Ortotopowy przeszczep lewego płuca u szczurów

Moje badania koncentrowały się na opracowaniu ustandaryzowanego, powtarzalnego modelu przeszczepu lewego płuca w celu zbadania powikłań po przeszczepie, w szczególności przewlekłego odrzucenia, oraz lepszego zrozumienia mechanizmu powodującego długoterminowe niepowodzenie przeszczepu. Nasz protokół oferuje krótszą krzywą uczenia się, pojedynczą zdolność operacyjną i wyższą odtwarzalność w porównaniu z istniejącymi technikami. Nasz ustandaryzowany model bezpośredniego przeszczepu płuc stanowi niezawodną platformę do badania powikłań po przeszczepie płuc i może przyspieszyć badania translacyjne w celu poprawy przeżywalności przeszczepów.

W przyszłości nasze laboratorium skupi się na badaniu przewlekłego odrzucania przeszczepu płuc po przeszczepie płuc w celu poprawy długoterminowego wskaźnika przeżycia biorców przeszczepu płuc. Na początek zaopatrz się w cewniki i ostrza dożylne o rozmiarze 14 i 16. Przytnij cewniki do mankietu z ogonem z ostrzem.

Następnie podziel każdy mankiet na ciało i ogon, każdy o długości około dwóch do trzech milimetrów. Za pomocą skalpela utwórz powierzchowne zadrapania na korpusie mankietu, aby zwiększyć tarcie w celu zamocowania szwów. Aby pobrać płuco dawcy, cofnij język znieczulonego szczura na zewnątrz i do góry za pomocą kleszczy.

Umieść lampę chirurgiczną przed szyją, aby wyraźnie oświetlić otwór krtaniowy. Teraz włóż kaniulę dożylną o rozmiarze 14 do dróg oddechowych przez głośnię. Ustaw wentylator w trybie sterowania ciśnieniem.

Następnie wprowadź parametry wagi, dostosuj ciśnienie do 15 centymetrów wody i podłącz wentylator. Obserwuj unoszenie się i opadanie klatki piersiowej, aby zapewnić synchronizację z częstotliwością wentylatora. Następnie przymocuj kończyny i głowę za pomocą taśmy lub pasów.

Wykonaj nacięcie w linii środkowej wzdłuż ściany brzucha. Wstrzyknąć heparynę przez odsłoniętą żyłę otrzewnową, a następnie pozostawić krążenie ogólnoustrojowe na trzy minuty, aby zapewnić całkowitą heparynizację. Przetnij przeponę i otwórz jamę klatki piersiowej od linii środkowej mostka.

Następnie przymocuj ścianę klatki piersiowej po obu stronach za pomocą hemostatów. Usuń grasicę, aby odsłonić narządy jamy klatki piersiowej. Kolejno odetnij żyłę główną górną, żyłę główną dolną oraz lewą i prawą małżowinę uszną.

Teraz wstrzyknij zimną sól fizjologiczną do korzenia tętnicy płucnej za pomocą 20-mililitrowej strzykawki przez jedną minutę w celu perfuzji pod niskim ciśnieniem, aż płuco dawcy zmieni kolor na całkowicie białe. Przeciąć tkanki łączące płuco dawcy i wyekstrahować serce dawcy i płuco w bloku. Namocz blok płuco-serce dawcy we wstępnie schłodzonej soli fizjologicznej.

Umieść blok płuco-serce na lodzie pod mikroskopem. Chwyć tchawicę hemostatem i zabezpiecz ją plasteliną. Przykryj płuca mokrym, sterylnym papierem do soczewek.

Teraz użyj kleszczy, aby oddzielić tętnicę płucną, oskrzela i żyłę płucną pod mikroskopem. Podwiązać oskrzela w pobliżu płuca za pomocą szwów chirurgicznych 6-0. Użyj nożyczek sprężynowych, aby przeciąć tętnicę płucną, oskrzela i żyłę płucną.

Wyciągnij tętnicę płucną, oskrzela i żyłę płucną z odpowiednich mankietów wykonanych z cewników do wgłębień o rozmiarze 16, 14 i 16. Przymocuj ścianki rurki do mankietu za pomocą 8-0 szwy chirurgiczne. Płuca dawcy należy przechowywać w roztworze soli fizjologicznej i umieścić je z powrotem na lodzie do czasu implantacji.

Wykonać depilację w lewy obszar piersiowy zwierzęcia biorcy. Ustaw zwierzę w prawej bocznej pozycji odleżynowej na termostatycznym stole operacyjnym. Teraz wykonaj nacięcie przez skórę i ścianę klatki piersiowej w miejscu impulsu wierzchołkowego w czwartej przestrzeni międzyżebrowej, aby uzyskać dostęp do jamy klatki piersiowej.

Użyj zwijacza powiek, aby otworzyć klatkę piersiową. Następnie delikatnie odepchnij lewe płuco na bok za pomocą wilgotnego bawełnianego wacika, aby odsłonić i ostro przeciąć dolne więzadło płucne. Następnie chwyć lewe płuco kleszczami i wycofaj je na zewnątrz klatki piersiowej.

Zabezpiecz wnękę hemostatem, a następnie ustabilizuj ją modeliną. Teraz wypreparuj wnękę płucną, aby oddzielić tętnicę płucną, żyłę płucną i oskrzela. Zacisnąć proksymalne końce tętnicy płucnej, żyły płucnej i oskrzeli za pomocą zacisków naczyniowych.

Wstępnie zwiąż tętnicę płucną, oskrzela i żyłę płucną biorcy za pomocą 8-0 Szwy chirurgiczne do szybkiego zespolenia. Przytnij platformę na zaciśniętym lewym płucu biorcy, aby ułatwić umieszczenie płuca dawcy. Wykonaj małe nacięcia na dystalnych końcach tętnicy płucnej, żyły płucnej i oskrzeli.

Przepłukać tętnicę płucną i żyłę płucną heparynizowaną solą fizjologiczną, aby zapobiec tworzeniu się skrzepów. Następnie należy pobrać płuco dawcy z lodu i umieścić je na przygotowanej platformie lewego płuca biorcy. Użyj kleszczy, aby podnieść jedną stronę wyciętego otworu, a następnie sekwencyjnie wszczepij i podwiąż mankiety tętnicy płucnej, żyły płucnej i oskrzeli do biorcy.

Otwórz mikroklips hemostatyczny i obserwuj, jak płuco dawcy zmienia kolor z białego na czerwony. Sprawdź miejsca zespolenia pod kątem oznak krwawienia. Teraz usuń lewe płuco biorcy i włóż płuco dawcy do jamy klatki piersiowej.

Wytrzyj klatkę piersiową do sucha sterylną bawełną. Następnie zamknij klatkę piersiową warstwa po warstwie. Poczekaj na spontaniczne odzyskanie oddechu przed odłączeniem respiratora.

Po godzinie odbiorcy mogli swobodnie jeść. Sześć miesięcy po przeszczepieniu obrazowanie CT wykazało, że wentylacja przeszczepionych płuc była porównywalna z grupą pozorowaną, co wskazuje na zachowaną czynność płuc. Makroskopowy wygląd płuc nie różnił się widocznie między grupą pozorowaną a przeszczepioną, nie wykazując żadnych oznak pogorszenia lub nieprawidłowości.

Zabarwienie tkanek płuc hematoksyną i eozyną nie wykazało istotnych zmian patologicznych w przeszczepionych płucach w porównaniu z grupą pozorowaną, z zachowanymi strukturami pęcherzyków płucnych i brakiem nacieku zapalnego.