operacji, spróbuj wyciąć kilka kawałków papieru do ważenia na raz, aby zachować ten sam kształt.</li>
	<li>Zanurz papier wagowy w 10% roztworze fenolu/etanolu na co najmniej 30 sekund. Przykryj powierzchnię lewej tętnicy nerkowej i owiń naczynie papierem do ważenia, trzymaj przez 2 minuty (<silna klasa="xfig">Rysunek 1D). Użyj gazy, aby chronić otaczające tkanki, aby papier wagowy nie dotykał otaczających nerek i jelit. 
	UWAGA: Roztwór fenolu jest stabilny w plastikowych probówkach, ale nie w szklanych fiolkach. Dlatego roztwór musi być świeżo przygotowany dla każdego eksperymentu18.</li>
	<li>Wykonaj tę samą procedurę dla prawej tętnicy nerkowej. Wykonaj pozorowaną operację za pomocą papieru wagowego zanurzonego w soli fizjologicznej.</li>
	<li>Ustaw mięśnie w ich początkowej pozycji i zamknij otrzewną szwami 6-0 Vicryl w przerywanym szwie. Następnie zamknij skórę przerwanymi nylonowymi szwami 4-0. Monitoruj wszystkie myszy, aż do całkowitego wyzdrowienia.</li>
</ol>
4. Opieka pooperacyjna
<ol>
	<li>Nałóż jod powidonu na nacięcie i umieść zwierzę w ciepłym kocu elektrycznym w celu rekonwalescencji i monitorowania pooperacyjnego.</li>
	<li>Monitoruj myszy dwa razy dziennie, aby ocenić zaczerwienienie, obrzęk i ból lub infekcję jamy brzusznej. Meloksykam (0,5 mg/kg mc., SC) należy podać wszystkim myszom około 1 godziny przed i 24 godziny po zabiegu RDN.</li>
</ol>

<ol><li>Messerli, F. H., Rimoldi, S. F., Bangalore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transition+from+hypertension+to+heart+failure%3A+Contemporary+update%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">The transition from hypertension to heart failure: Contemporary update.</a> JACC Heart Failure. 5 (8), 543-551 (2017).</li>
<li>Lackland, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+recent+clinical+trials+and+hypertension+guidelines+on+stroke+and+future+cerebrovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Implications of recent clinical trials and hypertension guidelines on stroke and future cerebrovascular research.</a> Stroke. 49 (3), 772-779 (2018).</li>
<li>Rossignol, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+double+challenge+of+resistant+hypertension+and+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">The double challenge of resistant hypertension and chronic kidney disease.</a> The Lancet. 386 (10003), 1588-1598 (2015).</li>
<li>Du, X., Patel, A., Anderson, C. S., Dong, J., Ma, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+cardiovascular+disease+in+China+and+opportunities+for+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+International.+Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of cardiovascular disease in China and opportunities for improvement.</a> JACC International. Journal of the American College of Cardiology. 73 (24), 3135-3147 (2019).</li>
<li>Valenzuela, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifestyle+interventions+for+the+prevention+and+treatment+of+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Lifestyle interventions for the prevention and treatment of hypertension.</a> Nature Review Cardiology. 18 (4), 251-275 (2021).</li>
<li>Krum, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheter-based+renal+sympathetic+denervation+for+resistant+hypertension%3A+a+multicentre+safety+and+proof-of-principle+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Catheter-based renal sympathetic denervation for resistant hypertension: a multicentre safety and proof-of-principle cohort study.</a> The Lancet. 373 (9671), 1275-1281 (2009).</li>
<li>Bhatt, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+controlled+trial+of+renal+denervation+for+resistant+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">A controlled trial of renal denervation for resistant hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 370 (15), 1393-1401 (2014).</li>
<li>Kjeldsen, S. E., Narkiewicz, K., Burnier, M., Oparil, S. Renal denervation achieved by endovascular delivery of ultrasound in RADIANCE-HTN SOLO or by radiofrequency energy in SPYRAL HTN-OFF and SPYRAL-ON lowers blood pressure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKjeldsen%2C+SE+%22Blood+Press%22">Blood Press</a>. 27 (4), 185-187 (2018).</li>
<li>Böhm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+catheter-based+renal+denervation+in+the+absence+of+antihypertensive+medications+%28SPYRAL+HTN-OFF+MED+Pivotal%29%3A+a+multicentre%2C+randomised%2C+sham-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy of catheter-based renal denervation in the absence of antihypertensive medications (SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal): a multicentre, randomised, sham-controlled trial.</a> The Lancet. 395 (10234), 1444-1451 (2020).</li>
<li>Azizi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+ultrasound+renal+denervation+to+treat+hypertension+%28RADIANCE-HTN+SOLO%29%3A+a+multicentre%2C+international%2C+single-blind%2C+randomised%2C+sham-controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Endovascular ultrasound renal denervation to treat hypertension (RADIANCE-HTN SOLO): a multicentre, international, single-blind, randomised, sham-controlled trial.</a> The Lancet. 391 (10137), 2335-2345 (2018).</li>
<li>Kandzari, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+renal+denervation+on+blood+pressure+in+the+presence+of+antihypertensive+drugs%3A+6-month+efficacy+and+safety+results+from+the+SPYRAL+HTN-ON+MED+proof-of-concept+randomised+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of renal denervation on blood pressure in the presence of antihypertensive drugs: 6-month efficacy and safety results from the SPYRAL HTN-ON MED proof-of-concept randomised trial.</a> The Lancet. 391 (10137), 2346-2355 (2018).</li>
<li>Townsend, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheter-based+renal+denervation+in+patients+with+uncontrolled+hypertension+in+the+absence+of+antihypertensive+medications+%28SPYRAL+HTN-OFF+MED%29%3A+a+randomised%2C+sham-controlled%2C+proof-of-concept+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Catheter-based renal denervation in patients with uncontrolled hypertension in the absence of antihypertensive medications (SPYRAL HTN-OFF MED): a randomised, sham-controlled, proof-of-concept trial.</a> The Lancet. 390 (10108), 2160-2170 (2017).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+restrains+the+inflammatory+response+in+myocardial+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Renal denervation restrains the inflammatory response in myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Basic Research in Cardiology. 115 (2), 15(2020).</li>
<li>Sharp, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+prevents+heart+failure+progression+via+inhibition+of+the+renin-angiotensin+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Renal denervation prevents heart failure progression via inhibition of the renin-angiotensin system.</a> Journal of the American College of Cardiology. 72 (21), 2609-2621 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+attenuates+progression+of+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+independent+of+blood+pressure+lowering%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Renal denervation attenuates progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice independent of blood pressure lowering.</a> Hypertension. 65 (4), 758-765 (2015).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+mitigates+atherosclerosis+in+ApoE-%2F-+mice+via+the+suppression+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Renal denervation mitigates atherosclerosis in ApoE-/- mice via the suppression of inflammation.</a> American Journal of Translational Research. 12 (9), 5362-5380 (2020).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+promotes+atherosclerosis+in+hypertensive+apolipoprotein+E-deficient+mice+infused+with+Angiotensin+II%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Renal denervation promotes atherosclerosis in hypertensive apolipoprotein E-deficient mice infused with Angiotensin II.</a> Frontiers in Physiology. 8, 215(2017).</li>
<li>Eriguchi, M., Tsuruya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+sympathetic+denervation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Renal sympathetic denervation in rats.</a> Methods in Molecular Biology. 1397, 45-52 (2016).</li>
<li>Thukkani, A. K., Bhatt, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+therapy+for+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Renal denervation therapy for hypertension.</a> Circulation. 128 (20), 2251-2254 (2013).</li>
<li>Zhang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NAD%28%2B%29+administration+decreases+microvascular+damage+following+cardiac+ischemia%2Freperfusion+by+restoring+autophagic+flux%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">NAD(+) administration decreases microvascular damage following cardiac ischemia/reperfusion by restoring autophagic flux.</a> Basic Research in Cardiology. 115 (5), 57(2020).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+renal+sympathetic+denervation+ameliorates+renal+fibrosis+and+delays+the+onset+of+hypertension+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Long-term renal sympathetic denervation ameliorates renal fibrosis and delays the onset of hypertension in spontaneously hypertensive rats.</a> American Journal of Translational Research. 10 (12), 4042-4053 (2018).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Angiotensin+II+infusion+using+osmotic+pumps+induces+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (103), e53191(2015).</li>
<li>Wilde, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tail-cuff+technique+and+its+influence+on+central+blood+pressure+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Tail-cuff technique and its influence on central blood pressure in the mouse.</a> Journal of the American Heart Association. 6 (6), 005204(2017).</li>
<li>Daugherty, A., Rateri, D., Hong, L., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording%2C+a+tail-cuff+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (27), e1291(2009).</li>
<li>Esler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illusions+of+truths+in+the+Symplicity+HTN-3+trial%3A+generic+design+strengths+but+neuroscience+failings%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Illusions of truths in the Symplicity HTN-3 trial: generic design strengths but neuroscience failings.</a> Journal of the American Society of Hypertension. 8 (8), 593-598 (2014).</li>
<li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+sustained-release+deoxycorticosterone+acetate-induced+hypertension+in+Bama+miniature+pigs+for+renal+sympathetic+nerve+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Low-dose sustained-release deoxycorticosterone acetate-induced hypertension in Bama miniature pigs for renal sympathetic nerve denervation.</a> Journal of the American Society of Hypertension. 11 (5), 314-320 (2017).</li>
<li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+safety+of+renal+denervation+as+assessed+by+optical+coherence+tomography%3A+pre-+and+post-procedure+comparison+with+multi-electrode+ablation+catheter+in+animal+experiment%5BTitle%5D)+AND+%22Hellenic+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The safety of renal denervation as assessed by optical coherence tomography: pre- and post-procedure comparison with multi-electrode ablation catheter in animal experiment.</a> Hellenic Journal of Cardiology. 61 (3), 190-196 (2020).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+stereotactic+radiotherapy+for+renal+denervation+in+a+swine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Noninvasive stereotactic radiotherapy for renal denervation in a swine model.</a> Journal of the American College of Cardiology. 74 (13), 1697-1709 (2019).</li>
</ol>

Nie ma żadnych konfliktów interesów, finansowych lub innych, jak deklarują autorzy.

To, czy RDN może obniżać ciśnienie krwi, stało się kontrowersyjne od czasu publikacji negatywnego wyniku badania symplicity HTN-3 7,25. Jednak kilka badań klinicznych i eksperymentów na zwierzętach wykazało pozytywne i skuteczne wyniki RDN u ludzi i zwierząt z nadciśnieniemtętniczym 9,10,11,12,13,14,15,16,17.<sup class="xref"...

Nadciśnienie jest główną przewlekłą chorobą sercowo-naczyniową na całym świecie. Niekontrolowane nadciśnienie może uszkodzić narządy docelowe i przyczynić się do niewydolności serca, udaru mózgu i przewlekłych chorób nerek1,2,3. Częstość występowania nadciśnienia tętniczego wzrosła w Chinach z 20% do 31% w latach 1991-2007. Liczba dorosłych z nadciśnieniem tętniczym w Chinach może się podwoić po niedawnej rewizji kryteriów diagnostycznych nadciśnienia (130/80 mmHg)4. Nadciśnienie tętnicze można kontrolować za pomocą leków, jednak około 20% pacjentów nie jest w stanie kontrolować nadciśnienia, nawet jeśli otrzymują co najmniej trzy leki przeciwnadciśnieniowe (w tym jeden moczopędny) w maksymalnej tolerowanej dawce, co może prowadzić do rozwoju nadciśnienia lekoopornego5.
Udowodniono, że denerwacja współczulna nerek (RDN) jest potencjalnym sposobem leczenia nadciśnienia. W 2009 roku Krum i współpracownicy po raz pierwszy poinformowali o leczeniu opornego nadciśnienia tętniczego za pomocą RDN. Stwierdzono, że przezskórna ablacja tętnicy nerkowej może skutecznie powodować trwałe obniżenie ciśnienia krwi u pacjentów6. Jednak niepowodzenie badania Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) utrudniło zastosowanie RDN7, przekształcając RDN w kontrowersyjną terapię. Niemniej jednak perspektywa RDN nie została jeszcze wykluczona. Ostatnie badania kliniczne, w tym RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED i SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal, potwierdziły skuteczność RDN w leczeniu nadciśnienia tętniczego8,9,10,11,12. W związku z tym konieczne jest przeprowadzenie bardziej szczegółowych badań mechanistycznych, aby zbadać wpływ RDN.
Ogólnym celem tego badania jest pokazanie, jak RDN u myszy może być zmodyfikowany, aby uzyskać prostszą i bardziej stabilną operację. W wielu eksperymentach badano różne podejścia RDN, takie jak krioablacja wewnątrznaczyniowa, ultradźwięki pozaustrojowe i miejscowe zastosowanie substancji chemicznej lub neurotoksyny w różnych modelach zwierzęcych13,14,15,16,17. Model RDN wygenerowany przy użyciu ablacji chemicznej fenolem jest dobrze ugruntowanym modelem eksperymentalnym do badania patogenezy aktywacji układu współczulnego w nadciśnieniu. Model ten jest generowany przez chemiczną korozję nerkowych nerek współczulnych za pomocą 10% roztworu fenolu/etanolu za pomocą wacika bawełnianego18. Z jednej strony konwencjonalny RDN potencjalnie hamuje aktywność współczulną nerek, co z kolei zmniejsza wydzielanie reniny i wchłanianie zwrotne sodu oraz zwiększa przepływ krwi przez nerki. Z drugiej strony hamuje układ renina-angiotensyna-aldosteron19. W ten sposób RDN ma korzystny wpływ na nadciśnienie. Jednak w modelu RDN generowanym przez ablację chemiczną brakuje kryteriów ablacji i czasu ablacji, a szczegóły procedury eksperymentalnej są jeszcze niejasne. Ponadto nie ma dostępnych raportów technicznych. W tym raporcie opisujemy protokół chirurgiczny generowania modelu RDN z fenolem przy użyciu papieru do ważenia w nadciśnieniu indukowanym angiotensyną II (Ang II) u myszy C57BL / 6. Owijamy tętnicę nerkową bibułą wagową zawierającą fenol i ujednolicamy czas ablacji, co pomaga ustalić bardziej powtarzalny, wiarygodny model RDN. Ten eksperymentalny model ma na celu ocenę wpływu RDN na nadciśnienie tętnicze.

<table><tbody><tr><td>Angiotensyna II</td><td>Sangon Biotech</td><td>CAS: 4474-91-3</td><td>Aby wykonać model animolu z nadciśnieniem</td></tr> tętniczym <tr><td>Przeciwciało przeciw hydroksylazie tyrozyny</td><td>Abcam</td><td>ab137869</td><td>Aby ocenić ekspresję TH nerwów nerkowych</td></tr><tr><td>Analiza ciśnienia krwi</td><td>Visitech Systems</td><td>BP-2000</td><td>Zmierz ciśnienie krwi myszy</td></tr><tr><td>Mini-pompa osmotyczna</td><td>DURECT Corporation</td><td>CA 95014</td><td>Aby napełnić Angiotensyną II</td></tr><tr><td>Norepinefryna Zestaw ELISA</td><td>Abcam</td><td>ab287789</td><td>do pomiaru poziomu noradrenaliny w nerkach</td></tr><tr><td>Phenol</td><td>Sangon Biotech</td><td>CAS: 108-95-2</td><td>Uszkodzić nerek współczulnych</td></tr><tr><td>Papier wagowy</td><td>Sangon Biotech</td><td>F512112</td><td>Aby zniszczyć nerw nerkowy za pomocą papieru wagowego zanurzonego w fenolu; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

poprawa unerwienia nerek łagodziła nadciśnienie indukowane przez infuzję angiotensyny ii

Improved Renal Denervation Mitigated Hypertension Induced by Angiotensin II Infusion

Korzyści płynące z odnerwienia współczulnego nerek (RDN) na ciśnienie krwi zostały udowodnione w wielu badaniach klinicznych w ostatnich latach. Jednak mechanizm regulacyjny RDN na nadciśnienie pozostaje nieuchwytny. Dlatego ważne jest, aby ustalić prostszy model RDN u myszy. W tym badaniu mini pompy osmotyczne wypełnione angiotensyną II wszczepiono 14-tygodniowym myszom C57BL/6. Tydzień po wszczepieniu minipompy osmotycznej przeprowadzono zmodyfikowaną procedurę RDN na obustronnych tętnicach nerkowych myszy przy użyciu fenolu. Myszom dopasowanym pod względem wieku i płci podawano sól fizjologiczną i podawano jako grupę pozorowaną. Ciśnienie krwi mierzono na początku badania, a następnie co tydzień przez 21 dni. Następnie pobrano tętnicę nerkową, aortę brzuszną i serce do badania histologicznego za pomocą barwienia H&E i Massona. W tym badaniu przedstawiamy prosty, praktyczny, powtarzalny i ustandaryzowany model RDN, który może kontrolować nadciśnienie tętnicze i łagodzić przerost mięśnia sercowego. Technika ta może denerwować obwodowe nerwy współczulne nerek bez uszkodzenia tętnicy nerkowej. W porównaniu z poprzednimi modelami, zmodyfikowany RDN ułatwia badanie patobiologii i patofizjologii nadciśnienia tętniczego.

Statystyka 
Wszystkie dane przedstawiono jako średnia ± odchylenie standardowe. W eksperymentach obejmujących trzy lub więcej warunków zastosowano jednoczynnikową analizę wariancji (ANOVA), a następnie testy post-hoc Bonferroniego do porównań między poszczególnymi grupami. Wartość p równa lub mniejsza niż 0,05 uznana została za istotną. Do wykonania wszystkich analiz statystycznych wykorzystano komercyjne oprogramowanie.
Wzrost ciśnienia tętniczego wywołany przez An...

Tutaj prezentujemy protokół odnerwienia współczulnego nerek (RDN) u myszy z nadciśnieniem wywołanym infuzją angiotensyny II. Zabieg jest powtarzalny, wygodny i pozwala na zbadanie mechanizmów regulacyjnych RDN na nadciśnienie tętnicze i przerost mięśnia sercowego.

Poprawa unerwienia nerek łagodziła nadciśnienie indukowane przez infuzję angiotensyny II

The benefits of renal sympathetic denervation (RDN) on blood pressure have been proved in a large number of clinical trials in recent years. However, the ...

Odnerwienie współczulne nerek jest potencjalnym sposobem leczenia nadciśnienia tętniczego, co zostało udowodnione w wielu badaniach klinicznych. Ta technika odnerwia nerwy nerkowe o swobodnym przepływie bez uszkodzenia tętnicy nerkowej. Co więcej, jest to prosty, krytyczny, powtarzalny i ustandaryzowany model.Procedurę zademonstruje Ming Wang, asystent laboratoryjny z mojego laboratorium. Zacznij od zdezynfekowania stołu operacyjnego 70% etanolem, a następnie dostosuj temperaturę poduszki grzewczej do 37 stopni Celsjusza. Przed zabiegiem wysterylizuj wszystkie narzędzia chirurgiczne, w tym nożyczki mikrochirurgiczne, cienkie kleszcze proste, kleszcze drobno zakrzywione, kleszczyki hemostatyczne, sterylne gazy i papier do ważenia w temperaturze 121 stopni Celsjusza przez 30 minut.Po znieczuleniu 14-tygodniowego samca myszy C57BKL/6 usuń włosy z pleców za pomocą golarki, a następnie nałóż maść weterynaryjną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu. Umieść mysz na stole operacyjnym w pozycji grzbietowej. Przesuń i przetrzyj ogolony obszar jodonem powidonu, a następnie trzema chusteczkami z 70% etanolem.Za pomocą sterylnego ostrza skalpela wykonaj jednocentymetrowe nacięcie prostopadłe do ogona za uchem nad łopatką przedniej nogi. Następnie za pomocą sterylnego hemostatu wykonaj podskórny tunel pod skórą i utwórz kieszeń na pompę. Delikatnie wprowadzić pompę osmotyczną wypełnioną angiotensyną II do kieszonki, zapewniając wystarczająco dużo wolnego miejsca do zszycia rany bez rozciągania skóry.Zszyj mięsień przerwanymi szwami 6-0 Vicryl i zamknij skórę przerwanymi szwami nylonowymi 4-0. Następnie pobierz wymaz i przetrzyj miejsce rany powidonem-jodem. Umieść wszystkie narzędzia chirurgiczne w sterylizatorze na 10 sekund i wymieniaj sterylne rękawiczki między operacjami.Monitoruj mysz, aż w pełni się zregeneruje. Uważnie monitoruj i obserwuj gojenie się ran co najmniej dwa razy dziennie przez pierwszy tydzień, a następnie raz dziennie, w tym zaczerwienienie, obrzęk i infekcję. Natychmiast należy przeprowadzić sekcję, jeśli mysz umrze podczas infuzji angiotensyny II.Pomiar ciśnienia krwi na początku badania i co tydzień po infuzji angiotensyny II metodą pletyzmografii mankietu ogonowego u przytomnych myszy. Tydzień po infuzji angiotensyny II wybierz myszy z podwyższonym ciśnieniem krwi i zapisz ich wagę. Wybierz zwierzęta o minimalnej wadze 24 gramów do operacji odnerwienia nerek.Następnie usuń włosy na brzuchu znieczulonej myszy za pomocą golarki, a następnie umieść mysz na stole operacyjnym. Trzymaj brzuch w górze i przymocuj kończyny taśmą. Zdezynfekuj skórę brzucha jodonem powidonu, a następnie użyj trzech chusteczek z 70% etanolem.Po wykonaniu dwucentymetrowego brzusznego nacięcia brzucha w linii środkowej, odciągnij jelito gazą nasączoną solą fizjologiczną o temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby odsłonić lewą tętnicę nerkową. Ostrożnie, ale bez ogródek, wypreparuj tłuszcz z tętnicy nerkowej za pomocą zakrzywionej pęsety. Za pomocą sterylnych ostrych nożyczek pokrój papier wagowy na prostokąt o tej samej wielkości co tętnica nerkowa.Wytnij kilka kawałków papieru do ważenia na raz, aby zachować ten sam kształt. Zanurz papier wagowy w 10% roztworze fenolu i etanolu na co najmniej 30 sekund. Przykryj powierzchnię lewej tętnicy nerkowej i owiń naczynie papierem wagowym na dwie minuty.Użyj gazy, aby chronić otaczające tkanki, aby papier wagowy nie dotykał nerki i jelita. Powtórz tę samą procedurę dla prawej tętnicy nerkowej. Po operacji należy przestawić mięśnie do ich początkowej pozycji i zamknąć otrzewną szwami 6-0 Vicryl w przerywanym wzorze szwów, a następnie zamknąć skórę przerwanymi szwami nylonowymi 4-0.Monitoruj wszystkie myszy, aż do całkowitego wyzdrowienia. Znaczny wzrost skurczowego ciśnienia krwi obserwowano po tygodniu od infuzji angiotensyny II. Grupa z odnerwieniem współczulnym nerek (RDN), angiotensyna II wykazała znaczne obniżenie skurczowego ciśnienia krwi w porównaniu z grupą otrzymującą angiotensynę II pozorowaną po 21 dniach od zabiegu RDN.Nie zaobserwowano istotnej różnicy między grupą pozorowaną a grupą RDN po dwóch tygodniach od zabiegu RDN. Pokazano barwienie hematoksyliną i eozyną nerkowego nerwu współczulnego i tętnicy nerkowej. W czterech grupach nie zaobserwowano pogrubienia warstwy wewnętrznej tętnicy nerkowej.W porównaniu z grupą pozorów, jądra rozdrobnione i piknotyczne, w obu grupach RDN obserwowano trawienie i obrzęk tkanki wewnątrznerowej. Immunohistochemia pęczków nerwowych wykazała, że ekspresja hydroksylazy tyrozynowej była istotnie zmniejszona w grupie RDN i RDN angiotensyny II w porównaniu z obiema grupami pozorów. Zawartość noradrenaliny w korze nerkowej w nerkach odnerwionych zarówno w grupie normotensyjnej, jak i nadciśnieniowej była znacznie zmniejszona w porównaniu z nerką unerwionioną.Barwienie Massona nie wykazało znaczącego wzrostu błony wewnętrznej środkowej aorty brzusznej wśród grup. Reprezentatywne obrazy mięśnia sercowego w różnych grupach są pokazane tutaj. Przerost serca wywołany infuzją angiotensyny II uległ poprawie po leczeniu RDN poprzez zmniejszenie zwłóknienia śródmiąższowego i wielkości kardiomiocytów.Podczas zabiegu nie należy dotykać fenolu otaczającej tkanki, z wyjątkiem tętnicy nerkowej, ponieważ może to spowodować niedrożność jelit, infekcję jamy brzusznej i zwężenie tętnicy nerkowej. Metoda ta może ustanowić ustandaryzowany model RDN, który pomoże w badaniu mechanizmów kontrolujących nadciśnienie. Przyszłe zastosowania tej techniki mogą przyczynić się do rozszerzenia szlaków, które leżą u podstaw procesu nadciśnienia tętniczego i przerostu mięśnia sercowego.

improved-renal-denervation-mitigated-hypertension-induced-angiotensin

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film przedstawia procedurę odnerwienia współczulnego tętnicy nerkowej w mysim modelu nadciśnieniowym indukowanym angiotensyną II, wykorzystującą fenol do zakłócenia funkcji nerwu współczulnego i obniżenia ciśnienia krwi.

Współczulne unerwienie tętnic nerkowych w mysim modelu nadciśnienia indukowanego angiotensyną II

Opisano dwuetapową metodę leczenia przewlekłej choroby nerek (PChN) u szczura Lewisa poprzez chirurgiczne usunięcie 5/6 masy nerkowej. Połączenie zabiegu chirurgicznego, hamowania NOS i diety bogatej w sól prowadzi do powstania modelu przypominającego ludzką PChN, co pozwala na badanie mechanizmów przyczynowych i opracowywanie nowych interwencji terapeutycznych.

5/6 nefrektomia w połączeniu z dietą bogatą w sól i hamowaniem syntazy tlenku azotu w celu wywołania przewlekłej choroby nerek u szczura Lewisa

Znieczulone myszy wykazują niefizjologiczne ogólnoustrojowe ciśnienie krwi, co uniemożliwia miarodajną ocenę tonu autonomicznego, biorąc pod uwagę ścisły związek między ciśnieniem krwi a autonomicznym układem nerwowym. W związku z tym przedstawiono nowatorską metodę jednoczesnego rejestrowania aktywności nerkowego nerwu współczulnego i ciśnienia krwi za pomocą wlewu dożylnego u przytomnych myszy.

Nowatorskie podejście do jednoczesnego rejestrowania aktywności nerek współczulnych i ciśnienia krwi za pomocą wlewu dożylnego u przytomnych, nieskrępowanych myszy.

Zmodyfikowany model myszy Goldblatt z 2 nerkami i klipsem (2K1C) został opracowany przy użyciu rurki poliuretanowej do zainicjowania zwężenia tętnicy nerkowej, wywołując wzrost ekspresji reniny i uszkodzenie nerek. W tym miejscu opisujemy szczegółową procedurę przygotowania i umieszczenia mankietu na tętnicy nerkowej w celu wygenerowania powtarzalnego i spójnego modelu myszy 2K1C.

Zmodyfikowany mysi model regulacji reniny w zwężeniu tętnicy nerkowej z jedną nerką i jednym klipsem

Tutaj prezentujemy protokół opisujący farmakologię sieciową i techniki dokowania molekularnego, aby zbadać mechanizm działania Jiawei Shengjiang San (JWSJS) w leczeniu nefropatii cukrzycowej.

Antagonistyczny wpływ Jiawei Shengjiang San na szczurzy model nefropatii cukrzycowej: związany ze szlakiem sygnałowym EGFR/MAPK3/1

Odnerwienie nerek za pośrednictwem ozonu (RDN) sterowane przez CT poprzez wstrzyknięcie mieszaniny gazówO2-O 3 wokół zwojów lędźwiowych zmniejsza obciążenie lekami przeciwnadciśnieniowymi i osiąga lepsze tempo kontroli ciśnienia krwi w domu. Przedstawiamy nowatorską, uproszczoną, jednostronną i pozbawioną kontrastu technikę RDN, która minimalizuje uszkodzenie tętnicy nerkowej w leczeniu pacjentów z opornym nadciśnieniem tętniczym (RH).

Lepsza kontrola ciśnienia krwi w domu dzięki denerwacji nerek za pośrednictwem ozonu pod kontrolą tomografii komputerowej u pacjentów z opornym nadciśnieniem tętniczym

Przewlekłe nadciśnienie oczne jest wywoływane za pomocą laserowej fotokoagulacji siatki beleczkowej w oczach myszy. Ciśnienie wewnątrzgałkowe (IOP) utrzymuje się podwyższone przez kilka miesięcy po leczeniu laserowym. Spadek ostrości wzroku i wrażliwości na kontrast u zwierząt doświadczalnych monitoruje się za pomocą testu optomotorycznego.

Mysi model przewlekłego nadciśnienia ocznego indukowany laserem w celu scharakteryzowania wad wzroku

Model przecięcia nerwu piszczelowego jest dobrze tolerowanym, sprawdzonym i powtarzalnym modelem zaniku mięśni szkieletowych. Modelowy protokół chirurgiczny został opisany i zademonstrowany na myszach C57Black6.

Przecięcie nerwu piszczelowego - standaryzowany model atrofii mięśni szkieletowych wywołanej denerwacją u myszy

Stopień dysfunkcji naczyń krwionośnych i przyczyniających się do nich mechanizmów fizjologicznych można ocenić u pacjentów z przewlekłą chorobą nerek, mierząc rozszerzenie zależne od przepływu tętnicy ramiennej, prędkość fali tętna aorty i ekspresję białka w komórkach śródbłonka naczyniowego.

Ocena funkcji naczyń krwionośnych u pacjentów z przewlekłą chorobą nerek

Wczesne stadium dysfunkcji hemodynamicznej jest kluczowe dla rozwoju choroby nerek. Metodologie wykrywania są jednak ograniczone. Najnowsze postępy w ultrasonografii zapewniają nieinwazyjną, dokładną opcję wczesnego wykrywania uszkodzenia nerek. Badanie to przedstawia krok po kroku, ultrasonograficzną metodologię wykrywania dysfunkcji nerek przy użyciu szczurzego modelu nefrotoksyczności wywołanej lekiem.

Wczesne wykrywanie farmakologicznej dysfunkcji hemodynamicznej nerek za pomocą technologii sonograficznej u szczurów

Poznaj procedurę denerwacji nerki w myszy z nadciśnieniem indukowanym przez angiotensynę II. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów regulacji ciśnienia tętniczego i przerostu serca.

Poprawa unerwienia nerek łagodziła nadciśnienie indukowane przez infuzję angiotensyny II

Przeglądaj więcej filmów