Name: Metody badania wkładu macicy w powstanie ciąży w mysim modelu owariektomii (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-07T12:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Poznaj metody badania wkładu macicy w powstanie ciąży w mysim modelu owariektomii. Protokoły umożliwiają badanie regulacji osi HPG i biologii rozrodczej niezależnie od wpływu jajników.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była możliwa dzięki Wsparciu Infrastruktury Operacyjnej Rządu Stanu Wiktoria oraz Narodowej Radzie ds. Zdrowia i Badań Medycznych (NHMRC) Rządu Australii IRIISS. Prace te były wspierane przez Wydział Medycyny, Pielęgniarstwa i Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Monash Grant Access Grant dla A.L.W. (Winship-PAG18-0343) w celu uzyskania dostępu do platformy usług reprodukcyjnych Monash. A.L.W. jest wspierany przez DECRA DE21010037 finansowania z Australijskiej Rady ds. Badań Naukowych (ARC). J.N.H. i L.R.A. są wspierane przez stypendium Australijskiego Rządowego Programu Szkoleń Badawczych. L.R.A. jest wspierana przez stypendium Monash Graduate Excellence Scholarship. K.J.H. jest wspierany przez FT190100265 ARC Future Fellowship.

<ol><li>Szamatowicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+reproductive+medicine+-+Possibilities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Ginekologia+Polska%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations.</a> Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).</li>
<li>Evans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertile+ground%3A+Human+endometrial+programming+and+lessons+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Fertile ground: Human endometrial programming and lessons in health and disease.</a> Nature Reviews. Endocrinology. 12 (11), 654-667 (2016).</li>
<li>Norwitz, E. R., Schust, D. J., Fisher, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+and+the+survival+of+early+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Implantation and the survival of early pregnancy.</a> The New England Journal of Medicine. 345 (19), 1400-1408 (2001).</li>
<li>Zinaman, M. J., Clegg, E. D., Brown, C. C., O'Connor, J., Selevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+human+fertility+and+pregnancy+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">Estimates of human fertility and pregnancy loss.</a> Fertility & Sterility. 65 (3), 503-509 (1996).</li>
<li>Kupka, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproductive+technology+in+Europe%2C+2010%3A+Results+generated+from+European+registers+by+ESHRE%E2%80%A0%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Assisted reproductive technology in Europe, 2010: Results generated from European registers by ESHRE†.</a> Human Reproduction. 29 (10), 2099-2113 (2014).</li>
<li>Gleicher, N., Kushnir, V. A., Barad, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+decline+of+IVF+birth+rates+and+its+probable+causes%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Open%22%5BJournal%5D)">Worldwide decline of IVF birth rates and its probable causes.</a> Human Reproduction Open. 2019 (3), (2019).</li>
<li>Diaz-Gimeno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genomic+diagnostic+tool+for+human+endometrial+receptivity+based+on+the+transcriptomic+signature%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+%26+Sterility%22%5BJournal%5D)">A genomic diagnostic tool for human endometrial receptivity based on the transcriptomic signature.</a> Fertility & Sterility. 95 (1), 50-60 (2011).</li>
<li>Amin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+outcomes+in+recurrent+implantation+failure+patients+following+endometrial+receptivity+array+with+pre-implantation+genetic+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Cureus%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer outcomes in recurrent implantation failure patients following endometrial receptivity array with pre-implantation genetic testing.</a> Cureus. 14 (6), e26248(2022).</li>
<li>Patel, J. A., Patel, A. J., Banker, J. M., Shah, S. I., Banker, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+embryo+transfer+helps+in+improving+in+vitro+fertilization%2FICSI+outcomes+in+patients+with+recurrent+implantation+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Human+Reproductive+Sciences%22%5BJournal%5D)">Personalized embryo transfer helps in improving in vitro fertilization/ICSI outcomes in patients with recurrent implantation failure.</a> Journal of Human Reproductive Sciences. 12 (1), 59-66 (2019).</li>
<li>Khan, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+differences+between+functionalis+and+basalis+endometria+in+women+with+and+without+adenomyosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Obstetrics%2C+Gynecology%2C+and+Reproductive+Biology%22%5BJournal%5D)">Biological differences between functionalis and basalis endometria in women with and without adenomyosis.</a> European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 203, 49-55 (2016).</li>
<li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment%2C+differentiation%2C+and+impact+on+fertility%3A+2017+update%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocrine Reviews. 39 (1), 1-20 (2018).</li>
<li>Corciulo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+administration+for+physiological+estrogen+replacement+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Pulsed administration for physiological estrogen replacement in mice.</a> F1000Research. 10, 809(2021).</li>
<li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li>
<li>Griffiths, M. J., Alesi, L. R., Winship, A. L., Hutt, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+embryo+transfer+model+to+study+uterine+contributions+to+pregnancy+in+vivo+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction+%26+Fertility%22%5BJournal%5D)">Development of an embryo transfer model to study uterine contributions to pregnancy in vivo in mice.</a> Reproduction & Fertility. 3 (1), 10-18 (2022).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+from+a+mouse+model+that+epithelial+cell+migration+and+mesenchymal-epithelial+transition+contribute+to+rapid+restoration+of+uterine+tissue+integrity+during+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evidence from a mouse model that epithelial cell migration and mesenchymal-epithelial transition contribute to rapid restoration of uterine tissue integrity during menstruation.</a> PLoS One. 9 (1), e86378(2014).</li>
<li>Cousins, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgens+regulate+scarless+repair+of+the+endometrial+%26%2334%3Bwound%26%2334%3B+in+a+mouse+model+of+menstruation%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Androgens regulate scarless repair of the endometrial &#34;wound&#34; in a mouse model of menstruation.</a> FASEB Journal. 30 (8), 2802-2811 (2016).</li>
<li>Fullerton, P. T., Monsivais, D., Kommagani, R., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follistatin+is+critical+for+mouse+uterine+receptivity+and+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Follistatin is critical for mouse uterine receptivity and decidualization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), E4772-E4781 (2017).</li>
<li>Rowland, R. R., Reyes, E., Chukwuocha, R., Tokuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corticosteroid+and+immune+responses+of+mice+following+mini-osmotic+pump+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Corticosteroid and immune responses of mice following mini-osmotic pump implantation.</a> Immunopharmacology. 20 (3), 187-190 (1990).</li>
<li>Barton, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+steroid+hormones+in+oviductal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Roles of steroid hormones in oviductal function.</a> Reproduction. 159 (3), R125-R137 (2020).</li>
<li>Lee, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+regulates+embryonic+survival+during+delayed+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Autophagy regulates embryonic survival during delayed implantation.</a> Endocrinology. 152 (5), 2067-2075 (2011).</li>
<li>Hamatani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+analysis+identifies+molecular+pathways+distinguishing+blastocyst+dormancy+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Global gene expression analysis identifies molecular pathways distinguishing blastocyst dormancy and activation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (28), 10326-10331 (2004).</li>
<li>Cui, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcervical+embryo+transfer+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Transcervical embryo transfer in mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (3), 228-231 (2014).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych lub innych.

Ten artykuł zawiera instrukcje krok po kroku, jak wykonać OVX i dostarczyć hormony egzogenne do badań koncentrujących się na zrozumieniu wpływu macicy na ciążę i płodność. Podano dwa szczegółowe protokoły dotyczące dwóch eksperymentalnych zastosowań tych metod, w tym przeprowadzania transferu zarodków i sztucznego wywoływania decydualizacji.
Chociaż wykonywanie OVX może być początkowo trudne - szczególnie dla badaczy początkujących w modelach gryzoni - jest to stosunkowo prosta procedura, gdy ...

Wraz z rosnącym wykorzystaniem technologii wspomaganego rozrodu w ostatnich dziesięcioleciach, wiele barier w poczęciu zostało pokonanych, co pozwoliło wielu parom na założenie rodziny pomimo problemów z płodnością1. Deficyty oocytów lub plemników można często ominąć za pomocą zapłodnienia in vitro lub docytoplazmatycznego wstrzyknięcia plemnika; Jednak kwestie związane z receptywnością macicy i endometrium pozostają nieuchwytną "czarną skrzynką" potencjału reprodukcyjnego<klasa SUP="xref">2.
Ciąża jest ustalana, gdy wysokiej jakości zarodek pomyślnie wchodzi w interakcję z receptywnym endometrium (błoną śluzową macicy). Szanse na pomyślne zajście w ciążę w danym cyklu miesiączkowym są niewielkie i wynoszą około 30%3,4. Spośród tych, którym się powiedzie, tylko 50%-60% przechodzi powyżej 20 tygodnia ciąży, przy czym niepowodzenie implantacji jest odpowiedzialne za 75% ciąż, które nie osiągają 20 tygodnia3. Pomimo tych danych sięgających końca lat 90., dziedzina ta nie przezwyciężyła jeszcze ograniczeń spowodowanych nieodpowiednio receptywnym endometrium. Doprowadziło to do stagnacji, a czasem spadku liczby udanych zapłodnień in vitro w ostatnich latach5,6.
Kobiety z niewyjaśnioną niepłodnością często mają przesunięte okno wrażliwości lub nie są w stanie osiągnąć receptywności z nieznanych powodów. Niedawno opracowano macierz receptywności endometrium, która ocenia ekspresję setek genów w celu dostosowania czasu transferu zarodka do indywidualnego okna receptywności7,8,9. Jednak w tej dziedzinie nadal brakuje wiedzy na temat patogenezy powikłań ciąży, które ujawniają się po zakończeniu procesu implantacji.
Żeński układ rozrodczy jest bardzo dynamiczny i znajduje się pod ścisłą kontrolą hormonalną. Oś podwzgórze-przysadka-gonady (HPG) kontroluje uwalnianie hormonu luteinizującego i hormonu folikulotropowego, które regulują aspekty cyklu jajnikowego, w tym dojrzewanie pęcherzyków jajnikowych oraz aktywność estrogenu i progesteronu. Z kolei cykl menstruacyjny macicy jest regulowany przez estrogeny i progesteron10,11. Tak więc badanie mechanizmów biologicznych macicy jest skomplikowane ze względu na wpływ jajników. Na przykład, badając, w jaki sposób terapie przeciwnowotworowe mogą wpływać na macicę, może być trudno odróżnić, czy jakikolwiek zaobserwowany fenotyp macicy (taki jak utrata ciąży lub acykliczność miesiączkowania) jest wynikiem bezpośredniego uszkodzenia macicy, czy też wynikającego z uszkodzenia jajników.
Aby kompleksowo zrozumieć płodność, należy scharakteryzować wpływ macicy na ciążę. Co ważne, wiedza ta musi wykraczać poza funkcję macicy pod kontrolą jajników. Nie można tego badać u ludzi; Dlatego często stosuje się modele zwierzęce. W związku z tym owariektomia (OVX) jest powszechnie stosowana, aby umożliwić naukowcom regulację cykli rujowych gryzoni (analogicznie do cyklu miesiączkowego) poprzez egzogenne dostarczanie hormonów. Dodatkowo, OVX umożliwia badanie reakcji macicy niezależnie od wpływu jajników12. Jeśli jednak hormony nie zostaną natychmiast dostarczone po OVX, dojdzie do fenotypu menopauzy, który musi być dokładnie rozważony przez naukowców.
OVX jest często stosowany w modelach gryzoni13,14,15,16,17 i jest stosunkowo łatwy do wykonania po odpowiednim przeszkoleniu. Metody różnią się w zależności od tego, czy usuwa się sam jajnik, czy jajnik i jajowód, a także w zależności od wieku zwierzęcia (dorosłe, jeżdżące na rowerze zwierzęta mają większe jajniki z widocznym ciałkiem żółtym na ich powierzchni, co oznacza, że ich jajniki są łatwiejsze do uwidocznienia). Podobnie, istnieje wiele metod suplementacji hormonalnej, w tym zastrzyki podskórne14, granulki o spowolnionym uwalnianiu15, mini pompy osmotyczne18 oraz przeszczep jajników.
W tym artykule znajdują się szczegółowe instrukcje, jak przeprowadzić owariektomię i przygotować trzy rodzaje suplementacji hormonalnej, w tym zastrzyki podskórne, granulki o spowolnionym uwalnianiu i mini pompy osmotyczne. Podano dwa szczegółowe protokoły dla eksperymentalnych punktów końcowych, które są korzystne dla OVX, a następnie suplementacji hormonami egzogennymi (transfer zarodków i sztuczne decydualizacja). W tym artykule omówiono mocne i słabe strony każdego podejścia, mając na celu wskazanie badaczom, jak przeprowadzać badania w celu wyizolowania wpływu na macicę, szczególnie w dziedzinie badań nad ciążą i płodnością.

<table><tbody><tr><td>Mini pompy osmotyczne ALZET 1002</td><td>BioScientific</td><td>1002</td><td>Dostarcza 0,25 &mikro; L/h przez 14 dni. Stosowanie w sekcji 7 (Procedura doświadczalna - Transfer zarodków).</td></tr><tr><td>Mini pompy osmotyczne ALZET 1003D</td><td>BioScientific</td><td>1003D</td><td>Dostarcza 1 i mikro; L/h przez 14 dni. Stosować w sekcji 8 (Procedura doświadczalna - Sztuczne decydualizowanie).</td></tr><tr><td>Klipsy ALZET Reflex 7 mm</td><td>BioScientific</td><td>0009971</td><td>W zależności od preferencji do zamykania ran można używać klipsów Reflex lub klipsów Michel, w zależności od preferencji</td></tr><tr><td>Aplikator klipsów ALZET Reflex</td><td>BioScientific</td><td>0009974</td><td>Do zamykania ran można używać klipsów Reflex lub klipsów Michel, w zależności od preferencji</td></tr><tr><td>Do usuwania klipsów ALZET Reflex</td><td>BioScientific</td><td>0009976</td><td>Do zamykania ran można użyć klipsów Reflex lub klipsów Michel, w zależności od preferencji</td></tr><tr><td>Bupiwakaina do wstrzykiwań</td><td>Pfizer</td><td>NA</td><td>Stock 0,5%. Stosować w stężeniu 0,05% w soli fizjologicznej</td></tr><tr><td>Estradiol</td><td>Sigma</td><td>E8875</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Ilium</td><td>NA</td><td>Składnik aktywny 0,5 mg/ml. Użyj 3,5 ml na 400 ml butelki z klatką lub zgodnie z zaleceniami weterynarza Twojej instytucji.</td></tr><tr><td>Klipsy Michel</td><td>Daniels</td><td>NS-000242</td><td></td></tr><tr><td>Wielofunkcyjny uszczelniacz</td><td>Dow Corning</td><td>732</td><td></td></tr><tr><td>Niechirurgiczne urządzenie do transferu zarodków (NSET)</td><td>ParaTechs</td><td>60010</td><td>Zawiera wziernik 6 mm. Tylko do jednorazowego użytku.</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P0130</td><td>Rozpuszczalny w etanolu. Posługiwać się do&nbsp; sekcja 3 (Preparat hormonalny - wstrzyknięcie podskórne) i&nbsp; sekcja 4 (Preparat hormonalny - granulki o powolnym uwalnianiu)</td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P7556</td><td>Rozpuszczalny w wodzie. Stosować w sekcji 5 (Preparat hormonalny - mini pompy osmotyczne)</td></tr><tr><td>Odświeżająca maść do oczu</td><td>Allergan</td><td>NA</td><td>42,5% w/v ciekła parafina, 57,3% w/v miękka biała parafina</td></tr><tr><td>Rimadyl Carprofen</td><td>Zoetis</td><td>NA</td><td>Stock 50 mg/mL. Stosować w dawce 1 mg/ml (dla dawki 5 mg/kg)</td></tr><tr><td>Rurka gumowa</td><td>Dow Corning</td><td>508-008</td><td>Umyte w 100% etanolu i pokrojone na 1 cm kawałki. Średnica wewnętrzna 1,57 mm &plusmn; &nbsp; 0,23 mm; średnica zewnętrzna 3,18 mm &plusmn; 0,23 mm; ścianka 0,81 mm.</td></tr><tr><td>Olej sezamowy</td><td>Sigma</td><td>S3547</td><td></td></tr><tr><td>Szwy Sofsilk Silk rozmiar 3-0</td><td>Covidien</td><td>GS-832</td><td></td></tr></tbody></table>

metody badania wkładu macicy w powstanie ciąży w mysim modelu owariektomii

Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model

Aby ciąża mogła zostać stwierdzona, żywotna blastocysta musi skutecznie współdziałać z receptywną błoną śluzową macicy (endometrium), aby ułatwić implantację i tworzenie łożyska oraz umożliwić kontynuowanie ciąży. Ograniczenia w powodzeniu ciąży spowodowane wadami embrionalnymi są dobrze znane i zostały w dużej mierze przezwyciężone w ostatnich dziesięcioleciach wraz z rozwojem zapłodnienia in vitro (IVF) i technologii wspomaganego rozrodu. Do tej pory jednak dziedzina ta nie przezwyciężyła ograniczeń spowodowanych nieodpowiednio receptywnym endometrium, co doprowadziło do stagnacji wskaźników powodzenia IVF. Funkcje jajnika i endometrium są ze sobą ściśle powiązane, ponieważ hormony wytwarzane przez jajnik są odpowiedzialne za cykliczność miesiączkową endometrium. W związku z tym, podczas korzystania z modeli ciąży u gryzoni, może być trudno ustalić, czy obserwowany wynik jest spowodowany deficytem jajników czy macicy. Aby temu zaradzić, opracowano mysi model owariektomii z transferem zarodków lub sztucznym decydualizacją, aby umożliwić badanie specyficznego dla macicy wpływu na ciążę. W tym artykule znajdziesz instrukcje, jak przeprowadzić owariektomię i zaoferujemy wgląd w różne techniki dostarczania hormonów egzogennych w celu wsparcia udanej sztucznej decydualizacji lub ciąży po transferze zarodków od zdrowych dawców. Techniki te obejmują wstrzyknięcie podskórne, granulki o powolnym uwalnianiu i mini pompy osmotyczne. Omówione zostaną kluczowe zalety i wady każdej z metod, co umożliwi badaczom wybór najlepszego projektu badania dla ich konkretnego pytania badawczego.

W niniejszej publikacji opisano dobrze scharakteryzowany model sztucznej decidualizacji (Rycina 1A). W tym modelu młode dorosłe myszy żeńskie (w wieku 8 tygodni) poddano chirurgicznej owariektomii, zgodnie z opisem w sekcji 1 i sekcji 2. Następnie myszy pozostawiono na 2 tygodnie, aby zapewnić całkowity zanik endogennych hormonów jajnika przed rozpoczęciem podaży hormonów egzogennych, opisanej w sekcjach 3-7 oraz sekcji 9. Sztuczną decidualizację wywołano poprzez dopoch...

Ustanowienie ciąży to dynamiczny proces obejmujący skomplikowane przenikanie się zarodków i macicy. Dokładny wkład środowiska macicy matki w te procesy pozostaje aktywnym obszarem badań. W tym miejscu przedstawiono szczegółowe protokoły, które mają pomóc w projektowaniu modeli zwierzęcych in vivo, aby odpowiedzieć na te pytania badawcze.

Metody badania wkładu macicy w powstanie ciąży w mysim modelu owariektomii

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation ...

Trudno jest więc oddzielić rolę hormonalnych wpływów macicy i jajników na zajście w ciążę, ponieważ są one ściśle ze sobą powiązane. Tak więc ten protokół pozwala nam bezpośrednio zbadać wkłady macicy. Chociaż niektóre z tych technik, takie jak owariektomia, są dość inwazyjne, są one stosunkowo proste do wykonania po praktyce i treningu, co czyni je odpowiednimi dla badaczy, którzy są nowicjuszami w modelach mysich.Tak więc ta metoda może być wykorzystana do zrozumienia szerszej regulacji osi HPG, ponieważ zarówno jajniki, jak i macica odgrywają ważną rolę w regulacji tej osi. Jeśli nigdy wcześniej nie stosowałeś tych technik, skonsultuj się z zespołem weterynarzy swojego instytutu w celu uzyskania szkolenia i wsparcia. Na początek nałóż obficie lubrykant do oczu na znieczuloną mysz, delikatnie wklepując go w oko po ogoleniu niewielkiego obszaru w wgnieceniu poniżej garbu kręgosłupa.Wstrzyknij 0,1 mililitra karprofenu podskórnie w kark szyi. Sprawdź, czy zwierzę jest znieczulone, szczypiąc go w tylny palec u nogi i sprawdzając, czy nie ma odruchu. Następnie nałóż Betadine na miejsce operowane.Następnie przykryj go obłożeniem chirurgicznym. Za pomocą kleszczy z zębami szczura odciągnij skórę od garbu do góry i wykonaj pięciomilimetrowe nacięcie wzdłużne. Następnie, za pomocą kleszczy, odetnij skórę od leżącej pod spodem warstwy mięśni w dół na bok w kierunku nerki.Zidentyfikuj nerki, jajnik i poduszeczkę tłuszczową jajnika przez ścianę mięśniową. Chwyć i podnieś warstwę mięśniową za pomocą kleszczy. Następnie za pomocą nożyczek wykonaj nacięcie o długości od 0,5 do jednego centymetra i przeciągnij poduszkę jajnika przez nacięcie za pomocą kleszczy.Następnie, za pomocą zakrzywionego uchwytu na igłę, zaciśnij pod jajnikiem i jajowód na dystalnym końcu rogu macicy i wytnij jajnik nożyczkami. Po 30 sekundach zdejmij zacisk i przetrzyj sterylną gazą. Aby zamknąć nacięcie ściany mięśniowej, podnieś górną część nacięcia za pomocą kleszczy.Następnie zawiąż nacięcie węzłem chirurgicznym za pomocą jedwabnych szwów. Nałóż miejscowo kilka kropli bupiwakainy za pomocą jednomililitrowej strzykawki bez mocowania igły, a nadmiar przetrzyj sterylną gazą. Po podobnym wykonaniu jajnikomii po drugiej stronie, zamknij nacięcie skóry, ściskając obie strony skóry razem i nakładając kilka siedmiomilimetrowych klipsów chirurgicznych, pozostawiając miejsce na obrzęk rany.Umieść cały wymagany sprzęt na folii wewnątrz okapu bezpieczeństwa laminarnego lub kaptura bezpieczeństwa biologicznego klasy II i sterylizuj UV przez 20 minut. Umyj rurkę silastyczną w 100% desinolu i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu wewnątrz okapu. Po wyschnięciu pokrój rurkę na segmenty o długości jednego centymetra za pomocą skalpela.Następnie wyciśnij około 200 mikrolitrów szczeliwa do strzykawki bez tłoka. Wymień tłok i wypchnij niewielką ilość szczeliwa. Nałóż szczeliwo na jeden koniec rurki, wygładzając go palcem w rękawiczce.I pozostaw szczeliwo do wyschnięcia przez noc lub w świetle UV przez 30 minut w kapturze. Następnie wlej proszek progesteronu na wysterylizowaną szalkę Petriego. Nabierz proszek na granulki za pomocą kleszczy.Postukaj uszczelnionym końcem granulki w powierzchnię kaptura, aby skondensować proszek. Następnie uszczelnij otwarty koniec szczeliwem. Zawiń szalkę Petriego zawierającą granulki w folię, aby chronić je przed światłem.Około 72 godziny przed wprowadzeniem podskórnym aktywuj granulki, inkubując je w SKO pozbawionym węgla drzewnego. Tę procedurę zademonstruje dr Fiona Cousins, naukowiec na początku kariery z Hudson Institute of Medical Research. Po hormonalnym przygotowaniu zwierząt podskórnymi zastrzykami estradiolu, należy zagruntować zwierzęta podskórnymi granulkami progesteronu na dwa dni przed sztucznym decydualizacją.Przed zabiegiem znieczul mysz i przetestuj głębokość znieczulenia, sprawdzając odruch szczypania palca u nogi. Następnie umieść mysz w pozycji leżącej, unieś jej ogon i powoli włóż sześciomilimetrowy wziernik do pochwy. Umieść dolną część myszy między dwoma pierwszymi palcami ręki niedominującej.Następnie, używając palca wskazującego, delikatnie popchnij ogon do góry, aby zapewnić lepszy dostęp do pochwy. Przenieś 20 mikrolitrów oleju sezamowego do niechirurgicznej końcówki do transferu zarodków i włóż końcówkę przez pochwę i szyjkę macicy do rogu macicy. Powoli wyrzuć olej.Po zakończeniu usuń wziernik z pochwy. W tym badaniu 80% myszy przeszło pomyślne zdziesiątkowanie, podczas gdy 20% nie. Dlatego ważne jest, aby cały sprzęt chirurgiczny i obszary robocze były sterylne i miały pacjentów podczas wprowadzania wkładki NLPZ przez szyjkę macicy do rogu macicy myszy.Po wywołaniu sztucznego decydualizacji podniebienie progesteronu można usunąć, aby naśladować miesiączkę i badać rozpad endometrium. Za pomocą tej metody możemy badać biologię i regulację macicy niezależnie od wpływu jajników. Jest to naprawdę ekscytujące w dziedzinie płodności i zdrowia kobiet w ogóle.

methods-for-studying-uterine-contributions-to-pregnancy-establishment

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Opis chirurgicznego indukowania endometriozy u myszy i szczurów poprzez autotransplantację tkanki macicy do kaskady tętniczej krezki jelitowej.

Myszowy model chirurgicznie wywołanej endometriozy poprzez autotransplantację tkanki macicy

W tym filmie opisujemy zabieg chirurgiczny polegający na pobraniu nienaruszonego jajnika z modelu mysiego.

Nienaruszone jajniki pobrane od myszy: zabieg chirurgiczny mający na celu wyizolowanie całego jajnika z modelu mysiego

Ten protokół opisuje technikę oceny zmian w unaczynieniu matki podczas ciąży u myszy. Za pomocą metod stereologicznych ocenia się ilościowo przebudowę dziesiętnych tętnic spiralnych, a wyniki potwierdza się jakościowo za pomocą immunohistochemii.

Ocena przebudowy naczyń krwionośnych matki w czasie ciąży w macicy myszy

Skurcze macicy są ważne dla dobrego samopoczucia kobiet. Jednak patologicznie zwiększona kurczliwość może powodować bolesne miesiączkowanie, szczególnie u młodszych kobiet. W tym miejscu opisujemy prosty preparat ex vivo, pozwalający na szybką ocenę skuteczności leków zwiotczających mięśnie gładkie, które mogą być stosowane w leczeniu bolesnego miesiączkowania.

Metoda ex vivo do oceny spontanicznej ruchliwości układu rozrodczego myszy oraz algorytm śledzenia ruchu macicy oparty na MATLAB do analizy danych

Wiele modeli endometriozy u gryzoni jest ograniczonych przez techniczną złożoność, powtarzalność i/lub potrzebę stosowania zwierząt z obniżoną odpornością lub specjalnych myszy reporterowych. Przedstawiamy uproszczony system indukcji zmian chorobowych przy użyciu dowolnej myszy eksperymentalnej z niezależnie weryfikowalnym, obiektywnym systemem punktacji i bez konieczności wycinki owariektomii lub operacji przeżycia.

Syngeniczny mysi model endometriozy przy użyciu myszy z naturalną jazdą na rowerze

Tutaj opisujemy metodę generowania sztucznego modelu decydualizacji za pomocą myszy z owariektomią, klasyczny eksperyment decydualizacji endometrium w dziedzinie badań nad decydualizacją endometrium.

Generowanie mysiego modelu sztucznego decydualizacji z owariektomią do badań nad decydualizacją endometrium

Przedstawiona metoda manipulacji szyjką macicy może wywołać pseudociążę u myszy bez potrzeby rozmnażania samic z samcami po wazektomii. Indukcja ciąży rzekomej jest niezbędna do powodzenia niechirurgicznego transferu zarodków i niechirurgicznego sztucznego zapłodnienia, które również zostały przedstawione.

Wywoływanie ciąży rzekomej u samic myszy bez konieczności wazektomii samców przed niechirurgicznym transferem zarodków lub sztucznym zapłodnieniem

Hormon folikulotropowy (FSH) w różnych tkankach i organach pozagonadalnych jest związany z patogenezą wielu chorób. Mysi model owariektomii i leczony FSH (OVF) może być wykorzystany do zbadania pozagonowego działania FSH.

Badanie niezależnych efektów hormonu folikulotropowego in vivo w modelu mysim

Badanie to wprowadza nowy model mysi zaprojektowany specjalnie do symulacji endometriozy, klinicznie istotnego podtypu endometriozy. Wykorzystując myszy C57BL/6J, model ma na celu wyjaśnienie patofizjologicznych mechanizmów leżących u podstaw niepłodności związanej z endometrioma, oferując wyrafinowane narzędzie do wypełnienia obecnej luki w wiedzy w medycynie reprodukcyjnej.

Stworzenie eksperymentalnego mysiego modelu endometrioma w celu zbadania związanej z nim niepłodności

Ten artykuł opisuje szczegółowy protokół wytwarzania niezawodnego i powtarzalnego cienkiego endometrium o bardzo niskiej śmiertelności i minimalnych zrostach wewnątrzmacicznych poprzez wstrzyknięcie 95% etanolu do macicy myszy w ciągu 1-3 minut.

Ustalenie mysiego modelu cienkiego endometrium

Protokół ten opisuje procedurę wywoływania uszkodzenia macicy w modelu mysim, po której następują dalsze analizy podczas kolejnej ciąży.

Mysi model chirurgicznego uszkodzenia macicy i późniejszych wyników ciąży

Poznaj metody badania wkładu macicy w powstanie ciąży w mysim modelu owariektomii. Protokoły umożliwiają badanie regulacji osi HPG i biologii rozrodczej niezależnie od wpływu jajników.

Metody badania wkładu macicy w powstanie ciąży w mysim modelu owariektomii

Przeglądaj więcej filmów