Name: Charakterystyka morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem za pomocą angiografii zieleni indocyjaninowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T14:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: Poznaj metodę angiografii zieleni indocyjaninowej do charakteryzacji morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej u myszy. Technika ta umożliwia ocenę typów zmian naczyniowych i odpowiedzi na leczenie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty z BrightFocus Foundation, Retina Research Foundation, Mullen Foundation i Sarah Campbell Blaffer Endowment in Ophthalmology dla YF, główny grant NIH 2P30EY002520 dla Baylor College of Medicine, oraz nieograniczony grant dla Wydziału Okulistyki w Baylor College of Medicine z Research to Prevent Blindness.

Eksperymenty na zwierzętach przeprowadzone w tym badaniu otrzymały zgodę Instytucjonalnych Komitetów ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) w Baylor College of Medicine. Wszystkie procedury zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi określonymi w Oświadczeniu Stowarzyszenia Badań nad Wzrokiem i Okulistyką (ARVO) dotyczącym wykorzystania zwierząt w badaniach okulistycznych i wzrokowych. Do niniejszego badania wykorzystano młode (7-9 tygodni) i stare (12-16 miesięcy) samce i samice myszy C57BL/6J. Zwierzęta zostały pozyskane ze źródła komercyjnego (patrz tabela materiałów).
1. Przygotowanie systemu obrazowania
<ol>
	<li>Umieść poduszkę grzewczą na platformie obrazowania (patrz Tabela materiałów), aby upewnić się, że temperatura ciała myszy jest utrzymywana podczas obrazowania. Aktywuj poduszkę grzewczą i ustaw temperaturę na 35 °C.</li>
	<li>Zdejmij osłonę przeciwpyłową i włącz laserowy oftalmoskop skanujący. Umieść soczewkę 55° na maszynie.</li>
	<li>Skonfiguruj oprogramowanie do obrazowania (patrz Spis materiałów) i wprowadź niezbędne informacje, w tym genotyp, płeć, wiek itp. Po rozpoczęciu sesji obrazowania wybierz IR (kanał podczerwieni) do przechwytywania obrazów ICGA.</li>
</ol>
2. Przygotowanie zwierząt przed ICGA i FA
<ol>
	<li>Zważ mysz, aby określić ilość znieczulenia (ketamina/ksylazyna 70-100/2,5-10 mg/kg, patrz tabela materiałów) potrzebna. 
	UWAGA: Optymalizacja dawki ma kluczowe znaczenie, ponieważ profil metaboliczny różni się w zależności od różnych szczepów myszy. Konieczne jest ustalenie odpowiedniej dawki, aby uniknąć obudzenia się myszy przed zakończeniem obrazowania lub ryzyka przedawkowania i potencjalnej śmiertelności zwierząt.</li>
	<li>Użyj sterylnej strzykawki o pojemności 1 ml z igłą 30-32 G, aby podać znieczulenie we wstrzyknięciu dootrzewnowym. Delikatnie uszczypnij jedną z łapek myszy, aby sprawdzić, czy mysz jest odpowiednio znieczulona. Jeśli zwierzę wykazuje jakąkolwiek reakcję lub ruch, zaleca się odczekanie dodatkowego czasu przed przejściem do następnego kroku. Pozwala to zwierzęciu na osiedlenie się i zapewnia optymalne warunki do kolejnych zabiegów.</li>
	<li>Podawać 1% krople z tropikamidowym roztworem okulistycznym, aby rozszerzyć oba oczy myszy. Odczekaj co najmniej 30 sekund przed użyciem 0,5% kropli chlorowodorku proparakainy (patrz tabela materiałów) na oba oczy, aby zmniejszyć ruchy gałek ocznych i mruganie. Następnie zastosuj nawilżające krople żelowe do oczu. 
	UWAGA: Przez cały czas trwania znieczulenia ważne jest, aby zająć się kwestią ekstremalnej suchości oczu myszy, która może prowadzić do zmętnienia rogówki. To zmętnienie sprawia, że późniejsze obrazowanie jest trudne ze względu na ograniczoną widoczność. Aby temu zapobiec, ważne jest, aby stale nakładać nawilżające krople żelu pod oczy, aby oczy myszy były nawilżone.</li>
	<li>Umieść mysz na poduszce grzewczej. 
	UWAGA: Myszy mają wysoki stosunek powierzchni do objętości, co powoduje zwiększoną utratę ciepła do otoczenia. W połączeniu ze spadkiem temperatury wywołanym znieczuleniem może to stanowić znaczne zagrożenie dla myszy, potencjalnie prowadząc do śmierci z powodu hipotermii. Bardzo ważne jest podjęcie niezbędnych środków ostrożności, aby zapobiec hipotermii i zapewnić dobre samopoczucie myszy podczas zabiegu.</li>
	<li>Przygotować mieszaninę w proporcji 1:1 zawierającą 2 mg/ml ICG i 20 mg/ml barwnika fluoresceinowego (patrz tabela materiałów). Podawać 250 μl mieszaniny we wstrzyknięciu dootrzewnowym za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml i igły 32 G.
	<ol>
		<li>Wbij igłę w lewy dolny kwadrant odwłoka myszy w pobliżu tylnych nóg pod kątem równoległym do skóry myszy, aby uniknąć perforacji jakichkolwiek narządów.</li>
		<li>Ostrożnie wyjąć tłok i sprawdzić, czy do nasadki strzykawki nie dostała się krew. Przystępuj do wstrzykiwania barwnika powoli i równomiernie, utrzymując stałe tempo. 
		UWAGA: Przed użyciem barwnik ICG należy przefiltrować filtrem strzykawkowym 0,22 μm.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. ICGA i FA
<ol>
	<li>Umieść mysz na poduszce grzewczej platformy obrazowania, aby rozpocząć obrazowanie.</li>
	<li>Ustaw korpus myszy pod kątem 45 stopni do kamery i obróć jego głowę lekko w dół. Dzięki temu nerw wzrokowy znajduje się w centrum ostrości aparatu.</li>
	<li>Za pomocą bawełnianego wacika delikatnie przetrzyj oko, aby usunąć warstwę nawilżających kropli lub żeli do oczu z pierwszego obrazowanego oka. Upewnij się, że krople żelu smarującego zostały nałożone natychmiast po zakończeniu procedury obrazowania. 
	UWAGA: Nie zaleca się pozostawiania oka bez smarowania przez ponad 1 minutę w znieczuleniu.</li>
	<li>Przesuń kamerę w kierunku oka myszy. Wybierz kanał FA z modułu akwizycji. Luminescencja emitowana przez kanał FA może być wykorzystana do umieszczenia w środku rogówki myszy w celu szybszego umieszczenia.</li>
	<li>Ustaw głowę myszy w taki sposób, aby nerw wzrokowy był wyśrodkowany na ekranie, unikając konieczności przechylania laserowego oftalmoskopu skanującego pod kątem. Dokonaj drobnych zmian w pozycji głowy myszy, aby uzyskać pożądane wyrównanie.</li>
	<li>W module akwizycji wybierz kanał ICGA. Upewnij się, że intensywność lasera jest ustawiona na 100% i wybierz opcję 55°, aby dopasować odpowiednią soczewkę. Zapewnia to optymalne ustawienia dla laserowego oftalmoskopu skaningowego. 
	UWAGA: Aby zapobiec przesyceniu, może być konieczne użycie niższej intensywności lasera, zwykle około 25%-50%, podczas obrazowania we wczesnym etapie. Regulacja intensywności lasera w tym zakresie może pomóc w uchwyceniu wyraźnych i dokładnych obrazów bez powodowania przesycenia.</li>
	<li>Gdy oko zajmuje cały ekran w oprogramowaniu do obrazowania, dokonaj regulacji ustawień czułości i ostrości, aby uzyskać jak najwyraźniejszy obraz błony CNV.
	<ol>
		<li>Obróć okrągły przycisk na module akwizycji, aby dostosować czułość obrazu.</li>
		<li>Obróć pokrętło na oftalmoskopie, aby wyregulować ostrość. Optymalna ostrość do wizualizacji naczyń krwionośnych siatkówki za pomocą FA mieści się zwykle w zakresie 35-45 D (dioptrii). Z drugiej strony, idealna ostrość do wizualizacji naczyniówki za pomocą ICGA wynosi zwykle między 10-15 D. 
		UWAGA: Ze względu na różne rozmiary błony CNV może być konieczne dostosowanie ostrości w zakresie 10-30 D, aby uzyskać optymalne obrazowanie morfologii naczyń.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Po wyregulowaniu ostrości i czułości w celu uzyskania najlepszego możliwego obrazu, naciśnij okrągły przycisk na module akwizycji, aby znormalizować obraz. Po zakończeniu normalizacji (przechwyceniu wszystkich klatek) kliknij przycisk pobierania na panelu ekranu dotykowego, aby zapisać obraz. Może być konieczne przesuwanie kamery w celu uzyskania obrazu CNV pod różnymi kątami. Mysz można również ustawić w różnych pozycjach, aby zapewnić najlepszy obraz zmiany CNV. 
	UWAGA: Może być konieczne ponowne ustawienie ostrości lub położenia laserowego oftalmoskopu skaningowego podczas oglądania naczyń krwionośnych dalej od nerwu wzrokowego.</li>
	<li>Przełącz się z powrotem na kanał FA za pomocą modułu akwizycji. Wykonaj te same czynności, które wymieniono w krokach 3.6-3.7, aby dostosować czułość i ostrość każdego obrazu w celu uchwycenia wycieku uszkodzenia CNV. 
	UWAGA: Upewnij się, że wybrano odpowiednią czułość, aby uniknąć przesycenia wycieku CNV i sztucznie zwiększyć obszar wycieku.</li>
	<li>Obraz "wczesnej fazy" ICGA i FA 3-4 minuty po wstrzyknięciu. 
	UWAGA: "Faza wczesna" to czas, w którym naczyniówka jest wyraźnie i wyraźnie widoczna. W środkowej fazie, która zwykle występuje między 4-8 minutami, naczynia siatkówki i naczyniówki są znacznie bardziej wyblakłe i rozproszone. W późnej fazie (>8-10 min) zarówno naczynia naczyniówkowe, jak i siatkówkowe stają się niedostrzegalne. Hiperfluorescencyjne zmiany CNV wykazują jednak maksymalny kontrast na zmniejszonym tle. Wspomniane czasy są zmienne i zależą od stężenia i ilości wstrzykniętego barwnika ICG. Większa ilość barwnika ICG ma tendencję do wydłużania czasu każdej fazy i zapewnia bardziej wyraźne naczynia. Faza powinna być zdefiniowana w oparciu o kluczowe cechy wymienione powyżej, a nie czas bezwzględny.</li>
	<li>Po uzyskaniu wszystkich obrazów nałóż żel lub maść na oko myszy i uważnie monitoruj mysz na poduszce grzewczej w celu odzyskania sprawności. Pełna regeneracja myszy zajmuje zwykle 1,5 godziny.</li>
	<li>Umieść myszy z powrotem w klatkach i wyznaczonym obszarze przetrzymywania, gdy w pełni wyzdrowieją ze znieczulenia i obudzą się.</li>
	<li>Przed wyłączeniem systemu obrazowania i lasera należy wyeksportować obrazy jako pliki TIFF lub JPEG w celu późniejszej analizy.</li>
</ol>
4. RPE/naczyniówka do montażu płaskiego i barwienia
<ol>
	<li>Utrwal oczy w 4% paraformaldehydzie na noc. Przemyj oczy trzykrotnie PBS. Zdejmij soczewkę i rogówkę.</li>
	<li>Inkubować oczy w roztworze blokującym (10% albuminy surowicy bydlęcej, 0,6% Triton X-100 w PBS) przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Powtórz pranie PBS trzy razy.</li>
	<li>Inkubować oczy z izopektyną GS-IB4, koniugatem z mąki Alexa 568 i przeciwciałem przeciw aktynie przeciwko α mięśniom gładkim (patrz tabela materiałów) przez noc w roztworze blokującym.</li>
	<li>Umyj trzy razy PBS. Próbki inkubować z kozim przeciwciałem drugorzędowym przeciwko królikowi Alexa Fluor 488 (patrz tabela materiałów) przez 2 godziny w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Wykonaj 4 cięcia promieniowe od krawędzi do równika. Ostrożnie usuń siatkówkę17. 
	UWAGA: Należy zachować ostrożność, aby błona neowaskularna nie została przypadkowo oderwana.</li>
	<li>Zamontuj płasko zamontowany choroid na szklanym szkiełku. Wizualizacja CNV za pomocą mikroskopii konfokalnej.</li>
</ol>

Characterizing Different Lesion Types of Laser-Induced CNV in Mouse

<ol><li>Fleckenstein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 1-25 (2021).</li>
<li>Wong, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+age-related+macular+degeneration+and+disease+burden+projection+for+2020+and+2040%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Global+Health%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of age-related macular degeneration and disease burden projection for 2020 and 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Global Health. 2 (2), e106-e116 (2014).</li>
<li>Maguire, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five-Year+outcomes+with+anti-vascular+endothelial+growth+factor+treatment+of+neovascular+age-related+macular+degeneration%3A+the+comparison+of+age-related+macular+degeneration+treatments+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Five-Year outcomes with anti-vascular endothelial growth factor treatment of neovascular age-related macular degeneration: the comparison of age-related macular degeneration treatments trials.</a> Ophthalmology. 123 (8), 1751-1761 (2016).</li>
<li>Yang, S., Zhao, J., Sun, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+anti-VEGF+therapy+in+neovascular+age-related+macular+degeneration%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design%2C+Development+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Resistance to anti-VEGF therapy in neovascular age-related macular degeneration: a comprehensive review.</a> Drug Design, Development and Therapy. 10, 1857-1867 (2016).</li>
<li>Ehlken, C., Jungmann, S., Böhringer, D., Agostini, H. T., Junker, B., Pielen, A. Switch of anti-VEGF agents is an option for nonresponders in the treatment of AMD. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEhlken%2C+C+%22Eye%22">Eye</a>. 28 (5), London, England. 538-545 (2014).</li>
<li>Heier, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+aflibercept+%28VEGF+trap-eye%29+in+wet+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Intravitreal aflibercept (VEGF trap-eye) in wet age-related macular degeneration.</a> Ophthalmology. 119 (12), 2537-2548 (2012).</li>
<li>Rofagha, S., Bhisitkul, R. B., Boyer, D. S., Sadda, S. R., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SEVEN-UP+Study+Group+Seven-year+outcomes+in+ranibizumab-treated+patients+in+ANCHOR%2C+MARINA%2C+and+HORIZON%3A+a+multicenter+cohort+study+%28SEVEN-UP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">SEVEN-UP Study Group Seven-year outcomes in ranibizumab-treated patients in ANCHOR, MARINA, and HORIZON: a multicenter cohort study (SEVEN-UP).</a> Ophthalmology. 120 (11), 2292-2299 (2013).</li>
<li>Krebs, I., Glittenberg, C., Ansari-Shahrezaei, S., Hagen, S., Steiner, I., Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-responders+to+treatment+with+antagonists+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Non-responders to treatment with antagonists of vascular endothelial growth factor in age-related macular degeneration.</a> British Journal of Ophthalmology. 97 (11), 1443-1446 (2013).</li>
<li>Mettu, P. S., Allingham, M. J., Cousins, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incomplete+response+to+Anti-VEGF+therapy+in+neovascular+AMD%3A+Exploring+disease+mechanisms+and+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Incomplete response to Anti-VEGF therapy in neovascular AMD: Exploring disease mechanisms and therapeutic opportunities.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 82, 100906(2021).</li>
<li>Otsuji, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+non-responders+to+ranibizumab+in+the+treatment+of+age-related+macular+degeneration+%28AMD%29%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Ophthalmology+%28Auckland%2C+N.Z%29%22%5BJournal%5D)">Initial non-responders to ranibizumab in the treatment of age-related macular degeneration (AMD).</a> Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z). 7, 1487-1490 (2013).</li>
<li>Cobos, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+CFH%2C+CFB%2C+ARMS2%2C+SERPINF1%2C+VEGFR1+and+VEGF+polymorphisms+and+anatomical+and+functional+response+to+ranibizumab+treatment+in+neovascular+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Association between CFH, CFB, ARMS2, SERPINF1, VEGFR1 and VEGF polymorphisms and anatomical and functional response to ranibizumab treatment in neovascular age-related macular degeneration.</a> Acta Ophthalmologica. 96 (2), e201-e212 (2018).</li>
<li>Kitchens, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pharmacogenetics+study+to+predict+outcome+in+patients+receiving+anti-VEGF+therapy+in+age+related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Ophthalmology+%28Auckland%2C+N.Z.%29%22%5BJournal%5D)">A pharmacogenetics study to predict outcome in patients receiving anti-VEGF therapy in age related macular degeneration.</a> Clinical Ophthalmology (Auckland, N.Z.). 7, 1987-1993 (2013).</li>
<li>Rosenfeld, P. J., Shapiro, H., Tuomi, L., Webster, M., Elledge, J., Blodi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+patients+losing+vision+after+2+Years+of+monthly+dosing+in+the+phase+III+Ranibizumab+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Characteristics of patients losing vision after 2 Years of monthly dosing in the phase III Ranibizumab clinical trials.</a> Ophthalmology. 118 (3), 523-530 (2011).</li>
<li>Spaide, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+angiography+signs+of+vascular+abnormalization+with+antiangiogenic+therapy+for+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography angiography signs of vascular abnormalization with antiangiogenic therapy for choroidal neovascularization.</a> American Journal of Ophthalmology. 160 (1), 6-16 (2015).</li>
<li>Lumbroso, B., Rispoli, M., Savastano, M. C., Jia, Y., Tan, O., Huang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+angiography+study+of+choroidal+neovascularization+early+response+after+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography angiography study of choroidal neovascularization early response after treatment.</a> Developments in Ophthalmology. 56, 77-85 (2016).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+apolipoprotein-A-I%2Fapolipoprotein-A-I+binding+protein+and+anti-VEGF+treatment+overcomes+anti-VEGF+resistance+in+choroidal+neovascularization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Combination of apolipoprotein-A-I/apolipoprotein-A-I binding protein and anti-VEGF treatment overcomes anti-VEGF resistance in choroidal neovascularization in mice.</a> Communications Biology. 3 (1), 386(2020).</li>
<li>Zhang, Z., Shen, M. M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+AIBP%2C+apoA-I%2C+and+Aflibercept+overcomes+anti-VEGF+resistance+in+neovascular+AMD+by+inhibiting+arteriolar+choroidal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Combination of AIBP, apoA-I, and Aflibercept overcomes anti-VEGF resistance in neovascular AMD by inhibiting arteriolar choroidal neovascularization.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 63 (12), 2(2022).</li>
<li>Koehn, D., Meyer, K. J., Syed, N. A., Anderson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine%2FXylazine-induced+corneal+damage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Ketamine/Xylazine-induced corneal damage in mice.</a> PloS One. 10 (7), e0132804(2015).</li>
<li>Li, X. -T., Qin, Y., Zhao, J. -Y., Zhang, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lens+opacity+induced+by+different+kinds+of+anesthetic+drugs+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Acute lens opacity induced by different kinds of anesthetic drugs in mice.</a> International Journal of Ophthalmology. 12 (6), 904-908 (2019).</li>
<li>Zhou, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+corneal+calcification+associated+with+xylazine+for+longitudinal+optical+coherence+tomography+in+young+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Preventing corneal calcification associated with xylazine for longitudinal optical coherence tomography in young rodents.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (1), 461-469 (2017).</li>
<li>Ikeda, W., Nakatani, T., Uemura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cataract-preventing+contact+lens+for+in+vivo+imaging+of+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Cataract-preventing contact lens for in vivo imaging of mouse retina.</a> BioTechniques. 65 (2), 101-104 (2018).</li>
<li>Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. D., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+abnormalities+in+choroidal+vasculature+in+a+mouse+model+of+age-related+macular+degeneration+by+time-course+indocyanine+green+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Detecting abnormalities in choroidal vasculature in a mouse model of age-related macular degeneration by time-course indocyanine green angiography.</a> Journal of Visualized Experiments. 84, e51061(2014).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Badanie to wykazało zastosowanie zielonej angiografii indocyjaninowej (ICGA) do identyfikacji morfologii naczyniowej tętniczki i naczynia włosowatego naczyniówki (CNV) w modelach mysich z CNV indukowanym laserem. Właściwości barwnika zieleni indocyjaninowej (ICG) związane z hemoglobiną i światłem podczerwonym umożliwiły wykrycie morfologii CNV, co jest trudne do osiągnięcia przy użyciu angiografii fluoresceinowej (FA), obecnej metody stosowanej przez społeczność naukową.
Pierwszym krytycznym k...

Zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD) jest powszechnym schorzeniem, które prowadzi do poważnej utraty wzroku u osób starszych1. Przewiduje się, że w samych Stanach Zjednoczonych liczba pacjentów z AMD podwoi się, osiągając prawie 22 miliony do 2050 roku, w porównaniu z obecnymi 11 milionami. Oczekuje się, że do 2040 r. na całym świecie szacowana liczba przypadków AMD osiągnie oszałamiającą liczbę 288 milionów2.
Neowaskularyzacja naczyniówkowa (CNV), znana również jako "mokre" lub neowaskularne AMD, może mieć niszczący wpływ na widzenie z powodu tworzenia się nieprawidłowych naczyń krwionośnych pod centralną siatkówką. Prowadzi to do krwotoku, wysięku siatkówki i znacznej utraty wzroku. Wprowadzenie terapii przeciwnaczyniowego śródbłonkowego czynnika wzrostu (VEGF), które są ukierunkowane na zewnątrzkomórkowy VEGF, zrewolucjonizowało leczenie CNV. Jednak pomimo tych postępów, do 50% pacjentów wykazuje nieoptymalne odpowiedzi na te terapie, z ciągłą aktywnością choroby, taką jak gromadzenie się płynów i nierozwiązane lub nowe krwotoki3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14.
Badania kliniczne wykazały, że oporność na anty-VEGF u pacjentów z CNV często odpowiada obecności tętniczki tętniczkowej, charakteryzującej się rozgałęzionymi tętniczkami dużego kalibru, pętlami naczyniowymi i połączeniami zespoleniowymi9. Powtarzające się leczenie anty-VEGF może przyczyniać się do nieprawidłowości naczyń krwionośnych, rozwoju CNV tętniczek, a ostatecznie do oporności na terapie anty-VEGF14,15. W przypadku CNV tętniczego uporczywy wyciek płynu jest prawdopodobnie spowodowany zwiększonym wysiękiem spowodowanym nieodpowiednio uformowanymi ścisłymi połączeniami w pętlach zespolenia tętniczo-żylnego, szczególnie w warunkach wysokiego przepływu krwi9. I odwrotnie, osoby, które dobrze reagują na leczenie anty-VEGF, mają tendencję do wykazywania naczyń włosowatych CNV.
W naszych badaniach z wykorzystaniem modeli zwierzęcych wykazaliśmy, że indukowany laserem CNV u starszych myszy rozwija tętnicze CNV i wykazuje odporność na leczenie anty-VEGF16,17. I odwrotnie, indukowany laserem CNV u młodszych myszy prowadzi do rozwoju naczyń włosowatych CNV i wysokiej odpowiedzi na leczenie anty-VEGF. W związku z tym kluczowe znaczenie ma rozróżnienie między typami naczyniowymi CNV zarówno w badaniach mechanistycznych, jak i terapeutycznych.
W warunkach klinicznych, CNV jest powszechnie klasyfikowane na podstawie wzorców przecieku angiografii fluoresceinowej (FA) (np. Typ 1, Typ 2), które wykorzystują barwnik fluoresceinowy do śledzenia wysięku i identyfikacji obszarów patologicznego przecieku. W badaniach nad AMD CNV jest badany głównie przy użyciu FA w modelach zwierzęcych. Jednak FA nie ujawnia morfologii naczyniowej CNV. Co więcej, FA rejestruje obrazy tylko w widmie światła widzialnego i nie może wizualizować naczyniówki pod nabłonkiem barwnikowym siatkówki (RPE). Z kolei zieleń indocyjaninowa (ICG), która wykazuje silne powinowactwo do białek osocza, ułatwia dominującą retencję wewnątrznaczyniową i umożliwia wizualizację struktury naczyń krwionośnych i przepływu krwi9. Wykorzystując właściwość fluorescencji ICG w bliskiej podczerwieni, możliwe staje się obrazowanie pigmentu siatkówki i naczyniówki za pomocą angiografii ICG (ICGA). W tym kontekście przedstawiono protokół, który łączy FA i ICGA w celu zbadania przecieku i morfologii naczyniowej indukowanej laserem neowaskularyzacji naczyniówkowej (CNV) u młodych i starych myszy, u których obserwuje się CNV naczyń włosowatych i tętniczych.

<table><tbody><tr><td>Strzykawka insulinowa 32-G</td><td>MHC Produkty medyczne</td><td>NDC 08496-3015-01</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 kozie przeciwciało wtórne przeciwko królikowi</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp; A11008</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało anty-&alfa przeciwko aktynie mięśni gładkich</td><td>Abcam</td><td>ab5694</td><td></td></tr><tr><td>Albumina surowicy bydlęcej</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC-2323&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Myszy C57BL/6J (7-9 tygodni)</td><td>Szczep laboratoryjny Jackson</td><td>#:000664</td><td></td></tr><tr><td>Sól sodowa fluoresceiny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MFCD00167039</td><td></td></tr><tr><td>System terapii cieplnej z pompą Gaymar T</td><td>Gaymar</td><td>TP-500</td><td>Pompa ciepła z obiegiem wody do odzyskiwania myszy po obrazowaniu</td></tr><tr><td>GenTeal Gel</td><td>Genteal</td><td>NDC 58768-791-15</td><td>Przezroczysty nawilżający żel</td></tr> <tr><td>pod oczyGS-IB4 Alexa-Mąka 568 sprzężona</td><td>z invitrogenem</td><td>&nbsp; I21412</td><td></td></tr><tr><td>Heidelberg Eye Explorerer</td><td>Heidelberg Engineering, Niemcy</td><td>HEYEX2</td><td></td></tr><tr><td>Indocyanine Green</td><td>Pfaultz & Bauer</td><td>I01250</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Vedco Inc.</td><td>NDC 50989-996-06</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Acros Organics&nbsp;</td><td></td><td></td>416785000</tr><tr><td>Roztwór okulistyczny chlorowodorku proparakainy (0,5%)</td><td>Sandoz</td><td>NDC 61314-016-01</td><td></td></tr><tr><td>Multimodalny system obrazowania Spectralis</td><td>Heidelberg Engineering, Niemcy</td><td>SPECTRALIS HRA+OCT</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-1L</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide roztwór okulistyczny (1%)</td><td>Bausch & Lomb</td><td>NDC 24208-585-64</td><td>Do rozszerzania źrenic</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>NADA 139-236</td><td></td></tr></tbody></table>

charakterystyka morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem za pomocą angiografii zieleni indocyjaninowej

Characterization of Vascular Morphology of Neovascular Age-Related Macular Degeneration by Indocyanine Green Angiography

Zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD) jest główną przyczyną ślepoty wśród osób starszych, a jego częstość występowania gwałtownie wzrasta ze względu na starzenie się populacji. Neowaskularyzacja naczyniówkowa (CNV) lub wysiękowe AMD, które stanowi 10%-20% wszystkich przypadków AMD, jest odpowiedzialne za alarmujące 80%-90% ślepoty związanej z AMD. Obecne terapie anty-VEGF wykazują nieoptymalną odpowiedź u około 50% pacjentów. Oporność na leczenie anty-VEGF u pacjentów z CNV jest często związana z CNV tętniczków, podczas gdy osoby reagujące na leczenie mają zwykle naczyń włosowate CNV. Chociaż angiografia fluoresceinowa (FA) jest powszechnie stosowana do oceny wzorców przecieków u pacjentów z wysiękową postacią AMD i modelach zwierzęcych, nie dostarcza informacji na temat morfologii naczyń CNV (CNV tętniczek w porównaniu z CNV naczyń włosowatych). Protokół ten wprowadza zastosowanie zielonej angiografii indocyjaninowej (ICGA) do scharakteryzowania typów zmian w mysich modelach CNV indukowanych laserem. Metoda ta ma kluczowe znaczenie dla zbadania mechanizmów i strategii leczenia oporności na anty-VEGF w wysiękowym AMD. Zaleca się włączenie ICGA wraz z FA w celu kompleksowej oceny zarówno nieszczelności, jak i cech naczyniowych CNV w badaniach mechanistycznych i terapeutycznych.

Zgodnie z protokołem, przeprowadzono ICGA i FA w przypadku CNV indukowanej laserowo u młodych (7-9 tygodni) i starych (12-16 miesięcy) myszy C57BL/6J. FA dostarcza informacji o lokalizacji i przecieku zmian CNV (Rycina 1, panele lewe), podczas gdy ICGA ujawnia morfologię naczyniową zmian CNV (Rycina 1, panele prawe). U młodych myszy w zmianach CNV dominuje CNV kapilarna. W przeciwieństwie do nich, u starych myszy występuje CNV tętniczkowa, charakteryzująca się n...

Obecnie, angiografia fluoresceinowa (FA) jest preferowaną metodą identyfikacji wzorców przecieków w zwierzęcych modelach neowaskularyzacji naczyniówkowej (CNV). Jednak FA nie dostarcza informacji na temat morfologii naczyń krwionośnych. Protokół ten przedstawia zastosowanie angiografii zieleni indocyjaninowej (ICGA) do scharakteryzowania różnych typów zmian CNV indukowanych laserem w modelach mysich.

Charakterystyka morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem za pomocą angiografii zieleni indocyjaninowej

Age-related macular degeneration (AMD) is a leading cause of blindness among older individuals, and its prevalence is rapidly increasing due to the aging ...

Pracujemy nad mechanizmem i strategiami leczenia zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem, powszechnego schorzenia powodującego poważną utratę wzroku u osób starszych. W szczególności opracowujemy nowe metody leczenia, aby rozwiązać problem lekooporności na obecne leczenie neowaskularyzacji naczyniówkowej, która jest wysiękowym typem AMD. Nasze laboratorium niedawno opracowało nową terapię w celu poprawy oporności na anty VEGF w CNV.Osiąga się to za pomocą mysiego modelu CNV. Nasze badania wykazały, że u starych myszy z CNV indukowanym laserem rozwija się arteriola CNV, która jest oporna na leczenie anty VEGF. Natomiast młode myszy z naczyń włosowatych CNV reagują na leczenie.W badaniach nad AMD CNV jest badany prawie wyłącznie za pomocą angiografii fluoresceinowej w celu ujawnienia wzorców przecieków w modelach zwierzęcych. Jednak FA nie wykazuje morfologii naczyń CNV, a zatem nie nadaje się do badania oporności na anty-VEGF w AMD. Obecna metoda FA stosowana do obrazowania CNV nie zawiera istotnych informacji dotyczących morfologii naczyniowej zmian CNV, takich jak CNV naczyń włosowatych lub tętniczych.Jednak łącząc ICGA i FA, protokół ten może ocenić zarówno przeciek CNV, jak i morfologię naczyń. Oceniając zarówno przeciek, jak i morfologię zmian CNV, możliwe jest zbadanie mechanizmu leżącego u podstaw cząsteczki, prowadzącego do powstania arvioli CNV, a tym samym zapewnienie możliwości znalezienia nowych celów w leczeniu oporności na anty-VGF u pacjentów z AMD. Po znieczuleniu myszy delikatnie uszczypnij jedną z łapek myszy, aby sprawdzić, czy mysz jest odpowiednio znieczulona.Podaj 1% krople roztworu okulistycznego tropikamidu, aby rozszerzyć oczy myszy i odczekaj 30 sekund. Następnie, aby zmniejszyć ruchy gałek ocznych i mruganie, nałóż 0,5% krople chlorowodorku proparakainy na oba oczy, a następnie krople lubrykantu iGel i umieść mysz na poduszce grzewczej. Przygotować mieszankę barwników zawierającą równą objętość zieleni indocyjaninowej lub ICG i barwnika fluoresceinowego.Wstrzyknąć 250 mikrolitrów mieszaniny przez wstrzyknięcie dootrzewnowe w lewy dolny kwadrant, w pobliżu tylnych nóg myszy, ustawiając ją równolegle do skóry, aby zapobiec perforacji narządów. Ostrożnie wycofać tłok, upewniając się, że do nasadki strzykawki nie dostała się krew. Kontynuuj, stopniowo wstrzykując barwnik w stałym tempie.Następnie umieść mysz na poduszce grzewczej platformy obrazowania. Dostosuj położenie korpusu myszy pod kątem 45 stopni w stosunku do aparatu i delikatnie pochyl głowę lekko w dół. Delikatnie przetrzyj oko, które ma być wykonane za pomocą bawełnianego wacika, aby usunąć warstwę nawilżających kropli do oczu lub żeli.Przesuń kamerę w kierunku oka myszy i wybierz kanał FA z modułu akwizycji. Ułóż głowę myszy tak, aby nerw wzrokowy był wyśrodkowany na ekranie, unikając konieczności przechylania laserowego oftalmoskopu skanującego. Teraz przełącz się na kanał ICGA w module akwizycji.Gdy oko zajmie cały ekran w oprogramowaniu do obrazowania, obróć okrągły przycisk na module akwizycji, aby dostosować czułość obrazu. Użyj pokrętła oftalmoskopów, aby dostroić ostrość. Następnie naciśnij okrągły przycisk na module akwizycji, aby znormalizować obraz.Po normalizacji kliknij przycisk pobierania na panelu ekranu dotykowego, aby zapisać obraz. Przełącz się na kanał FA za pomocą modułu akwizycji i dostosuj zarówno czułość, jak i ostrość każdego obrazu, jak pokazano wcześniej, aby uchwycić przeciek neowaskularyzacji naczyniówkowej lub zmiany CNV. Następnie uchwyć obrazy wczesnej fazy ICGA i FA trzy do czterech minut po wstrzyknięciu.Po zrobieniu wszystkich niezbędnych obrazów nałóż żel, lubrykant lub maść na oko myszy. Naczyń włosowatych CNV dominuje w zmianach CNV u młodych myszy. W przeciwieństwie do tego, stare myszy wykazują CNV tętniczki, charakteryzujące się naczyniami dużego kalibru, pętlami naczyniowymi i połączeniami zespoleniowymi.Zarówno młode, jak i stare myszy wykazują wyraźną widoczność układu naczyniowego siatkówki, FA.in obrazach ICGA młodych myszy, unaczynienie siatkówki nie jest widoczne, a naczynia naczyniówkowe wydają się wyblakłe. Na obrazach ICGA starych myszy można zaobserwować częściowe unaczynienie siatkówki, podczas gdy naczynia naczyniówkowe wydają się wyblakłe. Tętnicze CNV u starych myszy wykazują większy rozmiar CNV i znacznie większy wyciek w porównaniu z CNV naczyń włosowatych u młodych myszy.

characterization-vascular-morphology-neovascular-age-related-macular

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Angiografia z zieleni indocyjaninowej (lub ICGA) wykonywana przez wstrzyknięcie żyły ogonowej dostarcza wysokiej jakości obrazów przebiegu czasu ICGA do scharakteryzowania nieprawidłowości w naczyniówce myszy.

Wykrywanie nieprawidłowości w unaczynieniu naczyniówki w mysim modelu zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem za pomocą zielonej angiografii indocyjaniny w czasie

Siatkówka wykazuje wyraźne podobieństwa do mózgu, a zatem stanowi unikalne okno do nieinwazyjnego badania układu naczyniowego i struktury neuronalnej w mózgu. Protokół ten opisuje metodę badania demencji przy użyciu technik obrazowania siatkówki. Ta metoda może potencjalnie pomóc w diagnozie i ocenie ryzyka demencji.

Wykorzystanie obrazowania siatkówki do badania demencji

Tutaj prezentujemy przydatność podłużnego obrazowania in vivo w obserwacji zmian morfologicznych wywołanej laserem neowaskularyzacji naczyniówkowej u myszy.

In vivo (in vivo) Multimodalne obrazowanie i analiza mysiego modelu neowaskularyzacji naczyniówki indukowanej laserem

Przedstawiamy protokół do efektywnej oceny perfuzji tętniaka tętniaka i drożności naczyń tętniaka ściany bocznej u szczurów i królików, przy użyciu fluorescencji opartej na fluoresceinie wideoangiografii (FVA). Przy dodatniej wartości predykcyjnej wynoszącej 92,6% jest to prosta, ale bardzo skuteczna i ekonomiczna metoda, która nie wymaga specjalnego sprzętu.

Angiografia fluorescencyjna do oceny perfuzji tętniaka i drożności tętnicy rodzicielskiej w modelach tętniaków szczurów i królików

Opisujemy ocenę współczynnika determinacji między gęstością naczynia a gęstością perfuzji powierzchownego splotu kapilarycznego przydołkowego, aby określić udział naczyń większych niż naczynia włosowate w gęstości perfuzji.

Ocena udziału naczyń włosowatych i innych naczyń w gęstości perfuzji plamki żółtej mierzonej za pomocą angiografii optycznej koherentnej tomografii

Ten artykuł opisuje dobrze sprawdzony i powtarzalny test barwienia lektyny dla całego preparatu siatkówki Mount oraz protokoły wymagane do ilościowego pomiaru parametrów naczyniowych często zmienianych w retinopatiach proliferacyjnych i nieproliferacyjnych.

Kwantyfikacja parametrów naczyniowych w całych siatkówkach górskich myszy z retinopatiami nieproliferacyjnymi i proliferacyjnymi

Testy laboratoryjne mogą wykorzystać wartość prognostyczną z multimodalnego obrazowania zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem (AMD) opartego na podłużnej optycznej tomografii koherentnej (OCT). Ludzkie oczy dawcy z AMD i bez AMD są obrazowane za pomocą OCT, koloru, skaningowej oftalmoskopii laserowej w bliskiej podczerwieni i autofluorescencji na dwóch długościach fal wzbudzenia przed sekcją tkanki.

Ex vivo Multimodalne obrazowanie oczu ludzkiego dawcy oparte na OCT do badań nad zwyrodnieniem plamki żółtej związanym z wiekiem

Niniejszy artykuł opisuje metodologiczne rozważania dotyczące kilku nieinwazyjnych ocen funkcji i morfologii naczyń krwionośnych, które są powszechnie stosowane w badaniach medycznych do oceny różnych etapów miażdżycy.

Metodologiczne podejście do nieinwazyjnej oceny funkcji i morfologii naczyń krwionośnych

Choroba zwyrodnieniowa stawów (OA), czyli choroba zwyrodnieniowa stawów, jest wyniszczającym stanem związanym z bólem, który pozostaje tylko częściowo kontrolowany przez dostępne leki przeciwbólowe. Opracowywane są modele zwierzęce, które mają na celu lepsze zrozumienie mechanizmów bólu związanych z chorobą zwyrodnieniową stawów. W tym miejscu opisujemy metodologię monojodooctanowego modelu bólu zwyrodnieniowego stawów u myszy.

Model monojodooctanu bólu związanego z chorobą zwyrodnieniową stawów u myszy

Celem tego badania jest ocena, czy nadnaczyniówkowy przeszczep komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej zawartych we frakcji naczyniowej zrębu i płytek krwi pochodzących z osocza bogatopłytkowego za pomocą Techniki Odbudowy Siatkówki Limoli może poprawić ostrość wzroku i wrażliwość siatkówki w oczach dotkniętych suchym, związanym z wiekiem zwyrodnieniem plamki żółtej.

Terapia regeneracyjna za pomocą autoprzeszczepu komórek nadnaczyniówkowych w suchym zwyrodnieniu plamki żółtej związanym z wiekiem: wstępny raport in vivo

Poznaj metodę angiografii zieleni indocyjaninowej do charakteryzacji morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej u myszy. Technika ta umożliwia ocenę typów zmian naczyniowych i odpowiedzi na leczenie.

Charakterystyka morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem za pomocą angiografii zieleni indocyjaninowej (Wideo) | JoVE Journal

Charakterystyka morfologii naczyniowej neowaskularnego zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem za pomocą angiografii zieleni indocyjaninowej

Przeglądaj więcej filmów