Name: Leczenie akupunkturą w mysim modelu przewlekłej dysfunkcji poznawczej wywołanej niedotlenieniem (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-08T13:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 26 s
Description: Poznaj protokół akupunktury w mysim modelu przewlekłej hipoksji z łagodnym znieczuleniem. Metoda minimalizuje ryzyko upośledzenia poznawczego i poprawia dokładność badań behawioralnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Program S&T Hebei (NO.E2020100001 i NO.22372502D), High-level S & T Innovation and Entrepreneurship Talent Project of Shijiazhuang (No. 07202203).

Eksperymenty na zwierzętach zostały przeprowadzone za zgodą Komitetu ds. Badań na Zwierzętach i Etyki Instytutu Badań Medycznych Hebei Yiling (numer zatwierdzenia: N2022148). Samce myszy C57BL/6J o wadze 18-22 g (patrz tabela materiałów) zostały umieszczone w nowym centrum oceny leków Instytutu Badań Medycznych Hebei Yiling. Zapewniono im normalne pożywienie i czystą wodę oraz wystawiono na działanie sztucznego światła przez 12 godzin dziennie. W pomieszczeniach utrzymywany był kontrolowany zakres temperatur 20-26 °C i wilgotność względna 40%-70%.
1. Ustanowienie mysiego modelu przewlekłego niedotlenienia (<silna klasa="xfig">Rysunek 1)
<ol>
	<li>Przed rozpoczęciem eksperymentu należy przygotować klatki dla zwierząt pod normalnym ciśnieniem atmosferycznym oraz klatki z ciągłym środowiskiem o niskiej zawartości tlenu. Stwórz ciągłe środowisko o niskim poziomie tlenu, wykorzystując zautomatyzowany system kontroli dostarczania gazu do przepłukiwania komory mieszaniną czystego tlenu i azotu. 
	UWAGA: System ten jest zaprogramowany do sterowania przełącznikiem zaworu elektromagnetycznego, zapewniając w ten sposób precyzyjne dostarczanie gazu zarówno pod względem czasu, jak i stężenia.</li>
	<li>Losowo podziel myszy na trzy grupy: grupę kontrolną (Con), grupę modelową (CH) i grupę elektroakupunktury (EA + CH). Umieść myszy kontrolne i modelowe/elektroakupunkturowe oddzielnie w dwóch klatkach, po 10 myszy w klatce. Utrzymuj cykl światła na poziomie 12 godzin/12 godzin (jasny/ciemny). 
	UWAGA: W grupie kontrolnej nie indukuje się leczenia ani niedotlenienia (Con). Grupa modelowa (CH) składa się z myszy z przewlekłym niedotlenieniem. Grupa elektroakupunktury (EA + CH) składa się z myszy wywołanych niedotlenieniem leczonych elektroakupunkturą.</li>
	<li>W przypadku rozwoju przewlekłego niedotlenienia należy ustalić parametry komory o niskiej zawartości tlenu, wykorzystując cyfrowy miernik tlenu do regulacji natężenia przepływu gazu i utrzymania stężenia tlenu na poziomie 10%. Umieść zwierzęta w komorze o niskiej zawartości tlenu o godzinie 9:00 i usuń je o godzinie 17:00, co daje łącznie 8 godzin nieprzerwanej ekspozycji na niski poziom tlenu dziennie przez 3 miesiące. 
	UWAGA: Podczas ustawiania dostarczania azotu gazowego w celu zmniejszenia stężenia tlenu zaleca się powolne działanie, aby zapobiec nadmiernemu wprowadzeniu azotu od razu, ponieważ doprowadzi to do śmierci zwierząt.</li>
	<li>Oceń model dysfunkcji poznawczych wywołanych przewlekłą hipoksją za pomocą badania histologicznego i testów behawioralnych: test otwartego pola<klasa sup="xref">15 i test labiryntu wodnego<klasa sup="xref">16.</li>
</ol>
2. Znieczulenie (<silna klasa="xfig">Rysunek 2)
<ol>
	<li>Przygotuj maszynę do znieczulania małych zwierząt (patrz tabela materiałów) i poduszkę grzewczą o stałej temperaturze. 
	UWAGA: Podczas znieczulenia zwierzęta są podatne na hipotermię, co podkreśla konieczność zastosowania poduszki grzewczej o stałej temperaturze do izolacji.</li>
	<li>Umieść mysz w pudełku indukcyjnym do znieczulenia i szybko indukuj 2%-2.5% izofluranu w tlenie (patrz Tabela materiałów) przez około 1 min. 
	UWAGA: Ta krótkotrwała obróbka wstępna jest kluczowym krokiem w celu zapewnienia, że myszy mogą rozwijać się pod wpływem dawki o niskim stężeniu przez dłuższy czas.</li>
	<li>Gdy ich pobudliwość zmniejszy się, uszczypnij palec u nogi myszy, aby sprawdzić jej odruch. Następnie przenieś mysz na poduszkę grzewczą o stałej temperaturze (37 °C).</li>
	<li>Dostosuj natężenie przepływu znieczulenia do około 0,5% stężenia. Podłącz aparat do znieczulenia do ust i nosa myszy. Kontynuuj leczenie elektroakupunkturą, zapewniając jednocześnie utrzymanie znieczulenia. 
	UWAGA: Efekt znieczulenia został potwierdzony, gdy myszy przestały mrugać. Efekt znieczulenia może utrzymywać się przez co najmniej 30 minut.</li>
</ol>
3. Leczenie elektroakupunkturą
<ol>
	<li>Aby skutecznie poprawić dysfunkcję poznawczą, wybierz określone punkty akupunkturowe, takie jak Baihui (GV20), Shenting (GV24) i obustronne Zusanli (ST36), w oparciu o teorię tradycyjnej medycyny chińskiej i doświadczenie kliniczne (<silna klasa = "xfig">Rysunek 3). Zabieg elektroakupunktury należy wykonać na 2 tygodnie przed zakończeniem procesu modelowania.
	<ol>
		<li>Zlokalizuj punkt akupunkturowy GV20 na linii środkowej czoła, w środku linii łączącej końcówki uszu7. Głębokość wprowadzenia igły do akupunktury musi wynosić 2 mm.</li>
		<li>Zlokalizuj punkt akupunkturowy GV24 1,3 mm bezpośrednio nad punktem środkowym oczu myszy na linii środkowej czoła17. Głębokość wprowadzenia igły do akupunktury musi wynosić 2 mm.</li>
		<li>Zlokalizuj punkt akupunkturowy ST36 na zewnątrz stawu kolanowego, około 2 mm poniżej głowy kości strzałkowej18,19. Głębokość wprowadzenia igły do akupunktury musi wynosić 3-4 mm.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotuj jednorazowe igły do akupunktury (patrz Tabela Materiałów) oraz urządzenie do elektroakupunktury (patrz Tabela Materiałów) do zabiegu (<silna klasa="xfig">Rysunek 4).</li>
	<li>Umieść mysz w pozycji leżącej w łagodnym znieczuleniu z 0,5% izofluranem, upewniając się, że ich głowy i kończyny są unieruchomione. Trzymaj igłę ze stali nierdzewnej (średnica: 0,18 mm; długość: 7 mm) prawą ręką, kciukiem, palcem wskazującym i palcem środkowym.</li>
	<li>Wykonuj akupunkturę w punktach akupunkturowych GV20 i GV24 poprzecznie na głębokość 2 mm, unosząc lewą ręką skórę na głowie myszy. Nakłuj punkt akupunkturowy ST36 pionowo na głębokość 3-4 mm, dotykając głowy kości strzałkowej po bocznej stronie stawu kolanowego myszy i naciskając na skórę lewym kciukiem. 
	UWAGA: W przypadku punktów akupunkturowych znajdujących się na głowie zaleca się wprowadzanie igieł w kolejności GV24, a następnie GV20. Zamówienie to ułatwia obsługę. Punkty akupunkturowe są odrębnymi lokalizacjami anatomicznymi, a nie punktami stacjonarnymi. W związku z tym niewielkie odchylenia w kącie wkłucia igły nie mają wpływu na skuteczność terapeutyczną, podobnie obserwowaną u pacjentów leczonych elektroakupunkturą w warunkach klinicznych.</li>
	<li>Podłącz elektroniczne urządzenie do akupunktury do igieł, przy czym GV20 i lewy ST36 są podłączone do jednego zestawu elektrod, a GV24 i prawy ST36 są podłączone do innego (<silna klasa="xfig">Rysunek 4). Wybierz tryb fali ciągłej, z natężeniem prądu elektrycznego 2 mA i częstotliwością 2 Hz20,21. Potwierdź idealne leczenie, obserwując miejscowe łagodne drżenie w punktach akupunkturowych i cichą tolerancję przez mysz.
	<ol>
		<li>Podłączając elektryczny instrument do akupunktury, podłącz bliższy koniec igły. Pomaga to zminimalizować wpływ spowodowany ciężarem przewodu łączącego, a w konsekwencji poprawia zapobieganie odklejaniu się igły. W razie potrzeby użyj taśmy klejącej, aby zabezpieczyć poziomo włożoną igłę i przewód łączący.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Podawaj codzienną kurację przez 30 minut każdego dnia przez 6 kolejnych dni, z jednym dniem odpoczynku między każdym cyklem leczenia.</li>
</ol>
4. Test w otwartym polu (Rysunek 5)
UWAGA: Test otwartego pola jest konwencjonalną metodą używaną do oceny autonomicznego zachowania, zachowania eksploracyjnego, zdolności poznawczych i zachowań lękowych zwierząt doświadczalnych w nowych i nieznanych środowiskach22. Składa się z otwartej skrzynki reakcyjnej i urządzenia rejestrującego.
<ol>
	<li>Do przeprowadzenia testu należy przygotować kostkę o białych ściankach o wymiarach 50 cm × 50 cm × 30 cm, której spód dzieli się na 25 równych kwadratów o wymiarach 10 cm × 10 cm.</li>
	<li>Umieść mysz w pudełku reakcyjnym na otwartym polu w celu aklimatyzacji. Pozwól myszy na eksplorację pokoju testowego i zapoznanie się z nowym środowiskiem w okresie aklimatyzacji. Przeprowadź test w otwartym polu po aklimatyzacji myszy do środowiska eksperymentalnego przez 1 godz. 
	UWAGA: Gwarantuje to minimalizację lęku lub stresu wywołanego zmianami w środowisku, umożliwiając w ten sposób bardziej precyzyjne wyniki podczas kolejnych ocen zachowania.</li>
	<li>Umieść mysz na środku pudełka i monitoruj ją przez 10 minut, po tym jak mysz dostosuje się do otoczenia przez 2 minuty.
	<ol>
		<li>Użyj systemu śledzenia wideo (patrz Tabela materiałów), aby zarejestrować trajektorię ruchu myszy, całkowitą przebytą odległość, czas spędzony w obszarze centralnym, prędkość przekraczania obszaru centralnego oraz liczbę wejść do obszaru centralnego podczas testu.</li>
		<li>Wykonaj odpowiednie czynności zgodnie z instrukcją obsługi systemu śledzenia wideo. Każda mysz przechodzi pojedynczy test i rozpoczyna eksplorację z tego samego miejsca w pudełku.</li>
		<li>Po każdym teście wyczyść pudełko z otwartym polem 75% etanolem, aby zapobiec fałszywym wynikom spowodowanym zakłóceniami zapachów podczas korzystania z myszy.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Wodny labirynt (<silna klasa="xfig">Rysunek 5)
UWAGA: Test wodnego labiryntu jest często używany jako narzędzie oceny behawioralnej w eksperymentach z udziałem myszy, aby ocenić ich zdolności do uczenia się przestrzennego i pamięci23.
<ol>
	<li>Przygotuj okrągły zbiornik na wodę o średnicy 120 cm i głębokości 30 cm. Podziel zbiornik na cztery równe ćwiartki: I, II, III i IV. Jeśli używasz czarnych myszy w eksperymencie, użyj zbiornika na białą wodę; W przypadku białych myszy użyj czarnego zbiornika na wodę.</li>
	<li>Umieść zasłony wokół okrągłego zbiornika na wodę, aby mysz nie widziała badaczy podczas testu.</li>
	<li>Umieść różne znaczniki na górnej powierzchni zbiornika na wodę jako wizualne wskazówki dotyczące orientacji przestrzennej. Upewnij się, że te markery pozostają nieruchome przez cały czas trwania eksperymentu, aby zachować spójność.</li>
	<li>Umieść okrągłą platformę o średnicy 10 cm w kwadrancie III zbiornika na wodę jako wyznaczony obszar docelowy. Upewnij się, że platformę można łatwo przenosić i zabezpieczać w dowolnym miejscu.</li>
	<li>Przez cały czas trwania eksperymentu wprowadzaj wodę do zbiornika, utrzymując zakres temperatur 22-24 °C.
	<ol>
		<li>Upewnij się, że poziom wody utrzymuje się stale 1 cm powyżej platformy docelowej. Włącz do wody 20% stężenie nietoksycznego dwutlenku tytanu, aby uzyskać wyraźny kontrast między czarnymi myszami a białym tłem. Kontrast ten ułatwia rejestrowanie przez kamerę ruchów myszy i istotnych parametrów.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przeprowadź 5-dniowy ciągły test eksploracji przestrzennej, umieszczając kolejno każdą mysz w kwadrantach I, II, III i IV.
	<ol>
		<li>Ustaw mysz przodem do ściany. Odsuń się od labiryntu, aby mysz nie wykorzystała pozycji eksperymentatora jako punktu odniesienia. Nagraj czas potrzebny myszy na znalezienie platformy.</li>
		<li>Jeśli mysz nie zlokalizuje podwodnej platformy w ciągu 90 sekund, poprowadź ją do platformy i zapewnij 30-sekundowy okres nauki. Dodatkowo zapisz okres opóźnienia jako 90 s.</li>
		<li>Jeśli mysz zlokalizuje podwodną platformę w ciągu 90 sekund, pozwól jej pozostać na platformie przez 10 sekund w celu nauczenia się przed wyjęciem jej ze zbiornika na wodę.</li>
		<li>Osusz mysz ręcznikiem i włóż ją z powrotem do klatki.</li>
		<li>Obracaj położenie każdej myszy w każdej ćwiartce co 20 minut. Zapisz odległość pływania każdej myszy, prędkość i czas potrzebny na znalezienie platformy (okres opóźnienia) za pomocą systemu śledzenia wideo (patrz tabela materiałów), wykonując odpowiednie operacje zgodnie z instrukcjami zawartymi w instrukcji obsługi produktu.</li>
		<li>Ustaw platformę 1 cm nad powierzchnią wody w dniu 1. Umieść platformę na głębokości 1 cm poniżej powierzchni wody w dniach 2-5.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>W dniu 6 usuń platformę z kwadrantu docelowego i przeprowadź test eksploracji przestrzennej.
	<ol>
		<li>Umieść mysz w kwadrancie I, aby swobodnie eksplorować przez 90 s. Komputer rejestruje trajektorię pływania myszy, czas spędzony w kwadrancie celu oraz liczbę przekroczeń przez nią platformy. 
		UWAGA: W celu zminimalizowania błędów eksperymentalnych spowodowanych czynnikami ludzkimi, ważne jest, aby w eksperymencie z labiryntem wodnym utrzymać stałą pozycję punktu odniesienia. Dodatkowo eksperymentator powinien natychmiast wycofać się po umieszczeniu myszy w wodzie. Po zakończeniu eksperymentu myszy należy osuszyć ręcznikiem i umieścić z powrotem w klatkach, aby utrzymać ciepło.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. Barwienie hematoksyliną i eozyną (HE) (<silna klasa="xfig">Rysunek 6)
UWAGA: Badanie histologiczne obszaru hipokampa pomaga w ocenie ustalenia modelu hipoksji i określeniu skuteczności leczenia akupunkturą.
<ol>
	<li>Po eksperymencie behawioralnym znieczulij mysz wstrzyknięciem dootrzewnowym 20 mg/kg pentobarbitalu sodu i perfekuj go 10% roztworem paraformaldehydu (patrz Tabela materiałów), aby zapewnić pełną perfuzję ciała. Odizoluj tkankę mózgową i zanurz ją w 10% roztworze paraformaldehydu w temperaturze pokojowej (RT) na 3 dni, aby uzyskać utrwalenie.</li>
	<li>Umieść próbki mózgu w pudełku do zatapiania. Następnie przetworzone próbki mózgu należy myć bieżącą wodą przez 6 godzin.</li>
	<li>Zatrudnij zautomatyzowany procesor tkanek do odwadniania próbek za pomocą szeregu roztworów alkoholowych o rosnących stężeniach, a mianowicie 60% etanolu przez 1 godzinę, 70% etanolu przez 1 godzinę, 90% etanolu przez 1 godzinę, 95% etanolu przez 2 godziny i wreszcie 100% etanolu przez 2 godziny.</li>
	<li>Zanurz próbki tkanek w ksylenie na 2 godziny, aby uzyskać przezroczystość. Następnie, po zakończeniu procesu odwadniania, przeniesiono przepuszczalne próbki do wosku parafinowego podgrzanego do temperatury 60 °C przez 3 godziny. Na koniec osadź je w automatycznym procesorze.</li>
	<li>Użyj krajalnicy obrotowej, aby uzyskać sekcje 4 μm. Następnie należy poddać skrawki barwieniu hematoksyliną przez czas trwający od 3 do 8 minut, a następnie barwieniu eozyną przez 1-3 minuty.</li>
	<li>Kolejno przenieś poplamione części do oddzielnych pojemników z czystym alkoholem i ksylenem. Następnie uszczelnij i zabezpiecz poplamione skrawki neutralną gumą w ramach przygotowań do badania patologicznego pod mikroskopem optycznym.</li>
	<li>Użyj skanera do slajdów (patrz tabela materiałów), aby zeskanować plasterki. Następnie skorzystaj z oprogramowania do przeglądania, aby uzyskać wyniki barwienia HE dla obszaru hipokampa. Porównaj układ neuronów i zagęszczenie jąder neuronalnych.</li>
</ol>

Cognitive Improvement in Chronic Hypoxia Mice with Acupuncture

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Akupunktura, niefarmakologiczna praktyka medyczna wywodząca się z Chin ponad 2000 lat temu, polega na wprowadzaniu cienkich igieł w określone punkty na ciele znane jako punkty akupunkturowe. Uważa się, że punkty te są połączone kanałami lub meridianami, przezktóre przepływa energia życiowa ciała, czyli "qi". Stymulując te punkty, akupunktura ma na celu przywrócenie równowagi i harmonii w ciele. Wykazano, że skutecznie leczy różne schorzenia, w tym przewlekły ból, lęk/depresję, problemy trawienne, ...

Globalna populacja stoi obecnie w obliczu krytycznego problemu starzenia się, co skutkuje szybkim wzrostem częstości występowania zaburzeń poznawczych. Na całym świecie częstość występowania zaburzeń poznawczych wynosi około 53,97 na 1000 osobolat1. Przewlekłe niedotlenienie mózgu spowodowane dysfunkcją naczyń krwionośnych lub zaburzeniami krążenia/układu oddechowego pozostaje jednym z głównych czynników ryzyka demencji związanej z wiekiem2. Wcześniejsze badania wykazały, że niedotlenienie mózgu może zwiększyć odkładanie β amyloidu poprzez modyfikację ekspresji BACE13. Ponadto niedotlenienie wiąże się z dysregulacją komórek glejowych i zapaleniem nerwów4,5. Pomimo rosnącej skali tego problemu, obecnie brakuje skutecznych zachodnich leków zapobiegających przewlekłemu pogorszeniu funkcji poznawczych wywołanym niedotlenieniem. Niefarmakologiczna tradycyjna medycyna chińska, w szczególności akupunktura, była stosowana od tysięcy lat w leczeniu zaburzeń poznawczych i wykazała obiecujące wyniki w łagodzeniu chorób neurodegeneracyjnych6,7. Punkty akupunkturowe Baihui, Shenting i Zusanli są skutecznymi punktami w leczeniu dysfunkcji poznawczych8,9. Badania kliniczne wykazały, że terapia elektroakupunkturą znacznie poprawia wyniki Montreal Cognitive Assessment (MoCA) i Mini-Mental State Examination (MMSE) u pacjentów z naczyniowymi zaburzeniami poznawczymi i skutecznie łagodzi dysfunkcje poznawcze8. Chociaż badania sugerują, że akupunktura może znacznie poprawić zdolność zapamiętywania szczurów z podwiązaniem tętnic - modele ostrego niedotlenienia mózgu < klasa sup = 'xref'>10, model ostrego niedotlenienia mózgu, nie ma doniesień na temat skutków akupunktury w żadnym modelu gryzoni z przewlekłymi zaburzeniami poznawczymi wywołanymi niedotlenieniem. Brak badań nad tym mechanizmem znacznie utrudnił jego zastosowanie kliniczne. 
Poprzednie badania wykazały, że poddanie szczurów działaniu niedotlenionego środowiska przez okres 8 tygodni może znacznie podnieść poziom stresu oksydacyjnego i stanu zapalnego w mózgu, powodując pogorszenie funkcji pamięci11. Niniejsze badanie ma na celu zbadanie wpływu akupunktury na modele gryzoni, aby pogłębić naszą wiedzę. Warto jednak zauważyć, że znieczulenie jest zwykle wymagane podczas leczenia akupunkturą u gryzoni ze względu na możliwość pobudzenia podczas wielokrotnej stymulacji. Przedłużone znieczulenie może znacząco wpłynąć na funkcje poznawcze u myszy, ponieważ większość leków znieczulających może hamować aktywność neuronalną i utrudniać przetwarzanie informacji, prowadząc do deficytów behawioralnych12. Kilka badań wykazało, że podawanie 2,5% sewofluranu przez okres 6 godzin może znacznie upośledzać pamięć przestrzenną, zdolność uczenia się i uwagę u myszy13. Co więcej, dowody sugerują, że wysokie dawki znieczulenia mogą prowadzić do śmierci neuronów lub uszkodzenia nerwów u myszy14. Dlatego konieczne jest określenie odpowiedniego podejścia w celu zminimalizowania całkowitej ilości stosowanego znieczulenia. W tym badaniu wprowadzamy skuteczną metodę akupunktury w leczeniu myszy z zaburzeniami poznawczymi, wraz z testami behawioralnymi w celu oceny ich zdolności pamięciowych. Co ważne, prezentujemy zmodyfikowaną technikę znieczulenia przedzabiegowego, która może skutecznie zmniejszyć całkowitą dawkę znieczulenia podawanego podczas eksperymentu.

<table><tbody><tr><td>10% roztwór paraformaldehydu</td><td>Bioroyee (Beijing) Biotechnology Co., Ltd</td><td>RL3234</td><td></td></tr><tr><td>ANY-maze</td><td>Nauka</td><td>&nbsp; SA201</td><td>System śledzenia wideo</td></tr><tr><td>Mysz C75BL / 6J</td> BEIJING <td>HFK BIOSCIENCE CO., LTD</td><td>No.110322220103041767</td><td>Płeć: Mężczyzna,&nbsp; Waga: 18&ndash; 22 g</td></tr><tr><td>Urządzenie do elektroakupunktury</td><td>Great Wall</td><td>KWD-808 I</td><td></td></tr><tr><td>Akupunktura Hwato&nbsp; igła</td><td>Fabryka urządzeń medycznych Suzhou</td><td>2655519&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>NanoZoomer Digital Patology</td><td>Hamamatsu Photonics KK</td><td>C9600-01</td><td></td></tr><tr><td>Aparat do znieczulania małych zwierząt</td><td>RWD</td><td>YL-LE-A106</td><td></td></tr></tbody></table>

leczenie akupunkturą w mysim modelu przewlekłej dysfunkcji poznawczej wywołanej niedotlenieniem

Acupuncture Treatment in a Mouse Model of Chronic Hypoxia-Induced Cognitive Dysfunction

Leczenie zaburzeń ośrodkowego układu nerwowego konsekwentnie stanowi poważne wyzwanie dla dziedziny medycyny. Akupunktura, niefarmakologiczna praktyka zakorzeniona w tradycyjnej medycynie chińskiej, polega na wprowadzaniu cienkich igieł w precyzyjne punkty na ciele i jest powszechnie stosowana w leczeniu różnych schorzeń. Ostatnio akupunktura stała się obiecującą interwencją terapeutyczną w przypadku wielu chorób neurologicznych, w tym lęku i zaburzeń układu oddechowego. Jednak potencjał akupunktury w leczeniu dysfunkcji poznawczych wywołanych przewlekłą hipoksją nie został jeszcze zbadany. W artykule przedstawiono kompleksowy protokół tworzenia mysiego modelu przewlekłego upośledzenia funkcji poznawczych wywołanego niedotlenieniem, podawania łagodnego znieczulenia, wykonywania leczenia akupunkturą oraz oceny zmian behawioralnych i zdolności pamięciowych za pomocą testów w terenie otwartym i labiryntów wodnych. Protokół krok po kroku zawiera szczegółowe instrukcje dotyczące dokładnego lokalizowania i pozycjonowania punktów akupunkturowych i igieł w celu poprawy funkcji poznawczych. Stosując ten protokół, naukowcy mogą prowadzić systematyczne badania w celu dokładnej oceny potencjału terapeutycznego akupunktury w dysfunkcjach poznawczych.

Charakterystyka trajektorii lokomocji myszy w eksperymencie w otwartym polu 
Mapa trajektorii wykazuje, że myszy w grupie normalnej przejawiają silną tendencję do eksploracji w nieznanym środowisku. Trajektorie ich aktywności koncentrują się głównie w narożnikach, obejmując jednocześnie całe otwarte pole (panel lewy). W przeciwieństwie do nich, grupa myszy w modelu długotrwałej hipoksji wykazuje znacznie zmniejszoną chęć do eksploracji nowego otoczenia. Zwierzęta te przebywają głównie w narożnikach, n...

Tutaj opisujemy protokół wdrażania łagodnego znieczulenia i leczenia akupunkturą na mysim modelu przewlekłego niedotlenienia oraz przeprowadzamy testy behawioralne w celu oceny zmian poznawczych po leczeniu.

Leczenie akupunkturą w mysim modelu przewlekłej dysfunkcji poznawczej wywołanej niedotlenieniem

The treatment of central nervous disorders has consistently posed significant challenges to the medical field. Acupuncture, a non-pharmacological practice ...

Wybór odpowiedniego protokołu anestezjologicznego ma kluczowe znaczenie dla prowadzenia akupunktury myszy ze względu na potencjalne upośledzenie funkcji poznawczych związane z przedłużonym znieczuleniem. Stanowi to zasadnicze wyzwanie początkowe, wymagające starannego rozważenia w celu zminimalizowania ryzyka funkcji poznawczych u myszy podczas zabiegu. W tym badaniu proponujemy ulepszony protokół, który pomaga zminimalizować nieprawidłowości funkcjonalne i behawioralne spowodowane nadmiernym dawkowaniem znieczulenia i zwiększa dokładność eksperymentów.W przyszłości nasze laboratorium ma na celu zbadanie mechanizmów leżących u podstaw akupunktury, pomimo jej obserwowalnych efektów terapeutycznych na zachowanie i patologię. Nasze badania skupią się na nadejściu akupunktury, aby lepiej zrozumieć jej mechanizmy. Na początek umieść znieczuloną mysz z przewlekłą dysfunkcją poznawczą wywołaną niedotlenieniem na poduszce grzewczej ustawionej na 37 stopni Celsjusza.Następnie podłącz aparat do znieczulenia do ust i nosa myszy. W przypadku elektroakupunktury umieść punkt akupunkturowy GV 20 na linii środkowej czoła między linią łączącą końcówki douszne. Następnie zlokalizuj punkt akupunkturowy GV 24 1,3 milimetra bezpośrednio nad punktem środkowym oczu.Następnie znajdź punkt akupunkturowy ST 36 na zewnątrz stawu kolanowego, około dwóch milimetrów poniżej głowy kości strzałkowej. Do zabiegu przygotuj jednorazowe igły do akupunktury oraz urządzenie do elektroakupunktury. Teraz umieść mysz w pozycji leżącej.Prawym kciukiem, palcem wskazującym i środkowym przytrzymaj igłę ze stali nierdzewnej. Nakłuć punkty GV 20 i GV 24 poprzecznie na głębokości dwóch milimetrów. Następnie nakłuj punkt akupunkturowy ST 36 pionowo na głębokość od trzech do czterech milimetrów.Podłącz bliższy koniec igieł w GV 20 i lewy SD 36 do jednego zestawu elektrod. Podłącz proksymalny koniec igieł w GV 24 i prawy SD 36 do innego zestawu elektrod. Wybierz tryb fali ciągłej w urządzeniu do elektroakupunktury i ustaw natężenie prądu elektrycznego na dwa miliampery, a częstotliwość na dwa herce.Potwierdź idealne leczenie, obserwując miejscowe łagodne drżenie w punktach akupunkturowych. Użyj taśmy klejącej, aby zabezpieczyć poziomo włożoną igłę i przewód łączący. Podawaj lek przez 30 minut każdego dnia przez sześć kolejnych dni.Okazało się, że elektroakupunktura poprawia aktywność eksploracyjną myszy wywołanych hipoksją. Leczone myszy wykazywały również bardziej zorganizowane zachowanie.

acupuncture-treatment-mouse-model-chronic-hypoxia-induced-cognitive

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Tutaj prezentujemy protokół do stworzenia mysiego modelu kardiomiopatii cukrzycowej oraz mysie urządzenie do mocowania elektroakupunktury do stosowania elektroakupunktury u myszy, które może łagodniej utrwalać myszy podczas leczenia.

Wytwarzanie urządzenia do mocowania elektroakupunktury myszy do wstępnego leczenia elektroakupunktury w modelu myszy z kardiomiopatią cukrzycową

Ten artykuł opisuje wykorzystanie chronicznego stresu społecznego intruza jako etologicznie istotnego paradygmatu do modelowania depresji poporodowej i lęku u gryzoni w okresie laktacji.

Wykorzystanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u gryzoni w okresie laktacji

Pokazujemy, jak obiektywna miara może być zastosowana w powszechnie stosowanym paradygmacie iluzji gumowej ręki. Miara ta jest uzyskiwana przez modyfikację dobrze ugruntowanego zadania kongruencji intermodalnej. Zadanie to pozwala na zbadanie procesów multisensorycznych, które są krytyczne dla modulacji reprezentacji ciała, jak w iluzji gumowej ręki.

Zadanie kongruencji intermodalnej jako sposób na uzyskanie obiektywnej miary behawioralnej w paradygmacie iluzji gumowej ręki

Fagot &amp; Paleressompoulle1 opublikowali urządzenie do automatycznego uczenia się (ALDM) przeznaczone do testowania indywidualnych zdolności poznawczych u małp żyjących na półwolnym wybiegu. Głównym celem naszego protokołu jest wykorzystanie sieci jednostek testowych ALDM do badania poznania społecznego u naczelnych innych niż ludzie.

Ocena poznania społecznego u naczelnych innych niż ludzie przy użyciu sieci skomputeryzowanych systemów testowych urządzeń do automatycznego uczenia się (ALDM)

Tutaj pokazujemy wstrzyknięcie ciśnieniowe substancji neurofarmakologicznych podczas rejestracji pojedynczej komórki u przytomnego, zachowującego się makaka. Procedura ta pozwala na manipulację farmakologiczną w bezpośrednim sąsiedztwie miejsca rejestracji kory mózgowej.

System iniekcji ciśnieniowych do badania neurofarmakologii przetwarzania informacji w korze mózgowej makaków zachowujących się w stanie czuwania

Celem tej procedury jest zademonstrowanie zestawu technik ilościowych do pomiaru czucia i bólu u ludzi. Opisany sprzęt i techniki są powszechnie spotykane w klinikach leczenia bólu lub są łatwe do zdobycia.

Protokół testów manualnych do pomiaru czucia i bólu u ludzi

Tutaj prezentujemy protokół korzystania z Systemu Edukacji Manipulacji Akupunkturą (AMES) w treningu umiejętności manipulacji akupunkturą za pomocą fantomowych punktów akupunkturowych.

Wizualizacja wzorców ruchowych w manipulacji akupunkturą

Opisujemy technikę pozbawiania snu znaną jako delikatne obchodzenie się, gdzie badacze delikatnie szturchają myszy za każdym razem, gdy obserwuje się zachowanie podczas snu. Ta metoda jest potężnym narzędziem, które pozwala naukowcom badać wpływ, jaki przewlekłe ograniczenie snu w trakcie rozwoju może mieć na przyszłą fizjologię i zachowanie mózgu.

Przewlekły brak snu u młodych myszy poprzez delikatne obchodzenie się z nim

Tutaj udostępniamy protokół, który zawiera obszerne instrukcje dotyczące ekonomicznego ustanawiania lokalizacji obiektów mysich i nowatorskich testów behawioralnych rozpoznawania obiektów, w tym projektowania, kosztu i budowy wymaganego sprzętu, a także wykonywania testów behawioralnych, zbierania danych i analizy.

Nowatorskie rozpoznawanie obiektów i testy behawioralne lokalizacji obiektów u myszy przy ograniczonym budżecie

Tutaj opisany jest protokół do przeprowadzenia testów labiryntu wodnego Morrisa w celu oceny zdolności uczenia się i pamięci myszy modelowych z chorobą Alzheimera oraz oceny wpływu akupunktury manualnej na ich leczenie.

Analiza zdolności uczenia się i zapamiętywania w mysim modelu choroby Alzheimera przy użyciu labiryntu wodnego Morrisa

Poznaj protokół akupunktury w mysim modelu przewlekłej hipoksji z łagodnym znieczuleniem. Metoda minimalizuje ryzyko upośledzenia poznawczego i poprawia dokładność badań behawioralnych.

Leczenie akupunkturą w mysim modelu przewlekłej dysfunkcji poznawczej wywołanej niedotlenieniem

Przeglądaj więcej filmów