30 czerwca 2023
Tutaj prezentujemy protokół oferujący szybkie, łatwe i niezawodne alternatywy pobierania krwi dla modelu szczurzego. Opisujemy trzy różne metody pobierania krwi w zależności od kontekstu: nakłucie żyły ogonowej w znieczuleniu lub na przytomnym zwierzęciu oraz nakłucie żyły grzbietowej prącia w znieczuleniu.
Należy zająć się kwestią powtarzających się metod pobierania krwi, ponieważ większość badań na szczurach wymaga ich. Ważne jest, aby wziąć pod uwagę, że metoda pobierania próbek może być bardzo skuteczna w pewnym kontekście, ale stać się nieodpowiednia dla innego badania. Protokół ten ma na celu zaoferowanie naukowcom prostych i niezawodnych alternatyw w zakresie pobierania próbek krwi.
Obie metody mogą być wykonywane przez jednego operatora i nie wymagają intensywnego wcześniejszego szkolenia, co pozwala na ustandaryzowaną procedurę. Kiedy zwierzę jest pod narkozą, działanie izofluranu może prowadzić do skurczu naczyń i sprawić, że nakłucie żyły ogonowej nie będzie nadawało się do pobrania krwi. Nasz protokół oferuje alternatywę w tej sytuacji, nakłucie żyły prącia, które zapewnia lepszy wskaźnik powodzenia i daje znacznie więcej krwi w krótszym czasie.
Na początek zabezpiecz szczura w plastikowym stożku ograniczającym i zamknij duży koniec stożka wokół podstawy ogona. Upewnij się, że zwierzę czuje się komfortowo, a oddychanie jest nieograniczone przez cały czas trwania zabiegu. Zanurz ogon w ciepłej wodzie na około minutę, aby rozszerzyć żyłę, i osusz ogon ręcznikiem papierowym.
W unieruchomieniu ustaw zwierzę przodem do dołu z ogonem leżącym na poduszce grzewczej. Aby wybrać odpowiednią żyłę ogonową do pobrania próbek, obróć całe zwierzę w prawą lub lewą stronę. Użyj końcowej trzeciej części ogona do nakłuwania naczyń krwionośnych, ponieważ naczynia stają się bardziej powierzchowne w tej strefie.
Przetrzyj ogon chusteczkami z 70% etanolu w miejscu nakłucia i umieść go na krawędzi poduszki grzewczej, tworząc kąt w końcowej jednej trzeciej ogona. W ten sposób żyła wydostaje się na powierzchnię i tworzy więcej miejsca do pobrania próbki. W celu pobrania próbki krwi należy kilkakrotnie przesunąć tłok strzykawki do przodu i do tyłu, aby wygładzić odciąganie, a następnie pociągnąć za tłok, aby wytworzyć podciśnienie w strzykawce.
Przymocuj ogon płasko na poduszce grzewczej za pomocą niedominującego palca wskazującego i środkowego. Umieść palec środkowy proksymalnie, a palec wskazujący dystalnie w miejscu nakłucia między tymi dwoma palcami. Wsunąć strzykawkę insulinową na palec wskazujący z oczkiem igły skierowanym do góry, aż zostanie ona wprowadzona do żyły.
W ten sposób powstaje kąt 35 stopni między igłą a ogonem. Gdy igła wejdzie do żyły, krew zacznie napływać do strzykawki. Powoli wyjmować tłok strzykawki ze stałą szybkością, aby zebrać żądaną objętość.
Wyjąć strzykawkę z ogona i pozwolić, aby po stronie nakłucia ogona utworzyła się kropla krwi. Odessać tę krew, aby zebrać kilka dodatkowych mikrolitrów krwi w przypadku niesterylnego zabiegu. Uciskaj miejsce wkłucia, aby zatrzymać krwawienie, i przetrzyj obszar nowym wacikiem nasączonym alkoholem.
Po wyjęciu szczura ze stożka włóż go z powrotem do klatki. Wskaźniki powodzenia metody nakłuwania żyły ogonowej porównano ze skutecznością metody nakłuwania żyły prącia w znieczuleniu. Co ciekawe, pod narkozą żyła ogonowa stała się bardzo zawodna i miała wskaźnik sukcesu wynoszący tylko 25%Wskaźniki sukcesu wykazały prawie podobne wyniki w przypadku nakłucia żyły ogonowej u przytomnych szczurów i nakłucia żyły prącia w znieczuleniu.
Pobieranie krwi przeprowadzono w czasie krótszym niż sześć minut w punkcji żyły ogonowej bez znieczulenia, a metoda nakłucia żyły prącia w znieczuleniu, podczas gdy metoda nakłucia żyły ogonowej w znieczuleniu trwała ponad osiem minut z powodu wielu niepowodzeń. Kilkakrotnie przesunąć tłok strzykawki do przodu i do tyłu, aby ułatwić wyjmowanie, a następnie pociągnąć za tłok, aby wytworzyć podciśnienie w strzykawce. Cofnij napletek znieczulonego szczura z końca penisa i przytrzymaj gruczoły między palcem wskazującym a kciukiem, delikatnie pociągając.
Żyła grzbietowa prącia pojawi się jako powierzchowny niebieski sznur. Z uchem igły skierowanym do góry, włóż strzykawkę z insuliną do żyły pod kątem 35 stopni. Gdy igła wejdzie do żyły, krew zacznie napływać do strzykawki.
Powoli wyjmować tłok strzykawki z powolną i stałą szybkością, aby uzyskać pożądaną objętość. Wyjmij strzykawkę, w miejscu nakłucia utworzy się kropla krwi. Odessać kroplę, aby zebrać kilka dodatkowych mikrolitrów krwi, w przypadku niesterylnego zabiegu.
Lekko dociśnij miejsce nakłucia, aby zatrzymać krwawienie i przetrzyj obszar nową wacikiem nasączonym alkoholem. Umieść penisa z powrotem w neutralnej pozycji. Po wyłączeniu izofluranu należy monitorować szczura aż do całkowitego wyzdrowienia i umieścić go z powrotem w klatce.
Objętość krwi pobraną metodą nakłucia żyły grzbietowej prącia w znieczuleniu porównano z krwią pobraną metodą nakłucia żyły ogonowej, ze znieczuleniem i bez. Wynik pokazuje, że metoda nakłucia żyły prącia w znieczuleniu i metoda nakłucia żyły ogonowej bez znieczulenia, dały porównywalne ilości krwi.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Niniejszy protokół przedstawia szybkie i niezawodne metody pobierania krwi u modeli szczurzych, koncentrując się na nakłuciach żyły ogonowej oraz żyły grzbietowej prącia. Podkreślono w nim znaczenie kontekstu przy wyborze odpowiedniej techniki pobierania próbek.
Niezawodny i szybki pobór krwi w modelach szczurzych jest kluczowy dla generowania powtarzalnych danych hematologicznych w badaniach przedklinicznych. Techniki nakłucia bocznej żyły ogonowej oraz grzbietowej żyły prącia umożliwiają elastyczny, zależny od kontekstu pobór materiału przy minimalnym przeszkoleniu operatora, co wspiera standaryzację procesów i ogranicza zmienność proceduralną. Metody te bezpośrednio wpływają na wczesny etap odkryć, rozwój analiz oraz badania translacyjne, zapewniając spójną jakość i objętość próbek.
Te techniki pobierania krwi płynnie integrują się z procesem badawczym – od wczesnej fazy odkrywania, poprzez identyfikację wiodących kandydatów, aż po walidację przedkliniczną, stanowiąc podstawę dla wiarygodnego generowania danych na wszystkich etapach prac B&R.