Name: Przesiewanie miazgi owocowej w celu wykrycia niedojrzałych muszek owocowych Tephritid na polu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 21 s
Description: Poznaj metodę przesiewania miazgi owocowej w celu szybszego wykrywania larw muszek owocowych Tephritid w terenie. Technika ta poprawia skuteczność detekcji w programach zwalczania szkodników.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować Silvii Durand, Teri Allen, Jose Alegrii i Alejandrze Canon za pomoc w przetwarzaniu guawy na Uniwersytecie Florydy, Rickowi Kurashimie, Jeanowi Authowi i Bruce'owi Inafuku za pomoc w ocenie sztucznie zainfekowanego owocu na Hawajach oraz Michaelowi Stulbergowi za pomocne komentarze do wcześniejszych wersji rękopisu. Projekt ten był częściowo finansowany przez USDA APHIS i University of Florida Cooperative Agreement oraz częściowo wspierany przez USDA-ARS (projekt 2040-22430-027-00D). Ustalenia i wnioski zawarte w tej wstępnej publikacji nie zostały formalnie rozpowszechnione przez USDA i nie powinny być interpretowane jako reprezentujące jakiekolwiek ustalenia lub politykę agencji. Wzmianki o nazwach handlowych lub produktach komercyjnych w tej publikacji służą wyłącznie dostarczeniu konkretnych informacji i nie oznaczają rekomendacji ani poparcia ze strony USDA. USDA jest dostawcą równych szans i pracodawcą.

1. Wybór owoców
<ol>
	<li>Określ, jakie owoce są dostępne na obszarze, który ma być badany.</li>
	<li>Wybierz owoc żywiciela na podstawie listy znanych żywicieli dla docelowego gatunku tefrytów.</li>
	<li>Wybieraj dojrzałe owoce o miękkim miąższu, takie jak mango, papaja i guawa. Niedojrzałe lub owoce o twardym miąższu, takie jak tropikalne migdały, należy sprawdzić inną metodą, taką jak krojenie owoców.</li>
	<li>Wybierz opadłe, przejrzałe owoce lub dojrzałe owoce na drzewach, które mają ślady uszkodzeń, blizny po złożeniu jaj i miękkie miejsca.</li>
	<li>Jednorazowo należy przetworzyć około 2 l owoców (np. 5 guaw lub 5 średniej wielkości mango stanowi odpowiednie próbki dla tej metody). Liczba owoców, które można przetworzyć za jednym razem, zależy od wielkości owoców (<silna klasa="xfig">Rysunek 1A).</li>
</ol>
2. Czyszczenie
<ol>
	<li>Pokrój owoce na duże kawałki i umieść je w 4-litrowej torbie do przechowywania z zamkiem błyskawicznym (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1B).</li>
	<li>Wlej wodę do torebki, aż woda pokryje posiekany owoc na 25-50 mm (<silna klasa="xfig">Rysunek 1C).</li>
	<li>Delikatnie ściskaj owoce ręcznie, aż cały miąższ oderwie się od skórki i uzyska gładką konsystencję (tj. bez dużych kawałków) (<silna klasa="xfig">Rysunek 1D).</li>
</ol>
3. Przesiewanie do późnej zbiórki
<ol>
	<li>Ułóż sita w stos. Do przetwarzania dużych ilości owoców (~ 5 owoców na raz) należy używać dużych sit (o średnicy 457 mm), a do pojedynczych owoców lub mniejszych próbek (< 5 owoców).</li>
	<li>Ułóż sito z sitkiem o dużych oczkach (nr 8; 2,36 mm) na sitku o małych oczkach (nr 20; 0,85 mm). W celu wykrycia wczesnych stadiów należy umieścić trzecie sito (nr 45; 0,35 mm) na dnie stosu (<silna klasa="xfig">Rysunek 1E).</li>
	<li>Wlej miazgę na górne sito (<silna klasa="xfig">Rysunek 1F).</li>
	<li>Dokładnie umyj miazgę przez stos sit, używając wody z kranu, węża lub butelki, aż drobna miazga przejdzie przez sita (<silna klasa = "xfig">Rysunek 1G).</li>
	<li>Wizualnie przeskanuj górne sita w poszukiwaniu larw w późnym stadium rozwojowym, które mogły zostać zatrzymane wraz ze skórką lub jakimikolwiek dużymi kawałkami owoców (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1H).</li>
	<li>Dokładnie sprawdź drugie sito pod kątem larw w późnym stadium rozwojowym. W przypadku dużych ilości drobnej miazgi może być konieczne dodatkowe płukanie.</li>
	<li>Zebrać larwy z sit za pomocą kleszczy larwalnych i umieścić je w fiolkach z 70% EtOH.</li>
</ol>
4. Flotacja cukru dla wczesnej kolekcji instar
<ol>
	<li>Roztwór cukru należy wstępnie wymieszać, rozpuszczając 453 g (1 pudełko) ciemnobrązowego cukru w 2 litrach wody z kranu, co daje odczyt Brixa 19°10.</li>
	<li>Umyj miazgę z sit o drobnych oczkach (np. nr 20 i nr 45) do krawędzi sita wodą z kranu, a następnie przenieś materiał do plastikowej patelni (11 l).</li>
	<li>Dodaj roztwór brązowego cukru, aż pokryje miazgę na 25-50 mm i dodaj 2 krople środka przeciwpieniącego. Pozostaw miazgę w roztworze brązowego cukru na około 5 minut.</li>
	<li>Larwy, które unoszą się na powierzchni roztworu, zebrać za pomocą kleszczyków larwalnych do fiolek z 70% EtOH.</li>
</ol>
5. Opieka nad larwami
<ol>
	<li>Oznacz fiolkę miejscem pobrania, datą, rodzajem owocu i pojemnikiem na śmieci w celu późniejszego zbadania i identyfikacji.</li>
</ol>

The Mushing, Sieving, and Floating Method for Detecting Fruit Fly Larvae

<ol><li>White, I. M., Elson-Harris, M. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWhite%2C+IM+%22Fruit+Files+of+Economic+Significance%3A+Their+Identification+and+Bionomics%22">Fruit Files of Economic Significance: Their Identification and Bionomics</a>. , CAB International. Wallingford, UK. (1992).</li>
<li>Papadopoulos, N. T., Plant, R. E., Carey, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+trickle+to+flood%3A+the+large-scale%2C+cryptic+invasion+of+California+by+tropical+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">From trickle to flood: the large-scale, cryptic invasion of California by tropical fruit flies.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 280 (1768), 20131466(2013).</li>
<li>Suckling, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+tephritid+fruit+fly+pest+populations%3A+outcomes+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">Eradication of tephritid fruit fly pest populations: outcomes and prospects.</a> Pest Management Science. 72 (3), 456-465 (2016).</li>
<li>Mcinnis, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+polyphagous+invasive+tephritid+pest+populations+escape+detection+for+years+under+favorable+climatic+and+host+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Can polyphagous invasive tephritid pest populations escape detection for years under favorable climatic and host conditions.</a> American Entomologist. 63 (2), 89-99 (2017).</li>
<li>Mutamiswa, R., Nyamukondiwa, C., Chikowore, G., Chidawanyika, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+oriental+fruit+fly%2C+Bactrocera+dorsalis+%28Hendel%29+%28Diptera%3A+Tephritidae%29+in+Africa%3A+From+invasion%2C+bio-ecology+to+sustainable+management%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Protection%22%5BJournal%5D)">Overview of oriental fruit fly, Bactrocera dorsalis (Hendel) (Diptera: Tephritidae) in Africa: From invasion, bio-ecology to sustainable management.</a> Crop Protection. 141, 105492(2021).</li>
<li>Steck, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oriental+fruit+fly+eradication+in+Florida+2015-2016%3A+program+implementation%2C+unique+aspects%2C+and+lessons+learned%5BTitle%5D)+AND+%22American+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Oriental fruit fly eradication in Florida 2015-2016: program implementation, unique aspects, and lessons learned.</a> American Entomologist. 65 (2), 108-121 (2019).</li>
<li>Alvarez, S., Evans, E., Hodges, A. W. Estimated costs and regional economic impacts of the oriental fruit fly (Bactrocera dorsalis) outbreak in Miami-Dade County, Florida. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAlvarez%2C+S+%22University+of+Florida+Institute+of+Food+and+Agricultural+Sciences+Extension%22">University of Florida Institute of Food and Agricultural Sciences Extension</a>. , FE988 (2016).</li>
<li>Gould, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probability+of+detecting+Caribbean+fruit+fly+%28Diptera%3A+Tephritidae%29+infestation+by+fruit+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Florida+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Probability of detecting Caribbean fruit fly (Diptera: Tephritidae) infestation by fruit dissection.</a> Florida Entomologist. 73 (3), 502-507 (1995).</li>
<li>Yee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Rhagoletis+indifferens+%28Diptera%3A+Tephritidae%29+larvae+using+brown+sugar+flotation+and+hot+water+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Entomology%22%5BJournal%5D)">Detection of Rhagoletis indifferens (Diptera: Tephritidae) larvae using brown sugar flotation and hot water methods.</a> Journal of Applied Entomology. 136 (7), 549-560 (2012).</li>
<li>Yee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+brown+sugar%2C+hot+water%2C+and+salt+methods+for+detecting+western+cherry+fruit+fly+%28Diptera%3A+Tephritidae%29+larvae+in+sweet+cherry%5BTitle%5D)+AND+%22Florida+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Comparison of the brown sugar, hot water, and salt methods for detecting western cherry fruit fly (Diptera: Tephritidae) larvae in sweet cherry.</a> Florida Entomologist. 97 (2), 422-430 (2014).</li>
<li>Van Timmeren, S., Diepenbrock, L. M., Bertone, M. A., Burrack, H. J., Isaacs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+filter+method+for+improved+monitoring+of+Drosophila+suzukii+%28Diptera%3A+Drosophilidae%29+larvae+in+fruit%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Integrated+Pest+Management%22%5BJournal%5D)">A filter method for improved monitoring of Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) larvae in fruit.</a> Journal of Integrated Pest Management. 8 (1), 23(2017).</li>
<li>Van Timmeren, S., Davis, A. R., Isaacs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+larval+sampling+method+for+monitoring+Drosophila+suzukii+%28Diptera%3A+Drosophilidae%29+in+blueberries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Economic+Entomology%22%5BJournal%5D)">Optimization of a larval sampling method for monitoring Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) in blueberries.</a> Journal of Economic Entomology. 114 (4), 1690-1700 (2021).</li>
<li>Balagawi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+brown+sugar+flotation+for+detecting+Queensland+and+Mediterranean+fruit+fly+%28Diptera%3A+Tephritidae%29+infestation+in+Australian+cherries%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Protection%22%5BJournal%5D)">Evaluation of brown sugar flotation for detecting Queensland and Mediterranean fruit fly (Diptera: Tephritidae) infestation in Australian cherries.</a> Crop Protection. 151, 105823(2022).</li>
<li>CFIA (Canadian Food Inspection Agency). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directive+D-02-04%3A+The+Blueberry+Certification+Program+and+domestic+phytosanitary+requirements+to+prevent+the+spread+of+blueberry+maggot+%28Rhagoletis+mendax%29+within+Canada.+2+Revision+10%5BTitle%5D)+AND+%22CFIA+%28Canadian+Food+Inspection+Agency%29%22%5BJournal%5D)">Directive D-02-04: The Blueberry Certification Program and domestic phytosanitary requirements to prevent the spread of blueberry maggot (Rhagoletis mendax) within Canada. 2 Revision 10.</a> CFIA (Canadian Food Inspection Agency). , Ottawa, Canada. (2020).</li>
<li>Kendra, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gas+chromatography+for+detection+of+citrus+infestation+by+fruit+fly+larvae+%28Diptera%3A+Tephritidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Postharvest+Biology+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Gas chromatography for detection of citrus infestation by fruit fly larvae (Diptera: Tephritidae).</a> Postharvest Biology and Technology. 59 (2), 143-149 (2011).</li>
<li>SAS Institute Inc. SAS 9.4 Guide to Software Updates and Product Changes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22SAS+Institute+Inc%22">SAS Institute Inc</a>. , (2013).</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie pozostają w konflikcie interesów.

Naszym celem było opracowanie wydajnego i skutecznego sposobu na znajdowanie larw tefrytów w terenie. Motywacją do uruchomienia programu zwalczania lub ustanowienia obszaru kwarantanny jest wykrycie krytych samic lub larw6, co wskazuje na populację lęgową. Obecna metoda krojenia i wizualnego wyszukiwania owoców jest nieefektywna w znajdowaniu larw, ponieważ zwykle obecnych jest znacznie więcej owoców żywicielskich, niż można indywidualnie sprawdzić. Ponadto populacje tefrytów są prawdopodobnie niskie na obszarze nowej inwazji, co sprawia, że szanse na znalezienie larw w dużej ilości owoców są niezwykle trudne. Na przykład w 2015 r. w ramach programu zwalczania Bactrocera dorsalis na Florydzie zidentyfikowano 54 różne gatunki żywicieli i ścięto ponad 4000 owoców. W tym programie zwalczania znaleziono tylko kilka larw w mango i nie stwierdzono żadnych innych żywicieli6. Odkryliśmy, że metoda MSF/MS była zarówno bardziej czuła, jak i szybsza w wykrywaniu larw A. suspensa i B. dorsalis podczas przetwarzania owoców, które miały dużą ilość miąższu (mango, guawa i papaja) luzem w porównaniu z krojeniem owoców. Większa ilość owoców żywiciela, którą można zbadać metodą rozdrabniania i przesiewania, w połączeniu ze zwiększoną wykrywalnością rzadkich larw, może zwiększyć prawdopodobieństwo, że inwazja zostanie wcześnie wykryta. Wczesne wykrycie populacji lęgowej może zwiększyć prawdopodobieństwo eradykacji i obniżyć koszty programu.
Nasze eksperymenty wykazały, że liczba larw wykrytych przez pracowników zajmujących się krojeniem i oględzinami owoców znacznie się różniła. Pracownicy krojący owoce przegapili 50% i 75% larw B. dorsalis umieszczonych odpowiednio w mango i papai. Natomiast tylko 5% i 15% larw zostało pominiętych przy użyciu metody MS do przetwarzania odpowiednio owoców mango i papai. Podobnie badanie oceniające rozbiór owoców w portach wejścia wykazało, że istniały znaczne różnice w liczbie porażonych owoców i larw stwierdzonych przez inspektorów8 . Badanie wykazało, że doświadczeni inspektorzy portowi pominęli 64%-99% larw A. suspensa i 16%-82% porażonych owoców podczas krojenia owoców i oględzin8. Nasze wyniki sugerują, że metoda rozdrabniania i przesiewania może zmniejszyć prawdopodobieństwo, że pracownik nie wykryje porażonego owocu.
Unoszenie się na wodzie z cukrem i gorącą wodą jest akceptowanym protokołem w metodzie podejścia systemowego w celu zapewnienia, że wiśnie i jagody są wolne od muszek owocowych14. Podzbiór przesyłki jest kruszony w roztworze, po czym inspektor wizualnie bada powierzchnię roztworu cukru pod kątem obecności jaj i larw. Chociaż można przetworzyć większą liczbę owoców w porównaniu do krojenia pojedynczych owoców, na prawdopodobieństwo znalezienia larw przy użyciu tych technik nadal mają wpływ umiejętności inspektora, stadium i liczba obecnych larw oraz rodzaj owocu8. Odkryliśmy, że podobnie jak inne tefryty, B. dorsalis i A. suspensa odrywają się od miąższu owoców i wypływają na powierzchnię. Co ciekawe, odkryliśmy, że w przypadku większych larw w późnym stadium rozwojowym, które są celem programów awaryjnych i eradykacyjnych, ponieważ można je zidentyfikować morfologicznie, w tym flotacja cukru nie zwiększyła dokładności metody. W rzeczywistości dodanie metody flotacji wydłużyło czas przetwarzania o 90% w przypadku papai i o 48% w przypadku mango. Wydłużony czas przetwarzania oraz dodatkowe materiały (np. woda, pojemniki, cukier itp.) nie umożliwiają dodania tego kroku w przypadku poszukiwania dużych gwiazd w terenie. Metoda unoszenia cukru na rynku może być odpowiednia, gdy celem jest wykrycie wszystkich stadiów, w tym wczesnych stadiów, takich jak porty wejścia i pakownie. Filtrowanie roztworu cukru za pomocą sita o drobnych oczkach najprawdopodobniej zapewniłoby najdokładniejsze wykrywanie jaj i wczesnych stadiów larwalnych11,12.
Techniki MS i MSF dobrze sprawdzają się w przypadku owoców, które można łatwo rozgnieść i mają dużą objętość miąższu. Larwy tefrytów mają tendencję do zakopywania się w miazgi owocowej, co utrudnia wykrycie wzrokowe. Krytycznym aspektem metod MS i MSF jest oddzielenie larw od miazgi. Proces przesiewania usuwa miazgę, odsłaniając w ten sposób larwy na sitach sitowych. Podobnie metoda wody z cukrem oddziela larwy od miazgi, sprawiając, że larwy unoszą się na wodzie, podczas gdy miazga opada na dno naczynia. Larwy oddzielone od miazgi metodą MS lub MSF można łatwo zaobserwować poruszające się na sicie sitowym lub powierzchni wody. Chociaż metoda mushingu, przesiewania i opcjonalnie pływającej znacznie poprawiła szybkość i dokładność wykrywania larw tefrytidaków w ważnych owocach żywiciela, proces ten może nie być odpowiedni dla wszystkich owoców. Na przykład owoce żywicielskie z twardym miąższem, takie jak zielone awokado lub owoce z dużym pestkiem/pestką i stosunkowo niewielką ilością miąższu, takie jak tropikalne migdały, mogą być łatwiejsze do przetworzenia dzięki ręcznemu krojeniu i oględzinom.
Stwierdziliśmy, że metody MS i MSF były szybsze, gdy przetwarzano stosunkowo niewielką liczbę owoców (5-10). Różnica byłaby prawdopodobnie większa, gdyby przetworzono większe ilości owoców, co może być konieczne i typowe dla programów awaryjnych dla muszek owocowych. Usunięcie etapu flotacji jeszcze bardziej zwiększyło szybkość wykrywania bez uszczerbku dla dokładności znajdowania dużych larw tefrytów (>3 mm). Wykazaliśmy, że techniki te można zastosować w terenie, który symulował warunki, jakich doświadczają pracownicy podczas programu awaryjnego zwalczania muszek owocowych. Nasze badania wskazują, że metody MS mogą pozwolić na szybsze wykrycie larw w późnym stadium rozwojowym, a następnie zwalczenie populacji lęgowych tefrytów. MSF może być używany do wykrywania jaj i wczesnych stadiów rozwojowych, które obecnie nie są objęte programami eradykacji.

Muszki owocowe Tephritid należą do najbardziej destrukcyjnych szkodników rolniczych, a największe zagrożenie stanowią rodzaje Anastrepha, Bactrocera i Ceratitis1. Wiele obszarów jest narażonych na wysokie ryzyko osiedlenia się egzotycznych muszek owocowych, w oparciu o 1) historyczne wtargnięcia i związane z nimi programy delimitacji i eliminacji, 2) wysoki wskaźnik przybycia materiału żywicielskiego muszki owocowej do portów wjazdu oraz 3) warunki klimatyczne sprzyjające tworzeniu się populacji rozrodczych. Stan Kalifornia doświadcza wielu wtargnięć i wykryć tefrytidów rocznie2. W ciągu ostatniego stulecia na całym świecie miało miejsce ponad 200 inwazji i programów zwalczania tefrytidów, a w ostatnich dziesięcioleciach liczba ta znacznie przyspieszyła3. Chociaż zdecydowana większość tych programów odnosi sukcesy w zwalczaniu inwazji muszek owocowych3,4, obciążenie ekonomiczne i środowiskowe tych inwazji pozostaje nadal wysokie, a możliwość powstania jest zawsze obecna; niedawnym katastrofalnym przykładem jest zakażenie Bactrocera dorsalis na kontynencie afrykańskim5.
Podczas programów awaryjnych dla muszek owocowych, podejmowane są wspólne wysiłki w celu wykrycia i kontroli populacji lęgowych inwazyjnych gatunków. Na przykład stan Floryda reaguje na inwazje tefrytów, stosując zraszacze glebowe (pod linią kroplującą roślin żywicielskich owocujących) i usuwając owoce żywiciela w promieniu 200 m wokół miejsc, w których znajdują się kryte samice i/lub larwy6. Te działania i taktyki służą zabijaniu larw i poczwarek w glebie oraz usuwaniu wszelkich jaj i larw z owoców na tym obszarze. W niektórych programach zwalczania usuwa się znaczną ilość owoców żywiciela. W 2015 roku ponad 100 000 kg owoców zostało zniszczonych podczas programu zwalczania B. dorsalis na Florydzie6. Straty ekonomiczne poniesione przez plantatorów i powiązane branże na samym obszarze objętym kwarantanną oszacowano na ponad 10,7 miliona dolarów7.
Aby znaleźć larwy tefrytów w obszarach kwarantanny, mały zespół entomologów zbiera owoce żywiciela w promieniu 200 m wokół obszaru wykrywania samic much, a następnie tnie i wizualnie sprawdza każdy owoc pod kątem larw6. Przy ograniczonych zasobach kadrowych i setkach potencjalnych gospodarzy zadanie staje się trudne, szczególnie na obszarach, gdzie różnorodność roślin zarówno w obszarach produkcji komercyjnej, jak i na placach mieszkalnych jest wysoka. Ponadto larwy mogą zostać pominięte podczas krojenia owoców żywicielskich. W badaniu oceniającym krojenie owoców w portach wejściowych stwierdzono, że krojenie owoców nie jest tak skuteczne w wykrywaniu A. suspensa w porównaniu z przetrzymywaniem porażonych owoców przez kilka tygodni i liczeniem larw i poczwarek znalezionych w podłożu do przepoczwarzenia8.
Istnieją alternatywy dla cięcia owoców do wykrywania inwazji9,10,11,12,13. Na przykład, unoszenie się brązowego cukru i metoda gorącej wody są akceptowanymi procedurami stosowanymi do wykrywania muszek owocowych wiśni zachodnich w zebranych wiśniach9,10. Metoda brązowego cukru polega na umieszczeniu zmiażdżonych owoców w roztworze wody z cukrem i zebraniu larw, które unoszą się na wierzchu. Metoda flotacji brązowego cukru została opracowana specjalnie w celu spełnienia przepisów regulacyjnych dotyczących eksportowanych wiśni, które wymagają od pakowalni monitorowania szkodników muszek owocowych w czasie kwarantanny. Istnieje również zatwierdzony amerykańsko-kanadyjski program certyfikacji borówek, który obejmuje pływanie w wodzie z brązowym cukrem, pływanie w słonej wodzie lub gotowanie w celu wsparcia fitosanityzacji14. Testując dokładność unoszenia się cukru i gorącej wody, naukowcy wykorzystali metodę przesiewania, aby określić, ile larw zostało pominiętych9,10,11,12,13. Badanie wykazało, że zmieszanie zmiażdżonych jagód w roztworze soli i przefiltrowanie roztworu przez filtr do kawy wielokrotnego użytku było czterokrotnie lepsze w wykrywaniu larw Drosophila suzukii niż wizualne sprawdzanie powierzchni roztworów soli i cukru14. Ponadto chromatografia gazowa została wykorzystana do wykrycia larw A. suspensa w citrus15. Podejścia te nie zostały przetestowane pod kątem możliwości zastosowania w badaniach terenowych.
Naszym celem było opracowanie i przetestowanie metody znajdowania larw tefrytów w terenie za pomocą przesiewania i pływania wodą z cukrem. Metoda ta pozwala na skuteczniejsze wykrywanie niedojrzałych muszek owocowych niż tradycyjna metoda cięcia owoców, wspierając terminową kontrolę populacji lęgowych podczas programów zwalczania muszek owocowych.

<table><tbody><tr><td>Środek przeciwpieniący</td><td>MicroLubrol</td><td>ML200-50-4</td><td>MicroLubrol 2000 Płynny czysty olej silikonowy, https://www.microlubrol.com</td></tr><tr><td>Dominos</td><td></td><td>z brązowym cukrem</td><td>1 lb Pudełko&nbsp; Ciemnobrązowe kryształki cukru,</td></tr><tr><td>deski do krojenia</td> https://www.dominosugar.com/products/dark-brown-sugar <td>KitchenAid</td><td>KE703NOSMGA</td><td>KitchenAid Klasyczna antypoślizgowa plastikowa deska do krojenia, 12x18 cali, https://www.amazon.com/KitchenAid-Classic-Nonslip-Plastic-11x14-Inch/dp/B09117L774/ref=sxin_24_ac_d_mf_brs?ac_md=2-1-S2l0Y2hlbkFpZA%3D%3D-ac_d_mf_brs_brs&content-id=amzn1.sym.1ad31f34-ba12-4dca-be4b-f62f7f5bb10d%3Aamzn1.sym.1ad31f34-ba12-4dca-be4b-f62f7f5bb10d&crid=UXMLNC72BL0 M& cv_ct_cx=cięcie%2Bboards& słowa kluczowe=cięcie%2Bboards & pd_rd_i=B091118V8T& pd_rd_r= 4c48b4ad-4d4d-4b4b-8799-fc7313 2f8e34& pd_rd_w=li862& pd_rd_wg =KogbB& pf_rd_p=1ad31f34-ba12-4dca-be4b-f62f7f5bb10d& pf_rd_r=9ATJD6W QBF9DVRY889MP& qid=1673911 429& refresh=1& sprefix=cięcie%2Bboards%2Caps%2C198& sr=1-2-8b2f235a-ddf-4202-bbb9-592393927392& th = 1</td></tr><tr><td>Patelnie do naczyń</td><td>Sterilite</td><td>06578012</td><td>Biała 12 qrt Patelnia, https://www.amazon.com/STERILITE-06578012-Sterilite-White-Dishpan/dp/B0039V2G5E/ref=sr_1_1?crid=2SMBMLFJF18U&keywords = biała + 12 + qt + patelnia + sterylizit & qid=1673911729& s=home -ogród& sprefix=biały+12+qr+patelnia+sterlite%2Cgarden%2C184& sr=1-1</td></tr><tr><td>EthOH</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP8202500</td><td>Roztwór etanolu 96%, klasa biologii molekularnej, https://www.fishersci.com/shop/products/ethanol-solution-96-molecular-biology-grade-fisher-bioreagents/BP8202500</td></tr><tr><td>Fiolki szklane</td><td>Fisher Scientific</td><td>0333921H</td><td>Fisherbrand&nbsp; Fiolki z gwintem z przezroczystego szkła klasy B z zamknięciami,</td></tr><tr><td>noże</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/class-b-clear-glass-threaded-vials-with-closures-packaged-separately/0333921H Nóż uniwersalny Zyliss</td><td>31380</td><td>5,25", https://www.amazon.com/ZYLISS-Utility-Kitchen-5-5-Inch-Stainless/dp/B00421ATJK/ref=sr_1_7?crid=2U27KE1HTG5N1&keywords= owoce%2Bcięcie%2Bnoże& qid=1673911609& s= dom-ogród& sprefix=owoc%2Bcięcie%2Bnoże%2Cogród%2C145& sr=1-7& th=1</td></tr><tr><td>Nr 20 Sita siatkowe</td><td>Hogentogler & Co. Inc.</td><td>4221</td><td>Norma amerykańska&nbsp; Sita testowe, https://www.hogentogler.com/sieves/18-inch-sieves.asp</td></tr><tr><td>nr 45 Sita siatkowe</td><td>Hogentogler & Co. Inc.</td><td>4226</td><td>Norma amerykańska&nbsp; Sita testowe, https://www.hogentogler.com/sieves/18-inch-sieves.asp</td></tr><tr><td>nr 8 Sita siatkowe</td><td>Hogentogler & Co. Inc.</td><td>4215</td><td>Norma amerykańska&nbsp; Sita testowe, https://www.hogentogler.com/sieves/18-inch-sieves.asp</td></tr><tr><td>miękkie kleszcze</td><td>Instrumenty DR</td><td>DRENTF01</td><td>DR Instrumenty Lekkie kleszcze entomologiczne, https://www.amazon.com/DR-Instruments-DRENTF01-Featherweight-Entomology/dp/B008RBLO8Q</td></tr><tr><td>Torby do przechowywania z zamkiem błyskawicznym</td><td>Ziploc</td><td>682254</td><td>Marka Ziploc 2 galony przezroczyste torby do zamrażania, https://www.amazon.com/Ziploc-Freezer-Bag-Gallon-100/dp/B01NCDWR8A/ref=sr_1_1_sspa?crid=3SQFBT64Z76ES&keywords = ziploc + zamrażarka + torby + 2 + galon i qid=1674504602&</td></tr></tbody></table>

przesiewanie miazgi owocowej w celu wykrycia niedojrzałych muszek owocowych tephritid na polu

Sieving Fruit Pulp to Detect Immature Tephritid Fruit Flies in the Field

Muszki owocowe z rodziny Tephritidae są jednymi z najbardziej destrukcyjnych i inwazyjnych szkodników rolniczych na świecie. Wiele krajów podejmuje kosztowne programy eliminacji w celu wyeliminowania początkowych populacji. Podczas programów zwalczania dokłada się wszelkich starań w celu wykrycia larw, ponieważ wskazuje to na populację lęgową i pomaga ustalić przestrzenny zasięg inwazji. Wykrycie niedojrzałych etapów rozwojowych uruchamia dodatkowe działania kontrolne i regulacyjne w celu powstrzymania i zapobieżenia dalszemu rozprzestrzenianiu się szkodnika. Tradycyjnie, wykrywanie larw odbywa się poprzez krojenie poszczególnych owoców żywiciela i oglądanie ich. Ta metoda jest pracochłonna, ponieważ można przetworzyć tylko ograniczoną liczbę owoców, a prawdopodobieństwo pominięcia larwy jest wysokie. Przetestowano technikę ekstrakcji, która łączy i) miażdżenie owoców żywiciela w plastikowej torbie, ii) przecedzenie miazgi przez szereg sit, iii) umieszczenie zatrzymanej miazgi w roztworze wody z brązowym cukrem oraz iv) zbieranie larw, które unoszą się na powierzchni. Metoda została oceniona na Florydzie z guawą zebraną w terenie, naturalnie porażoną przez Anastrepha suspensa. Aby naśladować niskie populacje, bardziej reprezentatywne dla programu zwalczania muszek owocowych, mango i papaja na Hawajach zostały zaatakowane znaną, niską liczbą larw Bactrocera dorsalis. Możliwość zastosowania metody została przetestowana w terenie na guawie naturalnie zaatakowanej przez B. dorsalis w celu oceny metody w warunkach, jakich doświadczyli pracownicy podczas awaryjnego programu muszek owocowych. Zarówno w badaniach polowych, jak i laboratoryjnych, rozdrabnianie i przesiewanie miąższu było bardziej wydajne (wymagało mniej czasu) i bardziej wrażliwe (znaleziono więcej larw) niż krojenie owoców. Pływanie miazgi w roztworze wody z brązowym cukrem pomogło wykryć wcześniejsze larwy w stadium rozwojowym. Rozdrabnianie i przesiewanie miazgi owocowej ważnych żywicieli tefrytowych może zwiększyć prawdopodobieństwo wykrycia larw podczas programów awaryjnych.

Zwiększenie wykrywalności niedojrzałych muszek owocowych tefrytów na polu może w porę uruchomić działania mające na celu wyeliminowanie populacji tych niszczycielskich szkodników. Wykrywanie larw w późnym stadium rozwoju jest szybsze i dokładniejsze w przypadku rozdrabniania owoców żywiciela w torbie i przepuszczania miąższu przez szereg sit, niż podczas ręcznego cięcia i kontroli wzrokowej.

Przesiewanie miazgi owocowej w celu wykrycia niedojrzałych muszek owocowych Tephritid na polu

Fruit flies of the Tephritidae family are among the most destructive and invasive agricultural pests in the world. Many countries undertake expensive ...

Opracowujemy metodę znajdowania larw muszek owocowych tefrytów, która jest szybsza i dokładniejsza niż obecna metoda krojenia i wizualnej kontroli każdego owocu. Chcemy opracować prostą technikę, którą można wykorzystać w terenie do przetwarzania dużych ilości owoców. Wyzwaniem tego badania było znalezienie owoców o niskim porażeniu, które prawdopodobnie reprezentowałyby to, co widzimy podczas programu awaryjnego lub eradykacji.Ponieważ nie możemy zajrzeć do owocu, stosujemy metody sztucznego zarażania kluczowych żywicieli małą liczbą larw. Zarówno w badaniach polowych, jak i laboratoryjnych rozdrabnianie i przesiewanie miazgi zajmuje mniej czasu, a larw znaleziono więcej niż w przypadku krojenia owoców. Pływanie miazgi w roztworze wody z brązowym cukrem pomogło wykryć wcześniejsze larwy w stadium rozwojowym.Rozdrabnianie i przesiewanie miazgi owocowej ważnych żywicieli tefrytowych może zwiększyć prawdopodobieństwo wykrycia larw podczas programów awaryjnych. Będziemy nadal optymalizować protokół, aby określić optymalną wielkość sita dla różnych gatunków regulowanych muszek owocowych i ustalić kryteria, takie jak rodzaj owocu, ilość owoców i tak dalej, które pomogą zdecydować, czy uzasadnione jest zastosowanie metody niszczenia larw, czy standardowego krojenia owoców.

sieving-fruit-pulp-to-detect-immature-tephritid-fruit-flies

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Agresja jest wrodzonym zachowaniem, które wyewoluowało w ramach obrony lub zdobywania zasobów. To złożone zachowanie społeczne jest kształtowane przez...

Badanie agresji u Drosophila (muszek owocówek)

Fopius arisanus jest parasitoidem jaj i larw muszek owocówek z rodziny Tephritidae, który jest z sukcesem wykorzystywany w biologicznej kontroli tych istotnych tropikalnych szkodników. Opisujemy tutaj zoptymalizowany protokół hodowli F. arisanus na małą skalę z wykorzystaniem łatwo dostępnych materiałów.

Zoptymalizowany protokół hodowli Fopius arisanus, parasytoida much owocówek z rodziny Tephritidae

Opisano szybką metodę analizy związków lotnych w owocach. Związki lotne obecne w przestrzeni nad próbką homogenatu są szybko rozdzielane i wykrywane za pomocą ultraszybkiej chromatografii gazowej (GC) sprzężonej z czujnikiem fali akustycznej powierzchniowej (SAW). Omówiono również procedurę przetwarzania i analizy danych.

Analiza lotnych związków owoców z wykorzystaniem elektronicznego nosa

W tym artykule wideo opisujemy zautomatyzowany test do pomiaru wpływu głodu lub sytości na zależne od węchu zachowanie związane z poszukiwaniem pokarmu u dorosłej muszki owocowej Drosophila melanogaster.

Test pojedynczej muchy na zachowania żerowe u Drosophila

Tutaj prezentujemy protokół do ilościowego określenia unikania osób zestresowanych. Ten paradygmat jest potężny, ale przyjazny dla użytkownika i może być wykorzystany do oceny wpływu genów i środowiska na jeden rodzaj interakcji społecznych u Drosophila melanogaster.

Prosty test do ilościowego oznaczania unikania społecznego u Drosophila melanogaster

Przedstawiono metodę hodowli Drosophila melanogaster w warunkach aksonicznych i gnotobiotycznych. Zarodki much są dechorionowane w podchlorynie sodu, przenoszone aseptycznie do jałowej diety i hodowane w zamkniętych pojemnikach. Zaszczepianie diety i zarodków bakteriami prowadzi do asocjacji gnotobiotycznych, a obecność bakterii potwierdza się poprzez posiew homogenatów Drosophila na całe ciało.

Hodowla muszki owocowej Drosophila melanogaster w warunkach aksenicznych i gnotobiotycznych

Tutaj prezentujemy metodę pomiaru poziomu tłuszczu w organizmie w trzecim stadium larwalnym (L3) Drosophila melanogaster. Metoda ta wykorzystuje stosunkowo niską gęstość tkanki tłuszczowej do różnicowania larw ze zmienionymi zapasami tłuszczu. Analiza oparta na pływalności jest cennym narzędziem do szybkich, powtarzalnych i ekonomicznych badań przesiewowych.

Oparta na pływalności metoda określania poziomu tłuszczu u Drosophila

Tutaj opisano użycie kilku domowych narzędzi do przenoszenia, schładzania i zabijania dorosłych Drosophila, a także do czyszczenia szklanych fiolek z kulturami i zbierania jaj. Narzędzia te są łatwe do wykonania i są dość skuteczne w radzeniu sobie z Drosophila.

Proste domowe narzędzia do radzenia sobie z muszkami owocowymi - Drosophila melanogaster

Prezentowany tutaj jest protokół do określania liczby wciornastków i drobnych drapieżników owadów pirackich w uprawach w wielu terminach w doświadczeniach polowych. Przedstawiono również, w jaki sposób określić skuteczność taktyki zarządzania przeciwko wciornastkom i ocenić korzyści płynące z drapieżnictwa przez drobne robaki pirackie.

Pobieranie próbek w celu oszacowania gatunków Frankliniella, wciornastków kwiatowych i drapieżników z gatunku Orius w doświadczeniach terenowych

Celem tego protokołu jest zmierzenie kurczenia się upraw i ilościowe określenie dystrybucji pokarmu w jelitach Drosophila.

Pomiar ruchliwości upraw i pasażowania pokarmu u Drosophila

Opisujemy metodologię i znaczenie testu biologicznego do stosowania miejscowego do pomiaru podatności na insektycydy u komarów i muszek owocowych. Prezentowany test jest wysokoprzepustowy, wykorzystuje masę owadów - co pozwala na obliczenie zrelatywizowanej dawki śmiertelnej zamiast stężenia - i prawdopodobnie ma mniejszą zmienność niż inne podobne metody.

Test biologiczny do stosowania miejscowego w celu ilościowego określenia toksyczności insektycydów dla komarów i muszek owocowych

Poznaj metodę przesiewania miazgi owocowej w celu szybszego wykrywania larw muszek owocowych Tephritid w terenie. Technika ta poprawia skuteczność detekcji w programach zwalczania szkodników.

Przesiewanie miazgi owocowej w celu wykrycia niedojrzałych muszek owocowych Tephritid na polu

Przeglądaj więcej filmów