28 lutego 2025
Kapilaroskopia jest dostępnym narzędziem do bezpośredniej, taniej i nieinwazyjnej wizualizacji mikrokrążenia. Celem tego protokołu jest umożliwienie naukowcom wykorzystania kapilaroskopii do wizualizacji obwodowej morfologii mikronaczyniowej w łożyskach paznokci myszy.
Jednym z zainteresowań naszego laboratorium jest dysfunkcja naczyń krwionośnych w chorobach neurodegeneracyjnych. Naszym celem jest wykrywanie i monitorowanie obwodowej patologii mikrokrążenia za pomocą kapilaroskopii, aby uzyskać wgląd w jej potencjalną rolę w chorobach ośrodkowego układu nerwowego. Wykrywanie dysfunkcji mikrokrążenia u zwierząt jest często inwazyjne, przeprowadzane ex vivo lub kosztowne. Dzięki temu protokołowi naukowcy mogą łatwo i niedrogo ocenić mikrokrążenie łożyska paznokcia i przetłumaczyć kliniczne wyniki kapilaroskopii fałdu paznokciowego na modele zwierzęce. Wprowadzamy nowatorskie miejsce do wizualizacji lustrzanego odbicia mikrokrążenia obwodowego, łożyska paznokcia. W porównaniu z kapilaroskopią fałdu paznokciowego, kapilaroskopia łożyska paznokcia zapewnia większy obszar do lepszej obserwacji morfologii i struktury mikrokrążenia.
[Instruktor] Aby rozpocząć, umieść znieczuloną mysz na stole operacyjnym do zabiegu. Następnie nałóż lubrykant, żel do oczu lub sterylną, nieleczniczą maść okulistyczną na oba oczy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Następnie, utrzymując zwierzę w narkozie za pomocą stożka nosowego, nałóż obfitą ilość kremu do depilacji na całą łapę za pomocą aplikatora. Zapewnij pełne pokrycie obszarów łapy i łożyska paznokcia. Po pozostawieniu kremu na dwie minuty należy dokładnie zmyć krem do depilacji czystą chusteczką i umyć łapę w letniej, sterylnej wodzie. 24 godziny po usunięciu sierści ustaw sprzęt do kapilaroskopii w pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze, w którym panuje temperatura od 21,5 do 22,5 stopni Celsjusza. Podłącz kapilaroskop do laptopa za pomocą złącza USB. Otwórz aplikację Debut video na laptopie. Po odpowiednim znieczuleniu myszy nałóż lubrykant, żel do oczu lub sterylną, nieleczniczą maść okulistyczną na oba oczy. Umieść białą taśmę laboratoryjną lub podobny materiał tła pod łapą, aby zwiększyć kontrast i poprawić wizualizację naczyń. Teraz umieść tylną łapę krzywo do góry na platformie taśmy laboratoryjnej, poniżej celu. Delikatnie rozsuń palce u stóp, aby rozdzielić paznokcie pod obiektywem mikroskopu za pomocą aplikatora. Upewnij się, że łożyska paznokci są wyraźnie oddzielone, aby uzyskać optymalne obrazowanie naczyń. Wizualizuj to, co jest powiększane przez kapilaroskop i skup się na łożysku paznokcia, regulując regulatory stopnia X i Y oraz koło powiększenia, aby uzyskać wyraźny obraz. Aby zmniejszyć odblaski i poprawić koncentrację, obficie nałóż olejek immersyjny na łapę, zapewniając całkowite pokrycie paznokci. Skoncentruj się na paznokciu drugiego palca tylnej łapy, ponieważ jest to największy gwóźdź i najłatwiejszy do wyobrażenia u myszy. Wyreguluj regulatory stopnia X i Y oraz koło powiększenia, aby ustawić ostrość sieci statku. Dostosuj obiektyw, aby zminimalizować odblaski i wyświetlić sieć naczyń paznokciowych. Aby nagrać wideo, naciśnij czerwony przycisk nagrywania w debiucie. Zapisz każdy film w odpowiednim folderze projektu i odpowiednio oznacz każdy film. Następnie otwórz oprogramowanie ImageJ i przeciągnij plik do interfejsu oprogramowania, aby załadować obraz. Aby dostosować jasność i kontrast, wybierz obraz, a następnie Dostosuj i Jasność/Kontrast. To narzędzie pomaga zmienić kontrast obrazów, aby lepiej zobrazować morfologię naczyń. Po dostosowaniu obrazu kliknij przycisk Ustaw w narzędziu Jasność/Kontrast. Na koniec przejdź do Plik, Zapisz jako i wybierz Tiff, aby zapisać obraz. Morfologię naczyń krwionośnych łożyska paznokcia udało się zobrazować metodą kapilaroskopową. Typowe unaczynienie łożyska paznokcia myszy składało się z naczynia doprowadzającego, naczynia odprowadzającego i sieci naczyń włosowatych łączących oba. Sieć naczyń włosowatych łożyska paznokcia była spójna we wszystkich szczepach myszy, jak wykazano u myszy typu dzikiego na tle SV129 / S6 i tle C57 / B6J.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Niniejsze badanie wprowadza nowy protokół kapilaroskopii, umożliwiający badaczom wizualizację morfologii obwodowych naczyń mikrokraśniowych w łożyskach paznokciowych myszy. Ta nieinwazyjna metoda pozwala na ocenę dysfunkcji mikronaczyniowej, szczególnie w kontekście chorób neurodegeneracyjnych.
Nieinwazyjna kapilaroskopia łożyska paznokciowego u myszy umożliwia szybką i kosztowo efektywną wizualizację morfologii obwodowych mikronaczyniowych, wypełniając krytyczną lukę translacyjną między badaniami naczyniowymi w klinice i w fazie przedklinicznej. Podejście to wspiera wczesne wykrywanie i monitorowanie dysfunkcji mikronaczyniowych w modelach chorób, zwiększając pewność prognostyczną w procesie odkrywania leków ukierunkowanych na układ naczyniowy. Skalowalność i powtarzalność tej metody czynią ją cennym narzędziem w zakresie mechanistycznego ograniczania ryzyka w całym portfolio oraz walidacji celów terapeutycznych w zaburzeniach systemicznych i naczyniowo-neurologicznych.
Niniejszy protokół kapilaroskopii wpisuje się w kontinuum od etapu odkryć do badań przedklinicznych, stanowiąc pomost między wczesnymi badaniami nad mechanizmami a badaniami translacyjnymi w biologii naczyniowej.