Name: Wytwarzanie i enkapsulacja sferoidów nowotworowych w hydrożelach glikolu polietylenowego do badania oddziaływań sferoida-matryca (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-22T14:55:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: Naucz się szybkiej i taniej metody wytwarzania sferoidów nowotworowych oraz ich enkapsulacji w hydrożelach PEG, która naśladuje mikrośrodowisko nowotworu bez konieczności używania specjalistycznego sprzętu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana z funduszy startowych dostarczonych dr Silviya P Zustiak przez Uniwersytet Saint Louis, a także z grantu zalążkowego od Henry and Amelia Nasrallah Center for Neuroscience na Uniwersytecie Saint Louis przyznanego dr Silviya P Zustiak.

Fabrication Followed by 3D Encapsulation of Tumor Spheroids in PEG Hydrogels

<ol><li>Hirschhaeuser, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+tumor+spheroids%3A+an+underestimated+tool+is+catching+up+again%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Multicellular tumor spheroids: an underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148 (1), 3-15 (2010).</li>
<li>Costa, E. C., de Melo-Diogo, D., Moreira, A. F., Carvalho, M. P., Correia, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroids+formation+on+non-adhesive+surfaces+by+liquid+overlay+technique%3A+Considerations+and+practical+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">Spheroids formation on non-adhesive surfaces by liquid overlay technique: Considerations and practical approaches.</a> Biotechnology Journal. 13 (1), 1700417(2018).</li>
<li>Li, Y., Kumacheva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+microenvironments+for+cancer+spheroid+growth+and+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Hydrogel microenvironments for cancer spheroid growth and drug screening.</a> Science Advances. 4 (4), eaas8998(2018).</li>
<li>Kamatar, A., Gunay, G., Acar, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+and+synthetic+biomaterials+for+engineering+multicellular+tumor+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Polymers%22%5BJournal%5D)">Natural and synthetic biomaterials for engineering multicellular tumor spheroids.</a> Polymers. 12 (11), 2506(2020).</li>
<li>Wang, C., Tong, X., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineered+3D+brain+tumor+model+to+elucidate+the+effects+of+matrix+stiffness+on+glioblastoma+cell+behavior+using+PEG-based+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Bioengineered 3D brain tumor model to elucidate the effects of matrix stiffness on glioblastoma cell behavior using PEG-based hydrogels.</a> Molecular Pharmaceutics. 11 (7), 2115-2125 (2014).</li>
<li>Nakod, P. S., Kim, Y., Rao, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+biomimetic+hyaluronic+acid+hydrogels+to+investigate+glioblastoma+stem+cell+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional biomimetic hyaluronic acid hydrogels to investigate glioblastoma stem cell behaviors.</a> Biotechnology and Bioengineering. 117 (2), 511-522 (2020).</li>
<li>Xiao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineered+scaffolds+for+3D+culture+demonstrate+extracellular+matrix-mediated+mechanisms+of+chemotherapy+resistance+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biology%22%5BJournal%5D)">Bioengineered scaffolds for 3D culture demonstrate extracellular matrix-mediated mechanisms of chemotherapy resistance in glioblastoma.</a> Matrix Biology. 85, 128-146 (2020).</li>
<li>Pedron, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyaluronic+acid-functionalized+gelatin+hydrogels+reveal+extracellular+matrix+signals+temper+the+efficacy+of+erlotinib+against+patient-derived+glioblastoma+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Hyaluronic acid-functionalized gelatin hydrogels reveal extracellular matrix signals temper the efficacy of erlotinib against patient-derived glioblastoma specimens.</a> Biomaterials. 219, 119371(2019).</li>
<li>Hill, L., Bruns, J., Zustiak, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+matrix+presence+and+composition+influence+drug+responses+of+encapsulated+glioblastoma+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Hydrogel matrix presence and composition influence drug responses of encapsulated glioblastoma spheroids.</a> Acta Biomaterialia. 132, 437-447 (2021).</li>
<li>Chen, J. -W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+microglia+and+patient-derived+glioblastoma+cells+inhibit+invasion+in+a+three-dimensional+gelatin+hydrogel+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between microglia and patient-derived glioblastoma cells inhibit invasion in a three-dimensional gelatin hydrogel model.</a> Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 346(2020).</li>
<li>Thakuri, P. S., Liu, C., Luker, G. D., Tavana, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterials-based+approaches+to+tumor+spheroid+and+organoid+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Biomaterials-based approaches to tumor spheroid and organoid modeling.</a> Advanced Healthcare Materials. 7 (6), 1700980(2018).</li>
<li>Shin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alginate-marine+collagen-agarose+composite+hydrogels+as+matrices+for+biomimetic+3D+cell+spheroid+formation%5BTitle%5D)+AND+%22RSC+Advances%22%5BJournal%5D)">Alginate-marine collagen-agarose composite hydrogels as matrices for biomimetic 3D cell spheroid formation.</a> RSC Advances. 6 (52), 46952-46965 (2016).</li>
<li>Pradhan, S., Clary, J. M., Seliktar, D., Lipke, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+spheroidal+cancer+model+based+on+PEG-fibrinogen+hydrogel+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional spheroidal cancer model based on PEG-fibrinogen hydrogel microspheres.</a> Biomaterials. 115, 141-154 (2017).</li>
<li>Imaninezhad, M., Hill, L., Kolar, G., Vogt, K., Zustiak, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Templated+macroporous+polyethylene+glycol+hydrogels+for+spheroid+and+aggregate+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Templated macroporous polyethylene glycol hydrogels for spheroid and aggregate cell culture.</a> Bioconjugate Chemistry. 30 (1), 34-46 (2018).</li>
<li>Mirab, F., Kang, Y. J., Majd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+characterization+of+size-controlled+glioma+spheroids+using+agarose+hydrogel+microwells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Preparation and characterization of size-controlled glioma spheroids using agarose hydrogel microwells.</a> PLoS One. 14 (1), e0211078(2019).</li>
<li>Razian, G., Yu, Y., Ungrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+large+numbers+of+size-controlled+tumor+spheroids+using+microwell+plates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Production of large numbers of size-controlled tumor spheroids using microwell plates.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. 81, e50665(2013).</li>
<li>Timmins, N. E., Nielsen, L. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTimmins%2C+NE+%22Generation+of+Multicellular+Tumor+Spheroids+by+the+Hanging-Drop+Method%22">Generation of Multicellular Tumor Spheroids by the Hanging-Drop Method</a>. Hauser, H., Fussenegger, M. 140, Springer, Humana Press, NJ. (2007).</li>
<li>Zhao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3D+printed+hanging+drop+dripper+for+tumor+spheroids+analysis+without+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A 3D printed hanging drop dripper for tumor spheroids analysis without recovery.</a> Scientific Reports. 9 (1), 19717(2019).</li>
<li>Amaral, R. L., Miranda, M., Marcato, P. D., Swiech, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+3D+bladder+tumor+spheroids+obtained+by+forced+floating+and+hanging+drop+methods+for+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of 3D bladder tumor spheroids obtained by forced floating and hanging drop methods for drug screening.</a> Frontiers in Physiology. 8, 605(2017).</li>
<li>Gencoglu, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+multicellular+tumor+spheroid+formation+methods+and+implications+for+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomaterials+Science+%26+Engineering%22%5BJournal%5D)">Comparative study of multicellular tumor spheroid formation methods and implications for drug screening.</a> ACS Biomaterials Science & Engineering. 4 (2), 410-420 (2018).</li>
<li>Zhang, C., Liu, C., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+brain+tissue+based+on+microstructure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Mechanical+Behavior+of+Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of brain tissue based on microstructure.</a> Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 126, 104924(2021).</li>
<li>Alifieris, C., Trafalis, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+multiforme%3A+Pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma multiforme: Pathogenesis and treatment.</a> Pharmacology & Therapeutics. 152, 63-82 (2015).</li>
<li>Zustiak, S. P., Leach, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrolytically+degradable+poly+%28ethylene+glycol%29+hydrogel+scaffolds+with+tunable+degradation+and+mechanical+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Hydrolytically degradable poly (ethylene glycol) hydrogel scaffolds with tunable degradation and mechanical properties.</a> Biomacromolecules. 11 (5), 1348-1357 (2010).</li>
<li>Zustiak, S. P., Wei, Y., Leach, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein-hydrogel+interactions+in+tissue+engineering%3A+Mechanisms+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+B%3A+Reviews%22%5BJournal%5D)">Protein-hydrogel interactions in tissue engineering: Mechanisms and applications.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 19 (2), 160-171 (2013).</li>
<li>Kroger, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+hydrolytically+degradable+polyethylene+glycol+crosslinkers+for+facile+control+of+hydrogel+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Design of hydrolytically degradable polyethylene glycol crosslinkers for facile control of hydrogel degradation.</a> Macromolecular Bioscience. 20 (10), 2000085(2020).</li>
<li>Raeber, G., Lutolf, M., Hubbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecularly+engineered+PEG+hydrogels%3A+a+novel+model+system+for+proteolytically+mediated+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Molecularly engineered PEG hydrogels: a novel model system for proteolytically mediated cell migration.</a> Biophysical Journal. 89 (2), 1374-1388 (2005).</li>
<li>Bruns, J., Egan, T., Mercier, P., Zustiak, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+spheroid+growth+and+chemotherapeutic+responses+in+single+and+dual-stiffness+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma spheroid growth and chemotherapeutic responses in single and dual-stiffness hydrogels.</a> Acta Biomaterialia. 163, 400-414 (2023).</li>
<li>Kuwajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ClearT%3A+a+detergent-and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">ClearT: a detergent-and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140 (6), 1364-1368 (2013).</li>
<li>Holt, S. E., Ward, E. S., Ober, R. J., Alge, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shooting+for+the+moon%3A+using+tissue-mimetic+hydrogels+to+gain+new+insight+on+cancer+biology+and+screen+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22MRS+Communications%22%5BJournal%5D)">Shooting for the moon: using tissue-mimetic hydrogels to gain new insight on cancer biology and screen therapeutics.</a> MRS Communications. 7 (3), 427-441 (2017).</li>
<li>Jain, E., Scott, K. M., Zustiak, S. P., Sell, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+polyethylene+glycol-based+hydrogel+microspheres+through+electrospraying%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Materials+and+Engineering%22%5BJournal%5D)">Fabrication of polyethylene glycol-based hydrogel microspheres through electrospraying.</a> Macromolecular Materials and Engineering. 300 (8), 823-835 (2015).</li>
<li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+tumor+spheroid+generation+techniques+for+differential+in+vitro+drug+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of tumor spheroid generation techniques for differential in vitro drug toxicity.</a> Oncotarget. 7 (13), 16948(2016).</li>
<li>Lee, K. -H., Kim, T. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+multicellular+tumor+spheroid+generation+for+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors%22%5BJournal%5D)">Recent advances in multicellular tumor spheroid generation for drug screening.</a> Biosensors. 11 (11), 445(2021).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Wielokomórkowe modele sferoidalne guzów oparte na hydrożelu są coraz częściej opracowywane w celu przyspieszenia odkryć w leczeniu nowotworów 11,13,29. Są one korzystne, ponieważ w kontrolowany sposób naśladują kluczowe parametry mikrośrodowiska guza i pomimo swojej złożoności są prostsze i tańsze w użyciu niż modele in vivo, a wiele z nich jest kompatybilnych z wysokoprzepustowymi technologiami badań przesiewowych. Biomateriały...

Sferoidy nowotworowe okazały się użytecznymi narzędziami in vitro do badania etiologii, patologii i reakcji na leki w nowotworach1. Tradycyjnie, sferoidy były hodowane w warunkach takich jak płytki o niskiej przyczepności lub bioreaktory, gdzie adhezja komórka-komórka jest faworyzowana nad adhezją na powierzchni komórki2. Jednak obecnie uznaje się, że aby wierniej odtworzyć mikrośrodowisko guza, modele sferoidalne in vitro powinny uchwycić zarówno interakcje komórka-komórka, jak i komórka-macierz. To skłoniło wiele grup do zaprojektowania rusztowań, takich jak hydrożele, w których sferoidy mogą być zamknięte3,4. Takie hydrożelowe modele sferoidalne umożliwiają wyjaśnienie interakcji komórka-komórka i komórka-matryca na różne zachowania komórek, takie jak żywotność, proliferacja, łodyga lub responsywność terapii3.
Tutaj opisujemy protokół enkapsulacji sferoidów glejaka w hydrożelach z glikolu polietylenowego (PEG). Istnieje wiele doniesień literaturowych na temat enkapsulacji sferoidalnej komórek glejaka w hydrożelach. Na przykład, sferoidy zostały utworzone przez zamknięcie komórek U87 w hydrożelach PEG ozdobionych ligandem adhezyjnym RGDS i usieciowanych enzymatycznie rozszczepialnym peptydem w celu określenia wpływu sztywności hydrożelu na zachowanie komórki5. Komórki U87 zostały również utworzone w innych hydrożelach na bazie PEG lub na bazie kwasu hialuronowego w celu rozszerzenia populacji nowotworowych komórek macierzystych6 lub w celu zbadania mechanizmów oporności na chemioterapię za pośrednictwem macierzy7,8,9. Sferoidy glejaka zostały również zamknięte w hydrożelach żelatynowych w celu zbadania wzajemnych oddziaływań między mikroglejem a komórkami nowotworowymi i ich wpływu na inwazję komórek10. Ogólnie rzecz biorąc, takie badania wykazały przydatność modeli in vitro opartych na hydrożelu w zrozumieniu patologii glejaka wielopostaciowego i opracowaniu metod leczenia.
Ponadto, istnieją różne metody wytwarzania sferoidów nowotworowych i enkapsulacji hydrożelowej11. Na przykład, rozproszone komórki mogą być zasiane w hydrożelach i pozwolić im tworzyć sferoidy w czasie5,12. Jedną z wad takiej metody jest polidyspersyjność utworzonych sferoid, co może prowadzić do zróżnicowanych odpowiedzi komórek. Aby wytworzyć jednolite sferoidy, komórki można zamknąć w mikrożelach i hodować przez dłuższy czas, aż zaatakują i przemodelują gel13, lub komórki można umieścić w szablonowych żelach ze sferycznymi "otworami" i pozwolić na agregację14. Wadą tych metod jest ich względna złożoność, potrzeba generatora kropel lub innych środków do tworzenia mikrożeli lub "" w żelu oraz czas potrzebny na wzrost i dojrzewanie sferoid. Alternatywnie, sferoidy mogą być wstępnie uformowane w mikrostudzienkach9,15,16 lub w wiszących płytach17,18, a następnie zamknięte w hydrożelu, podobnie jak w opisanej tutaj technice. Te metody są prostsze i można je wykonać w sposób o wyższej przepustowości. Co ciekawe, wykazano, że metoda tworzenia sferoidów może wpływać na zachowania komórek sferoidalnych, takie jak ekspresja genów, proliferacja komórek czy reaktywność leków19,20.
Tutaj skupiamy się na glejaku, ponieważ jest to guz, którego naturalnym środowiskiem jest miękka, nanoporowata matryca mózgu21, który może być naśladowany przez miękki, nanoporowaty hydrożel. Glejak wielopostaciowy jest również najbardziej śmiertelnym nowotworem mózgu, na który nie ma dostępnego lekarstwa22. Jednak opisany tutaj protokół może być stosowany do enkapsulacji sferoid reprezentujących dowolny guz lity. Zdecydowaliśmy się użyć hydrożeli PEG, które powstają w wyniku reakcji addycji typu Michael23. PEG to syntetyczny, niedegradowalny i biokompatybilny hydrożel, który jest obojętny i służy jako rusztowanie i fizyczne wsparcie komórki, ale nie obsługuje przyczepiania komórek23. Adhezjalność komórek może być dodawana oddzielnie poprzez wiązanie całych białek lub ligandów adhezyjnych24, a degradowalność może być dodawana poprzez chemiczne modyfikacje łańcucha polimerowego PEG lub hydrolitycznie lub enzymatycznie degradowalnych środków sieciujących25,26. Pozwala to na dostrojenie właściwości biochemicznych niezależnie od mechanicznych lub fizycznych właściwości hydrożelowych, co może być korzystne w badaniu interakcji komórka-macierz. Chemia żelowania typu Michaela jest selektywna i zachodzi w warunkach fizjologicznych; W związku z tym pozwala na enkapsulację sferoidów poprzez proste zmieszanie sferoidów z roztworem prekursora hydrożelu.
Ogólnie rzecz biorąc, przedstawiona tutaj metodologia ma kilka godnych uwagi cech. Po pierwsze, wytwarzanie sferoid guza w zespole wielodołkowym jest wydajne, szybkie, a koszt wymaganych materiałów jest niski. Po drugie, sferoidy są produkowane w dużych partiach w różnych rozmiarach o niskiej polidyspersyjności. Wreszcie, wymagane są tylko materiały dostępne na rynku. Użyteczność metodologii zilustrowano poprzez zbadanie wpływu właściwości substratu na żywotność komórek sferoidalnych, cyrkularność i macierzystość komórek.

<table><tbody><tr><td>70% etanol</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>LC22210-4</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Stożkowe</td><td>FALCON</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>24-dołkowa płytka Ultra Low Płytki Fisher</td><td>Scientific</td><td>07-200-602</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Szalka Petriego</td><td>Amazon</td><td>706011</td><td></td></tr><tr><td>4-ramienny poli(glikol etylenowy)-akrylowy (4-ramienny PEG-Ac; 10 kDa)</td><td>Laysan Bio</td><td>ACRL-PEG-ACRL-10K-5g</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Stożkowy</td><td>Fisher Scinetific</td><td></td><td></td>3181345107</tr><tr><td>6-dołkowy AggreWell 400&nbsp;</td><td>StemCell Technologies, Vancouver, Kanada</td><td>34421</td><td>Kwadratowe piramidalne mikrostudzienki&nbsp;</td></tr><tr><td>Roztwór do płukania zapobiegający przywieraniu</td><td>StemCell Technologies, Vancouver, Kanada</td><td>Kat #: 07010</td><td></td></tr><tr><td>Kwas asparaginowy-arginina-cysteina-glicyna-walina-prolina-metionina-seryna-metionina-arginina-arginina-glicyna-cysteina-arginina-kwas asparaginowy (DRCG-VPMSMR-GCRD) peptyd</td><td>Genic Bio, Szanghaj, Chiny</td><td>n/a</td><td>Niestandardowa synteza</td></tr><tr><td>Chemiczny wyciąg</td><td>wyciągowy KEWAUNEE</td><td>99151</td><td></td></tr><tr><td>Matryca membrany podstawnej Corning Matrigel, bez LDEV&nbsp;</td><td>Corning</td><td>356234</td><td>Detergent do matrycy membrany podstawnej</td></tr><tr><td>- Triton-X</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td>Niejonowy środek powierzchniowo czynny</td></tr><tr><td>Dimetylosulfotlenek (DMSO)</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>BP231-100</td><td></td></tr><tr><td>Pipety jednorazowe (1 ml, 2 ml, 5 mL, 10 mL, 25 ml, 50 ml)</td><td>Fisher Scinetific</td><td>1 mL: 13-678-11B, 2 mL: 05214038, 5 ml (FALCON): 357529, 10 mL: 13-678-11E, 25 mL: 13-678-11, 50 ml: 13-678-11F</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca</td><td>Hyklon</td><td>SH30073-03</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyd 37% roztwór</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F1635</td><td></td></tr><tr><td>Szklane talerze</td><td>Slumpys</td><td>GBS4100SFSL</td><td></td></tr><tr><td>Szklane pipety transferowe</td><td>Fisher Scinetific</td><td>5 3/4": 1367820A, 9":136786B</td><td></td></tr><tr><td>Peptyd glicyno-argininy-cysteiny-asparaginianu-glicyny-seryny (GRCD-RGDS)</td><td>Genic Bio, Szanghaj, Chiny</td><td>nie dotyczy</td><td>Niestandardowa synteza</td></tr><tr><td>Hemacytometr</td><td>Bright-Line</td><td>383684</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór hydrofobowy - Repel Silane&nbsp;</td><td>GE Healthcare Bio-Sciences</td><td>17-1332-01</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>NUAIRE</td><td>NU-8500</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop odwrócony (Axiovert 25)</td><td>Zeiss</td><td>663526</td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen DiOC16(3) (nadchloran 3,3'-diheksadecyloksakarbocyjaniny)</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>D1125</td><td></td></tr><tr><td>Leica Confocal SP8</td><td>Leica Microsystems Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop świetlny i fluorescencyjny (Axiovert 200M)</td><td></td>Probówki wirówkowe <td>Zeiss</td> 3820005619 <td></td></tr><tr><td>Micro</td><td>Fisher Scientific</td><td>2 mL: 02681258</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie mikroskopowe</td><td>Zeiss</td><td>AxioVision Rel. 4.8.2</td><td></td></tr><tr><td>Nestin Alexa Fluor 594&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-23927</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>PARAFILM&nbsp;</td><td>PM992</td><td></td></tr><tr><td>PBS (1x), pH 7,4</td><td>HyClone</td><td>SH30256,01</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina Streptomycyna</td><td>MP Biomedicals</td><td>1670046</td><td></td></tr><tr><td>Pomoc w pipetach</td><td>Drummond Scientific Co.</td><td>P-76864</td><td></td></tr><tr><td>Końcówki do pipet (1&ndash; 200 i mikro; L, 101&ndash; 1000 &mikro; L)</td> <td>Fisher Scinetific</td><td>2707509</td><td></td></tr><tr><td>Plastikowe standardowe jednorazowe pipety transferowe</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9D</td><td></td></tr><tr><td>Plastikowe łodzie wagowe (100 ml)</td><td>Amazon&nbsp;</td><td>mdo-azoc-1030</td><td></td></tr><tr><td>poli(glikol etylenowy)-ditiol (PEG-diSH; 3,4 kDa)</td><td>Laysan Bio</td><td>SH-PEG-SH-3400-5g</td><td></td></tr><tr><td>Polidimehylsiloksan (PDMS) [Zestaw elastomerów Slygard 182]</td><td>Elsworth Adhesives</td><td>3097358-1004</td> Bezpudrowe rękawice badawcze <td>z polidimetylosiloksanu</td></tr><tr><td></td><td>Quest</td><td>92897</td><td></td></tr><tr><td>Jodek propidyny, 1 mg/ml roztwór wodny.&nbsp;</td><td>Fisher Naukowy&nbsp;</td><td></td><td></td>AAJ66584AB</tr><tr><td>RPMI-1640 Medium (1x)</td><td>HyClone</td><td>SH30027-02</td><td></td></tr><tr><td>Dystanse silikonowe - Arkusz silikonowy o grubości 0,5 mm / 13 cm x 18 cm</td><td>Grace Bio-Labs</td><td>JTR-S-0,5</td><td></td></tr><tr><td>SOX2 Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-365823</td><td></td></tr><tr><td>Kaptur do hodowli tkanek</td><td>NUAIRE</td><td>NU-425-600</td><td></td></tr><tr><td>Trietanoloamina, &ge; 99.0% (GC)&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>90279</td><td></td></tr><tr><td>U-87 MG ludzkie komórki glejaka</td><td>Kolekcja kultur typu amerykańskiego&nbsp;</td><td>Zobacz materiał HTB-14</td><td></td></tr></tbody></table>

wytwarzanie i enkapsulacja sferoidów nowotworowych w hydrożelach glikolu polietylenowego do badania oddziaływań sferoida-matryca

Tumor Spheroid Fabrication and Encapsulation in Polyethylene Glycol Hydrogels for Studying Spheroid-Matrix Interactions

Trójwymiarowa (3D) enkapsulacja sferoidów jest kluczowa dla odpowiedniej replikacji mikrośrodowiska guza dla optymalnego wzrostu komórek. Tutaj zaprojektowaliśmy model glejaka 3D in vitro do enkapsulacji sferoidalnej, aby naśladować zewnątrzkomórkowe mikrośrodowisko guza. Najpierw uformowaliśmy kwadratowe piramidalne formy mikrostudzienkowe przy użyciu polidimetylosiloksanu. Te formy mikrostudzienkowe zostały następnie wykorzystane do wytworzenia sferoid guza o ściśle kontrolowanych rozmiarach od 50 do 500 μm. Po uformowaniu sferoid zebrano je i zatorbiono w hydrożelach na bazie glikolu polietylenowego (PEG). Hydrożele PEG są wszechstronną platformą do enkapsulacji sferoidowej, ponieważ właściwości hydrożelu, takie jak sztywność, degradowalność i adhezjalność komórek, można dostrajać niezależnie. W tym przypadku użyliśmy reprezentatywnego miękkiego (~8 kPa) hydrożelu do kapsułkowania sferoid glejaka. Na koniec opracowano metodę barwienia i obrazowania sferoid w celu uzyskania wysokiej jakości obrazów za pomocą mikroskopii konfokalnej. Ze względu na gęste sferoidalne jądro i stosunkowo rzadkie peryferium, obrazowanie może być trudne, ale zastosowanie roztworu oczyszczającego i konfokalnego przekroju optycznego pomaga złagodzić te trudności z obrazowaniem. Podsumowując, pokazujemy metodę wytwarzania jednolitych sferoid, kapsułkowania ich w hydrożelach PEG i wykonywania mikroskopii konfokalnej na zamkniętych sferoidach w celu zbadania wzrostu sferoidów i różnych interakcji komórka-macierz.

Platformy do przesiewania leków oparte na sferoidach, służące do badania efektów chemioterapeutycznych, są coraz bardziej poszukiwane ze względu na nacisk na modulowanie mikrośrodowiska guza podczas enkapsulacji sferoidów w biomateriałach naśladujących natywną tkankę. W niniejszej pracy opracowaliśmy metodę przygotowania wielokomórkowych sferoidów nowotworowych oraz ich późniejszej enkapsulacji i obrazowania w hydrożelu 3D. Sferoidy są przygotowywane w formach z mikrowellami (Ryc. 3A,<strong...

Tutaj prezentujemy protokół, który umożliwia szybką, solidną i tanią produkcję sferoid nowotworowych, a następnie enkapsulację hydrożelową. Ma szerokie zastosowanie, ponieważ nie wymaga specjalistycznego sprzętu. Byłoby to szczególnie przydatne do badania interakcji sferoida-matryca oraz budowania modeli fizjologii lub patologii tkanek in vitro.

Wytwarzanie i enkapsulacja sferoidów nowotworowych w hydrożelach glikolu polietylenowego do badania oddziaływań sferoida-matryca

Three-dimensional (3D) encapsulation of spheroids is crucial to adequately replicate the tumor microenvironment for optimal cell growth.  Here, we ...

Nasze laboratorium koncentruje się na projektowaniu modeli hydrożelowych in vitro do enkapsulacji sferoidalnej glejaka w celu naśladowania zewnątrzkomórkowego mikrośrodowiska guza. Za pomocą takich modeli bada się wpływ właściwości mechanicznych i biochemicznych substratu na żywotność komórek sferoidalnych, kolistość, łodygę i rozprzestrzenianie się. Obecne wyzwania eksperymentalne w opracowywaniu modeli nowotworów koncentrują się wokół pragnienia złożoności, aby naśladować wszystkie aspekty mikrośrodowiska guza pod kątem znaczenia fizjologicznego, a także pragnienia prostoty, aby model był dostępny, solidny, tani i łatwy w użyciu oraz kompatybilny z podejściami do badań przesiewowych multipleksów.Przedstawiamy protokół, który umożliwia szybkie, solidne i tanie wytwarzanie sferoid guza i enkapsulację w hydrożelach wykonanych w celu naśladowania mikrośrodowiska guza. Model nie wymaga żadnego specjalistycznego sprzętu. Będzie to szczególnie przydatne do badania interakcji sferoida-matryca oraz budowania modeli fizjologii lub patologii tkanek in vitro.Zrozumienie interakcji między komórkami raka glejaka wielopostaciowego a ich mikrośrodowiskiem może zachęcić do opracowania nowych terapii w celu lepszego leczenia tego nowotworu. Co więcej, opracowanie modelu in vitro raka glejaka może przyspieszyć rozwój tego modelu dla innych chorób nowotworowych. Na początek ubogie dwa gramy lub około jednego mililitra ujemnego roztworu prekursora PDMS na jedną studzienkę sześciodołkowej kwadratowej piramidalnej formy wzorcowej.Po pokryciu formy wzorcowej PDMS umieścić płytkę w eksykatorze próżniowym w celu odgazowania roztworu. Następnie umieść talerz w piekarniku w temperaturze 60 stopni Celsjusza na 24 godziny, aby utwardzić PDMS. Gdy PDMS utwardzi się, ale jest nadal ciepły, użyj szpatułki, aby ostrożnie usunąć formę PDMS z formy głównej.Następnie za pomocą stempla do biopsji pokrój go w płytę o średnicy 35 milimetrów. Umieść odpowiednio przyciętą foremkę PDMS na szalce Petriego i przykryj ją pokrywką, aby kontynuować utwardzanie w temperaturze pokojowej przez dodatkowe 24 godziny. Aby przygotować dodatnią formę PDMS, umieść 35-milimetrową płytę ujemnej formy PDMS na 35-milimetrowej szalce Petriego z teksturowanymi mikrodołkami skierowanymi do góry.Wlej 2,5 grama lub około 1,2 mililitra dodatniego roztworu prekursora PDMS na ujemną formę na szalce Petriego. Odgazuj roztwór prekursora przez 30 minut przed włożeniem go do piekarnika w temperaturze 60 stopni Celsjusza na trzy do czterech godzin. Po utwardzeniu usuń foremki z szalki Petriego.Natychmiast oderwij dodatnią formę od ujemnej formy. Użyj 10-milimetrowego stempla do biopsji, aby pociąć dodatnie formy na płyty. Następnie za pomocą pęsety delikatnie zanurz płaską stronę każdej 10-milimetrowej formy dodatniej we wcześniej przygotowanym roztworze prekursora kleju PDMS.Ostrożnie umieść jedną formę na studzienkę w dołku z 48-dołkową płytką. Delikatnie dociśnij każdą foremkę, aby przykleić ją do dna studzienki. Inkubuj zmontowaną płytkę w temperaturze 60 stopni Celsjusza przez 4 do 24 godzin, aby utwardzić klej.Na początek umieść formy do mikrostudzienek PDMS, płyn do płukania zapobiegający przywieraniu i niezbędny sprzęt laboratoryjny w kapturze do hodowli tkankowych. Aby umyć formy do mikrostudzienek PDMS, użyj pipety o pojemności 1 000 mikrolitrów, aby dodać 300 mikrolitrów roztworu płuczącego zapobiegającego przywieraniu do każdej studzienki. Następnie odwirować płytkę 1,620g przez trzy minuty.Użyj pompy próżniowej i pipety Pasteura, aby zassać roztwór. Następnie umieścić 500 mikrolitrów zawiesiny komórkowej o pożądanym stężeniu w mikrostudzienkach i odwirować płytkę o sile 1,620 g przez trzy minuty. Umieścić płytkę w nawilżonym inkubatorze, aby umożliwić tworzenie sferoidów.Aby zebrać sferoidy, za pomocą pipety o pojemności 1 000 mikrolitrów, mocno dodaj 500 mikrolitrów kompletnego podłoża do każdej studzienki. Odpipetować dodane medium w górę i w dół w każdym kwadrancie trzy do czterech razy, aby usunąć sferoidy. Następnie za pomocą pipety delikatnie zassać pożywkę zawierającą sferoidy do probówki mikrowirówkowej.Przenieść 50 mikrolitrów zawiesiny sferoidalnej do probówki do mikrowirówki. Następnie, po kolei, dodaj do niego 4-ramienny PEG-akrylan i PEG-ditiol. Wymieszaj otrzymany roztwór, pipetując go w górę iw dół około 10 razy, aby uzyskać 100 mikrolitrów 10% wagowo roztworu prekursora hydrożelu PEG.Odpipetować 20 mikrolitrów roztworu prekursora żelu pomiędzy dwoma szkiełkami szklanymi wyłożonymi parafilmem, oddzielonymi jednomilimetrowymi silikonowymi przekładkami i inkubować szkiełka z roztworem prekursora żelu, aby umożliwić żelowanie. Po zakończeniu żelowania hydrożelowego za pomocą szpatułki delikatnie oderwij żele od oddzielonych szkiełek szkiełkowych. Umieść jeden żel na studzienkę w 24-dołkowej płytce, upewniając się, że powierzchnia zawierająca sferoidy jest skierowana do góry.Dodaj 500 mikrolitrów kompletnej pożywki do każdej studzienki, aby całkowicie zanurzyć hydrożel. Umieść płytkę wielodołkową w nawilżonym inkubatorze w celu hodowli komórek. Opisana technika z wykorzystaniem form mikrostudzienkowych doprowadziła do powstania sferoid o sferoidalnych kształtach i ściśle kontrolowanej polidyspersyjności.W przypadku sferoid z 3 300 komórkami na mikrostudzienkę, średni rozmiar sferoidy wynosił około 250 mikronów, a okrągłość była większa niż 0,8, biorąc pod uwagę wartość jeden jako idealną kulę. Średnice sferoid zależały od wielkości mikrostudzienki i liczby komórek w mikrostudzince. Na początek odessać pożywkę z dołków, w których hoduje się komórki otoczone hydrożelem na 24-dołkowej płytce.Przepłukać hydrożele, pipetując 500 mikrolitrów PBS bezpośrednio do każdej studzienki zawierającej hydrożele, a następnie delikatnie zassać PBS. Używając pipety o pojemności 1 000 mikrolitrów, dodaj 500 mikrolitrów roztworu utrwalającego do dołka, aby utrwalić sferoidy w 24-dołkowej płytce. Pozostawić utrwalacz do namoczenia żeli przez 30 minut w temperaturze pokojowej, a następnie odpipetować roztwór utrwalacza i wyrzucić go do wyznaczonego pojemnika na odpady.Następnie trzykrotnie przepłucz hydrożele PBS, jak pokazano wcześniej. Jeśli nie zostaną natychmiast zużyte, przechowuj hydrożele w 500 mikrolitrach PBS na studzienkę w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez okres do jednego tygodnia. Aby wybarwić komórki otoczone hydrożelem, najpierw należy przygotować odpowiednio rozcieńczone przeciwciała pierwszorzędowe dla nestyny i SOX2.Po zaessaniu PBS ze studzienek dodać 50 mikrolitrów rozcieńczonych przeciwciał do każdej studzienki. Inkubuj komórki z przeciwciałami przez 24 godziny, aby całkowicie je wybarwić. Następnie, za pomocą pipety o pojemności 1 000 mikrolitrów, usuń roztwór barwiący i odpowiednio wyrzuć odpady.Po trzykrotnym wypłukaniu hydrożeli należy je przechowywać w PBS w temperaturze czterech stopni Celsjusza do dwóch tygodni przed obrazowaniem lub natychmiast wykonać obraz. Aby usunąć zabarwioną sferoidę w celu poprawy przezroczystości obrazowania, najpierw odessać PBS z każdej studzienki. Następnie, po kolei, potraktuj sferoidy 500 mikrolitrami 20%40% i 80% formamidu na studzienkę przez 90 minut każdy.Na koniec inkubuj hydrożele w 100% formamidzie przez 24 godziny przed obrazowaniem. Sferoidy zostały zobrazowane na różnych głębokościach stosu Z, co pozwoliło na ocenę żywotności komórek w każdym miejscu w stosie Z. Maksymalna projekcja wykorzystująca stos sferoidalny reprezentowała najwyższy punkt natężenia światła w każdej lokalizacji, uproszczony do jednego obrazu.Reprezentatywne obrazy barwionych sferoid ujawniły, że samoodnawiający się czynnik transkrypcyjny SOX2 był kolokalizowany z DAPI w jądrze. Wręcz przeciwnie, gniazdo markera komórek macierzystych było obecne we wszystkich komórkach. Nie stwierdzono różnicy między sferoidami swobodnie unoszącymi się bez żelu a sferoidami zamkniętymi w kapsułkach, prawdopodobnie ze względu na obojętność zastosowanego żelu PEG.Reprezentatywne obrazy przekrojów optycznych o średnicy około 90 mikronów w oczyszczone i nieoczyszczone sferoidy ujawniły, że po przeprowadzeniu oczyszczania sferoidalne jądro można było zobrazować o około 30 mikronów głębiej w porównaniu z nieoczyszczoną sferoidą.

tumor-spheroid-fabrication-encapsulation-polyethylene-glycol

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Źródło: Guyon, J., et al. Model sferoidalny 3D glejaka. J. Vis. Exp. (2020)Film demonstruje generowanie trójwymiarowego sferoidalnego modelu inwazji komórek nowotworowych. Sferoidy są tworzone z ludzkich komórek nowotworowych mózgu i osadzone w macierzy kolagenowej. Komórki nowotworowe na obrzeżach sferoidy przyjmują fenotyp inwazyjny, wydzielając proteazy w celu degradacji kolagenu i posuwając się do inwazji na otaczającą macierz.

Generowanie trójwymiarowego sferoidalnego modelu inwazji komórek nowotworowych

Mikroreologia śledząca cząstki może być wykorzystana do nieniszczącego ilościowego i przestrzennego mapowania zmian właściwości mechanicznych macierzy zewnątrzkomórkowej w modelach 3D nowotworów.

Podłużny pomiar sztywności macierzy zewnątrzkomórkowej w modelach 3D guzów przy użyciu mikroreologii śledzenia cząstek

Tutaj opisujemy szybki i elastyczny protokół tworzenia sferoid 3D komórek poprzez agregację komórek. Można go łatwo dostosować do wielu typów komórek i nadaje się do stosowania w różnych zastosowaniach, w tym w testach migracji komórek, inwazji lub anoikis, a także do obrazowania i ilościowego określania interakcji komórka-macierz.

Wydajna i elastyczna metoda agregacji komórek do produkcji sferoidów 3D

Ten protokół opisuje wytwarzanie elastycznych makroporowatych mikrokriożeli 3D poprzez integrację mikrofabrykacji z technologią kriożelacji. Po załadowaniu komórkami generowane są mikrotkanki 3D, które można łatwo wstrzyknąć in vivo w celu ułatwienia terapii regeneracyjnej lub złożyć w matryce do wysokoprzepustowych badań przesiewowych leków in vitro.

Mikrotkanki 3D do iniekcyjnej terapii regeneracyjnej i wysokoprzepustowych badań przesiewowych leków

Opracowaliśmy heterogeniczny model raka piersi składający się z unieśmiertelnionych komórek guza i fibroblastów osadzonych w biodrukowalnym biotuszu alginian/żelatyna. Model podsumowuje mikrośrodowisko guza in vivo i ułatwia tworzenie wielokomórkowych sferoid guza, dostarczając informacji na temat mechanizmów napędzających nowotworzenie nowotworów.

Biodrukowalny hydrożel alginianowo-żelatynowy 3D Systemy modelowe in vitro indukują tworzenie sferoidów komórkowych

Mikrośrodowisko guza jest istotną częścią wzrostu i inwazji raka. Aby naśladować postęp raka, potrzebna jest biologicznie istotna ludzka matryca. Protokół ten wprowadza ulepszenie trójwymiarowego testu inwazji sferoidalnej in vitro poprzez zastosowanie ludzkiej matrycy opartej na mięśniaku gładkokomórkowym. Protokół wprowadza również komputerową analizę inwazji komórek.

W pełni ludzka matryca oparta na guzie w trójwymiarowym teście inwazji sferoidów

Tutaj opisujemy łatwy w użyciu test na inwazję glejaka. Ten test jest odpowiedni dla komórek macierzystych podobnych do glejaka. Opisano również makro Fidżi do łatwego ilościowego określania inwazji, migracji i proliferacji.

Model sferoidalny 3D glejaka wielopostaciowego

Przedstawione podejście jednocześnie ocenia inwazję komórek rakowych w testach sferoidalnych 3D i cytotoksyczność limfocytów T. Sferoidy są generowane w odlewie wielodołkowym z agarozy bez rusztowań. Kohodowla i osadzanie w macierzy kolagenu typu I są wykonywane w tym samym urządzeniu, które pozwala monitorować inwazję komórek rakowych i cytotoksyczność za pośrednictwem limfocytów T.

Monitorowanie inwazji komórek nowotworowych i cytotoksyczności limfocytów T w hodowli 3D

Brakuje kompleksowych modeli in vitro, które wiernie odwzorowują daną chorobę ludzką. Obecne badanie przedstawia trójwymiarowe (3D) tworzenie i hodowlę sferoidów guza, wiarygodne narzędzie in vitro do badania interakcji guz-zręb w ludzkim raku wątrobowokomórkowym.

Trójwymiarowy model sferoidalny do badania interakcji guz-zręb w raku wątrobowokomórkowym

Niniejsze badanie opisuje metodologie hodowli, zamrażania, rozmrażania, przetwarzania, barwienia, etykietowania i badania całych sferoid i organoidów pod różnymi mikroskopami, podczas gdy pozostają one nienaruszone w hydrożelu w wielofunkcyjnym urządzeniu.

Hodowla, zamrażanie, przetwarzanie i obrazowanie całych organoidów i sferoidów jeszcze w hydrożelu

Ten artykuł demonstruje ustandaryzowaną metodę konstruowania trójwymiarowych sferoid nowotworowych. Opisano również strategię obserwacji sferoidy i analizy głębokiego uczenia opartego na obrazach przy użyciu zautomatyzowanego systemu obrazowania.

Generowanie sferoid 3D guza do badań oceny leków

Naucz się szybkiej i taniej metody wytwarzania sferoidów nowotworowych oraz ich enkapsulacji w hydrożelach PEG, która naśladuje mikrośrodowisko nowotworu bez konieczności używania specjalistycznego sprzętu.

Wytwarzanie i enkapsulacja sferoidów nowotworowych w hydrożelach glikolu polietylenowego do badania oddziaływań sferoida-matryca (Wideo) | JoVE Journal

Wytwarzanie i enkapsulacja sferoidów nowotworowych w hydrożelach glikolu polietylenowego do badania oddziaływań sferoida-matryca

Przeglądaj więcej filmów