Technika iniekcji dootrzewnowej u dorosłych danio pręgowanego, która minimalizuje uszkodzenia ciała i związaną z nimi śmiertelność

Naszym celem jest wygenerowanie modeli kardiotoksyczności indukowanej antracyklinami u dorosłych danio pręgowanego, abyśmy mogli odkryć nowe geny i związki terapeutyczne. Niezawodna metoda wstrzykiwania IP jest niezbędna, aby zapewnić sukces tego projektu. Dotychczas opracowane metody iniekcji IP to techniki klasyczne i alternatywne.

Podczas gdy metoda klasyczna penetruje rybę od strony brzusznej przez linię środkową między płetwami brzusznymi, metoda alternatywna penetruje rybę od strony grzbietowej znajdującej się między płetwami brzusznymi a odbytowymi. Ze względu na toksyczność doksorubicyny stwierdzono znaczne uszkodzenia ciała i śmiertelność ryb przy użyciu obecnych dwóch metod IP. Badacze muszą zostać gruntownie przeszkoleni, zanim modele chorób będą mogły być wiarygodnie osadzone w ich rękach.

Zaprojektowaliśmy nową metodę iniekcji IP, dostosowując miejsce penetracji igły i kąt penetracji igły. Wstrzykujemy przez naturalny otwór znajdujący się w okolicy brzusznej między płetwami piersiowymi i penetrujemy przez unikalny kierunek od przodu do tyłu. Na początek rozpuść pięć miligramów doksorubicyny w proszku w jednym mililitrze wody destylowanej.

Podnieś bulion do 1,5 mililitrowej tuby. Następnie należy łowić ryby w grupach, w których różnica masy ciała wynosi mniej niż 10%. Po znieczuleniu ryb w wodzie zarodkowej za pomocą tricainy, wyjmij rybę z wody, przetrzyj obie strony ciała ryby czystą bibułą filtracyjną, aby usunąć nadmiar wody.

Następnie umieść znieczuloną rybę w rowku osadzonej gąbki z brzuchem skierowanym do góry. Napełnij strzykawkę o pojemności 10 mikrolitrów wyposażoną w igłę o rozmiarze 34 pięcioma mikrolitrami roztworu roboczego doksorubicyny. Wbić igłę pod kątem prawie zerowym od środka płetwy piersiowej w kierunku tylnej strony jamy serca.

Skieruj igłę w stronę ogona i wejdź pod srebrną skórę. Powoli dozuj roztwór dokujący, a następnie wyjmij igłę wzdłuż pierwotnej ścieżki, aby zapobiec wyciekowi. Roztwór dokujący pokoloruje brzuch na czerwono.