Name: Pobieranie przytarczyc od żywych świń dawców i identyfikacja ex vivo (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Poznaj metodę pobierania przytarczyc od żywych świń dawców z identyfikacją ex vivo. Technika ta wspiera badania nad ksenotransplantacją i leczeniem niedoczynności przytarczyc.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Chcielibyśmy podziękować Francuskiemu Towarzystwu Diabetologicznemu oraz Fondation pour la Recherche Médicale za wsparcie i finansowanie badań.

Wszystkie badania na zwierzętach zostały zatwierdzone przez komisję etyki zwierząt Uniwersytetu w Lille (odniesienie #20491-20190219161313).
1. Znieczulenie świń
<ol>
	<li>Buprenorfinę należy podawać (0,015 mg/kg mc., domięśniowo) 30 minut przed pierwszym nacięciem w celu zapewnienia przedoperacyjnej analgezji.</li>
	<li>Wykonać domięśniowe wstrzyknięcie ketaminy (50 mg/kg) i ksylazyny (3 mg/kg) w celu wywołania sedacji. Podawać 5% izofluranu w inhalacji przez 3 do 5 minut w celu pogłębienia znieczulenia.</li>
	<li>Oceń głębokość znieczulenia, sprawdzając odruch zamykania powiek i odruch połykania. Zaintubuj świnię i ułóż ją na wznak na stole operacyjnym. Stężenie izofluranu należy zmniejszyć do 2% poprzez inhalację w celu podtrzymania znieczulenia.</li>
	<li>Stale monitoruj tętno i nasycenie tlenem za pomocą przenośnego wieloparametrowego monitora weterynaryjnego, aby zapewnić optymalną głębokość znieczulenia i stabilność fizjologiczną podczas całej procedury.</li>
</ol>
2. Ekspozycja obszaru zainteresowań
<ol>
	<li>Ogol się i skrupulatnie oczyść okolicę szyjki macicy, rozciągającą się od obszaru podżuchwowego do mostka.</li>
	<li>Zastosuj mydło antyseptyczne, a następnie chlorheksydynę, aby zapewnić sterylne pole. Dokładnie osusz cały obszar.</li>
	<li>Ustaw sterylne serwety, aby odizolować przedni odcinek szyjki macicy do interwencji chirurgicznej.</li>
</ol>
3. Ekspozycja grasicy świńskiej
<ol>
	<li>Wykonaj 10 cm pionowe nacięcie wzdłuż białej linii szyjki macicy za pomocą skalpela. Ostrożnie wypreparuj obszar nożyczkami Metzenbauma, aby oddzielić mięśnie przedtarczycowe, tworząc czyste pole operacyjne.</li>
	<li>Umieść samozatrzymujący się retraktor między mięśniem omohyoidalnym a chrząstką tarczycy, aby ułatwić rozwarstwienie tkanki łącznej i odsłonić grasicę. 
	UWAGA: Unikaj nadmiernego nacisku na tchawicę, aby zapobiec obrażeniom.</li>
	<li>Stopniowo odsłaniaj czaszkową część grasicy i ostrożnie oddzielaj ją od pochewki tętnicy szyjnej, która zawiera nerw błędny, żyłę szyjną wewnętrzną i tętnicę szyjną wspólną. 
	UWAGA: Aby zapobiec obrażeniom, użyj elektrokoagulacji w celu uzyskania hemostazy.</li>
</ol>
4. Pozyskiwanie grasicy świńskiej
<ol>
	<li>Po uwolnieniu usuń czaszkową część grasicy, która zwykle mierzy 5-8 cm.</li>
	<li>Wyekstrahowaną grasicę opłukać w izotonicznym roztworze soli fizjologicznej, aby ułatwić identyfikację przytarczyc. 
	UWAGA: Ten krok ma kluczowe znaczenie dla poprawy wizualizacji i różnicowania wyraźnej tekstury przytarczyc</li>
</ol>
5. Identyfikacja przytarczyc dograsicowo ex vivo
<ol>
	<li>Delikatnie spłaszcz tkankę grasicy, aby ułatwić identyfikację przytarczyc. 
	UWAGA: Przytarczyce wykazują charakterystyczną teksturę, szczególnie w porównaniu z otaczającą tkanką. Zwłóknieniowa torebka przytarczyc jest twardsza i ma podobną wielkość do ziarnka grochu.</li>
	<li>Użyj źródła światła, aby zidentyfikować przytarczyce za pomocą transillumination. 
	UWAGA: Układ naczyniowy otaczający przytarczyce powinien być wyraźnie widoczny, co pomaga w jego różnicowaniu.</li>
	<li>Ostrożnie wyciąć kapsułkę i usunąć całe przytarczyce. Używanie kleszczy Debakey do delikatnego przenoszenia i nożyczek Metzenbaum do precyzyjnego preparowania. Odizoluj gruczoł od otaczającej tkanki grasicy.</li>
	<li>Umieścić wyizolowaną przytarczycę w roztworze chłodniczym i utrzymywać ją w temperaturze 4 °C, aby zachować jej żywotność do kolejnych zabiegów.</li>
	<li>Zanurz tkankę w parafinie w celu dalszej obróbki.</li>
</ol>
6. Chirurgiczne zamknięcie i przebudzenie
<ol>
	<li>Po pobraniu przytarczyc zamknij miejsce operacyjne warstwami. Zszyj mięśnie i tkanki podskórne za pomocą szwów wchłanialnych. Zamknij skórę niewchłanialnymi szwami.</li>
	<li>Stopniowo odzwyczajaj świnię od znieczulenia. Po odzyskaniu przytomności należy monitorować świnię pod kątem natychmiastowych powikłań pooperacyjnych.</li>
	<li>Podawać leki przeciwbólowe i antybiotyki zgodnie z protokołem pooperacyjnym (buprenorfina 0,03 à 0,05 mg/kg i Clamoxyl 15 mg/kg przez 48 godzin). Zwrócić świnie do ich pomieszczeń w celu odzyskania pod nadzorem lekarza weterynarii.</li>
</ol>
7. Protokół barwienia immunologicznego
<ol>
	<li>Przeprowadzić deparafinowanie i odwodnienie z próbek zatopionych w parafinie: ksylen przez 5 min, ksylen przez 10 min, 100% etanol przez 5 min, 90% etanol przez 7 min 30, 70% etanol przez 7 min 30, 50% etanol przez 5 min, woda destylowana przez 5 min i sól fizjologiczna z buforu fosforanowego (PBS) przez 5 min.</li>
	<li>Pobrać antygen poprzez podgrzewanie próbek w kuchence mikrofalowej w buforze cytrynianowym o pH 6 przy mocy 650 W przez 9 minut. Pozostawić próbki do ostygnięcia w buforze przez 20 minut. Przepłukać trzy razy PBS przez 5 minut każda.</li>
	<li>Próbki należy inkubować otoczone długopisem Dako w temperaturze pokojowej przez 20 minut z roztworem bloku białkowego w celu zablokowania niespecyficznego wiązania.</li>
	<li>Próbki inkubować przez noc w temperaturze 4°C z pierwszorzędowym przeciwciałem (przeciwciało PTH (H-7), mysie IgG-α-ludzkie, sc-398856, 1:100) rozcieńczone w 1% albuminie surowicy bydlęcej (BSA). Umyć dwukrotnie PBS przez 5 minut każdy.</li>
	<li>Inkubować przez 1 godzinę i 30 minut w temperaturze pokojowej z przeciwciałem drugorzędowym (Alexa Fluor 488, kozio-α-mysz, A11001, 1:500) rozcieńczonym w 1% albuminie surowicy bydlęcej. Umyć dwa razy PBS i raz wodą podwójnie destylowaną przez 5 minut.</li>
	<li>Zamontuj szkiełka za pomocą roztworu DAPI i przechowuj je w temperaturze 4 °C.</li>
</ol>

<ol><li>Gafni, R. I., Collins, M. T. Hypoparathyroidism. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGafni%2C+RI+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 380, 1738-1747 (2019).</li>
<li>Gosmanova, E. O., Houillier, P., Rejnmark, L., Marelli, C., Bilezikian, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+complications+in+patients+with+chronic+hypoparathyroidism+on+conventional+therapy%3A+a+systematic+literature+review%3A+Renal+disease+in+chronic+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Endocr.+Metab.+Disord%22%5BJournal%5D)">Renal complications in patients with chronic hypoparathyroidism on conventional therapy: a systematic literature review: Renal disease in chronic hypoparathyroidism.</a> Rev. Endocr. Metab. Disord. 22, 297-316 (2021).</li>
<li>Frey, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+permanent+post-thyroidectomy+hypoparathyroidism+on+self-evaluation+of+quality+of+life+and+voice%3A+results+from+the+national+qol-hypopara+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Impact of permanent post-thyroidectomy hypoparathyroidism on self-evaluation of quality of life and voice: results from the national qol-hypopara study.</a> Ann. Surg. 274, 851-858 (2021).</li>
<li>Büttner, M., Krogh, D., Siggelkow, H., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+predictors+of+impaired+quality+of+life+in+patients+with+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Endocrinol.+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">What are predictors of impaired quality of life in patients with hypoparathyroidism.</a> Clin. Endocrinol. (Oxf). 97, 268-275 (2022).</li>
<li>Gadelha, D. D., Filho, W. A., Brandão, M. A. J., Montenegro, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+parathyroid+allotransplantation+a+viable+option+in+the+treatment+of+permanent+hypoparathyroidism%3F+A+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine%22%5BJournal%5D)">Is parathyroid allotransplantation a viable option in the treatment of permanent hypoparathyroidism? A review of the literature.</a> Endocrine. 80 (2), 253-265 (2022).</li>
<li>Sakane, E. N., Vieira, M. C. C., Vieira, G. M. M., Maeda, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+options+in+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Treatment options in hypoparathyroidism.</a> Arch. Endocrinol. Metab. 66, 651-657 (2022).</li>
<li>Zhang, J. L. H., Appelman-Dijkstra, N. M., Schepers, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+allotransplantation%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Parathyroid allotransplantation: A systematic review.</a> Med. Sci. 10, 19(2022).</li>
<li>Goncu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+survival+effect+of+HLA-A+allele+matching+parathyroid+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Investig.+Med.+Off.+Publ.+Am.+Fed.+Clin.+Res%22%5BJournal%5D)">Graft survival effect of HLA-A allele matching parathyroid allotransplantation.</a> J. Investig. Med. Off. Publ. Am. Fed. Clin. Res. 69, 785-788 (2021).</li>
<li>Barczyński, M., Gołkowski, F., Nawrot, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+transplantation+in+thyroid+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Gland+Surg%22%5BJournal%5D)">Parathyroid transplantation in thyroid surgery.</a> Gland Surg. 6, 530-536 (2017).</li>
<li>Montgomery, R. A., et al. Results of two cases of pig-to-human kidney xenotransplantation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMontgomery%2C+RA+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 386, 1889-1898 (2022).</li>
<li>Loupy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+after+pig-to-human+kidney+xenotransplantation%3A+a+multimodal+phenotyping+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Immune response after pig-to-human kidney xenotransplantation: a multimodal phenotyping study.</a> The Lancet. 402, 1158-1169 (2023).</li>
<li>Goncu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+microencapsulated+parathyroid+cells+as+a+potential+treatment+for+autoimmune-related+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Clin.+Transplant.+Off.+J.+Middle+East+Soc.+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of microencapsulated parathyroid cells as a potential treatment for autoimmune-related hypoparathyroidism.</a> Exp. Clin. Transplant. Off. J. Middle East Soc. Organ Transplant. 21, 901-912 (2023).</li>
<li>Hasse, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+xenotransplantation+without+immunosuppression+in+experimental+hypoparathyroidism%3A+long-term+in+vivo+function+following+microencapsulation+with+a+clinically+suitable+alginate%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Parathyroid xenotransplantation without immunosuppression in experimental hypoparathyroidism: long-term in vivo function following microencapsulation with a clinically suitable alginate.</a> World J. Surg. 24, 1361-1366 (2000).</li>
<li>Oster, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+and+reliable+dissection+of+porcine+parathyroid+glands+-+A+protocol+for+molecular+and+histological+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Anat.+-+Anat.+Anz%22%5BJournal%5D)">Fast and reliable dissection of porcine parathyroid glands - A protocol for molecular and histological analyses.</a> Ann. Anat. - Anat. Anz. 219, 76-81 (2018).</li>
<li>Hyun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-inherent+targeting+of+near-infrared+fluorophores+for+parathyroid+and+thyroid+gland+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Structure-inherent targeting of near-infrared fluorophores for parathyroid and thyroid gland imaging.</a> Nat. Med. 21, 192-197 (2015).</li>
<li>Klute, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Contribution+to+the+topography+and+histology+of+porcine+parathyroid+glands%22">Contribution to the topography and histology of porcine parathyroid glands</a>. , Justus Liebig University of Giessen. Beitrag zur Topographie und Histologie der EpithelkÃ¶rperchen des Schweines.Â Ph.D. thesis. Justus Liebig-UniversitÃ¤t zu Giessen (1959).</li>
<li>Arndt, H. On the topography of epithelial cells in pigs with special consideration of the suitability of pigs for the production of organo-therapeutic epithelial cell preparations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Z.+Anat%22">Z. Anat</a>. 81, (Zur Topographie der Epithelkörperchen beim Schwein mitbesonderer Berücksichtigung der Eignung des Schweines für die Gewinnungorgano-therapeutischer Epithelkörperchenpräparate) 191-197 (1926).</li>
<li>Butylina, M., Föger-Samwald, U., Gelles, K., Pietschmann, P., Sipos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+establishing+animal+models+for+studying+osteoimmunology+of+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Vet.+Sci%22%5BJournal%5D)">Challenges in establishing animal models for studying osteoimmunology of hypoparathyroidism.</a> Front. Vet. Sci. 10, 1163903(2023).</li>
</ol>

Protokół ten przedstawia szybką i nieśmiertelną metodę pobierania przytarczyc u świń. Kluczowym krokiem w ramach protokołu jest lokalizacja grasicy świni w celu zapewnienia całkowitego pobrania w celu dalszego badania ex vivo . Po ekstrakcji grasicy przytarczyce można łatwo zidentyfikować za pomocą transilluminacji.
Jednym z głównych wyzwań związanych z tą techniką jest konieczność unikania polegania na ludzkich nawykach chirurgicznych związanych z paratyreoidektomią, ponieważ nasz pr...

Ten protokół przedstawia szybką i nieśmiercionośną metodę pobierania przytarczyc od świń. Niedoczynność przytarczyc, charakteryzująca się niedostatecznym wydzielaniem parathormonów, krytycznie zaburza homeostazę wapnia1. Ten stan, głównie powikłanie chirurgiczne po paratyreoidektomii lub tyreoidektomii, objawia się objawami takimi jak osłabienie, przewlekły ból, tachykardia, drgawki, a nawet schyłkowa niewydolność nerek2. Czasami wynika z rzadkich chorób autoimmunologicznych lub genetycznych. Obecne metody leczenia, głównie doustna suplementacja wapniem i witaminą D lub rekombinowany parathormon, zapewniają tylko częściową ulgę w objawach ogólnoustrojowych, takich jak zmęczenie i depresja3,4. Rosnąca potrzeba allotransplantacji przytarczyc jako potencjalnego lekarstwa na ciężką niedoczynność przytarczyc podkreśla konieczność ustanowienia jednolitych protokołów transplantacji5,6,7,8,9. Jednak badania przedkliniczne nad przeszczepem przytarczyc pozostają ograniczone i brakuje standaryzowanych modeli zwierzęcych. Co więcej, niedawny wzrost w dziedzinie ksenotransplantacji10,11, zwiększa zainteresowanie klinicznymi zastosowaniami ksenotransplantacji, zwłaszcza w dziedzinie endokrynologicznej terapii komórkowej12,13. Jednak modele ksenotransplantacji przytarczyc u świń są trudne ze względu na złożoność identyfikacji tkanki przytarczyc u świń. W związku z tym istnieje potrzeba zapewnienia powtarzalnej, zrównoważonej i etycznej techniki pobierania przytarczyc od świń w celu dalszego rozwoju ksenotransplantacji przytarczyc.
W przeciwieństwie do istot ludzkich, które zazwyczaj mają cztery gruczoły przytarczyczne zlokalizowane za tarczycą, świnie posiadają, w większości, dwa gruczoły przytarczycowe, każdy zlokalizowany w części czaszkowej grasicy. Wcześniejsze badania, które miały na celu zlokalizowanie gruczołów przytarczyc u świń, opierały się na śmiertelnych metodach identyfikacji ex vivo lub technikach opartych na fluoroforach, które mogą być trudne do wdrożenia w ksenotransplantacji14,15,16. Proponujemy tutaj prostą i nieśmiertelną technikę, odpowiednią do ksenotransplantacji, opartą na dwóch kluczowych etapach: pobraniu grasicy świńskiej i identyfikacji ex vivo przytarczycza pomocą transilluminacji. Technika ta może być przydatna w badaniach nad fizjologią przytarczyc, a także w transplantacji.

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22G Krótki cewnik obwodowy</td><td>Smiths Medical</td><td>5060</td><td></td></tr><tr><td>Basic set II, krepa</td><td>Hartmann</td><td>9389253</td><td></td></tr><tr><td>Bupaq (bupr&eacute; norphine)</td><td>Virbac</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Clippers Favorita II</td><td>Aesculap Schermaschinen</td><td>GT104</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowe skalpele</td><td>Swann-Morton</td><td>0510</td><td></td></tr><tr><td>Szpatułka do elektrod</td><td>Erbe</td><td>21191-002</td><td></td></tr><tr><td>Generator elektrochirurgiczny BE VIO 200p</td><td>Erbe</td><td>10140-400</td><td></td></tr><tr><td>Euroklav 23 VS+</td><td>MELAG</td><td>10056</td><td></td></tr><tr><td>Zawór infuzyjny grawitacyjny 3-drogowy z ruchomą końcówką Luer Lock</td><td>Care Fusion</td><td>A64-3V</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt z dwoma przyciskami do elektrod Slim-Line&nbsp;</td><td>Erbe</td><td>20190-065</td><td></td></tr><tr><td>Waporyzator lejkowy z izofluranem</td><td>Supera Anesthesia Innovations</td><td>VAP3000</td><td></td></tr><tr><td>Isorane (izofluran)</td><td>Axience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamidor (k&eacute; tamine)</td><td>Axience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Light Ceiling Double</td><td>RIMSA</td><td>PENTA81+30E</td><td></td></tr><tr><td>Medisorb Absorent absorpcji dwutlenku węgla</td><td>Vyaire</td><td>8570043</td><td></td></tr><tr><td>Mersutures 0</td><td>Ethicon</td><td>F2520</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>LEICA RM2255</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miller Blade</td><td>Opticlar</td><td>600.020</td><td></td></tr><tr><td>Koncentrator tlenu</td><td>DeVilbiss</td><td>525KS</td> Paxman (ksylazyna) Przenośny wieloparametrowy <td></td></tr><tr><td>monitor weterynaryjny</td><td>Virbac</td><td></td> Uchwyty laryngoskopowe wielokrotnego użytku Mindray IPM 10 <td></td></tr><tr><td></td><td>Opticlar</td><td>600.080</td><td></td></tr><tr><td>Wentylator do znieczulenia małych zwierząt</td><td>Midmark</td><td>91806001</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> Wtrysk chlorku sodu Viaflo Baxter <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instrumenty chirurgiczne</td><td>Kohler medizintechnik</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stół chirurgiczny</td><td>Vetinox</td><td>TA700005</td><td></td></tr><tr><td>rurka tchawica</td><td>Smiths Medical</td><td>100/179/070</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 2-0</td><td>Ethicon</td><td>JV453</td><td></td></tr><tr><td>VMS</td><td>Midmark</td><td>91800003</td><td></td></tr><tr><td>Materiały i odczynniki </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM F-12 pożywka</td><td>ThermoFischer</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>przeciwciało parathormonu</td><td>SantaCruz</td><td>sc-398856</td><td></td></tr><tr><td>Szybki śródoperacyjny test pth</td><td>Beckman Coulter</td><td>A16972</td><td></td></tr></tbody></table>

pobieranie przytarczyc od żywych świń dawców i identyfikacja ex vivo

Procurement of Parathyroid Glands from Living Donor Pigs and Ex Vivo Identification

Niedoczynność przytarczyc, często wynikająca z powikłań chirurgicznych, poważnie zaburza homeostazę wapnia, prowadząc do objawów powodujących niepełnosprawność. Obecne metody leczenia oferują ograniczoną ulgę, co podkreśla potrzebę alternatywnych terapii, takich jak przeszczep przytarczyc. Badanie to wprowadza prostą metodę pobierania przytarczyc od żywych dawców od świń, z potencjalnymi zastosowaniami w badaniach transplantacyjnych, zwłaszcza w dziedzinie ksenotransplantacji. Procedura składa się z trzech kluczowych etapów: przygotowania trzody chlewnej w znieczuleniu, jednostronnego pobrania grasicy oraz identyfikacji ex vivo i ekstrakcji przytarczyc wewnątrz grasicy. W protokole wykorzystuje się świnie Landrace, a procedury zapewniają etyczne leczenie i powrót do zdrowia po operacji. Udało nam się wyodrębnić przytarczyce, potwierdzając ich żywotność i integralność poprzez późniejszą analizę. Poziomy PTH w supernatancie tkankowym przekroczyły 1000 pg/ml, a barwienie immunofluorescencyjne odróżniało przytarczyce od tkanki grasicy, potwierdzając wiarygodność procedury. Protokół ten oferuje szybką, nieśmiertelną i etycznie uzasadnioną metodę pobierania przytarczyc od świń, rozwiązując różnice anatomiczne między świniami a ludźmi. Oferuje zrównoważone podejście o istotnych implikacjach dla badań nad niedoczynnością przytarczyc i ksenotransplantacją.

Głównymi wynikami niniejszego badania są pomyślne wyizolowanie przytarczyc od świń rasy Landrace oraz późniejsza analiza w celu potwierdzenia ich żywotności i integralności. Wyniki przedstawiono w następujący sposób. Identyfikację tkanki przytarczycy potwierdzono śródoperacyjnie poprzez transiluminację (Rysunek 1A). Po wyizolowaniu pobrano dwie małe próbki tkanki (każda około 10%). Jedną próbkę posiekano na płytce w 1 mL pożywki hodowlanej DMEM-F12. Po posiekaniu pobrano 1 mL nadsąc...

Ten protokół przedstawia szybką i nieśmiercionośną metodę pozyskiwania przytarczyc od świń. Procedura składa się z trzech głównych etapów: preparatyki świńskiej w znieczuleniu, jednostronnego pobrania grasicy oraz identyfikacji ex vivo i ekstrakcji przytarczyc wewnątrz grasicy.

Pobieranie przytarczyc od żywych świń dawców i identyfikacja ex vivo

Hypoparathyroidism, often resulting from surgical complications, severely disrupts calcium homeostasis, leading to disabling symptoms. Current treatments ...

[Mehdi] Ten film opisuje pobieranie ex vivo przytarczyc od żywego dawcy u świń, przystosowanych do ksenotransplantacji przytarczyc. Niedoczynność przytarczyc, charakteryzująca się niewystarczającym wydzielaniem parathormonów, krytycznie zaburza homeostazę wapnia. Obecne metody leczenia oferują ograniczoną ulgę w objawach ogólnoustrojowych, takich jak zmęczenie i depresja. Obecnie na uwagę zasługuje allotransplantacja przytarczyc, a także ksenotransplantacja. Celem badania jest zaproponowanie prostej i nieśmiercionośnej techniki dostosowanej do ksenotransplantacji w oparciu o dwa kluczowe etapy. Jeden, odzyskiwanie grasicy świńskiej. I po drugie, identyfikacja przytarczyc ex vivo za pomocą transilluminacji. Eksperymenty przeprowadzono w ośrodku dla dużych zwierząt Uniwersytetu w Lille. Wszystkie badania na zwierzętach zostały zatwierdzone przez komisję etyczną ds. zwierząt. Krok pierwszy, znieczulenie świń. Buprenorfinę należy podać 30 minut przed pierwszym nacięciem w celu zapewnienia przedoperacyjnej analgezji. Wykonaj domięśniowe wstrzyknięcie ketaminy i ksylazyny w celu wywołania sedacji. Podawaj 5% izofluranu wziewnie przez trzy do pięciu minut w celu pogłębienia znieczulenia.

procurement-parathyroid-glands-from-living-donor-pigs-ex-vivo

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ten film opisuje ortotopowy autotransplantację nerki w modelu świni. Ten zabieg chirurgiczny polega na przeszczepieniu przeszczepu nerki zwierzęcia w jego pierwotnym anatomicznym położeniu. Model ten jest wykorzystywany do badania nowych metod leczenia schyłkowej fazy choroby nerek u ludzi.

Ortotopowy przeszczep nerki świni: technika przeszczepu nerki w modelu świni

Eksperymentalne badania na zwierzętach odgrywają kluczową rolę w rozwoju klinicznej praktyki transplantacyjnej. Ortotopowy model przeszczepiania wątroby u świń (OLTx) jest bardzo zbliżony do warunków panujących u ludzi i jest często stosowany w badaniach klinicznych. Poniższy protokół zawiera wszystkie informacje dotyczące wiarygodnego modelu OLTx świni przy użyciu aktywnej zastawki porto-caval-szyjnej.

Technika pozyskiwania wątroby świń i przeszczepu ortotopowego z wykorzystaniem aktywnej zastawki Porto-Caval

Świńskie modele transplantacji narządów stanowią ważną platformę do badania mechanizmów konserwacji narządów. W artykule opisano heterotopowy model autotransplantacji nerki świń, który pozwala na badanie nowych podejść do poprawy wyników przeszczepu przy użyciu brzeżnych przeszczepów nerki.

Heterotopowy autotransplantacja nerki w modelu świni: protokół krok po kroku

Myszy z nabytą niedoczynnością przytarczyc byłyby przydatne do badania nowych terapii lekowych na niedoczynność przytarczyc. Zademonstrowano dwie procedury tworzenia takich myszy.  Mysz GFP-PTX jest generowana przez chirurgiczną paratyreoidektomię pod kontrolą zielonych fluoryzujących przytarczyc.  Drugie, niechirurgiczne podejście opiera się na specyficznej dla przytarczyc ekspresji receptora toksyny błoniczej.

Dwie techniki tworzenia myszy z niedoczynnością przytarczyc: paratyreoidektomia przy użyciu gruczołów GFP i ablacja przytarczyc za pośrednictwem toksyny błoniczej

Duże modele zwierzęce odgrywają istotną rolę w badaniach przedklinicznych nad transplantacją. Ze względu na podobieństwa do konfiguracji klinicznej, świński model ortotopowego autotransplantacji nerki opisany w tym artykule stanowi doskonałe warunki in vivo do testowania technik konserwacji narządów i interwencji terapeutycznych.

Ortotopowy autotransplantacja nerki w modelu świni z wykorzystaniem 24-godzinnego zachowania narządów i ciągłej telemetrii

Przedstawiamy protokół wykorzystania normotermicznego systemu perfuzji krwi ex vivo do dostarczania środków terapeutycznych do całego alloprzeszczepu serca w heterotopowym modelu przeszczepu serca u świń.

Protokół heterotopowego przeszczepu serca u świń w celu dostarczenia leków do alloprzeszczepu serca

Bezpieczne zastosowanie nowo opracowanych urządzeń do chirurgii chirurgicznej tarczycy/przytarczyc przyciąga uwagę chirurgów. Eksperymentalne modele zwierzęce pozwalają uniknąć niepotrzebnych prób i błędów w chirurgii ludzkiej. Niniejszy raport ma na celu zademonstrowanie metod elektrofizjologicznych i termograficznych do oceny parametrów bezpieczeństwa SED w chirurgii tarczycy/przytarczyc.

Badanie parametrów bezpieczeństwa elektrofizjologicznego i termograficznego urządzeń energetycznych podczas operacji tarczycy i przytarczyc w modelu świniowym

Do tej pory rozwój metod identyfikacji przytarczyc (PG) jest ograniczony przez brak modeli zwierzęcych w badaniach przedklinicznych. W tym miejscu tworzymy prosty i skuteczny model szczura do śródoperacyjnego obrazowania PG i oceniamy jego skuteczność, wykorzystując nanocząstki tlenku żelaza jako nowy środek kontrastowy PG.

Opracowanie prostego i skutecznego modelu szczura do śródoperacyjnego obrazowania przytarczyc

Zwierzęcy model nabytej niedoczynności przytarczyc (HypoPT) jest kluczowy dla zrozumienia, jak HypoPT wpływa na homeostazę jonów mineralnych i do weryfikacji skuteczności nowych metod leczenia. W tym miejscu przedstawiono technikę generowania modelu szczura nabytej niedoczynności przytarczyc (AHypoPT) za pomocą paratyreoidektomii (PTX) przy użyciu nanocząstek węgla.

Generowanie szczurów z niedoczynnością przytarczyc za pomocą przytarczyc wspomaganej nanocząstkami węgla

Przedstawiamy protokół opisujący model chirurgiczny pozyskiwania nerek w przedklinicznym modelu świń do późniejszej perfuzji lub przeszczepu maszynowego.

Pozyskanie nerek w przedklinicznym modelu dużych zwierząt

Poznaj metodę pobierania przytarczyc od żywych świń dawców z identyfikacją ex vivo. Technika ta wspiera badania nad ksenotransplantacją i leczeniem niedoczynności przytarczyc.

Pobieranie przytarczyc od żywych świń dawców i identyfikacja ex vivo

Przeglądaj więcej filmów